專利名稱：：與高尿酸血癥密切相關(guān)的新的人urat1基因snp位點(diǎn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明為與血液中尿酸水平密切相關(guān)的hURATl基因第三內(nèi)含子SNP位點(diǎn)+11G〉A(chǔ)，涉及生物醫(yī)學(xué)高技術(shù)中新基因的開發(fā)與應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：尿酸是人體嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，腎臟是尿酸排泄的主要途徑。腎臟對(duì)尿酸的排泄主要取決于腎小管腔和基底膜側(cè)尿酸重吸收、分泌轉(zhuǎn)運(yùn)體的數(shù)目和活性。有關(guān)資料顯示，腎小管對(duì)尿酸的重吸收增加是人類高尿酸血癥的主要原因，而hURATl作為最重要的尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)體，被認(rèn)為是調(diào)節(jié)血尿酸水平的關(guān)鍵蛋白。hURATl基因?qū)儆谟袡C(jī)離子轉(zhuǎn)運(yùn)家族SLC22，該基因位于11ql3，含有10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子。hURATl為陰離子交換通道，通過與乳酸等有機(jī)陰離子及氯等無(wú)機(jī)陰離子交換，將腎小管管腔內(nèi)的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)到腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)。臨床資料顯示，hURATl基因多態(tài)性與原發(fā)性高尿酸血癥密切相關(guān)。GraesslerJ等研究發(fā)現(xiàn)，hURATl基因第二外顯子C426T多態(tài)性與德國(guó)人群腎尿酸排泄減少和高尿酸血癥顯著相關(guān)，相對(duì)于CC基因型，CT和TT基因型個(gè)體腎臟尿酸排泄分?jǐn)?shù)(FEUA)明顯降低，血尿酸水平明顯升高；YukioShima等研究發(fā)現(xiàn)，日本男性受試者中hURATl第四內(nèi)含子G/T多態(tài)不同基因型者(GGGT和TT)血尿酸水平明顯不同，GG基因型者血尿酸水平最高，GT基因型者次之，TT基因型者最低，提出在日本人群中，該SNP位點(diǎn)可作為獨(dú)立的高尿酸血癥預(yù)測(cè)標(biāo)記。Vdzquez-Mellado等對(duì)69名墨西哥原發(fā)性痛風(fēng)患者及其29名一級(jí)家屬和120名健康個(gè)體的hURATl基因進(jìn)行序列分析，結(jié)果顯示69名痛風(fēng)患者中16名患者存在hURATl基因突變，占患者的23%，其中5種突變位于第5外顯子，l種突變位于第4外顯子，16名突變患者中有11名為第5外顯子的C850G錯(cuò)義突變，提出上述突變可能與原發(fā)性痛風(fēng)有關(guān)。單核苷酸多態(tài)性是人類遺傳變異的主要來(lái)源，眾多研究證明單核苷酸多態(tài)性影響多基因遺傳病個(gè)體的易感性。高尿酸血癥是一種多基因遺傳病，hURATl作為高尿酸血癥的候選基因，其單核苷酸多態(tài)性在導(dǎo)致高尿酸血癥中發(fā)揮重要的作用。單核苷酸多態(tài)性在不同人群中分布不同，在中國(guó)人群中沒有高尿酸血癥和hURATl基因單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性報(bào)道。本研究中，我們選擇568名中國(guó)北方漢族人群hURATl基因10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子進(jìn)行測(cè)序，以期發(fā)現(xiàn)中國(guó)北方漢族人群中與高尿酸血癥相關(guān)的hURATl基因單核苷酸多態(tài)性。發(fā)明目的選擇原發(fā)性高尿酸血癥病人227例，對(duì)照組341例。取所有研究對(duì)象外周抗凝血，提取基因組DNA。設(shè)計(jì)特異性引物，采用PCR方法分別擴(kuò)增hURATl基因啟動(dòng)子、10個(gè)外顯子及外顯子和內(nèi)含子交界處,進(jìn)行正向和反向測(cè)序，應(yīng)用Genestar軟件尋找SNP及突變位點(diǎn)；應(yīng)用haploview軟件檢驗(yàn)研究對(duì)象SNPHardy-Weinberg平衡，確認(rèn)研究對(duì)象選取的隨機(jī)性及兩兩SNP位點(diǎn)之間的連鎖關(guān)系；應(yīng)用乂2檢驗(yàn)比較不同組別基因型及等位基因頻率，確定與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP及突變位點(diǎn);應(yīng)用Phase軟件進(jìn)行與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP位點(diǎn)所組成的單倍型分析，確定原發(fā)性高尿酸血癥易感單倍型；應(yīng)用Logistic回歸分析和不同組別間生化指標(biāo)的比較，確認(rèn)原發(fā)性高尿酸血癥的致病位點(diǎn),從而為高尿酸血癥的基因治療以及新藥篩選等提供可能的理論指導(dǎo)和依據(jù)。內(nèi)容與要求-研究對(duì)象中高尿酸血癥組患者的收入標(biāo)準(zhǔn)普通飲食并排除心、肝、腎以及全身性疾病的基礎(chǔ)上，連續(xù)三次測(cè)定男性及絕經(jīng)后女性血清中尿酸含量超過416umol/L,絕經(jīng)前女性超過357umol/L。正常對(duì)照組收入標(biāo)準(zhǔn)血脂、腎功能、肝功能、尿酸值(各項(xiàng)生化指標(biāo))均在正常范圍內(nèi)的無(wú)高尿酸血癥家族史正常人。利用常規(guī)方法提取患者外周血的基因組DNA，結(jié)合PCR方法獲得目的片段，純化后測(cè)序，與正常人相比較，尋找SNP位點(diǎn)。該基因/蛋白達(dá)到的技術(shù)指標(biāo)為1、hURATl基因中我們共發(fā)現(xiàn)了13個(gè)SNP位點(diǎn)，其中12個(gè)與已知報(bào)道相符，但我們發(fā)現(xiàn)的第3內(nèi)含子+11G>A位點(diǎn)在國(guó)內(nèi)、國(guó)際上均未見有相關(guān)報(bào)道，因此，該位點(diǎn)是hURATl基因的一個(gè)新的SNP位點(diǎn)(測(cè)序圖見圖l)。2、13個(gè)SNPsHardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)顯示所有實(shí)驗(yàn)樣本均符合隨機(jī)性原則(見表l)。3、SNPs等位基因及基因型頻率進(jìn)行比較結(jié)果顯示，高尿酸血癥患者中第三內(nèi)含子+llG〉A(chǔ)SNP,A等位基因頻率為6.28。/。，在正常對(duì)照者中僅為1.7%，差異具有極顯著性(A5.94X10—5)。高尿酸血癥患者AG+AA突變基因型頻率顯著高于正常對(duì)照組(12.11%VS3.40%，/^8.21X10—5)(見表2)。4、單倍型Ht4(包含所有突變型等位基因)在高尿酸血癥組中的頻率顯著高于正常對(duì)照組，與原發(fā)性高尿酸血癥發(fā)病危險(xiǎn)性密切相關(guān)(5.73%VS1.74%,尸=5.93X10,。單倍型Ht4是4種單倍型中唯一包含第三內(nèi)含子+3，11G〉A(chǔ)SNPA突變型等位基因的單倍型，并是唯一與高尿酸血癥密切相關(guān)的單倍型93X10—5)(見表3)。5、連鎖分析結(jié)果顯示，第三內(nèi)含子+3，11G〉A(chǔ)不位于任何一個(gè)周圍高度連鎖的hURATl基因BLOCK中，在基因連鎖圖中呈現(xiàn)斷開現(xiàn)象(見圖2)。6、對(duì)發(fā)現(xiàn)的13個(gè)hURATl基因SNP位點(diǎn)進(jìn)行Logistic回歸分析結(jié)果顯示，如果固定SNP11(+3，11G〉A(chǔ))，其它任何SNP位點(diǎn)都不能改變它的尸值，相反SNPll(+3，11G〉A(chǔ))可以改變其它任何一個(gè)SNP位點(diǎn)的尸值(見表4)。圖1.hURATl基因第三內(nèi)含子+3，11G>A三種基因型GG，GA，M圖2.hURATl基因SNP位點(diǎn)連鎖分析結(jié)果1-13代表hURATl基因上13個(gè)SNP位點(diǎn)l(SNPl):Promotor，-454A/T;2(SNP2):Promotor，-434T/C;3(SNP3):Promotor,—382C/T;4(SNP4):Promotor,-87C/T;5(SNP5):Promotor,+118G/A;6(SNP6):Exon1,C258T;7(SNP7):Exon2，C426T;8(SNP8):Intron2，+271A/G;9(SNP9):Intron2，+277C/T;10(SNP10):Intron2，十278A/G;11(SNP11):Intron3,+11G/A;12(SNP12):Intro8，-103G/A;13(SNP13):Exon8,T1309C.具體實(shí)施方式-1、研究對(duì)象的分組與收集(1)原發(fā)性高尿酸血癥組收入標(biāo)準(zhǔn)普通飲食并排除心、肝、腎以及全身性疾病的基礎(chǔ)上，連續(xù)三次測(cè)定男性及絕經(jīng)后女性血清中尿酸含量超過416umol/L，絕經(jīng)前女性超過357umol/L。227例原發(fā)性高尿酸血癥患者來(lái)自青島大學(xué)附屬醫(yī)院內(nèi)分泌門診、內(nèi)分泌病房及健康體檢中心。其中，男性193例，平均年齡49.58±14.33歲；女性34例，平均年齡54.2±12.0歲。(2)正常對(duì)照組收入標(biāo)準(zhǔn)血脂、腎功能、肝功能、尿酸值(各項(xiàng)生化指標(biāo))均在正常范圍內(nèi)的無(wú)高尿酸血癥家族史正常人。共收集750例自青島大學(xué)附屬醫(yī)院健康體檢中心正常對(duì)照者，從中選取341例與原發(fā)性高尿酸血癥組性別匹配個(gè)體收入正常對(duì)照組，男性206例，平均年齡48.32土13.39歲；女性135例，平均年齡40.9±13.1歲。(3)采集血樣采集每個(gè)研究對(duì)象的血樣。每個(gè)個(gè)體采外周血5ml，加lmlACD抗凝劑，混勻。2、外周血DNA的抽提(1)裂解紅細(xì)胞抗凝血6ml(5ml血，lml抗凝劑)加入15ml塑料離心管中，加入9ml預(yù)冷的溶血試劑，上下顛倒10次左右，冰浴10分鐘，4。C下4000卬m離心5分鐘，棄上清。重復(fù)上述步驟1次。(2)裂解白細(xì)胞加入3ml核懸液，輕輕混勻，加入50ul50。C預(yù)熱的10%SDS,再加入40ul預(yù)冷的蛋白酶K(20mg/ml)，45°C消化過夜，100次/分輕搖。3、抽提DNA:在上述離心管中加入等體積(約3ml)的新鮮配置的苯酚一氯仿一異戊醇(25:24:1)混合液，震蕩10分鐘至乳白色。4。C下4000rpm離心5分鐘，將上清液移入另一15ml離心管中。4、向該上清中加入等體積(約3ml)的氯仿，震蕩10分鐘至乳白色，4'C下4000rpm離心5分鐘，將上清液移入另一15ml離心管中。5、向該上清中加入1/10體積(一般約0.3ml)的3M醋酸鈉溶液(0。C預(yù)冷)及一倍體積(一般約3ml)的異丙醇(-20'C預(yù)冷)，上下輕輕顛倒至析出絮狀沉淀。6、析出絮狀沉淀后，用tip挑出沉淀，放入事先加入70%乙醇的lmlEp管中，在離心機(jī)上13000rpm離心3分鐘，棄乙醇，讓沉淀自然千燥，然后加入200ulTE溶解。7、DNA濃度的測(cè)定吸取DNA原液lul，加入雙蒸水稀釋至100ul，以雙蒸水作為0管，用紫外分光光度儀分別檢測(cè)260nm和280nm的吸光度，計(jì)算OD比值和DNA濃度?！睴D比值二260nmOD值/280nmOD值，DNA濃度(ng/ul)二OD260nm值X稀釋倍數(shù)X50)8、稀釋DNA:按已測(cè)的DNA濃度，把所有樣本的DNA稀釋成50ng/ul的濃度，-20度保存，以備下一步PCR反應(yīng)使用。9、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR):應(yīng)用引物設(shè)計(jì)軟件primerexperss2.0，遵循引物設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)10對(duì)引物(表1)，擴(kuò)增hURATl基因5'側(cè)翼區(qū)、IO個(gè)外顯子、外顯子和內(nèi)含子交界處。(1)PCR反應(yīng)體系(20ul):ddH2014(卩L)10*buffer2dNTP(10mM)1上游引物0.5下游引物0.5DNA(50ng/ul-100ng/ul)1Taq酶(5units/ul)0.5Total+)20u(2)PCR反應(yīng)條件PCR反應(yīng)用96孔PCR反應(yīng)板，在MJPCR熱循環(huán)儀上進(jìn)行:95°C,5min94°C,40s退火溫度見表5，lrain72°C,35sec—72°C，10min30cycles(3)1.5%agarose凝膠電泳。(4)PCR產(chǎn)物純化用ExonucleaseI(ExoI)和蟲下堿性磷酸酶(ShrimpAlkalinePhosphatase,SAP)純化PCR產(chǎn)物。當(dāng)PCR擴(kuò)增完成后，任何存在于PCR產(chǎn)物混合物中未被消耗的dNTPs和引物將影響測(cè)序或SNP分析。外切酶I可去除剩余的單鏈引物和任何在PCR中產(chǎn)生的外來(lái)單鏈DNA。SAP去除DNA片段5'端磷酸，增強(qiáng)隨后的標(biāo)記。反應(yīng)體系7|li1含SAP(lU/ul)0.5ul，ExoI0.25ul(終濃度為20U/ul)，PCR產(chǎn)物5ul。循環(huán)參數(shù)37°C60分鐘，80°C15分鐘。純化后取2ul跑1。/。agarose凝膠電泳定量，以備測(cè)序。(采用ABB730自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序)10、目的片段DNA測(cè)序產(chǎn)物純化后應(yīng)用美國(guó)ABIPRISM3730DNA自動(dòng)測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序，以PCR時(shí)的引物為測(cè)序引物，用BigDyeTerminator測(cè)序試劑盒(AppliedBiosystems)進(jìn)行PCRCycleSequencing反應(yīng)。11、序列比對(duì)分析利用Autoassembler2.0軟件將測(cè)序結(jié)果與UCSC數(shù)據(jù)庫(kù)下載的基因組序列進(jìn)行比較、分析，找出突變位點(diǎn)。12、統(tǒng)計(jì)處理應(yīng)用haploview軟件檢驗(yàn)研究對(duì)象SNPHardy-Weinberg平衡，確認(rèn)研究對(duì)象選取的隨機(jī)性及兩兩SNP位點(diǎn)之間的連鎖關(guān)系；應(yīng)用X2檢驗(yàn)比較不同組別基因型及等位基因頻率，確定與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP及突變位點(diǎn)；應(yīng)用Phase軟件進(jìn)行與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP位點(diǎn)所組成的單倍型分析，確定原發(fā)性高尿酸血癥易感單倍型；應(yīng)用Logistic回歸分析和不同組別間生化指標(biāo)的比較，確認(rèn)原發(fā)性高尿酸血癥的致病位點(diǎn)。表l中國(guó)漢族人群中hURATl基因SNP位點(diǎn)NucleotideSNPMAF0bsHETPredHET冊(cè)PdescriptionPromotorrsll602903-454A〉T0.2560.390.380.7806rs524023-434T〉C0.2540.3870.3790.8388rs97334313-382C〉T0.2560.390.380.7806rs559946-87C〉T0.2530.3920.3780.6539rs3825018+118G〉A(chǔ)0.2530.3920.3780.6539Exon1rs3825016C258T0.2370.3960.3620.1204Exon2rsll231825C426T0.2410.3730.3660.8471Intron2,rs576076+271A〉G0.4940.,430.50.0154rsl0792441+277C〉T0.2570.,390.3820.8395rs537246+278A〉G0.2570..390.3820.8395Intron3+11G〉A(chǔ)0.0160.0330.0321Intron8rs7929627-103G〉A(chǔ)0.4250.5240.4890.2368Exon8rs7932775T1309C0.4250.5240.4890.2368MAF:最小等位基因頻率；0bsHET:觀測(cè)雜合度；PredHET:預(yù)測(cè)雜合度;HWpvalue:Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)尸值表2hURATl基因等位基因頻率、基因型頻率比較SNP等位基因等位基因頻率P-valueOR基因型基因型頻率P-valueOR對(duì)照組病人組controlcase-454A>T74.17%80.56%1,63X1021.44AA+AT94.95.83%0.361.47-434T〉C74.17%&0.56%1.63X10'1.44TT+CT94.00%95.83%0.361.47-382C>T74,17%SO.56%1.63X10—2L44CC十CT94.00%95.83%0.361.47—87C〉T74.17%80.32%2.09XL(T1.42CC+CT94.00%96.30%C.241.66-118G>A74.17%SO.32%2.09X10—21.42GG+GA94.00%96.30%0.241.66C258TC426T+2，271A/G+2，277C/T+2，278A/G+3，11G〉A(chǔ)-8，103G/ATl，C76.57%79,0276.87%80.45%50.00%54.52%7153%79.09%74.53%79.09%0.680.87CCiCT95.60%93.75%(!5S1.70%0.181.24TT+TC94.78%95,00%0.910.190.83GG-GA71.16%75.11%0.330.090.77CC+CT93.26%93.64%0.870.090.77AA+AG93.26%93.64%0.871,45.040,820.940.946,28%5.94X1053.88AA+GA3.40%12.11%8.21X10—。3.9242.49%51.34%4.13X10—11.43GG+GA68.37%79.02%6.25X10—31.7442.49%51.34%4.13X10-31.43CC+CT6S.37%79.02%6.25X10-31.74表3hURATl基因SNP位點(diǎn)單倍型分析<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注0:野生型等位基因；1:突變型等位基因.S1:Promotor,-454A/T;S2:P謂otor，-434T/CS3:Promoter,-382C/T;S4:Promotor，-87C/T;S5:Promoter,+118G/A;S6:Intron3,+11G/A;S7:Intro8，-103G/A;S8:Exon8，T1309C.表4hURATl基因SNP位點(diǎn)Logistic回歸分析TOSNP1TOSNP2TOSNP3P-valueP-v3lueP—valueP-valueP-valueP-valueSNP1TOSNP2TOSNP3TOSNP60.0269SNP70.0411SNP60.0269SNP7O.(MllSNP60.0269SNP70.0411SNP80.0443S，80.0141SNP80.0443S鄉(xiāng)0.0141SNP80.0443SNP80.0141SNP110.0024SNP110.0024SNP110.0024TOSNP4TOSNP5TOSNP6P-valueP—valueP-valueP-velueP-valueP-valueSNP4TOSNP5TOSNP6TOSNP60.0473SNP80.0183SNP60.0473SNP80.0183SNP110搬9SNP110.0020SNP110.0020TOSNP7TOSNP8TOSNP9P-valueP—vaiusP-valueP-valueP-valueP-valueSNP7TOSNP8TOSNP9TOSNP10.0411SNP10.0141SNP10.0443SNP110細(xì)2SNP80.0474SNP20.04USNP20.0141SNP30.0411SNP300141SNP110.0108SNP40扁3SNP50扁3SNP90.0474SNP100.0474SNP110.0117TOSNP10TOSNP11TOSNP12P-valueP-valueP-valueP-valueP-vslueP-valueSNP10TOSNP11TOSNP12TOSNPil0細(xì)2SNP80.0474SNP10.0024SNP110.0097SNP20.0024SNP30-0024SNP40.0020SNP50.0020SNP60.0029SNP70.0簡(jiǎn)SNP80.0117SNP90,0082SNP100.0082SNP120.0097SNP130.0097TOSNP13P-valueSNP13TOP—valueSNP110,0097^主SNP1:Promotor,-454A/T;SNP2:Promotor,-434T/C;SNP3:Promotor,-382C/T;SNP4:Promotor,-87C/T;SNP5:Promotor,+118G/A;SNP6:Exon1,C258T;SNP7:Exon2,C426T;SNP8:Intron2,+271A/G;SNP9:Intron2，+277C/T;SNP10:Intron2,+278A/G;SNP11:Intron3，+11G/A;SNP12:Intro8，-103G/A;SNP13:Exon8,T1309C.表5用于擴(kuò)増hURATl基因外顯于的PCR引物及退火溫度<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>其中啟動(dòng)子分為三段進(jìn)行擴(kuò)增，引物分別為Promoter-1、Promoter-2、Promoter-3。引物1:擴(kuò)增外顯子12:擴(kuò)增外顯子23+4:擴(kuò)增外顯子3，內(nèi)含子3及外顯子45+6:擴(kuò)增外顯子5，內(nèi)含子5及外顯子67:擴(kuò)增外顯子78+9:擴(kuò)增外顯子8，內(nèi)含子8及外顯子910:擴(kuò)增外顯子10權(quán)利要求1.本發(fā)明涉及維持血尿酸水平的關(guān)鍵基因——hURAT1，發(fā)現(xiàn)該基因第三內(nèi)含子的SNP位點(diǎn)+11G>A，其特征在于首次在中國(guó)漢族人群中發(fā)現(xiàn)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述之hURATl第三內(nèi)含子多態(tài)性，其特征在于SNPS等位基因及基因型頻率進(jìn)行比較結(jié)果顯示，高尿酸血癥患者中第三內(nèi)含子+llG〉A(chǔ)SNP，A等位基因頻率為6.28%,在正常對(duì)照者中僅為1.7%,差異具有極顯著性(P二5.94X10-5)。高尿酸血癥患者AG+AA突變基因型頻率顯著高于正常對(duì)照組(12.11%VS3.40%,P=8.21X10-5)3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述之hURATl第三內(nèi)含子多態(tài)性，其特征在于單倍型Ht4(包含所有突變型等位基因)在高尿酸血癥組中的頻率顯著高于正常對(duì)照組，與原發(fā)性高尿酸血癥發(fā)病危險(xiǎn)性密切相關(guān)(5.73%VS1.74%，P-5.93X10-5)。單倍型Ht4是4種單倍型中唯一包含第三內(nèi)含子+3，11G>ASNPA突變型等位基因的單倍型，并是唯一與高尿酸血癥密切相關(guān)的單倍型(P=5.93X10-5)4.根據(jù)權(quán)利要求l、2、3所述之hURATl第三內(nèi)含子多態(tài)性，其特征在于連鎖分析結(jié)果顯示，第三內(nèi)含子+3，11G>A不位于任何一個(gè)周圍高度連鎖的hURATl基因BLOCK中，在基因連鎖圖中呈現(xiàn)斷開現(xiàn)象5.根據(jù)權(quán)利要求l、2、3、4所述之hURATl第三內(nèi)含子多態(tài)性，其特征在于hURATl第三內(nèi)含子的SNP位點(diǎn)+11G〉A(chǔ)與高尿酸血癥易感性的提高顯著相關(guān)全文摘要本發(fā)明涉及維持血尿酸水平的關(guān)鍵基因-hURAT1第三內(nèi)含子SNP位點(diǎn)+11G＞A的發(fā)現(xiàn)。內(nèi)容包括原發(fā)性高尿酸血癥患者以及正常人群的收集；常規(guī)方法提取外周血；根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)特異性的引物，PCR擴(kuò)增獲得目的基因；將PCR產(chǎn)物純化后測(cè)序；應(yīng)用haploview軟件檢驗(yàn)研究對(duì)象SNPHardy-Weinberg平衡，確認(rèn)研究對(duì)象選取的隨機(jī)性及兩兩SNP位點(diǎn)之間的連鎖關(guān)系；應(yīng)用X2檢驗(yàn)比較不同組別基因型及等位基因頻率，確定與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP及突變位點(diǎn)；應(yīng)用Phase軟件進(jìn)行與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)的SNP位點(diǎn)所組成的單倍型分析，確定原發(fā)性高尿酸血癥易感單倍型；應(yīng)用Logistic回歸分析和不同組別間生化指標(biāo)的比較，確認(rèn)原發(fā)性高尿酸血癥的致病位點(diǎn)。結(jié)果顯示我們?cè)跐h族人群中新發(fā)現(xiàn)的hURAT1第三內(nèi)含子的SNP位點(diǎn)+11G＞A與高尿酸血癥易感性的提高顯著相關(guān)。文檔編號(hào)C12N15/12GK101418296SQ200810170488公開日2009年4月29日申請(qǐng)日期2008年11月5日優(yōu)先權(quán)日2008年11月5日發(fā)明者孟冬梅,李長(zhǎng)貴,王云龍,苗志敏,閆勝利,琳韓申請(qǐng)人:李長(zhǎng)貴;苗志敏;閆勝利