專利名稱：添加促進(jìn)劑提高灰綠霉素a產(chǎn)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高灰綠霉素A產(chǎn)量的方法，特別是通過單獨(dú)添加或者混 合添加促進(jìn)劑實(shí)現(xiàn)灰綠霉素A產(chǎn)量提高的方法。屬于代謝調(diào)控優(yōu)化發(fā)酵過程技 術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
灰綠霉素A是中國海洋大學(xué)從海洋真菌灰綠曲霉(Asper^'W^^朋c^) HB1-19 (保藏日期2006.3.20，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC M 206022)中分離出來的一種具有自主知識產(chǎn)權(quán)的、結(jié)構(gòu)全新的具有抗癌活 性蒽酮內(nèi)酯化合物，灰綠霉素A以9-蒽酮為母核，分子中C-10與C-4形成 六元內(nèi)酯環(huán)。經(jīng)中科院上海藥物所評價，其對人肺癌A549細(xì)胞、人白血病 HL60細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖抑制作用，其ICs(,分別為0. 13和0. 28 u M，有良好 的醫(yī)藥價值和開發(fā)應(yīng)用前景。目前尚未有通過促進(jìn)劑提高該新型9-蒽酮內(nèi)酯 類化合物的報道。然而在灰綠曲霉"spe^"i77"s W加ciAs) HB1-19進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)時，灰綠 霉素A的產(chǎn)量比較低(< 15 mg/L)，這就給進(jìn)一步的動物體內(nèi)外活性評價及 藥代藥動等藥理學(xué)研究帶來困難，而通過規(guī)模化發(fā)酵及代謝調(diào)控研究提高灰 綠霉素A的產(chǎn)量可以有效的解決該問題。本發(fā)明旨在通過添加促進(jìn)劑來對該菌 的代謝進(jìn)行調(diào)控以實(shí)現(xiàn)灰綠霉素A產(chǎn)量的提高，為后續(xù)的大規(guī)模發(fā)酵以及將灰 綠霉素A開發(fā)為新藥奠定基礎(chǔ)。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的所要解決的技術(shù)問題在于克服灰綠霉素A發(fā)酵產(chǎn)量低的缺陷，提 供一種通過添加促進(jìn)劑提高灰綠霉素A產(chǎn)量的方法。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種通過添加促進(jìn)劑提高灰綠霉素A產(chǎn)量的方法，其特征是利用海洋絲 狀真菌灰綠曲霉HB1-19 CCTCC M 206022為生產(chǎn)菌株，在發(fā)酵培養(yǎng)基中單獨(dú) 或混合添加辛伐他汀、鄰苯二甲酸、檸檬酸或短鏈脂肪酸作為促進(jìn)劑。上述促進(jìn)劑的添加的初始時間為30小時一60小時。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為辛伐他汀，初始添加時間為30小時，添加 方式為每隔24小時添加一次0.05-0.2mM辛伐他汀，連續(xù)加2-4次，使其最 終濃度達(dá)0. 1-0. 8 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為鄰苯二甲酸，初始添加時間為30小時，添 加方式為每隔24小時添加一次2-6mM鄰苯二甲酸，連續(xù)加2-4次，使其最終 濃度達(dá)4-24 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為檸檬酸，初始添加時間為30小時，添加方 式為每隔24小時添加一次2-6 raM檸檬酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá) 4-24 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸，初始添加時間為60小時，添加方式 為每隔24小時添加一次l-3mM乙酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)2-12 mMo在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為丙二酸，初始添加時間為60小時，添加方 式為每隔24小時添加一次l-3 mM丙二酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá) 2-12 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為丙酸，初始添加時間為60小時，添加方式 為每隔24小時添加一次2-6mM丙酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)4_24 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸與丙二酸，初始添加時間為48小時， 添加方式為每隔24小時添加一次0. 5-1. 5 mM乙酸與0. 5-1. 5 mM丙二酸混 合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為l-6 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸與丙酸，初始添加時間為48小時，添 加方式為每隔24小時添加一次1-3 mM乙酸與0. 5-1. 5 mM丙酸混合物，連 續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為2-12mM及1-6mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸、丙二酸和丙酸，初始添加時間為48小時，添加方式為每隔24小時添加一次1-3 mM乙酸與0. 5-1. 5 mM丙二酸和 0. 5-1. 5 mM丙酸混合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為2-12mM， l-6mM， l-6mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸與擰檬酸，初始添加時間為48小時，， 開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小時添加一次1-3 mM乙酸與2-6 mM擰檬酸混 合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為2-12 mM與4-24 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸與辛伐他汀，初始添加時間為48小 時，開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小時添加一次1-3 mM乙酸與0.05-0.2 mM 辛伐他汀混合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為2-12mM與0. 1-0. 8 mM。在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為乙酸與鄰苯二甲酸，初始添加時間為48 小時，開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小時添加一次1-3 mM乙酸與2-6mM鄰苯 二甲酸混合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度分別為2-12mM與4-24mM。1 菌株灰綠曲霉HB1-19 (Aspergillosis glaucus HB1-19)(保藏編號是CCTCC M 206022)，由中國海洋大學(xué)提供。 2培養(yǎng)基固體種子培養(yǎng)基甘薯粉50 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g， K跳2. 5 g, MgS04 7H201.5 g，溶解于1L人工海水中。發(fā)酵培養(yǎng)基組成(g/l):麥芽糖20. 0，甘露醇20. 0，味精10. 0， KH2P04 0.5， MgS04 0. 3，酵母膏3.0，酵母粉3.0，加人工海水至1000 ml, pH6. 5。 其中人工海水配方NaCl， 24. 5g; MgCl2 6H20， 4. 98 g; NaS04， 3. 92 g; MgS04*7H20， 3.0 g; CaCl2*2H20 (無水CaCl2)， 1.60 g (1.20 g); KC1 ， 0.664 g; NaHC03， 0.192 g; KBr， 0.096 g; H3B03， 0.026 g; NaF， 0.0039 g;加蒸餾水至1000ml 。 3培養(yǎng)方法用無菌水將固體斜面培養(yǎng)4-5d的灰綠曲霉HB1-19的孢子洗下，制成孢 子懸浮液，接種到裝有50 ml培養(yǎng)液的250ml錐型搖瓶中，接種密度約為3 6 Xl()7孢子/ml，在28 °C、 165 rpm條件下?lián)u床培養(yǎng)約40 h后，再以15 %接 種量接種至250 ml的發(fā)酵培養(yǎng)基中(裝液量50ml)，在28 °C、 170rpm條件下?lián)u床培養(yǎng)約7 d。當(dāng)培養(yǎng)進(jìn)行到30—60h時，開始根據(jù)具體情況添加不 同濃度的各促進(jìn)劑，但其添加方式都是每隔24h添加一次，共添加3次。然 后再培養(yǎng)約2天，收獲菌體進(jìn)行后續(xù)的提取分析。 4分析方法(1) 生物量的測定采用干重法測定菌體量。將發(fā)酵液用濾紙過濾后，再用去離子水洗滌過 濾后烘干至恒重。(2) 灰綠霉素A的分離粗提取。搖瓶發(fā)酵結(jié)束后，吸取發(fā)酵液20 ml加入到有適量玻璃珠的250 ml三角 瓶中并與等體積的乙酸乙酯萃取，汲取上層有機(jī)相萃取液減壓蒸餾濃縮后， 用4 ml甲醇溶解后用RP-HPLC檢測灰綠霉素A。(3) 灰綠霉素A的含量測定用HP 1100液相色譜儀，Kramasil C18 反相柱(250x4.6mm， 5 jim)，溫度30 °C，進(jìn)樣量10pl，檢測波長為304 nm， 流速lml/min，流動相為純水乙睛=1: 1，然后在0~30 min用流動相洗脫。 進(jìn)樣分析前先將甲醇溶解液稀釋5倍，再進(jìn)行RP-HPLC分析，含量根據(jù)色譜 峰面積與標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積對比以及濃縮倍數(shù)計算。本發(fā)明利用海洋絲狀真菌灰綠曲霉HB1-19 (A Wa"c"sHB1-19)保藏編 號CCTCC M 206022為生產(chǎn)菌株，于菌體對數(shù)生長期在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加辛伐 他汀、鄰苯二甲酸、檸檬酸或短鏈脂肪酸來促進(jìn)生產(chǎn)灰綠霉素A的產(chǎn)量提高。 最終產(chǎn)量可達(dá)到36.2mg/L，是原始水平的2.84倍；該發(fā)明對于海洋真菌灰綠 曲霉HB1-19 ( Aspergillus glaucus HB1-19)發(fā)酵研究及灰綠霉素A藥理藥 效學(xué)研究具有重要意義。


圖1辛伐他汀對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響； 圖2鄰苯二甲酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響； 圖3檸檬酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響； 圖4添加乙酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響； 圖5添加丙二酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響；圖6添加丙酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響；圖7短鏈脂肪酸組合添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響；圖8乙酸與辛伐他汀、鄰苯二甲酸和擰檬酸組合添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響灰綠曲霉HB1-19 Us; erg7'iA/s^ai/c"s)保藏日期2006. 3. 20，中國典 型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC M 20602具體實(shí)施方式
實(shí)施例l辛伐他汀對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖1所示，通過添加O. 15mM、 0.3mM、 0. 45 mM終濃度的辛伐他汀，考 察其對灰綠霉素A合成以及灰綠曲霉菌體生長的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)終濃度為3 mM 的辛伐他汀對灰綠霉素A的生物合成促進(jìn)作用最大，可使其產(chǎn)量達(dá)到20. 8 mg/L，比沒有任何添加物的對照組提高了63 %。該物質(zhì)的添加對灰綠曲霉 朋1-19的菌體生長幾乎沒有什么影響。根據(jù)少量多次的原則以及實(shí)際實(shí)驗(yàn)確 定辛伐他汀的最佳添加方式為每隔24 h添加一次O. 1 mM辛伐他汀，共添加3 次(即連續(xù)添加3d)，最終濃度0.3mM，初始添加時間為30 h。 實(shí)施例2鄰苯二甲酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖2所示，添加不同終濃度為6mM、 12mM及24mM的鄰苯二甲酸，其灰 綠霉素A的產(chǎn)量分別為對照(沒有添加物)的l. 12倍、1.59倍和1.55倍。其中 12 mM的鄰苯二甲酸可使得灰綠霉素A的產(chǎn)量達(dá)20. 2 mg/L，比沒有任何添加物 的對照組提高了59%。鄰苯二甲酸的添加對灰綠曲霉HB1-19的菌體生長也沒有什么影響。根據(jù)少量多次的原則以及實(shí)際實(shí)驗(yàn)本發(fā)明人確定鄰苯二甲酸的 最佳添加方式為每隔24 h添加一次4 mM鄰苯二甲酸，共連續(xù)添加3次，最終 濃度12mM，初始添加時間為30 h。實(shí)施例3添加檸檬酸對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖3所示，添加檸檬酸的促進(jìn)作用更為明顯，其中分3次添加終濃度為 12mM的檸檬酸可使得灰綠霉素A的產(chǎn)量提高至對照(沒有任何添加物)的2. 79 倍，產(chǎn)量達(dá)35.5mg/L。檸檬酸的添加對灰綠曲霉HB1-19的菌體生長也沒有什 么影響。根據(jù)少量多次的原則以及實(shí)際實(shí)驗(yàn)確定檸檬酸的最佳添加方式為每隔24h添加一次4mM檸檬酸，共連續(xù)添加3次，最終濃度12mM，初始添加時間為灰綠曲霉HB1-19發(fā)酵到30 h。實(shí)施例4乙酸添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響實(shí)驗(yàn)過程中首先初步考察了乙酸添加對灰綠霉素A產(chǎn)量的影響，發(fā)現(xiàn)隨 著所添加乙酸濃度的提高(終濃度從3mM至12mM)，灰綠曲霉的產(chǎn)量也有所 提高，從最初的4. lmg/L提高至20. 9mg/L。隨后按照最優(yōu)添加乙酸的量(6 mM)以少量多次的原則考察了乙酸添加對 灰綠霉素A產(chǎn)量的影響，發(fā)現(xiàn)分3次添加終濃度6mM的乙酸添加濃度對提高灰綠 霉素A產(chǎn)量效果最好，可使對灰綠霉素A的產(chǎn)量達(dá)到30.0mg/L，比沒有任何添 加物的對照組提高了135% (如圖4所示)。 一次性加入6mM，非但對灰綠霉素A 的產(chǎn)量無促進(jìn)作用，反而使其產(chǎn)量減少為對照的78%，根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)確定乙酸 的最佳添加方式為每隔24h添加一次2mM乙酸，共連續(xù)添加3次，最終濃度6 mM，初始添加時間為該菌發(fā)酵進(jìn)行到60 h。 實(shí)施例5丙二酸的添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖5所示，本發(fā)明人又考察了丙二酸的添加對灰綠霉素A產(chǎn)量的作用效 果，其中的最優(yōu)添加方式可使灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到24.9 mg/L，為沒有任何添 加物的對照組的1.95倍。添加丙二酸時對灰綠曲霉的生長沒有影響。根據(jù)少 量多次的原則以及實(shí)驗(yàn)確定丙二酸鹽的最佳添加方式為每隔24 h添加一次2 mM丙二酸，共連續(xù)添加3次，最終濃度6 mM,初始添加時間為灰綠曲霉 HB1-19培養(yǎng)至60 h。實(shí)施例6丙酸添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖6所示，考察了丙酸的添加對灰綠霉素A產(chǎn)量的作用效果，當(dāng)發(fā)酵60 h 時，在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24h添加一次4mM丙酸，連續(xù)加3d，使其最終濃度 達(dá)12mM時，灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到19.9 mg/L，比沒有任何添加物的對照組提高 了56%。添加丙酸時對灰綠曲霉的生長也沒有影響。根據(jù)本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)情況 確定丙酸的最佳添加方式為每隔24h添加一次4mM丙酸，共連續(xù)添加3次，最 終濃度12mM,初始添加時間為該菌發(fā)酵進(jìn)行到60h。 實(shí)施例7短鏈脂肪酸的組合添加對灰綠霉素A合成及菌體生長的影響如圖7所示，幾種短鏈脂肪酸鹽的組合添加效果則更明顯，而且添加這些短鏈脂肪酸鹽對灰綠曲霉的生長狀況也基本沒有影響。其中組合添加乙酸與丙二酸混合物時，灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到26. 6mg/L，比沒有任何添加物的對照組 提高了109%。根據(jù)本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)操作條件確定組合添加乙酸與丙二酸的最 佳方式為每隔24h添加一次lmM乙酸與lmM丙二酸混合物，連續(xù)添加3次，最終 濃度分別為3mM，初始添加時間為該菌發(fā)酵進(jìn)行到48h。此實(shí)施例中，組合添加乙酸與丙酸混合物時，灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到 26.0mg/L,比沒有任何添加物的對照組提高了104%。由實(shí)驗(yàn)操作條件確定組 合添加乙酸與丙酸的最佳方式為每隔24 h添加一次2mM乙酸與l mM丙二酸混 合物，連續(xù)添加3次，最終濃度分別為6 mM和3 mM,初始添加時間為該菌發(fā)酵 進(jìn)行到48h。另外如圖7所示，組合添加乙酸、丙二酸和丙酸混合物時，灰綠霉素A產(chǎn) 量達(dá)到24.8mg/L，比沒有任何添加物的對照提高了95%。由實(shí)驗(yàn)操作條件確 定組合添加乙酸、丙二酸和丙酸混合物的最佳方式為每隔24 h添加一次2mM 乙酸、lmM丙二酸與lmM丙酸混合物，連續(xù)添加3次，最終濃度分別為6mM、 3mM 和3mM，初始添加時間為該菌發(fā)酵進(jìn)行到48h。實(shí)施例8乙酸與與辛伐他汀、鄰苯二甲酸和檸檬酸組合添加對灰綠霉素A合 成及菌體生長的影響乙酸作為灰綠霉素A的前體物質(zhì)，提高了灰綠霉素A的合成效率，提高 了灰綠霉素A的產(chǎn)量;其它類促進(jìn)劑的添加也有效促進(jìn)了灰綠霉素A的合成。 如圖8所示，當(dāng)混合添加乙酸與辛伐他汀時，最優(yōu)效果使灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá) 到18.6mg/L，比沒有任何添加物的對照提高了 46 %。由實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作條件 確定組合添加乙酸與辛伐他汀的最佳方式為每隔24 h添加一次2 mM乙酸與 0.1 mM辛伐他汀混合物，共連續(xù)添加3次，最終濃度分別為6 raM與0.3mM， 初始添加時間為48 h。而當(dāng)混合添加乙酸與鄰苯二甲酸酸時，最優(yōu)效果使灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到 20.8 mg/L，比沒有任何添加物的對照提高了 63 %。由實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作條件確 定組合添加乙酸與鄰苯二甲酸的最佳方式為每隔24 h添加一次2 mM乙酸與 4 mM鄰苯二甲酸混合物，共連續(xù)添加3次，最終濃度分別為6 mM與12 mM， 初始添加時間為48 h。如圖8所示，當(dāng)混合添加乙酸與檸檬酸時，所得到的促進(jìn)效果最佳，可 使灰綠霉素A產(chǎn)量達(dá)到36.2 mg/L，比沒有任何添加物的對照提高了 184 %。 由實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作條件確定組合添加乙酸與檸檬酸的最佳方式為每隔24h添加 一次2 mM乙酸與4 mM檸檬酸混合物，共連續(xù)添加3次，最終濃度分別為6 mM 與12 mM，初始添加時間為48 h。
權(quán)利要求
1、一種通過添加促進(jìn)劑提高灰綠霉素A產(chǎn)量的方法，其特征是利用海洋絲狀真菌灰綠曲霉HB1-19CCTCC M 206022為生產(chǎn)菌株，在發(fā)酵培養(yǎng)基中單獨(dú)或混合添加辛伐他汀、鄰苯二甲酸、檸檬酸或短鏈脂肪酸作為促進(jìn)劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是所述的促進(jìn)劑的添加的初始 時間為30小時一60小時。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為辛伐他汀，初始添加時間為30小時，添加方式為每隔24小時添加一次 0.05-0.2 mM辛伐他汀，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)O. 1-0. 8 raM。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為鄰苯二甲酸，初始添加時間為30小時，添加方式為每隔24小時添加一次 2-6mM鄰苯二甲酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)4-24 mM。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為擰檬酸，初始添加時間為30小時，添加方式為每隔24小時添加一次2-6mM 檸檬酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)4-24 mM。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為丙二酸，初始添加時間為60小時，添加方式為每隔24小時添加一次l-3 mM 丙二酸，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度達(dá)2-12 mM。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為乙酸、丙二酸和丙酸，初始添加時間為48小時，添加方式為每隔24小時添 加一次l-3 mM乙酸與O. 5-1.5 mM丙二酸和O. 5-1. 5 mM丙酸，連續(xù)加2-4次， 使其最終濃度分別為2-12mM, 1-6mM， 1-6mM。
8、 據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑為 乙酸與辛伐他汀，初始添加時間為48小時，，開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小 時添加一次1-3mM乙酸與0.05-0.2mM辛伐他汀混合物，連續(xù)加2-4次，使其 最終濃度分別為2-12mM與0.1-0. 8mM。
9、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為乙酸與鄰苯二甲酸，初始添加時間為48小時，開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小時添加一次l-3mM乙酸與2-6mM鄰苯二甲酸混合物，連續(xù)加2-4次，使其最 終濃度分別為2-12 mM與4-24 mM。
10、根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征是在發(fā)酵過程中添加的促進(jìn)劑 為乙酸與檸檬酸，初始添加時間為48小時，開始在發(fā)酵培養(yǎng)基中每隔24小時 添加一次l-3mM乙酸與2-6mM擰檬酸酸混合物，連續(xù)加2-4次，使其最終濃度 分別為2-12 mM與4-24 mM。
全文摘要
一種通過添加促進(jìn)劑提高灰綠霉素A產(chǎn)量的方法，屬于代謝調(diào)控優(yōu)化發(fā)酵過程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是利用海洋絲狀真菌灰綠曲霉HB1-19(Aspergillus glaucus HB1-19)CCTCC M 206022為生產(chǎn)菌株，通過在發(fā)酵培養(yǎng)基中單獨(dú)添加辛伐他汀、鄰苯二甲酸、檸檬酸或添加短鏈脂肪酸如乙酸、丙酸、丙二酸作為促進(jìn)劑，或混合添加以上促進(jìn)劑，來促進(jìn)生產(chǎn)灰綠霉素A的合成效率。最終產(chǎn)量可達(dá)到36.2mg/l，是原始水平的2.84倍。該發(fā)明對于灰綠霉素A的藥理藥效學(xué)研究具有重要意義。
文檔編號C12R1/66GK101402980SQ200810202518
公開日2009年4月8日 申請日期2008年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月11日
發(fā)明者周祥山, 孫學(xué)謙, 張元興, 蔡孟浩, 陶可敬 申請人:華東理工大學(xué)