專利名稱：：一種兒童智商基因檢測評估試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種易感基因檢測產(chǎn)品，具體的說，涉及一種有關(guān)兒童智商基因檢測評估的試劑盒。
背景技術(shù)：
：智力，也叫智能或者智慧，是認(rèn)識客觀事物并運(yùn)用知識的、技能去解決實(shí)際問題的一種能力。它是人所有能力的基礎(chǔ)，是保證各種活動正常進(jìn)行的關(guān)鍵。智力高的人，思維敏捷，學(xué)習(xí)能力強(qiáng)，分析問題深刻，容易在某個(gè)專業(yè)領(lǐng)域做出杰出的成就，成為該領(lǐng)域的專家。智商是以科學(xué)的方法來量化智力。智商集中表現(xiàn)在認(rèn)識客觀事物本質(zhì)的深刻程度、全面程度和正確程度，還表現(xiàn)在應(yīng)用知識技能解決問題的速度和質(zhì)量上。一般來說，智商有兩種一種是比率智商，智力年齡+實(shí)足年齡=智力商數(shù)。如果某人智齡與實(shí)齡相等，他的智商即為100，表示其智力中等；另一種是離差智商，把一個(gè)人的測驗(yàn)分?jǐn)?shù)與同齡組正常人的智力平均數(shù)之比作為智商?，F(xiàn)在大多數(shù)智力測驗(yàn)都采用離差智商。智商是先天素質(zhì)、教育的影響以及個(gè)人努力三方面因素相互作用的產(chǎn)物。人一出生智商急速直線增長，到了13-14歲的時(shí)候這種增長速度減緩，在26歲以后基本不變。科學(xué)家們對400多名兒童進(jìn)行長期跟蹤調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)智商的遺傳因素占到61%，而后天智力開發(fā)與環(huán)境因素占39%。目前生物學(xué)界發(fā)現(xiàn)幾個(gè)涉及智商形成的基因。其中重要的有COMT基因與M(PHl基因。C0MT基因編碼的蛋白C0MT主要存在與腦中，它會干擾機(jī)體解決問題的中心一最前腦皮層的活動。C0MT是降解兒茶酚胺的主要代謝酶，可以使體內(nèi)兒茶酚失去生物活性或毒性。如果產(chǎn)生基因突變，則會降低思考彈性。而MCPH1基因編碼的蛋白MCPH1在人類的進(jìn)化中起了巨大的作用。它與DNA損傷反應(yīng)有關(guān)，此基因的突變會影響機(jī)體智力甚至腦部疾病，其功能喪失可能促進(jìn)癌癥的發(fā)生。MCPH1與人腦的體積密切相關(guān)，決定智力水平。這些基因的變化將嚴(yán)重影響到一個(gè)人的智商潛力。對一個(gè)兒童來說，如果家長因?yàn)椴恢浪嬖诘倪z傳缺陷，而沒有特別注意孩子的智商培養(yǎng)，錯(cuò)過了最佳提高智商的時(shí)間，將會對孩子的終生造成不可彌補(bǔ)的損失。目前智商測試一般采用心理學(xué)量表編制法問巻測試。該類智商測試易受情緒、身體好壞的影響，重復(fù)性低，可信度低。即測試的準(zhǔn)確性受外界環(huán)境影響較大。由于對被測者配合程度的要求，一般都不適于對年幼兒童，尤其是5歲以前孩童做測試。但由于人在幼時(shí)智商的急劇增加，早教對個(gè)人的一生都至關(guān)重要。倘若一個(gè)人與智商相關(guān)的生物學(xué)遺傳特性有缺陷，早期發(fā)現(xiàn)和及時(shí)采取措施更會起到重大作用。提供一種簡便而客觀的方法進(jìn)行兒童智商生物學(xué)遺傳特性的測試，提供給父母養(yǎng)育孩子時(shí)重要的參考信息，對下一代的培養(yǎng)有非常積極的意義。
發(fā)明內(nèi)容為了可以簡便而客觀地對兒童智商進(jìn)行測試，本發(fā)明提供一種兒童智商基因檢測4評估試劑盒，可以以兒童DNA樣本為測試樣本，對兒童智商的基因進(jìn)行檢測，從而簡便快捷地測試其智商，而不需要經(jīng)過繁鎖的多方位測試，并且免受兒童臨時(shí)身體狀況的影響。該試劑盒由DNA抽提試劑，預(yù)混PCR反應(yīng)液，標(biāo)準(zhǔn)陽性對照品，標(biāo)準(zhǔn)陰性對照品組成。使用時(shí)以被測兒童的DNA樣本為檢測對象，經(jīng)過樣本DNA抽提后，使用試劑盒在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)合反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行診斷。上述的預(yù)混PCR反應(yīng)液含有SYBRgreenI，以及與兒童智商相關(guān)的C0MT和MCPH1基因突變位點(diǎn)的擴(kuò)增引物；擴(kuò)增引物為包含突變位點(diǎn)的上游引物和下游引物，序列如下擴(kuò)增COMT基因的引物上游引物FIA5-GGATGGTGGATTTCGCTGTCA-321bp，上游引物FIG5-GATGGTGGATTTCGCTGTCG-320bp，下游引物Rl5-CTGGTGGGGAGGACAAAGTG-320bp;擴(kuò)增MCPH1基因的引物上游引物F2T5-TTGCCGACCAGCCCGT-316bp，上游引物F2C5-TGCCGACCAGCCCGC-315bp，下游引物R25-CGGGGGACTTGGCTGAC-317bp。的序列上述的兒童智商基因檢測評估試劑盒，所述的陽性對照品有4個(gè)，分別包含如下SEQ1:CTGTGCCGCCAGGTGTGCATGGCAGGGAGGGTTCACTGAASEQ2:CTGTGCCGCCAAGGTGTGCAGGGCACGGAGCGTTCACTGASEQ3:GTCTGCAGGGTTTGTCTCGCCACCTGTGTGCATCGGGCCCSEQ4:AGATACTTGAGCTGGCCTGGGTTCACAGAGGCTGGCTGGT上述的兒SEQ5:ATCACCCAGCGCCTGACCCGGCATGCGCACAACCCACTATATCACCCAAGTGCCTGACCCGGCATGCGCAAAACCCACTACCGTACCGCGCTGCCAGCAGGAGGCCGGGTTACAGCGGAACTGTGGCTTTCGGGGGACTTCTTGGCCACTCGGCAAAGAGGGATGGTGGATTGTCAGACCTTTGTCCTCCCACCAGGCCCCGGATGGTGGGTTGTCAGACCTTTGTCCTCTCACCAGGCCGAAACCCTCTCCCCCCAGTGCAGCCAAGTCAGAAGAAAGCCTTCTTTCCGGGCTGACCCGGGGGGGCTGCGGTTCCGCGGTTTCGCTGGCTGGAAAAAGGCCACCAGGTGCTCAGTGCTTATTTCGCTGGCTGGAAAAAGCCCACCAGGTCCTCAGTGCTTTGCCGACCACCAAGCTCTGCCCCGCCAGGCACAGTCAAGCTGTAGGGCCGCCTCCGCACTGGCAGGCGATACGGCCCTGATGAAGGACAGCCGGCTGTGTTCACACCACCC;CGTGAAGGACGGCCGGCTGTGTTCACACCATCC;GCCAGTGATGTGAACTAGTCCCAGCATCGTTATCT;CGATGACGATAGGTGGACTAGACAAACATCCAGAC。智商基因檢測評估試劑盒，所述的陰性對照品包含的序列為TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。本發(fā)明的使用不需要兒童本人到場，只需取其DNA樣本，比如口腔樣本，更有效保護(hù)對方隱私。不用問答形式，減輕人為因素對診斷結(jié)果的影響。可以對兒童智商的生物學(xué)遺傳特性進(jìn)行簡便而客觀地分析，便于推廣應(yīng)用，有助于及早診斷兒童智商遺傳學(xué)特性。圖1，圖2，圖3，圖4，圖5，圖6為熒光定量PCR儀上的擴(kuò)增曲線圖。各圖上方的DeltaRnvsCycle,是指ARn隨循環(huán)變化的對數(shù)擴(kuò)增圖譜；ARn(DeltaRn)是指在給定的一組PCR條件下所生成熒光信號的對數(shù)值。該圖的橫坐標(biāo)表示循環(huán)數(shù)(CycleNumber)，縱坐標(biāo)表示熒光值(DeltaRn)。橫線表示熒光域值，曲線與熒光域值線的交叉點(diǎn)所對應(yīng)的循環(huán)數(shù)即為Ct值。圖1、圖2、圖3中橫線3表示熒光域值；曲線l表示為擴(kuò)增COMT基因的引物對F1A+R1，擴(kuò)增樣本所生成的擴(kuò)增曲線；曲線2為擴(kuò)增C0MT基因的引物對F1G+R1，這對引物擴(kuò)增樣本所生成的擴(kuò)增曲線。圖1表示COMT基因AA純合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線1與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為Cl，曲線2與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C2。圖2表示C0MT基因GG純合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線1與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C3，曲線2與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C4。圖3表示COMT基因AG雜合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線2與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C5，曲線1與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C6。圖4、圖5、圖6中橫線4表示熒光域值；曲線5表示為擴(kuò)增MCPH1基因的引物對F2T+R2，擴(kuò)增樣本所生成的擴(kuò)增曲線；曲線6為擴(kuò)增MCPH1基因的引物對F2C+R2，這對引物擴(kuò)增樣本所生成的擴(kuò)增曲線。圖4表示MCPH1基因CC純合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線5與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C7，曲線6與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C8。圖5表示MCPH1基因CT雜合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線5與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C9，曲線6與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為CIO。圖6表示MCPH1基因TT純合型樣本的產(chǎn)物擴(kuò)增曲線圖曲線6與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為Cll，曲線5與熒光域值線的交叉點(diǎn)表示達(dá)到域值的Ct循環(huán)數(shù)值為C12。具體實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，下面實(shí)施例中未說明的常規(guī)條件和方法，通常按照所屬領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)人員常規(guī)采用方法如薩姆布魯克和拉塞爾主編的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第三版，或按照制造廠商所建議的步驟和條件。實(shí)施例1:試劑盒的制備。包括(1)探針的準(zhǔn)備；(2)DNA抽提試劑；(3)預(yù)混反應(yīng)液；(4)標(biāo)準(zhǔn)陽性對照；(5)標(biāo)準(zhǔn)陰性對照。(1)探針的準(zhǔn)備；由通常的核苷酸引物合成儀合成。序列如下擴(kuò)增COMT基因的引物上游引物F1A5-GGATGGTGGATTTCGCTGTCA-321bp，上游引物FIG5-GATGGTGGATTTCGCTGTCG-320bp，下游引物Rl5-CTGGTGGGGAGGACAAAGTG-320bp;擴(kuò)增MCPH1基因的引物上游引物F2T5-TTGCCGACCAGCCCGT-316bp，上游引物F2C5-TGCCGACCAGCCCGC-315bp，下游引物R25-CGGGGGACTTGGCTGAC-317bp。使用前按每OD引物稀釋為100iimol/L(即100pmol/ii1)濃度的加水量，開啟瓶蓋溶解之前最好在3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心1分鐘，防止開蓋時(shí)引物散失。使用前，將濃溶液稀釋成工作液10pmol/ml后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(2)DNA抽提試劑<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>(3)預(yù)混PCR反應(yīng)液預(yù)混反應(yīng)液包括4種，每種內(nèi)含一對上下游擴(kuò)增引物，各對應(yīng)一個(gè)基因型。按lml配比量計(jì)算，共同的成分配制為100iiM的dNTP，20ii1;500U/ii1TaqDNAPolymerase20ii1;2XQuantOneSt印SYBR1300ii1;10iiM的上游弓l物50ii1;10iiM的下游引物50ii1;RNase-freeddH20860ii1。管l的l對引物為上游引物FA5-GGATGGTGGATTTCGCTGTCA-321bp，下游引物R5-CTGGTGGGGAGGACAAAGTG-320bp;管2的1對引物為上游引物FG5-GATGGTGGATTTCGCTGTCG-320bp，下游引物R5-CTGGTGGGGAGGACAAAGTG-320bp;管3的1對引物為上游引物FT5-TTGCCGACCAGCCCGT-316bp，下游引物R5-CGGGGGACTTGGCTGAC-317bp;管4的1對引物為上游引物FC5-TGCCGACCAGCCCGC-315bp，下游引物R5-CGGGGGACTTGGCTGAC-317bp。(4)標(biāo)準(zhǔn)陽性對照標(biāo)準(zhǔn)陽性模板是含有COMT和MCPH1基因中含突變核苷酸片段構(gòu)成的Pucl8-T重組質(zhì)粒，該重組質(zhì)料轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a增殖后用堿裂解法提取，經(jīng)DNA純化試劑盒純化，用分光光度計(jì)測A260定量并稀釋到1(fCopy/ia，-2(TC保存。貯存存為109Copy/yl，使用濃度為105COpy/iil。標(biāo)準(zhǔn)陽性模板提供4種，每種濃度為105Copy/1。序列如下SEQ1:CTGTGCCGCCATCACCCAGCGGATGGTGGATTTCGCTGGCATGAAGGACAAGGTGTGCATGCCTGACCCGTTGTCAGACCTGGAAAAAGGGCCGGCTGTGGGCAGGGAGGGCATGCGCACTTTGTCCTCCCCACCAGGTGTTCACACCACGTTCACTGAAAACCCACTATCACCAGGCCCCTCAGTGCTTCC，SEQ2:CTGTGCCGCCATCACCCAAGCGGATGGTGGATTTCGCTGGCGTGAAGGACAAGGTGTGCATGCCTGACCCGTTGTCAGACCTGGAAAAAGGGCCGGCTGTGGGCACGGAGGGCATGCGCACTTTGTCCTCCCCACCAGGTGTTCACACCACGTTCACTGAAAACCCACTATCACCAGGCCCCTCAGTGCTTCC，SEQ3:GTCTGCAGGGCCGTACCGCGGAAACCCTCTTTGCCGACCAGCCAGTGATGTTTGTCTCGCCTGCCAGCAGCCCCCCAGTGCCAAGCTCTGTGAACTAGTCCACCTGTGTGGAGGCCGGGTCAGCCAAGTCCCCCGCCAGGCCAGCATCGTCATCGGGCCCTACAGCGGAAAGAAGAAAGCCACAGTCAAGTATCT，SEQ4:AGATACTTGACTGTGGCTTTCTTCTTTCCGCTGTAGGGCCCGATGACGATGCTGGCCTGGCGGGGGACTTGGCTGACCCGGCCTCCGCACAGGTGGACTAGTTCACAGAGCTTGGCCACTGGGGGGCTGCTGGCAGGCGAGACAAACATCGCTGGCTGGTCGGCAAAGAGGGTTCCGCGGTACGGCCCTGCAGAC。(5)標(biāo)準(zhǔn)陰性對照標(biāo)準(zhǔn)陰性模板是含有擬南芥基因片斷180個(gè)核苷酸構(gòu)成的Pucl8-T重組質(zhì)粒重組質(zhì)料轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a增殖后用堿裂解法提取，經(jīng)DNA純化試劑盒純化，用分光光度計(jì)測A260定量并稀釋到109Copy/ia，-2(rC保存。貯存存為109Copy/yl，使用濃度為105Copy/iil。序列如下8SEQ5:TTCGTTATTGGCTTCTCTGGTAATTGCTGTGTATATAACAAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATTTAGGAGTTGGTGCATGCTC。實(shí)施例2:試劑盒的使用(1)樣本的制備取樣方式使用棉簽在面頰內(nèi)擦拭10次。注意為了保證樣本不被食物或者飲料污染，取樣前30分鐘內(nèi)請勿進(jìn)食和飲水。a)處理材料將在面頰內(nèi)擦拭過的棉簽轉(zhuǎn)置于2ml離心管中，用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，加入400ii1緩沖液GA。b)加入20ill蛋白酶K溶液，渦旋10秒混勻，56t:放置60分鐘，其間每15分鐘渦旋混勻數(shù)次。c)加入400ii1緩沖液GB，充分顛倒混勻，7(TC放置10分鐘，此時(shí)溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。d)加2001無水乙醇，充分顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。e)將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CR中(吸附柱CR放入收集管中)，12，OOOrpm(13，400Xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管中。f)向吸附柱CR中加入500ii1緩沖液GD，12，OOOrpm(倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管中。g)向吸附柱CR中加入700ii1漂洗液PW，12，OOOrpm(倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管。h)向吸附柱CR中加入500ii1漂洗液PW，12，OOOrpm(倒掉收集管中的廢液。i)將吸附柱CR放回收集管中，12，000rpm(13，400Xg)離心2分鐘，倒掉廢液。將吸附柱CR室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗。j)將吸附柱CR轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50ill洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5分鐘，12，OOOrpm(13，400Xg)離心2分鐘。重復(fù)一次。(2)實(shí)驗(yàn)過程a)按樣品數(shù)!1(樣品數(shù)=待測樣本數(shù)+陰性對照1個(gè)+陽性對照1個(gè))取預(yù)混PCR反應(yīng)液每管231分裝于反應(yīng)管中。b)將上述處理好的待測樣本和陰性、陽性對照(務(wù)必振蕩混勻數(shù)秒)各取2ul分別加入反應(yīng)管中，混勻，低速離心數(shù)秒，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。c)PCR條件95°C10sec(95°C15sec，60。C60sec)X40個(gè)循環(huán)(3)結(jié)果分析與判斷a)定量檢測SNP的判斷標(biāo)準(zhǔn)13，400Xg)離心30秒，13，400Xg)離心30秒，13，400Xg)離心30秒，兩曲線的Ct值之差的絕對值記為IACtl，當(dāng)IACt|《l，判斷為雜合型；當(dāng)ACt>5，判斷為純合型。如圖，圖1中IACt|>5，表示該樣本為C0MT基因AA純合型樣本。圖2中，ACt|>5，表示該樣本為C0MT基因GG純合型樣本。圖3中，|ACt|《l，表示該樣本為COMT基因AG雜合型樣本。圖4中IACtI>5，表示該樣本為MCPHl基因CC純合型樣本。圖5中，IACt|《l，表示該樣本為MCPHl基因CT雜合型樣本。圖6中，|ACt|>5，表示該樣本為MCPHl基因TT純合型樣本。b)結(jié)果分析基因型診斷結(jié)果COMTAA+MCPHlCC基因檢測結(jié)果顯示兒童高智商的機(jī)率比較大。COMTGG+MCPHlTT基因檢測結(jié)果顯示兒童高智商的機(jī)率較小。COMT+MCPHl的其他基因檢測結(jié)果顯示可能為兒童高智商，需要結(jié)合其他的檢組合査手段。序列表〈110〉上海裕隆生物科技有限公司〈120〉一種兒童智商基因檢測評估試劑盒〈160>11〈210>1〈211>21〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測COMT基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為上游引物F1A。〈400〉1ggatggtggatttcgctgtca21〈210>2〈211>20〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測COMT基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為上游引物F1G?！?00>20163]gatggtggatttcgctgtcg200164]〈210>30165]〈211>200166]〈212>DNA0167]〈213>人工序列0168]〈220〉0169]〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測COMT基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為下游引物Rl。0170]〈400>30171]ctggtggggaggacaaagtg200172]〈210>40173]〈211>160174]〈212>DNA0175]〈213>人工序列0176]〈220〉0177]〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測MCPH1基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為上游引物F2T。0178]〈400>40179]ttgccgaccagcccgt160180]〈210>50181]〈211>150182]〈212>DNA0183]〈213>人工序列0184]〈220〉0185]〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測MCPH1基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為上游引物F2C。0186]〈400>50187]tgccgaccagcccgc150188]〈210>60189]〈211>170190]〈212>DNA0191]〈213>人工序列0192]〈220〉0193]〈223〉根據(jù)核酸堿基配對原理和基因芯片雜交條件設(shè)計(jì)，以用作兒童智商基因檢測評估試劑盒中檢測MCPH1基因序列相關(guān)突變的DNA引物，命名為下游引物R2。0194]〈400>60195]cgggggacttggctgac170196]〈210>70197]〈211>19211〈212>DNA〈213〉人屬(Homo)〈400>7ctgtgccgccatcacccagcgg3tggtgg3tttcgctggcatg朋ggac3aggtgtgcat60gcctgacccgttgtcagacctgg3aaaagggccggctgtgggcagggagggcatgcgcac120tttgtcctccccaccaggtgttcacaccacgttcactgaaaacccactatcaccaggccc180ctcagtgcttcc192〈210>8〈211>193〈212>DNA〈213〉人屬(Homo)〈400>8ctgtgccgccatcacccaagcggatggtggatttcgctggcgtgaaggac朋ggtgtgC360tgcctgacccgttgtcagacggccggctgtgggraeggagggcatgegea120ctttgtcctccccaccaggtgttcacaccacgttcactgatcaccaggcc180cctcagtgcttec193〈210>9<211>195〈212>DNA〈213〉人屬(Homo)〈400>9gtctgcagggccgtaccgcggaaaccctctttgccgaccagccagtgatgtttgtctcgc60ctgccagcagccccccagtgccaagctctgtgaactagtccacctgtgtggaggcegggt120cagccaagtcccccgccaggccagcatcgtcatcgggccctacagcgg朋180C3C3gtC朋gtatct195〈210>10〈211>195〈212>DNA〈213〉人屬(Homo)<400〉10agatecttgactgtggctttcttctttccgctgtegggcccgatgacgatgctggcctgg60cgggggacttggctgacccggcctccgcac郷tggactegttcacagagcttggccact120ggggggctgctggcaggegagctggctggtCggC3朋g3gggttccgcgg180tecggccctgcagac195〈210>11〈211〉180〈212>DNA〈213>擬南芥(Arabidopsisthaliana)〈400>1112ttcgttettgaatcttgttttggttctcttgtgtggaatgcattgttcttgcttctctgg60aacttgggatatgatgacaaaaatecgatetctcteaggcteattgctgtgcggatgaaa120tetetttgcacgtcagtctgatcccattetgteteteacatteggagttggtgcatgctc180權(quán)利要求一種兒童智商基因檢測評估試劑盒，其特征在于由DNA抽提試劑，預(yù)混PCR反應(yīng)液，標(biāo)準(zhǔn)陽性對照品，標(biāo)準(zhǔn)陰性對照品組成；所述的預(yù)混PCR反應(yīng)液含有SYBRgreenI，以及擴(kuò)增與兒童智商相關(guān)的COMT和MCPH1基因突變位點(diǎn)的擴(kuò)增引物；擴(kuò)增引物為包含突變位點(diǎn)的上游引物和正常型下游引物，序列如下擴(kuò)增COMT基因的相關(guān)引物上游引物F1A5-GGATGGTGGATTTCGCTGTCA-321bp，上游引物F1G5-GATGGTGGATTTCGCTGTCG-320bp，下游引物R15-CTGGTGGGGAGGACAAAGTG-320bp；擴(kuò)增MCPH1基因的相關(guān)引物上游引物F2T5-TTGCCGACCAGCCCGT-316bp，上游引物F2C5-TGCCGACCAGCCCGC-315bp，下游引物R25-CGGGGGACTTGGCTGAC-317bp。2.如權(quán)利要求1所述的兒童智商基因檢測評估試劑盒，其特征在于所述的陽性對照品有4個(gè)，分別包含如下的序列SEQ1:ATCACCCAGCGGATGGTGGATTTCGCTGGCATGAAGGACAGCCTGACCCGTTGTCAGACCTGGAAAAAGGGCCGGCTGTGGCATGCGCACTTTGTCCTCCCCACCAGGTGTTCACACCACAACCCACTATCACCAGGCCCCTCAGTGCTTCC;CTGTGCCGCCAGGTGTGCATGGCAGGGAGGGTTCACTGAASEQ2:CTGTGCCGCCAAGGTGTGCAGGGCACGGAGCGTTCACTGASEQ3:GTCTGCAGGGTTTGTCTCGCCACCTGTGTGCATCGGGCCCSEQ4:AGATACTTGAGCTGGCCTGGGTTCACAGAGGCTGGCTGGTATCACCCAAGTGCCTGACCCGGCATGCGCAAAACCCACTACCGTACCGCGCTGCCAGCAGGAGGCCGGGTTACAGCGGAACGGATGGTGGGTTGTCAGACCTTTGTCCTCTCACCAGGCCGAAACCCTCTCCCCCCAGTGCAGCCAAGTCAGAAGAAAGCATTTCGCTGGCTGGAAAAAGCCCACCAGGTCCTCAGTGCTTTGCCGACCACCAAGCTCTGCCCCGCCAGGCACAGTCAAGCGTGAAGGACGGCCGGCTGTGTTCACACCATCC;GCCAGTGATGTGAACTAGTCCCAGCATCGTTATCT;CTGTGGCTTTCTTCTTTCCGCTGTAGGGCCCGATGACGATCGGGGGACTTGGCTGACCCGGCCTCCGCACAGGTGGACTACTTGGCCACTGGGGGGCTGCTGGCAGGCGAGACAAACATCCGGCAAAGAGGGTTCCGCGGTACGGCCCTGCAGAC。3.如權(quán)利要求1或2所述的兒童智商基因檢測評估試劑盒，其特征在于所述的陰性對照品包含的序列為SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。全文摘要一種用于兒童智商基因檢測評估試劑盒，可以克服傳統(tǒng)兒童智商檢測方法在原理和操作上的局限性。本試劑盒由DNA抽提試劑，預(yù)混PCR反應(yīng)液，標(biāo)準(zhǔn)陽性對照品，標(biāo)準(zhǔn)陰性對照品組成。使用時(shí)以被測兒童的DNA樣本為檢測對象，經(jīng)過樣本DNA抽提后，使用試劑盒在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)合反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行診斷。本發(fā)明提供的兒童智商測試方法簡便而客觀，并且免受外界因素的影響；有助于及早診斷兒童智商遺傳學(xué)特性，提供給父母養(yǎng)育孩子時(shí)重要的參考信息，對下一代的培養(yǎng)有非常積極的意義。文檔編號C12Q1/68GK101724687SQ200810201220公開日2010年6月9日申請日期2008年10月15日優(yōu)先權(quán)日2008年10月15日發(fā)明者汪寧梅,穆宇豪,穆海東,黎颯申請人:上海裕隆生物科技有限公司