專利名稱：：免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物及其在制備藥物或功能食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥活性成分的組合物及該組合物的應(yīng)用，具體涉及一種源自天然蟲草的免疫增強(qiáng)藥用核苷類成分的組合物，以及這種組合物在制備免疫增強(qiáng)藥物或功能食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：免疫缺陷是導(dǎo)致人類疾病的主要原因之一。繼發(fā)性免疫缺陷病是在出生后由于環(huán)境因素?fù)p傷免疫功能，導(dǎo)致免疫功能低下，發(fā)生反復(fù)感染。一些原發(fā)性疾病常伴免疫功能缺陷，如感染、腫瘤、腎病綜合癥、腸吸收不良和外傷等，如何提高這部分人群的免疫功能是防治這類疾病的重要途徑之一。免疫增強(qiáng)劑通過調(diào)動(dòng)免疫系統(tǒng)的功能，提高機(jī)體對(duì)病原微生物的特異性反應(yīng)，是治療和預(yù)防疾病的重要物質(zhì)。因此，篩選開發(fā)高效、無毒、穩(wěn)定的免疫增強(qiáng)劑是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。理想的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)該是選擇性強(qiáng)、作用快速、效果明顯、停藥后作用可逆，不良反應(yīng)少，不損傷機(jī)體正常免疫功能的藥物，傳統(tǒng)中藥以其安全、有效成為免疫增強(qiáng)劑重要來源。冬蟲夏草是我國傳統(tǒng)的滋補(bǔ)性中藥，現(xiàn)代研究表明其具有明顯的免疫增強(qiáng)作用。然而，由于天然蟲草的稀缺性，其市場價(jià)格在逐年攀升，極大地限制了其廣泛應(yīng)用。因此，研究天然蟲草的活性物質(zhì)，開發(fā)價(jià)格低廉的藥物或食療添加劑將有助于緩解這一矛盾。核苷類物質(zhì)被認(rèn)為是冬蟲夏草中的主要活性物質(zhì)之一?，F(xiàn)代研究也證明，外源性核苷類物質(zhì)可以增強(qiáng)動(dòng)物或人的免疫功能，有助于維持細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，但其作用與核苷的組成及比例密切相關(guān)[李紹平，免疫抑制藥用核苷組合物及其在制備免疫抑制藥物中的應(yīng)用.CN200810018832.0]。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種源自天然蟲草的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，以及這種核苷組合物在制備免疫增強(qiáng)藥物或功能食品中的應(yīng)用，從而提供一種安全有效的營養(yǎng)補(bǔ)充劑和免疫增強(qiáng)劑。本申請(qǐng)的第一個(gè)發(fā)明目是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物(或稱為"源自天然蟲草的核苷組合物"或"源自天然蟲草的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物")，其組成和重量比例為，尿香肌香鳥香=2~34:3~44:1~18，或其中任意兩種的組合物。本申請(qǐng)推薦以下優(yōu)化方案所述各組分的重量比例為，尿苷肌苷鳥苷=7~9:1012:4~6，或其中任意兩種的組合物。更優(yōu)化的重量比例為，尿苷40g,肌苷55g，烏苷25g。上述組合物中可以加有藥用輔料，例如糊精、淀粉和微晶纖維素。所用組合物和輔料可以用乙醇攪拌混合后，制成各種劑型的制劑。完成本申請(qǐng)的第二個(gè)發(fā)明目的技術(shù)方案是上述源自天然蟲草的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物在制備免疫增強(qiáng)藥物或功能食品中的應(yīng)用。根據(jù)發(fā)明人對(duì)冬蟲夏草多年的研究認(rèn)為核苷類成分是其重要的免疫調(diào)節(jié)活性物質(zhì)，不同的核苷類成分組成和/或用量，可產(chǎn)生不同的免疫調(diào)節(jié)(增強(qiáng)或抵制)作用。本發(fā)明的免疫增強(qiáng)核苷組物可以明顯提高機(jī)體的免疫功負(fù)&,通過增強(qiáng)免疫功能，產(chǎn)生防病治病的效果。以上應(yīng)用方法的效果見以下實(shí)驗(yàn)無菌獲取大鼠腹腔巨噬細(xì)胞，貼壁純化，1.5-2x1(^細(xì)胞/ml接種于細(xì)胞培養(yǎng)板中，核苦樣品分別為肌苷(1)、鳥苷(G)、尿苷(U)、尿苷+肌苷+鳥苷(UIG);I高濃度為8.4mg/mL，G高濃度為0.42mg/ml，U高濃度為10.8mg/ml，UIG高濃度為(0.68:0.88:0.36mg/ml),各組從高濃度依次倍比稀釋，形成8個(gè)濃度梯度，低濃度到高濃度定為濃度1到濃度8，樣品以培養(yǎng)液溶解并稀釋，這些濃度即為細(xì)胞培養(yǎng)體系中的終濃度。每個(gè)濃度設(shè)四個(gè)復(fù)孔。陽性對(duì)照組分別采用LPS(終濃度10|ag/ml)，陰性對(duì)照組直接在細(xì)胞懸液中加入細(xì)胞培養(yǎng)液。每濃度設(shè)四個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)16h后收集細(xì)胞上清液檢測NO，TNF-a和IL-l。各組檢測值與陰性對(duì)照組比較，進(jìn)行f檢驗(yàn)，比較差異性。結(jié)果單種核苷(U、I、G)的對(duì)巨噬細(xì)胞釋放NO的影響不明顯，但對(duì)巨噬細(xì)胞釋放IL-1均有促進(jìn)作用；U和I對(duì)巨噬細(xì)胞釋放TNF-a有一定的促進(jìn)作用，而G卻無明顯作用；UIG可明顯促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO，TNF-a和IL-l(見表l,表2和表3)。表l不同核苷及其組合對(duì)巨噬細(xì)胞釋放NO的影響(I±SD，n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>151.057.283±0.72##162.109.188±1.14#174.208.916±0.95#188.4011.016±0.37**Gl0駕5.91±0.71*#**G20.0068.01±0.56#G30.0137.60±0.81##G40.02610.51±0.99#*G50.0529.61±1.33#G60.10511.34±0.58**G70.2107.60±0.28#G80.4206.68±0.94#**Ul0.088.34±0.22#U20.1698.90±0.98#U30.3388.24±0.70#U40.6759.03±1.07#U51.357.72±0.35#U62.708.40±0.96#U75.409.31±0.39#*U810.8010.28±1.014#*UI(0.04:0.02)12.32±0.58**UG(0.04:0.02)13.13±1.23**IG(0.04:0.04)11.13±0.64**UIG1(0.005:0.007:0.002)8.037±0.79##UIG2(0.010:0.014:0.005)9.481±0.80#UIG3(0.021:0.027:0.011)10.172±0.83#*UIG4(0.042:0.055:0.022)11.790±0.45**UIG5(0.085:0.11:0.045)11.532士1.76*UIG6(0.17:0.22:0.09)16.988±1.07**UIG7(0.34:0.44:0.18)17.706±0.65**UIG8(0.68:0.88:0.36)23.706±0.44##**LPS15.22±2.68*control_8.29±0.49與空白組比較，*尸<0.05，**戶<0.01;與LPS組比較，#尸O.05，Mp〈0.01表2不同核苷及其組合對(duì)巨噬細(xì)胞釋放TNF-a的影響(7土SD,n-4)樣品濃度(mg/ml)巨噬細(xì)胞TNF-a釋放量(pg/ml)110.0617.335±0.76*##120.1317.384±0.93*##130.2616.920±0.97*##140.5217.748±0.72*##151.0518.299±1.73*#162.1017.302±1.26##174.2017.384±1.41##188.4018.133±1.47##Gl0.00317.78士1.08糾G20.00617.92±0.98##G30.01317.23±1.15*##G40雄18.頻.53##G50.05218.68±0.59##G60.10520.98±0.53**##G70.21019.02±0.65##G80.42019.49±0.74##Ul0.0821.89±0.86***#U20.16921.12±1.11*糾U30.33823.34±3.68##U40.67520.51±0.72*##U51.3522.71±0.42**##U62.7021.09±0.78**##U75.4022.05±0.95**##U810.8022.38±1.04**##UI(0.04:0.02)22.73±0.67**#<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3不同核苷及其組合對(duì)巨噬細(xì)胞釋放IL-1的影響(^±SD，n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>G70.210141.68士28.78"G80.420201.67±38.96**#Ul0.0871.97±9.94**##U20.16975.37±6.68**##U30.33865.70±14.43**##U40.67590.82±5.18***#U51.3587.12±18.40**#U62.70112.26±3.13**U75.40130.53±12.03**U810.80183.76±17.97**##UI(0.04:0.02)26.48±3.62##UG(0.04:0.02)26.13±6.15##IG(0.04:0.04)28.04±7.23##UIG1(0.005:0.007:0.002)43.853±11.513**##UIG2(0.010:0.014:0.005)43.323±13.466*##UIG3(0.021:0.027:0.011)51.207±12.215**##UIG4(0.042:0.055:0.022)54.497±6.164**##UIG5(0.085:0.11:0.045)66.562±24.775*##UIG6(0.17:0.22:0.09)71.92±29.440*#UIG7(0.34:0.44:0.18)107.608±7.045**#UIG8(0.68:0.88:0.36)103.362±28.303*LPS129.51±11.98**control10.63±6.47與空白組比較，*戶<0.05，**尸O.Ol;與LPS組比較，#/><0.05，尸O.Ol。以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的免疫增強(qiáng)核苷組物可以明顯提高機(jī)體的免疫功能，通過增強(qiáng)免疫功能，產(chǎn)生防病治病的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1天然蟲草藥粉(80目)經(jīng)超臨界二氧化碳流體萃取脫脂，殘?jiān)?倍量70%乙醇回流提取2小時(shí)，重復(fù)提取2次，提取液低溫回收乙醇至無醇味。濃縮液置4。C水箱放置析晶，母液冷凍干燥，以2倍量水溶解后置4°C冰箱放置再析晶，重復(fù)析晶操作2次。母液低溫濃縮至約1/2原體積，上ODS柱，以l倍柱體積水洗脫除雜后，改用30。/。乙醇洗脫至在254nm下無吸收，洗脫液低溫濃縮后冷凍干燥，即得天然蟲草核苷提取物。按以下比例選取提取物中的尿苷、肌苷與鳥苷組成藥粉尿苷40g，肌苷55g,鳥苷25g,藥粉內(nèi)加入輔料淀粉25g，糊精50g，微晶纖維素15g，以30%乙醇攪拌混合，制粒、干燥、整粒后壓制1000片(每片重0,2g)。用于免疫增強(qiáng)，每次1~2片。實(shí)施例2尿香40g，肌苷55g，烏苷25g，淀粉25g，糊精50g,微晶纖維素15g，30%乙醇適量。藥粉內(nèi)加入輔料糊精、淀粉和微晶纖維素，以30%乙醇攪拌混合，制粒、干燥、整粒后裝填膠嚢1000粒(每粒重0.2g)。用于免疫增強(qiáng)，每次1~2粒。實(shí)施例3尿香4g，肌苦5.5g，鳥苷2.5g，商品奶粉加至5000g,混勻即得核苷強(qiáng)化奶粉。用于免疫增強(qiáng)，每次3050克。實(shí)施例4尿苷0.4g，肌苷0.55g,鳥苷0.25g,溶于5000mL牛奶中，制得核苷強(qiáng)化牛奶。用于免疫增強(qiáng)，每次250500mL。實(shí)施例5，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為2:3:1。實(shí)施例6，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:3:18。實(shí)施例7，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷:肌苷鳥苷的重量比為34:44:1。實(shí)施例8，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為34:44:18。實(shí)施例9，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:44:1。實(shí)施例10，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:44:18。實(shí)施例ll,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為34:3:1。實(shí)施例12，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為34:3:18。實(shí)施例13,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:3:0。實(shí)施例14，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為34:44:0。實(shí)施例15，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:44:0。實(shí)施例16,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為34:3:0。實(shí)施例17,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:0:1。實(shí)施例18，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為34:0:1。實(shí)施例19，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為2:0:18。實(shí)施例20，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為34:0:18。實(shí)施例21,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為0:3:1。實(shí)施例22，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為0:3:18。實(shí)施例23，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為0:44:1。實(shí)施例24,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為0:44:18。實(shí)施例25,與實(shí)施例1基;M目同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為7:10:4。實(shí)施例26，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為9:12:6。實(shí)施例27,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為7:10:4。實(shí)施例28，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為7:12:6。實(shí)施例29，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為7:12:4。實(shí)施例30,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為9:12:4。實(shí)施例31，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為9:10:4。實(shí)施例32,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為9:10:6。實(shí)施例33,與實(shí)施例l基本相同，j旦有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為7:10:0。實(shí)施例34,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的重量比為9:12:0。實(shí)施例35，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為7:12:0。實(shí)施例36，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為9:10:0。實(shí)施例37,與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為9:0:6。實(shí)施例38，與實(shí)施例l基本相同，但有以下改變尿苷肌苷烏苷的重量比為7:0:4。實(shí)施例39,與實(shí)施例1基本相同，重量比為9:0:4。實(shí)施例40,與實(shí)施例1基本相同，重量比為7:0:6。實(shí)施例34，與實(shí)施例1基本相同，重量比為0:10:4。實(shí)施例41，與實(shí)施例1基本相同，重量比為0:10:6。實(shí)施例42，與實(shí)施例1基本相同，重量比為0:12:4。實(shí)施例43，與實(shí)施例1基本相同，重量比為0:12:6。但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的但有以下改變尿苦肌苷鳥苷的但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的但有以下改變尿苷肌苷鳥苷的權(quán)利要求1、一種免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，該組合物組成和重量比例為，尿苷∶肌苷∶鳥苷＝2～34∶3～44∶1～18，或其中任意兩種的組合物。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，所述各組分的重量比例為，尿苷肌苷鳥苷=7~9:10~12:46，或其中任意兩種的組合物。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，組成和重量比例為，尿苷40g，肌苷55g，鳥苷25g。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，組合物中還加有藥用輔料。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，所述的藥用輔料選自糊精、淀粉和/或微晶纖維素。6、根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，所述的組合物和輔料是用乙醇攪拌混合后，制成的制劑。7、一種權(quán)利要求1~6之一所述的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物在制備免疫增強(qiáng)藥物或功能食品中的應(yīng)用。全文摘要一種源自天然蟲草的免疫增強(qiáng)藥用核苷組合物，其特征在于，組成和重量比例為，尿苷∶肌苷∶鳥苷＝2～34∶3～44∶1～18，或其中任意兩種的組合物。優(yōu)化方案的組成和重量比例為，尿苷∶肌苷∶鳥苷＝7～9∶10～12∶4～6，或其中任意兩種的組合物。最佳比例為，尿苷40g，肌苷55g，鳥苷25g。組合物中還可加有藥用輔料。所述的藥用輔料選自糊精、淀粉和微晶纖維素。本發(fā)明還涉及上述源自蟲草的核苷組合物在制備免疫增強(qiáng)藥物或功能食品中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的免疫增強(qiáng)核苷組物可以明顯提高機(jī)體的免疫功能，通過增強(qiáng)免疫功能，產(chǎn)生防病治病的效果。文檔編號(hào)A23L1/30GK101306005SQ20081012440公開日2008年11月19日申請(qǐng)日期2008年7月4日優(yōu)先權(quán)日2008年7月4日發(fā)明者李紹平,楊豐慶申請(qǐng)人:李紹平