專利名稱：鯊魚軟骨中提取硫酸軟骨素鈣的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及鯊魚硫酸軟骨素鈣的制備方法，特別是一種從鯊魚軟骨 中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的方法
背景技術：
硫酸軟骨素作為結締組織得重要組成部分，具有多種藥理作用與生 物功能，常被作為膳食補充劑使用，主要用于骨關節(jié)炎的輔助治療。硫 酸軟骨素提取的傳統(tǒng)方法主要有堿提酶解法、堿提法、超聲波輔助法和 乙酸提取法，按傳統(tǒng)方法制成的硫酸軟骨素主要以鈉鹽的形式存在，由 于硫酸軟骨素對鈣的親和能力比鈉強，使用后，常引起血管及毛細血管 部位的鈣存積而導致淤點和血腫，普通的堿法生產工藝還存在純度低、乙 醇使用量大導致生產成本高的缺陷。
發(fā)明內本發(fā)明的目的是提出一種能克服上述缺陷，把硫酸軟骨素由鈉鹽轉 變?yōu)殁}鹽的鯊魚軟骨中提取高純度硫酸軟骨素鈣的方法。
本發(fā)明的技術方案是 一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的方 法，依序包括有熟化、堿化、酶解、去蛋白、結晶、樹脂預處理、樹脂 交換、超濾脫水、濾液鈣化、結晶脫水干燥各工序過程組成，上述
熟化取鯊魚軟骨，在中性條件下，80 —90攝氏度水煮1一3小時， 沖凈去除油脂再加水煮沸，保溫2 — 5小時；
堿化按鯊魚軟骨投料量的2% — 10%加入氫氧化鈉，按鯊魚軟骨
投料量的3% — 10%加入氯化鈉，加熱至30—40攝氏度，攪拌堿化1一5 小時，待軟骨溶解后停止堿化；
酶解用鹽酸調PH值為8 —10，溫度40—60攝氏度，按軟骨投料量的0. 1%—0. 4%加入胰酶，酶解過程不斷補加氫氧化鈉；
去蛋白用鹽酸調整PH值為7-9，升溫至80-100攝氏度，保溫
l一3小時，過濾，得到澄清溶液；
其特征在于上述結晶采用二次結晶，先在去蛋白的澄清液中加入
95%乙醇，使乙醇濃度達到70%，結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素粗制品， 再加水溶解，再加1一5%氯化鈉，用氫氧化鈉調PH值至7—9，加入過 氧化氫，升高溫度至40 — 70攝氏度，氧化時間控制在3—8小時，再調 PH值至2 — 5，濾過，得澄清濾液，用氫氧化鈉調m值至6 — 7，加入95 %乙醇，使乙醇濃度達70%，結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素精制品；上 述樹脂預處理是用732強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂，用水漂洗，浸 泡，用1摩爾/升氫氧化鈉堿洗，用1摩爾/升鹽酸酸洗，再用水沖洗至 PH值約6 — 7，按濕法裝柱；上述樹脂交換是取鯊魚硫酸軟骨素精制品， 按重量加水溶解，制成5% — 15%的溶液，上柱，控制好流出速度，并 用酸度計在線檢測流出液的PH值，當流出液的PH值由中性變?yōu)?時，
開始收集流出液，當ra值由強酸變?yōu)?時，停止收集；上述超濾脫水是
取上述離子交換溶液，超濾脫水，同時脫去分子量小于1000的多肽、氨 基酸等雜質，提高鯊魚硫酸軟骨素純度；上述濾液鈣化是取超濾脫水后 的濃縮液，用氫氧化鈣水飽和液調節(jié)PH值至3_8，再加入氯化鈣，攪 拌溶解，過濾。
本發(fā)明的鯊魚軟骨中提取硫酸軟骨素鈣的方法由于采用二次結晶， 用過氧化氫破壞蛋白質與鯊魚硫酸軟骨素的共價結合，使蛋白質中的硫 酸軟骨素游離出來，能有效的去除蛋白質等雜質，提高鯊魚硫酸軟骨素 鈉的純度和含量，采用陽離子交換樹脂，用柱層析法完成去鈉過程，交 換的鯊魚硫酸軟骨素濃度高，并可以精確控制離子交換過程中生成的鯊 魚硫酸軟骨素，產品中鈉含量低，超濾方法脫水既可以起到濃縮，又可 以同時脫去小分子雜質，提高鯊魚硫酸軟骨素的純度，同時可提高含鈣 量。還可節(jié)約乙醇的使用量，降低生產成本。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明
取鯊魚軟骨200克，加水，加熱至90攝氏度，煮2小時，取出軟骨 用水沖洗后，再加水煮沸4小時，加入10克氫氧化鈉，10克氯化鈉， 40度下攪拌堿化5小時，用鹽酸調PH值至8.5,加熱并控制溫度55攝 氏度，加胰酶0.6克，分兩次加入，第一次加入0.4克，三小時后加0.2 克，不斷攪拌，酶解反應6小時，用鹽酸調整PH值為7. 5,升溫至80 攝氏度，保溫2小時，過濾得澄清濾液，加入95%乙醇，使乙醇濃度達 到70%，每隔30分鐘攪拌一次，結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素粗制品， 秤重80克，再加水480毫升溶解，再加4. 8克氯化鈉，用氫氧化鈉調 PH值至8.5，升高溫度至50攝氏度，加入4.8毫升過氧化氫，氧化反應 5小時，再用鹽酸調PH值至2.5，過濾，得澄清濾液，用氫氧化鈉調PH 值至6.5，加入95%乙醇，使乙醇濃度達70%，每隔30分鐘攪拌一次， 結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素精制品，用500毫升熱水溶解沉淀物，用 732陽離子交換樹脂，用酸度計在線檢測PH值，當流出液的PH值由中 性變?yōu)?時，開始收集流出液，當PH值由強酸變?yōu)?時，停止收集，再 經超濾截留大于1000道爾頓的硫酸軟骨素酸，脫水濃縮后為300毫升， 用氫氧化鈣水飽和液調節(jié)PH值至6，再加入氯化^140克，攪拌溶解， 過濾，沉淀用無水乙醇脫水，65攝氏度真空干燥，得鯊魚硫酸軟骨素媽 50克，經檢測純度達到98%，其它各項指標符合技術要求。
權利要求
1、一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的方法，依序包括有熟化、堿化、酶解、去蛋白、結晶、樹脂預處理、樹脂交換、超濾脫水、濾液鈣化、結晶脫水干燥各工序過程組成，上述熟化取鯊魚軟骨，在中性條件下，80-90攝氏度水煮1-3小時，沖凈去除油脂再加水煮沸，保溫2-5小時；堿化按鯊魚軟骨投料量的2％-10％加入氫氧化鈉，按鯊魚軟骨投料量的3％-10％加入氯化鈉，加熱至30-40攝氏度，攪拌堿化1-5小時，待軟骨溶解后停止堿化；酶解用鹽酸調PH值為8-10，溫度40-60攝氏度，按軟骨投料量的0.1％-0.4％加入胰酶，酶解過程不斷補加氫氧化鈉；去蛋白用鹽酸調整PH值為7-9，升溫至80-100攝氏度，保溫1-3小時，過濾，得到澄清溶液；其特征在于上述結晶采用二次結晶，先在去蛋白的澄清液中加入95％乙醇，使乙醇濃度達到70％，結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素粗制品，再加水溶解，再加1-5％氯化鈉，用氫氧化鈉調PH值至7-9，加入過氧化氫，升高溫度至40-70攝氏度，氧化時間控制在3-8小時，再調PH值至2-5，濾過，得澄清濾液，用氫氧化鈉調PH值至6-7，加入95％乙醇，使乙醇濃度達70％，結晶過濾得到鯊魚硫酸軟骨素精制品。
2、 根據權利要求1所述的一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的 方法，其特征在于上述樹脂預處理是用732強酸性苯乙烯系陽離子交換 樹脂，用水漂洗，浸泡，用1摩爾/升氫氧化鈉堿洗，用1摩爾/升鹽酸 酸洗，再用水沖洗至PH值約6 — 7，按濕法裝柱。
3、 根據權利要求1所述的一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的 方法，其特征在于上述樹脂交換是取鯊魚硫酸軟骨素精制品，按重量加 水溶解，制成5% —15%的溶液，上柱，控制好流出速度，并用酸度計 在線檢測流出液的PH值，當流出液的PH值由中性變?yōu)?時，開始收集 流出液，當PH值由強酸變?yōu)?時，停止收集。
4、 根據權利要求1所述的一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素轉的 方法，其特征在于上述超濾脫水是取上述離子交換溶液，超濾脫水，同 時脫去分子量小于1000的多肽、氨基酸等雜質。
5、 根據權利要求1所述的一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素轉的 方法，其特征在于上述濾液鈣化是取超濾脫水后的濃縮液，用氫氧化鈣 水飽和液調節(jié)PH值至3—8，再加入氯化鈣，攪拌溶解，過濾。
全文摘要
一種鯊魚軟骨中提取鯊魚硫酸軟骨素鈣的方法，依序包括有熟化、堿化、酶解、去蛋白、結晶、樹脂預處理、樹脂交換、超濾脫水、濾液鈣化、結晶脫水干燥各工序過程組成。由于采用二次結晶，用過氧化氫破壞蛋白質與鯊魚硫酸軟骨素的共價結合，使蛋白質中的硫酸軟骨素游離出來，能有效的去除蛋白質等雜質，提高鯊魚硫酸軟骨素鈉的純度和含量，采用陽離子交換樹脂，用柱層析法完成去鈉過程，交換的鯊魚硫酸軟骨素濃度高，并可以精確控制離子交換過程中生成的鯊魚硫酸軟骨素，產品中鈉含量低，超濾方法脫水既可以起到濃縮，又可以同時脫去小分子雜質，提高鯊魚硫酸軟骨素的純度，同時可提高含鈣量。還可節(jié)約乙醇的使用量，降低生產成本。
文檔編號C12P19/00GK101358220SQ20081012105
公開日2009年2月4日 申請日期2008年9月25日 優(yōu)先權日2008年9月25日
發(fā)明者傅應華, 楊明富, 王清榮, 程 羅 申請人:王清榮