專利名稱：一種仙茅繁殖技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種仙茅繁殖技術(shù)，主要是一種利用仙茅根狀莖作為外植體進(jìn)行組織
培養(yǎng)達(dá)到快速繁殖目的的技術(shù)。
背景技術(shù)：
仙茅(Curculigo orchioides Gaertn)主要產(chǎn)于四川宜賓市、雅安市、云南昭通地 區(qū)以及貴州等地，常用中藥材。仙茅以根狀莖入藥，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、祛風(fēng)濕的功效。近年來(lái) 仙茅野生資源日漸減少，而人工栽培仙茅繁殖速度又較慢，采用組織培養(yǎng)技術(shù)則能很好地 解決這個(gè)問(wèn)題。在仙茅組織培養(yǎng)方面，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)仙茅葉片的器官發(fā)生和植株再生進(jìn)行 了研究，但一直未有人利用仙茅地下莖段進(jìn)行植株再生，且前人研究培養(yǎng)的再生植株其愈 傷組織的誘導(dǎo)、叢生芽、生根等環(huán)節(jié)需在不同配方的培養(yǎng)基上進(jìn)行，操作環(huán)節(jié)多，成本高，周 期長(zhǎng)。據(jù)查，目前中國(guó)發(fā)明專利局尚沒(méi)有關(guān)于仙茅組織培養(yǎng)和快速繁殖方面的專利公布。
發(fā)明目的 本發(fā)明的目的是提供的一種利用仙茅根狀莖作為外植體速度快、成本低的繁殖技 術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是 (1)外植體采集與消毒采集仙茅根狀莖作為外植體，并進(jìn)行消毒處理； (2)接種、培養(yǎng)，誘導(dǎo)植株再生將無(wú)菌外植體接種于含一定基本培養(yǎng)基、一定濃
度和種類激素、一定濃度碳水化合物和一定濃度瓊脂的培養(yǎng)基上，經(jīng)20左右誘導(dǎo)出愈傷組
織，30天左右長(zhǎng)出叢生芽，45天左右開(kāi)始生根； (3)煉苗、移栽； (4)生長(zhǎng)周期從接種到生根的時(shí)間大概為45天左右； (5)繁殖系數(shù)(叢生芽數(shù)與接種的外植體數(shù)的比)為8以上； (6)移栽成活率(移栽的苗數(shù)與成活的苗數(shù)之比)可達(dá)96%以上。以上所述，基
本培養(yǎng)基是MS(Murashigc & Skoog， 1962)或B5 (Gamborg et al. ， 1976)或N6 (朱至清，
1974); 以上所述，激素配比激素a為0. 6-1. 2mg L-、激素b為0. 2-0. 8mg L-、激素a
和激素b在此濃度范圍內(nèi)配比。 以上所述，培養(yǎng)基中碳水化合物濃度為20-40g L—、瓊脂的量為6-8g L一1。
發(fā)明優(yōu)點(diǎn) 本發(fā)明培養(yǎng)的再生植株其愈傷組織誘導(dǎo)、叢生芽、生根等環(huán)節(jié)是在同一種培養(yǎng)基
上完成的，減少了操作環(huán)節(jié)，多縮短了周期，減少了成本，增加了繁殖系數(shù)和生根率，繁殖系
數(shù)高達(dá)到8以上，移栽成活率可達(dá)96%以上，可以為大規(guī)模種植仙茅提供種苗。 以下通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例僅用于說(shuō)明并不能限制本發(fā)
3明的范圍。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例l —種仙茅繁殖技術(shù)具體實(shí)施步驟為 1.無(wú)菌苗的獲得取仙茅生長(zhǎng)植株的根狀莖，刷掉表面的泥土，置于自來(lái)水下沖 洗2 3h，用0. 1 %的KMn04 (高錳酸鉀)溶液浸泡4_5min，蒸餾水洗5 7次；再在超凈工 作臺(tái)上，用75%的酒精漂洗30s，用無(wú)菌水清洗3 5次，然后用0. 1 %的升汞+吐溫3 4 滴，漂洗10min，最后用無(wú)菌水處理6 8次(直至無(wú)泡沫為止)。 2.再生植株的誘導(dǎo)將無(wú)菌根狀莖段切成lcm左右接種于MS+6-BA(6-芐氨基嘌 呤)。.2mg *L—^NAA(a-萘乙酸)。.5mg *L—1培養(yǎng)基上，20天后長(zhǎng)出愈傷組織，30天后長(zhǎng)叢生芽， 45天后生根，繁殖系數(shù)為5。 以上所述培養(yǎng)基的蔗糖濃度為20g L—、瓊脂的量為6. 5g L—、 pH值5. 8，25"光
照條件下培養(yǎng)。 3.煉苗與移栽仙茅長(zhǎng)到一定高度進(jìn)行移栽，移栽前先去掉封口膜在培養(yǎng)室中鍛煉 2 3d。然后把經(jīng)過(guò)煉苗的幼苗基部的殘留瓊脂洗凈，移栽至小盆內(nèi)，移栽基質(zhì)用蛭石和營(yíng) 養(yǎng)土以2 : 3比例混勻配制而成大概煉苗5天后移栽至大田。移栽成活率97%。
實(shí)施例2 —種仙茅繁殖技術(shù)包括實(shí)施步驟為 1.無(wú)菌苗的獲得取仙茅生長(zhǎng)植株的根狀莖，刷掉表面的泥土，置于自來(lái)水下沖 洗2 3h，用0. 1 %的KMn04溶液浸泡4-5min，蒸餾水洗5 7次；再在超凈工作臺(tái)上，用 75 %的酒精漂洗30s，用無(wú)菌水清洗3 5次，然后用0. 1 %的升汞+吐溫3 4滴，漂洗 10min，最后用無(wú)菌水處理6 8次(直至無(wú)泡沫為止)。 2.再生植株的誘導(dǎo)將無(wú)菌地下莖段切成lcm左右接種于 MS+6-BA。.5mg L—^NAA。.smg L—1培養(yǎng)基上，20天后長(zhǎng)出愈傷組織，30天后長(zhǎng)叢生芽，45天后 生根，繁殖系數(shù)為8。 以上所述培養(yǎng)基的蔗糖濃度為30g L—、瓊脂的量為7g L—、 pH值5. 8，25"光照 條件下培養(yǎng)；培養(yǎng)基均高溫高壓滅菌；所有接種均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。 3.煉苗及移栽煉苗與移栽仙茅長(zhǎng)到一定高度進(jìn)行移栽，移栽前先去掉封口膜在 培養(yǎng)室中鍛煉2 3d。然后把經(jīng)過(guò)煉苗的幼苗基部的殘留瓊脂洗凈，移栽至小盆內(nèi)，移栽 基質(zhì)用蛭石和營(yíng)養(yǎng)土以2 : 3比例混勻配制而成大概煉苗5天后移栽至大田。移栽成活率 97%。
權(quán)利要求
一種仙茅繁殖技術(shù)，其特征是采集仙茅根狀莖作為外植體，并進(jìn)行消毒處理；將無(wú)菌外植體接種于含基本培養(yǎng)基、激素、碳水化合物和瓊脂的培養(yǎng)基上，經(jīng)20天左右誘導(dǎo)出愈傷組織，30天左右長(zhǎng)出叢生芽，45天左右開(kāi)始生根；即可煉苗、移栽。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種仙茅繁殖技術(shù)，其特征是基本培養(yǎng)基是MS或B5或N6。
3. 如權(quán)利要求l所述的一種仙茅繁殖技術(shù)，其特征是所述激素為激素a為 0. 6-1. 2mg L—、激素b為0. 2-0. 8mg L—、激素a和激素b在此濃度范圍內(nèi)配比。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種仙茅繁殖技術(shù)，其特征是培養(yǎng)基中碳水化合物濃度為 20-40g L—、瓊脂的量為6-8g L—全文摘要
本發(fā)明涉及一種仙茅繁殖技術(shù)，包括外植體消毒、再生植株誘導(dǎo)、煉苗和移栽等步驟，本發(fā)明從接種到生根的時(shí)間大概為45天左右，繁殖系數(shù)為8以上，移栽成活率可達(dá)96％以上，本發(fā)明繁殖系數(shù)高，減少了操作環(huán)節(jié)，培養(yǎng)周期短，成本低，可以為仙茅大規(guī)?？焖俜N植提供種苗。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101743907SQ20081023338
公開(kāi)日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2008年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月17日
發(fā)明者周黎軍, 張萍, 袁吉有, 魏琴 申請(qǐng)人:宜賓學(xué)院