專利名稱：蟲熒光素酶穩(wěn)定劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種酶穩(wěn)定劑，特別是涉及一種蟲熒光素酶穩(wěn)定劑。
背景技術：
生物發(fā)光是在自然界廣泛存在的、有生命的生物產(chǎn)生的一種發(fā)光現(xiàn)象。發(fā)光的生物種 類有很多，包括發(fā)光細菌、發(fā)光螢火蟲、發(fā)光魚、發(fā)光海星、發(fā)光甲蟲等。而能催化熒光 素或脂肪醛氧化產(chǎn)生生物發(fā)光的一類酶即為熒光素酶。從20世紀50年代就已經(jīng)開始了對 熒光素酶的研究。應用熒光素酶大大增加了生物發(fā)光免疫分析技術的靈敏度和應用范圍， 并且由于具有敏感性高，特異性好，反應迅速，操作簡單，應用范圍廣等特點，已成為醫(yī) 學、生物學、環(huán)境科學等研究領域中一種新的手段。
蟲熒光素酶能有效的催化由三磷酸腺苷(ATP)，熒光素，氧氣組成的反應，將生物能轉 變成光能發(fā)出熒光。蟲熒光素酶生物發(fā)光技術在食品，醫(yī)學，農(nóng)業(yè)，生命科學等領域有廣 闊的應用前景。但蟲熒光素酶對溫度及凍融等因素極為敏感，使用時需分裝保存在-18'C冰 箱中，否則極易失活。蟲熒光素酶的酶活不穩(wěn)定性，較大的影響了其開發(fā)應用。亟需一種 蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，為蟲熒光素酶的大規(guī)模應用掃除障礙。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種蟲熒光素酶穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的技術方案概述如下
熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12 mol/L，余量為
雙蒸水。
熒光素酶穩(wěn)定劑中還可以包括還原性谷胱甘肽0.4 -0.6 mmol/L或二硫蘇糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L-120g/L,海藻糖0.08-0.12 mol/L，還原性 谷胱甘肽0.4 -0.6 mmol/L和二硫蘇糖醇0.4 -0.6 mmol/L，余量為雙蒸水。 所述甘油優(yōu)選為100g/L。 所述海藻糖優(yōu)選為0.1mol/L。 所述還原性谷胱甘肽優(yōu)選為0.5mmol/L。 所述二硫蘇糖醇優(yōu)選為0.5mmol/L。 本發(fā)明的優(yōu)點
本發(fā)明的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑對蟲熒光素酶的活性有保護作用，使蟲熒光素酶對溫度及 凍融等因素不敏感，使用時分裝保存在4'C冰箱中。蟲熒光素酶穩(wěn)定性加強，保存時間長， 使用更為方便快捷。


圖1為甘油和海藻糖組成的熒光素酶穩(wěn)定劑對酶保護作用。
圖2為甘油、海藻糖和還原型谷胱甘肽(GSH)組成的熒光素酶穩(wěn)定劑對酶保護作用。 圖3為甘油、海藻糖和二硫蘇糖醇(DTT)組成的熒光素酶穩(wěn)定劑對酶保護作用。
3圖4為甘油、海藻糖、GSH和DTT組成的熒光素酶穩(wěn)定劑(混合保護劑)對酶保護作 用。 '
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一歩的說明。
實施例1
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，余量為雙蒸水。 實施例2
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L，海藻糖0.08 mol/L，余量為雙蒸水。 實施例3
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L,海藻糖0.12mol/L，余量為雙蒸水。 實施例4
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，余量為雙蒸水。 實施例5
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，還原性谷胱甘肽 0.5mmol/L,余量為雙蒸水。 實施例6
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L，海藻糖0.08mol/L，還原性谷胱甘肽 0.4mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例7
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L，還原性谷胱甘 肽0.5mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例8
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，還原性谷胱甘肽 0.6mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例9
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L,海藻糖0.1 mol/L， 二硫蘇糖醇0.5 mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例10
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L,海藻糖0.08 mol/L， 二硫蘇糖醇0.4 mmol/L，余量為雙蒸水。 . '
實施例11
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L， 二硫蘇糖醇0.6 mmol/L，余量為雙蒸水。
實施例12 ,
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L,海藻糖0.12 mol/L， 二硫蘇糖醇0.5 mmol/L，余量為雙蒸水。
4實施例13
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L，還原性谷胱甘肽 0.5mmol/L， 二硫蘇糖醇0.5 mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例14
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L，海藻糖0.08mol/L，還原性谷胱甘肽 0.4mmol/L， 二硫蘇糖醇0.5 mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例15
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油100g/L，海藻糖0.12 mol/L，還原性谷胱甘 肽0.5mmol/L， 二硫蘇糖醇0.6 mmol/L，余量為雙蒸水。 實施例16
蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油120g/L，海藻糖0.1mol/L，還原性谷胱甘肽 0.6mmol/L， 二硫蘇糖醇0.4 mmol/L，余量為雙蒸水。 實驗效果
按照以上實施方案并各選用4個濃度水平，分別選用不同因素不同濃度水平進行正交 試驗，按照設計規(guī)定的水平進行試驗，共16組平行試驗。記錄試驗數(shù)據(jù)后，按照正交表的 極差和方差分析方法分析所得以下結論。
_正交試驗的因素和水平_
因素 甘油 海藻糖 GSH DTT 水平_
1 100g/L 0.1mol/L 0.5mmol/L 0.5mmol/L
2 80g/L 0.08mol/L0,4mmol/L 0.4mmol/L
3 100g/L 0.12mol/L0.5mmol/L 0.6mmol/L
4 120g/L 0.1mol/L 0.6mmol/L 0.5mmol/L
結論一通過前四組中的甘油和海藻糖的IH交比較發(fā)現(xiàn)甘油和海藻糖都有提高酶穩(wěn)定作用
但是不同的濃度效果不同，當甘油是100g/L，海藻糖是O. lraol/L時保護效果最佳。 結論二當在甘油和海藻糖混合劑的基礎上加入GSH時保護作用進一歩加強，其中GSH 的最適濃度為0.5mmol/L;同樣在甘油和海藻糖混合劑的基礎上加入DTT也有進一歩保護 作用其中DTT的最適濃度為0.5mmol/L。
結論三當把四種保護劑同時加到熒光素酶緩沖液中保護作用最強，通過正交試驗發(fā)現(xiàn)最 佳組合是甘油100g/L，海藻糖0.1mol/L， GSH0.5mmol/L， DTT0.5mmol/L。
權利要求
1. 蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是包括下述組分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12mol/L，余量為雙蒸水。
2. 根據(jù)權利要求1所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是還包括還原性谷胱甘肽0.4 -0.6mmol/L。
3. 根據(jù)權利要求1所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是還包括二硫蘇糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
4. 根據(jù)權利要求1所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是還包括:還原性谷胱甘肽0.4-0.6 mmol/L， 二硫蘇糖醇0.4 -0.6 mmol/L。
5. 根據(jù)權利要求l-4之一所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是所述甘油為100g/L。
6. 根據(jù)權利要求l-4之一所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是所述海藻糖為0.1mol/L。
7. 根據(jù)權利要求2或4所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是所述還原性谷胱甘肽為 0.5mmol/L。
8. 根據(jù)權利要求3或4所述的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，其特征是所述二硫蘇糖醇為 0.5mmol/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蟲熒光素酶穩(wěn)定劑，包括下述組分甘油80g/L-120g/L，海藻糖0.08-0.12mol/L，余量為雙蒸水。本發(fā)明的蟲熒光素酶穩(wěn)定劑對蟲熒光素酶的活性有保護作用，使蟲熒光素酶對溫度及凍融等因素不敏感，使用時分裝保存在4℃冰箱中。蟲熒光素酶穩(wěn)定性加強，保存時間長，使用更為方便快捷。
文檔編號C12N9/96GK101463347SQ20081015459
公開日2009年6月24日 申請日期2008年12月26日 優(yōu)先權日2008年12月26日
發(fā)明者劉艷杰, 霍劉杰, 鶴 黃 申請人:天津大學