專利名稱：：制備、分離及超低溫保存子宮內(nèi)膜/月經(jīng)細(xì)胞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本案主張美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案2007年3月1日申請(qǐng)的第60/904，836，2007年3月20日申請(qǐng)的第60/918,961號(hào)，2007年9月17日申請(qǐng)的第60/994，166號(hào)，2007年10月9日申請(qǐng)的第60/998,255號(hào)，2008年1月22日申請(qǐng)的第61/011，881號(hào)及2008年2月29日申請(qǐng)的第__號(hào)的優(yōu)先權(quán)，前述每一案的名稱為〃Procurement，Isolation,andCryopreservationofEndometrial/MenstrualCells"內(nèi)胃以弓IffiAg^1入本文。本發(fā)明通常涉及關(guān)于獲得月經(jīng)干細(xì)胞(MSC)的方法、制程及系統(tǒng)。本發(fā)明尤其涉及關(guān)于取得及處理月經(jīng)期間所獲得的血液、體液及組織以分離及收集月經(jīng)干細(xì)胞群的方法、制程及系統(tǒng)，這些月經(jīng)干細(xì)胞可經(jīng)超低溫保存或經(jīng)由各種培養(yǎng)及選擇步驟進(jìn)一步處理以獲得為超低溫保存或?yàn)橹委熁蛩帄y用途作準(zhǔn)備的MSC。本發(fā)明還涉及關(guān)于包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞的相關(guān)組合物。
背景技術(shù)：
：干細(xì)胞固有地具有經(jīng)由控制細(xì)胞與細(xì)胞接觸及內(nèi)在信號(hào)而經(jīng)歷活體內(nèi)細(xì)胞分裂及細(xì)胞分化的能力。已顯示干細(xì)胞能藉由經(jīng)局部環(huán)境因子刺激來(lái)控制細(xì)胞接觸及內(nèi)在信號(hào)而活體外分裂及分化成多種細(xì)胞。應(yīng)了解，干細(xì)胞可獲自若干來(lái)源，包括多種成人組織(諸如骨髓)以及胚胎組織。某些干細(xì)胞表達(dá)為c-kit受體、青灰因子(Steelfactor)受體及干細(xì)胞因子受體的抗原因子CD117。c-kit的基因編碼干細(xì)胞因子(SCF)的酪胺酸激酶生長(zhǎng)因子，其亦稱為肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子且為血細(xì)胞生成、黑素生成及生育力所必需。應(yīng)了解，⑶117在造血干細(xì)胞、肥大細(xì)胞、生殖細(xì)胞、黑素細(xì)胞、某些基底上皮細(xì)胞、乳房的腔室上皮細(xì)胞及胃腸道的Cajal間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)。⑶117在生殖細(xì)胞確立、維持及功能方面具有關(guān)鍵作用。研究指示在胚胎性腺中，CD117及其相應(yīng)配位體SCF為原胚生殖細(xì)胞存活及增殖所必需。另外，研究指示CD117及其相應(yīng)配位體SCF為響應(yīng)促性腺激素產(chǎn)生配子所必需。換言之，與配位體SCF組合的CD117為睪丸生殖細(xì)胞、精原細(xì)胞的存活和增殖以及為卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)和成熟所必需。研究還指示⑶117為活體外原始造血細(xì)胞增殖的有效生長(zhǎng)因子。干細(xì)胞的治療應(yīng)用以骨髓的早期實(shí)驗(yàn)起始。近一個(gè)世紀(jì)前，醫(yī)師將骨髓經(jīng)口投于患有貧血及白血病的患者。盡管該療法并不成功，但實(shí)驗(yàn)室研究者最終證實(shí)可以將取自其它小鼠的骨髓輸注至具有缺陷性骨髓的小鼠的血流中而使其恢復(fù)健康。這促使醫(yī)師推測(cè)將骨髓自一人移植至另一人(同種異體移植)是否可行。來(lái)自骨髓及臍帶的干細(xì)胞已廣泛地主要用于造血移植以治療多種疾病。自利用骨髓的第一干細(xì)胞移植出發(fā)，已鑒別出干細(xì)胞的其它來(lái)源，包括羊水、胎盤、臍帶、帶內(nèi)膜、花頓氏膠(Wharton'sjelly)、脂肪及上皮細(xì)胞。當(dāng)研究者遇到由細(xì)胞的身體排斥反應(yīng)(稍后表征為移植物抗宿主疾病(GVHD))所引起的疾病及/或死亡時(shí)，人類免疫系統(tǒng)的作用，亦即防衛(wèi)本身免受感染及外來(lái)物質(zhì)的身體固有機(jī)制，成為早期移植中的關(guān)鍵考慮因素。直至發(fā)現(xiàn)人類組織兼容性抗原與人類免疫系統(tǒng)之間的關(guān)系之后才以較大規(guī)模嘗試在人類中進(jìn)行骨髓移植。體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞表面上所發(fā)現(xiàn)的這些蛋白質(zhì)被稱為人類白血球抗原或HLA抗原。身體免疫系統(tǒng)使用這些HLA抗原以鑒別哪些細(xì)胞屬于體內(nèi)且哪些不屬于。每當(dāng)免疫系統(tǒng)不識(shí)別細(xì)胞上的抗原時(shí)，其即產(chǎn)生抗體及破壞細(xì)胞的其它物質(zhì)。身體尋找且破壞的對(duì)象為致感染細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞及外來(lái)對(duì)象(諸如碎片)。以此方式，免疫系統(tǒng)防衛(wèi)身體抵抗可進(jìn)入體內(nèi)且引起損害的物質(zhì)。視治療所靶向的疾病病況而定，利用個(gè)體自身干細(xì)胞的自體移植可具有由準(zhǔn)確HLA匹配效益所產(chǎn)生的某些潛在優(yōu)勢(shì)。供體與受體的HLA抗原匹配愈接近，所捐贈(zèng)骨髓的T細(xì)胞(免疫系統(tǒng)細(xì)胞)將反抗患者身體的可能性愈小。來(lái)源于骨髓的成人干細(xì)胞的移植已成功用于治療人類疾病，諸如范康尼氏貧血(Fanconi'sAnemia)、再生障礙性貧血、急性及慢性白血病、脊髓增生性病癥、骨髓發(fā)育不良癥候群、淋巴增生性病癥及其它惡性疾病。骨髓成人干細(xì)胞的替代性來(lái)源包括外周血液祖細(xì)胞、臍帶血及自這些來(lái)源收集的間質(zhì)干細(xì)胞。然而，存在與成人干細(xì)胞的治療用途相關(guān)的若干缺點(diǎn)。已顯示成人干細(xì)胞具有有限功效，諸如在培養(yǎng)中的若干繼代后生長(zhǎng)緩慢及多能性損失。胚胎干細(xì)胞已證實(shí)增殖潛力使其適合于細(xì)胞療法。然而，已顯示人類胚胎干細(xì)胞產(chǎn)生畸胎瘤。另外，自胚胎收集干細(xì)胞部分由于在收集過(guò)程中破壞生長(zhǎng)中的胚胎而受到倫理關(guān)注。已鑒別干細(xì)胞的其它來(lái)源，其克服至少一些與成人及胚胎干細(xì)胞相關(guān)的問(wèn)題。一種來(lái)源為含有人類成人干細(xì)胞的臍帶血。臍帶血已出于若干原因而證實(shí)為干細(xì)胞的可行來(lái)源。臍帶血相對(duì)容易在分娩小孩期間取得且經(jīng)處理以供超低溫保存。臍帶血提供能細(xì)胞分裂及分化成多種細(xì)胞類型的干細(xì)胞的合適來(lái)源。來(lái)源于臍帶血的干細(xì)胞已在臨床背景下使用以作為骨髓替代者來(lái)治療若干已知人類病癥及疾病。詳言之，來(lái)源于臍帶血的干細(xì)胞已成功用于造血移植、造血重建及治療脊髓損傷。另外，已顯示來(lái)源于臍帶血的干細(xì)胞在動(dòng)物模型中逆轉(zhuǎn)中風(fēng)及心肌梗塞的效應(yīng)。已確定子宮內(nèi)膜/月經(jīng)干細(xì)胞(MSC)證實(shí)在培養(yǎng)物中與胚胎干細(xì)胞類似的增殖能力。MSC亦展現(xiàn)某些間質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記及某些胚胎干細(xì)胞標(biāo)記，其證實(shí)活體外及活體內(nèi)多能性能力的潛力。MSC用作干細(xì)胞來(lái)源出于若干原因系有益的。首先，MSC證實(shí)分化成特定細(xì)胞譜系的能力。其次，任何倫理關(guān)注或考慮因素系藉由收集另外視為廢棄的MSC而得以緩和。最后，在月經(jīng)周期期間取得MSC的制程對(duì)供體相對(duì)不賦予危險(xiǎn)性。相信，不存在關(guān)于收集MSC抑或取得合適樣本量的MSC的已知方法，及適用于獲得表現(xiàn)某些間質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記及/或某些胚胎樣抗原因子(尤其由MSC表現(xiàn)的細(xì)胞表面因子)的活的、最大產(chǎn)量MSC的相關(guān)處理及細(xì)胞收集方法。因此，目前需要收集合適量的存在于月經(jīng)期間排出的體液、血液及組織中的MSC以為即期運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室作準(zhǔn)備的方法，該實(shí)驗(yàn)室處理月經(jīng)體液、血液及組織以分離及超低溫保存或處理MSC。目前亦需要處理月經(jīng)體液、血液及組織以獲得來(lái)源于月經(jīng)血液、體液及組織的MSC的細(xì)胞制劑的方法。亦進(jìn)一步需要自月經(jīng)流分離、選擇及/或培養(yǎng)MSC以為超低溫保存、進(jìn)一步處理或治療用途作準(zhǔn)備，諸如，可表現(xiàn)包含⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49e、⑶49f、⑶59、⑶81、⑶105、⑶166及HLAI類的細(xì)胞表面標(biāo)記或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記中的至少一者，而表現(xiàn)較低量或不表現(xiàn)細(xì)胞標(biāo)記CD3及HLAII類中的至少一者的細(xì)胞。其它細(xì)胞標(biāo)記特征系以實(shí)施本發(fā)明的實(shí)施例的結(jié)果提供。更進(jìn)一步需要超低溫保存獲得及收集自月經(jīng)血液、體液及組織的MSC或特異性MSC的群。
發(fā)明內(nèi)容目前需要易于收集、處理及超低溫保存且具有治療、藥妝或其它用途的潛力的干細(xì)胞來(lái)源。本發(fā)明的方法、制程及組合物滿足此需要。本發(fā)明提供獲得月經(jīng)干細(xì)胞的方法。在一實(shí)施例中，該方法包含自月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含以離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降的至少一個(gè)步驟處理該月經(jīng)流。分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟亦可視情況包含以包含至少一種抗生素的溶液凈化該等月經(jīng)干細(xì)胞。在該實(shí)施例中，該方法包含處理分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的另一步驟。處理分離自月經(jīng)流樣本的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包含至少一個(gè)以下步驟針對(duì)某些細(xì)胞表面標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞，或培養(yǎng)來(lái)自月經(jīng)干細(xì)胞的處理后樣本、所選樣本或解凍樣本的月經(jīng)干細(xì)胞。在一實(shí)施例中，處理分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含針對(duì)至少一種包含CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類的細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。所選細(xì)胞可藉由培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞來(lái)進(jìn)一步處理?？山又顾囵B(yǎng)的月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受針對(duì)至少一種包含⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49e、⑶49f、⑶59、⑶81、⑶105、⑶166及HLAI類的細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的又一步驟?？墒顾x月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受培養(yǎng)該等月經(jīng)干細(xì)胞的又一步驟。在選擇或培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟之后的任一時(shí)亥IJ，可使該等月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受制備供超低溫保存或供治療或藥妝用的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟?？山又鴮⒁褱?zhǔn)備超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞超低溫保存且稍后解凍以供使用。在另一實(shí)施例中，處理自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞?？山又顾囵B(yǎng)的月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受針對(duì)某些細(xì)胞表面標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。可接著使所選月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受培養(yǎng)該等月經(jīng)干細(xì)胞的又一步驟?？山又惯M(jìn)一步培養(yǎng)的月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的另一步驟。在選擇或培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟之后的任一時(shí)刻，可使該等月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受制備供超低溫保存或供治療或藥妝用的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟?？山又鴮⒁褱?zhǔn)備超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞超低溫保存且稍后解凍以供使用。在又一實(shí)施例中，處理自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。在另一實(shí)施例中，處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含制備包含月經(jīng)干細(xì)胞及維持月經(jīng)干細(xì)胞的生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基的組合物的又一步驟。在又一實(shí)施例中，處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含制備包含月經(jīng)干細(xì)胞及藥妝制劑的組合物的又一步驟。在又一實(shí)施例中，可將經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍以為進(jìn)一步處理作準(zhǔn)備，該進(jìn)一步處理包含培養(yǎng)或選擇月經(jīng)干細(xì)胞的至少一個(gè)步驟?；蛘撸蓪⒔?jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍以為治療或藥妝用途作準(zhǔn)備。本發(fā)明亦提供自月經(jīng)流收集月經(jīng)干細(xì)胞的制程。在一實(shí)施例中，該制程包含在月經(jīng)周期期間取得月經(jīng)流，將該月經(jīng)流輸送至處理設(shè)施中，將月經(jīng)干細(xì)胞自月經(jīng)流分離成細(xì)胞制劑，及處理月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞制劑。本發(fā)明亦提供自月經(jīng)流收集月經(jīng)干細(xì)胞的系統(tǒng)。在一實(shí)施例中，該系統(tǒng)包含一月經(jīng)干細(xì)胞分離器，其中月經(jīng)干細(xì)胞分離器將月經(jīng)干細(xì)胞自月經(jīng)流分離；一月經(jīng)干細(xì)胞收集器，其中該月經(jīng)干細(xì)胞收集器收集月經(jīng)干細(xì)胞；及一月經(jīng)干細(xì)胞處理器，其中該月經(jīng)干細(xì)胞處理器制備供治療用或供超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞。本發(fā)明提供超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的方法。在一實(shí)施例中，該方法包含以下步驟自月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞，收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞，及超低溫保存自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞。包括自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟的超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的方法包含由離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降的至少一個(gè)步驟處理月經(jīng)流。分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟亦可視情況包含以包含至少一種抗生素的溶液凈化該等月經(jīng)干細(xì)胞。該方法可包含在至少一個(gè)超低溫保存或進(jìn)一步細(xì)胞培養(yǎng)的步驟之前的至少一個(gè)針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。該方法可包含至少又一培養(yǎng)所選月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。包括收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟的超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的方法包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。該方法可包含至少一個(gè)自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。本發(fā)明提供藉由包含以下步驟的制程所獲得的月經(jīng)干細(xì)胞的群自月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞及收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞。本發(fā)明提供富集自月經(jīng)流所收集的月經(jīng)干細(xì)胞群的制程。在一實(shí)施例中，該制程包含自月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞及收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。該制程包含至少一個(gè)針對(duì)包含CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、⑶105、⑶166及HLAI類的群的至少一個(gè)細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。該制程可包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。該制程可包含至少一個(gè)選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟及至少一個(gè)培養(yǎng)所選月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟亦可視情況包含以包含至少一種抗生素的溶液凈化該等月經(jīng)干細(xì)胞。在替代者中，該制程可包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟及至少一個(gè)自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。本發(fā)明提供富集月經(jīng)干細(xì)胞群的制程。在一實(shí)施例中，該制程包含以下步驟自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞，收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞及選擇表現(xiàn)與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記的月經(jīng)干細(xì)胞。本發(fā)明提供包含細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者的月經(jīng)干細(xì)胞群，該等細(xì)胞標(biāo)記包含⑶9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類。本發(fā)明提供包含月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞富集群，該等月經(jīng)干細(xì)胞表現(xiàn)包含⑶9、⑶10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類的細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者，且較低表現(xiàn)或不表現(xiàn)包含細(xì)胞標(biāo)記⑶3及HLAII類中的至少一者的細(xì)胞標(biāo)記。本發(fā)明提供包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及超低溫保存劑的組合物。本發(fā)明提供包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基的組合物。本發(fā)明提供包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及藥妝劑的組合物。本發(fā)明提供包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及維持細(xì)胞生存力的保存劑的組合物。本發(fā)明提供包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基的組合物，其系于容器中以為該至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞的治療用途作準(zhǔn)備。根據(jù)本發(fā)明所收集的細(xì)胞可在治療、藥妝或再生醫(yī)學(xué)或其它合適應(yīng)用中使用。本發(fā)明提供以下方法及制程收集包含月經(jīng)血液、體液、細(xì)胞及組織的月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本；藉由將月經(jīng)流樣本與收集培養(yǎng)基組合來(lái)制備供輸送用的月經(jīng)流；及將該月經(jīng)流樣本輸送至處理設(shè)施中，在此處理月經(jīng)流樣本以分離、收集及處理供超低溫保存或供治療或藥妝用的MSC。本發(fā)明亦提供以產(chǎn)生高產(chǎn)量的活MSC的方式分離、收集及濃縮MSC的方法及制程。在一實(shí)施例中，選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包括陽(yáng)性選擇表現(xiàn)與月經(jīng)干細(xì)胞一起存在的細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者的細(xì)胞。在一替代者中，選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包含藉由移除表現(xiàn)不與月經(jīng)干細(xì)胞一起存在的細(xì)胞標(biāo)記的不合需要細(xì)胞來(lái)陰性選擇細(xì)胞。陰性選擇可包含選擇表現(xiàn)(例如)CD45或不存在于月經(jīng)干細(xì)胞上的其它細(xì)胞表面標(biāo)記的細(xì)胞。在又一實(shí)施例中，選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包含使用市售耗盡或濃縮套組，諸如來(lái)自StemCellTechnologies,Inc.的RosetteSep、EasySep、RoboSepΛStemSep或SpinSep0在又一實(shí)施例中，選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包含使用ALDEFLUOR(Aldagen,Inc.)選擇月經(jīng)干細(xì)胞以選擇MSC且排除無(wú)完整細(xì)胞膜的死亡及/或?yàn)l死細(xì)胞。ALDEFLUOR套組可用于選擇對(duì)與月經(jīng)干細(xì)胞一起存在的表面標(biāo)記呈陽(yáng)性的ALDHto細(xì)胞、譜系-抗原陰性(LirT)細(xì)胞、群落形成細(xì)胞、長(zhǎng)期培養(yǎng)起始細(xì)胞及N0D/SCID再生細(xì)胞。在又一實(shí)施例中，選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可包含使該等月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受血清脫除歷時(shí)約2周至約4周以濃縮表現(xiàn)相關(guān)MSC標(biāo)記的MSC。一旦收集且培養(yǎng)細(xì)胞，即應(yīng)消除造血干細(xì)胞。圖1為一般說(shuō)明本發(fā)明的總體方法及制程的流程圖；圖2為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的一實(shí)施例的流程圖；圖3為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖4為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖5為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖6為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖7為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖8為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖9為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖10為展示收集及超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖11為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的一實(shí)施例的流程圖；圖12為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖13為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖14為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖15為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖16為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖17為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖18為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖19為展示收集月經(jīng)干細(xì)胞及制備供治療用的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖20為展示解凍超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞以為治療用途作準(zhǔn)備的本發(fā)明的一實(shí)施例的流程圖；圖21為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖22為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖23為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖24為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖25為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖26為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖27為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的另一實(shí)施例的流程圖；圖28為展示制備供治療用的經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的本發(fā)明的又一實(shí)施例的流程圖；圖29a至圖29j展示處理后樣本及關(guān)于如下所述的M2-01的同型的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。自M2-01收集約Iml細(xì)胞懸浮液形式的處理后樣本且將其置于分析管中以供流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果指示占TNC群0.4%的⑶117+細(xì)胞的濃度、占TNC群17.7%的⑶44+細(xì)胞的濃度、占TNC群3.6%的⑶166+細(xì)胞的濃度、占TNC群8.0%的⑶105+細(xì)胞的濃度、占TNC群6.8%的⑶90+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.1%的⑶29+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.1%的⑶34+細(xì)胞的濃度，及如由7AAD所測(cè)定的95.4%細(xì)胞生存力；圖30a至圖30e展示關(guān)于經(jīng)由本發(fā)明的⑶117選擇方法所獲得的陽(yáng)性溶離份中的細(xì)胞的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。CD117選擇的后，收集約Iml細(xì)胞懸浮液且將其置于分析管中以供流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果指示占TNC群7.2%的⑶117+細(xì)胞的濃度、占TNC群93.6%的CD44+細(xì)胞的濃度及由7AAD所測(cè)定的95.8%細(xì)胞生存力。結(jié)果系藉由根據(jù)本發(fā)明的流式細(xì)胞儀分析來(lái)運(yùn)作處理樣本且減去以與IgG抗體的同型一起運(yùn)作的處理后樣本所獲得的背景計(jì)算值來(lái)計(jì)算；圖31a至圖31cc說(shuō)明處理后樣本及關(guān)于如下所述的M2-02C的同型的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。收集約Iml細(xì)胞懸浮液形式的處理后樣本且將其置于分析管中以供流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果指示占TNC群0.2%的⑶117+細(xì)胞的濃度、占TNC群1.8%的⑶44+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.的⑶166+細(xì)胞的濃度、占TNC群1.1%的⑶105+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.4%的⑶90+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.5%的⑶29+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.0%的⑶34+細(xì)胞的濃度，及如由7AAD所測(cè)定的99.5%細(xì)胞生存力；圖32a至圖32cc說(shuō)明關(guān)于經(jīng)由本發(fā)明的⑶117選擇方法所獲得的陽(yáng)性溶離份中的細(xì)胞的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。收集約Iml細(xì)胞懸浮液形式的陽(yáng)性溶離份且將其置于分析管中以供流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果指示占TNC群18.40%的CDl17+細(xì)胞的濃度、占TNC群93.0%的CD44+細(xì)胞的濃度、占TNC群89.2%的CD166+細(xì)胞的濃度、占TNC群81.4%的⑶105+細(xì)胞的濃度、占TNC群78.1%的⑶90+細(xì)胞的濃度、占TNC群73.6%的⑶29+細(xì)胞的濃度、占TNC群0.的⑶34+細(xì)胞的濃度及如由7AAD所測(cè)定的91.9%細(xì)胞生存力。結(jié)果系藉由根據(jù)本發(fā)明的流式細(xì)胞儀分析來(lái)運(yùn)作處理樣本且減去以與IgG抗體的同型一起運(yùn)作的處理后樣本所獲得的背景計(jì)算值來(lái)計(jì)算；圖33a至圖33ι說(shuō)明在如本文進(jìn)一步詳述的培養(yǎng)、超低溫保存、解凍及解凍后繼代中的若干繼代后關(guān)于M2-03E的細(xì)胞的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。如藉此所示，流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示該等細(xì)胞表現(xiàn)MHCI、CD44、CD29、CD90、SSEA-4、CD105、CD49f、CD9、CD166、CD166及CXCR4且較低表現(xiàn)或不表現(xiàn)⑶133、MHCII、⑶34、⑶45及⑶38；圖34a至圖34f展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E對(duì)如圖34a所示的CDl17及如圖34c所示的SSEA-4以及如圖34e所示的⑶117與SSEA-4共定位呈陽(yáng)性染色。陰性對(duì)照對(duì)如圖34b所示的CDl17、如圖34d所示的SSEA-4或如圖34f所示的CDl17與SSEA-4共定位不呈陽(yáng)性染色。圖35a及圖35b展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E快速生長(zhǎng)且表現(xiàn)多能性標(biāo)記。圖35a展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E以約24小時(shí)至約36小時(shí)的倍增時(shí)間在超低溫保存前培養(yǎng)中快速生長(zhǎng)。此快速生長(zhǎng)允許以八次倍增自50，000個(gè)細(xì)胞擴(kuò)增至48，000,000個(gè)細(xì)胞。如由RT-PCR所測(cè)定，圖35b展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E以于培養(yǎng)中至多約12個(gè)繼代的RNA水平表現(xiàn)0ct_4，L，梯帶；水；ESC，胚胎干細(xì)胞；P12，第12代；圖36a至圖36g展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E分化成神經(jīng)組織。月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)神經(jīng)誘導(dǎo)以分化成表現(xiàn)如圖36a至圖36c所示的04及GalC的少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。月經(jīng)干細(xì)胞亦表現(xiàn)如圖36d所示的Map-2、如圖36e所示的Tub_3及如圖36f所示的波形蛋白(Vimentin)。分化細(xì)胞的RT-PCR結(jié)果展示通常對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞的RNA水平表現(xiàn)，RT-PCR=L,梯帶；W，水；B，腦對(duì)照；神經(jīng)誘導(dǎo)的月經(jīng)干細(xì)胞；圖37a至圖37d展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E分化成心臟組織。月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)8μMAza處理且經(jīng)圖37b的免疫細(xì)胞化學(xué)所示展現(xiàn)肌動(dòng)蛋白的強(qiáng)表現(xiàn)。如圖37a所示的肌鈣蛋白表現(xiàn)及如圖37c所示的連接蛋白43(connexin43)表現(xiàn)系藉由用800μΜSNAP處理細(xì)胞來(lái)刺激。RT-PCR確認(rèn)如圖37d所示的心臟分化，RT-PCR:L，梯帶；W，水；H，心臟對(duì)照；心臟誘導(dǎo)；圖38a至圖38f展示月經(jīng)干細(xì)胞M2-03E分化成中胚層型組織。與圖38a所示的對(duì)照相比，如圖38b所示誘導(dǎo)經(jīng)針對(duì)脂肪空泡的油紅0染色而指示分化成脂肪組織的細(xì)胞。與如圖38c所示的對(duì)照相比，當(dāng)如圖38d所示誘導(dǎo)時(shí)細(xì)胞經(jīng)艾爾遜藍(lán)(alcianblue)染色而指示分化成成軟骨組織。與圖38e相比，如圖38f所示細(xì)胞經(jīng)茜素紅S染色而指示鈣沈積物存在；圖39為展示在解凍后培養(yǎng)的第12代，M2-03E的月經(jīng)干細(xì)胞表現(xiàn)端粒酶活性的圖；hESC，人類胚胎干細(xì)胞；MEF，小鼠胚胎纖維母細(xì)胞；MenSCsP12；圖40為展示以分成3組且在預(yù)設(shè)條件下收集的161個(gè)樣本進(jìn)行研究的結(jié)果的圖，其系為了分析與本發(fā)明的月經(jīng)干細(xì)胞收集方法相關(guān)的變量。進(jìn)行該研究以測(cè)定使用有及無(wú)抗生素的收集培養(yǎng)基及在有及無(wú)冰的情況下運(yùn)送月經(jīng)流樣本的影響。圖40展示總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)分析平均在對(duì)于三組所收集的所有樣本中收集的每個(gè)樣本為約7，900,000個(gè)細(xì)胞；圖41為展示圖40所涉及的研究結(jié)果的圖。圖41展示處理后樣本的細(xì)胞生存力平均在對(duì)于三組所收集的所有樣本中為約74%的生存力；圖42為展示圖40所涉及的研究結(jié)果的圖。圖42展示對(duì)于三組所收集的所有樣本的平均溫度平均為約15°C；圖43為展示圖40所涉及的研究結(jié)果的圖。圖43展示對(duì)于三組所收集的所有樣本的平均樣本體積平均為約11ml，其包含約Iml月經(jīng)流樣本及約IOml收集培養(yǎng)基；及圖44為展示圖40所涉及的研究結(jié)果的圖。圖44展示自收集至處理設(shè)施處接收所計(jì)算的平均樣本齡期處于約小于5小時(shí)至大于140小時(shí)的范圍內(nèi)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明將藉由考慮本發(fā)明的實(shí)施例的以下詳細(xì)描述連同如附隨描述及圖式中所述的特定例示性實(shí)施例而便于理解。應(yīng)了解，本發(fā)明的圖式及描述已經(jīng)簡(jiǎn)化以出于清楚理解本發(fā)明的目的來(lái)說(shuō)明相關(guān)要素?，F(xiàn)參看圖1至圖44，本發(fā)明提供與自月經(jīng)期間排出的血液、細(xì)胞、體液及組織(本揭示案中于本文中亦稱作"月經(jīng)流")分離且根據(jù)本發(fā)明的方法、制程及系統(tǒng)收集的月經(jīng)干細(xì)胞的取得相關(guān)的方法、制程、系統(tǒng)及組合物。如貫穿本發(fā)明的揭示內(nèi)容所用的短語(yǔ)"子宮內(nèi)膜/月經(jīng)細(xì)胞"、“子宮內(nèi)膜/月經(jīng)干細(xì)胞"、“月經(jīng)干細(xì)胞"及"月經(jīng)細(xì)胞"及術(shù)語(yǔ)"MSC"及〃細(xì)胞〃一般關(guān)于表現(xiàn)包括(但不限于)CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、⑶49f、⑶59、⑶81、⑶105、⑶166及HLAI類的細(xì)胞標(biāo)記或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記中的至少一者而表現(xiàn)較低量或不表現(xiàn)CD3及MHCII的自月經(jīng)流收集的任意一或多個(gè)細(xì)胞而通篇使用。盡管術(shù)語(yǔ)"細(xì)胞"以單數(shù)含義使用，但其亦可以復(fù)數(shù)含義使用以指代本發(fā)明的一個(gè)以上細(xì)胞。盡管細(xì)胞的上述特征系作為例示性特征提供，但月經(jīng)干細(xì)胞的其它細(xì)胞表面特征系于本文中貫穿本發(fā)明的揭示內(nèi)容提供(包括(但不限于)于此任何表及圖式上所提供的特征)且提供關(guān)于本發(fā)明的月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步揭示內(nèi)容?，F(xiàn)尤其參看圖36至圖38，應(yīng)了解，一些干細(xì)胞性質(zhì)上具有多能性，此系歸因于該等細(xì)胞分化成許多獨(dú)特細(xì)胞類型的能力。多能性細(xì)胞具有經(jīng)歷分化成許多不同哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的能力。詳言之，如圖36至圖38中所說(shuō)明，本發(fā)明的MSC亦表現(xiàn)分化成各種獨(dú)特細(xì)胞譜系的能力，該等細(xì)胞譜系系諸如神經(jīng)譜系、心臟譜系、成軟骨譜系、成脂譜系及成骨譜系。相信本發(fā)明的MSC可能夠分化成體內(nèi)260個(gè)體細(xì)胞中的任一者。舉例而言，細(xì)胞可至少能夠分化成肝細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、肌源細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞及心肌細(xì)胞。如共培養(yǎng)系統(tǒng)中所見(jiàn)，細(xì)胞亦可具有當(dāng)與諸如肝細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、肌源細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞及心肌細(xì)胞的其它預(yù)處理細(xì)胞一起培養(yǎng)時(shí)分化的能力。自分化獲得的細(xì)胞及自共培養(yǎng)獲得的細(xì)胞亦可具有用于置換或再生療法、其它治療應(yīng)用、藥妝、器官排斥療法及其它應(yīng)用的處理中的潛力。詳言之，MSC在治療、藥妝及其它應(yīng)用中的潛在用途出于許多原因是有益的，這是由于MSC:(a)易于自其它方面視為生物廢物的無(wú)爭(zhēng)議來(lái)源獲得，(b)在無(wú)需醫(yī)學(xué)培訓(xùn)的情況下由供體有效收集，(c)高度增殖，(d)能分化成所要細(xì)胞類型，(e)能自體應(yīng)用，⑴能同種異體應(yīng)用，(g)能提供可用作多個(gè)療法的潛在來(lái)源的單細(xì)胞株，(h)能與其它健康細(xì)胞潛在地共同培養(yǎng)，(i)能用作專用再生保健解決方案的來(lái)源，及(j)能經(jīng)十年在規(guī)則周期上即期及多次收集。自其它來(lái)源獲得的干細(xì)胞的用途已在用于以下病況的各種形式的再生醫(yī)學(xué)中使用糖尿病、心肌梗塞、瓣膜/動(dòng)脈置換、帕金森氏病(Parkinson's)、阿茲海默氏病(Alzheimer's)、MS、中風(fēng)療法、胰島素再生、抗老化血清、燒傷/創(chuàng)傷愈合繃帶、痤瘡管理、白癲風(fēng)、假發(fā)、牙齒再生、假乳/豐乳、肝硬化、陰莖增大、運(yùn)動(dòng)療法、貧血、白血病、淋巴瘤、肺纖維化、鐮刀型細(xì)胞貧血、骨骼置換、骨質(zhì)疏松癥、脊柱側(cè)彎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、膝/髖/肘置換、激素置換療法、PMS/抑郁管理、自閉癥、不孕療法、視力再生及晶狀體置換。一般而言及在一實(shí)施例中，本發(fā)明提供自月經(jīng)流獲得及收集MSC的方法。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供自月經(jīng)流收集MSC的系統(tǒng)。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供超低溫保存自月經(jīng)流所收集的MSC的方法。在其它實(shí)施例中，包含MSC群的產(chǎn)物可藉由自月經(jīng)流獲得及分離MSC的各種制程來(lái)收集。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明提供MSC的富集群及富集自月經(jīng)流獲得的MSC群的制程。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明提供包含MSC及其它試劑的各種組合物，諸如，包含MSC及超低溫保存劑的組合物、包含MSC及至少一種藥妝劑的組合物、及包含MSC及保存劑的組合物。本發(fā)明的這些各個(gè)實(shí)施例在下文中進(jìn)一步詳述。本發(fā)明的總體方法及制程的例示性圖解于圖1中說(shuō)明。一般而言，各個(gè)步驟可用于取得月經(jīng)流且處理該月經(jīng)流以獲得可經(jīng)進(jìn)一步處理用于特定用途的MSC。詳言之，可將MSC超低溫保存，經(jīng)由細(xì)胞選擇或培養(yǎng)的單一或多個(gè)步驟富集，及/或準(zhǔn)備供治療或藥妝使用。貫穿本發(fā)明的實(shí)施，可藉由諸如表征所收集的MSC的流式細(xì)胞儀及鑒別樣本的任何可能污染的微生物分析的方法及制程對(duì)MSC及周圍環(huán)境進(jìn)行質(zhì)量控制分析。圖1所描繪的本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施例系在圖2至圖28中以及本發(fā)明的工作實(shí)例的書(shū)面描述中進(jìn)一步詳述?，F(xiàn)參看圖2，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖2，可以收集制程來(lái)收集月經(jīng)流且接著將其轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可將MSC進(jìn)一步處理且與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用?，F(xiàn)參看圖3，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖3，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離且收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可由表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的所選MSC來(lái)進(jìn)一步富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者。可將經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC處理且與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存。可接著將經(jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用?，F(xiàn)參看圖4，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖4，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可由表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的所選MSC來(lái)進(jìn)一步富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又囵B(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以使該等MSC擴(kuò)增?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用。現(xiàn)參看圖5，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖5，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可由表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的所選MSC來(lái)進(jìn)一步富集或收集MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又囵B(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以使該等MSC擴(kuò)增?？山又槍?duì)特異性細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)進(jìn)一步選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC以富集或收集特異性MSC?？蓪⒔?jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用。現(xiàn)參看圖6，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖6，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可由表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的所選MSC來(lái)進(jìn)一步富集或收集MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又囵B(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以使該等MSC擴(kuò)增?？山又槍?duì)特異性細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)進(jìn)一步選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC以富集或收集特異性MSC。可接著進(jìn)一步培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目。可接著將MSC與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用。現(xiàn)參看圖7，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖7，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？蓪⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC處理且與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用?，F(xiàn)參看圖8，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖8，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山逵蛇x擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮經(jīng)培養(yǎng)的MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又鴮⒔?jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC分別與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用?，F(xiàn)參看圖9，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖9，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山逵蛇x擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮經(jīng)培養(yǎng)的MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者。可接著培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以使該等MSC擴(kuò)增?？蓪SC的經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的培養(yǎng)物分別與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存?？山又鴮⒔?jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供使用。現(xiàn)參看圖10，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖10，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目。可藉由選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮經(jīng)培養(yǎng)的MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者。可接著培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以使該等MSC擴(kuò)增?？舍槍?duì)特異性細(xì)胞標(biāo)記來(lái)進(jìn)一步選擇MSC的經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的培養(yǎng)物?？山又鴮⒔?jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞分別與超低溫保存劑組合以為超低溫保存作準(zhǔn)備且接著超低溫保存。可接著將經(jīng)超低溫保存的MSC稍后解凍以供治療用。貫穿本發(fā)明的實(shí)施例的所有描述，短語(yǔ)"治療用途"包括使用MSC用于任何類型的干細(xì)胞療法且亦包括藥妝用途?，F(xiàn)參看圖11，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖11，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可將MSC處理且與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖12，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖12，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目。培養(yǎng)后，可將MSC處理且與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖13，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖13，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC。可接著將經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC分別與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖14，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖14，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)目。可接著將經(jīng)培養(yǎng)的MSC分別與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖15，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖15，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可培養(yǎng)MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC。可接著分別培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞表面標(biāo)記再次選擇經(jīng)分別培養(yǎng)的MSC?？山又鴮⒔?jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC分別與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖16，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖16，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可藉由選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又鴮⒔?jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC分別與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖17，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖17，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可藉由選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備。現(xiàn)參看圖18，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖18，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可藉由選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)特異性細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC。可接著將經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備?，F(xiàn)參看圖19，本發(fā)明提供超低溫保存MSC的方法及制程。根據(jù)圖19，可將月經(jīng)流收集且轉(zhuǎn)移至處理設(shè)施中，在此可接著處理該月經(jīng)流以分離及收集MSC。自月經(jīng)流分離及收集MSC可經(jīng)由用于使所收集的MSC數(shù)目最大化的離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降方法來(lái)進(jìn)行。一旦收集，即可藉由選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的MSC來(lái)富集或濃縮MSC，該等細(xì)胞標(biāo)記系諸如與MSC相關(guān)的細(xì)胞標(biāo)記中的任意一或多者?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及甚至未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)特異性細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又M(jìn)一步培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與維持細(xì)胞生存力的細(xì)胞培養(yǎng)基組合以為治療用途作準(zhǔn)備。本發(fā)明的其它實(shí)施例系于圖20至圖28中提供且描述。該等其它實(shí)施例包括在根據(jù)本發(fā)明的先前所述實(shí)施例中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存MSC的后處理MSC?，F(xiàn)參看圖20，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖20，將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖21，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖21，將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著針對(duì)某些MSC細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)選擇。可接著將經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖22，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖22，將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著針對(duì)某些MSC細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)選擇。可接著培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖23，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖23，將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著針對(duì)某些MSC細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)選擇?？山又囵B(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些MSC細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又鴮⒔?jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用。現(xiàn)參看圖24，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖24，可將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著針對(duì)某些MSC細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)選擇?？山又囵B(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞以擴(kuò)增MSC數(shù)目。可接著針對(duì)某些MSC細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC。可接著培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的細(xì)胞以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖25，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖25，可將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著培養(yǎng)以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用。現(xiàn)參看圖26，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖26，可將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著培養(yǎng)以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又鴮⒔?jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC分別與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖27，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖27，可將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著培養(yǎng)以擴(kuò)增MSC數(shù)目。可接著針對(duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又鴮⒔?jīng)培養(yǎng)的MSC與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用?，F(xiàn)參看圖28，本發(fā)明提供制備根據(jù)先前所述方法或制程中的任一者或任何其它細(xì)胞收集及/或超低溫保存方法或制程收集且超低溫保存的MSC的方法及制程。根據(jù)圖28，可將經(jīng)超低溫保存的MSC解凍且接著培養(yǎng)以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC?？山又謩e培養(yǎng)經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC以擴(kuò)增MSC數(shù)目?？山又槍?duì)某些細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)選擇經(jīng)培養(yǎng)的MSC。可接著將經(jīng)選擇及未經(jīng)選擇的MSC與細(xì)胞培養(yǎng)基組合以供治療用。如圖1至圖28中所涉及的本發(fā)明的上述實(shí)施例系如下文所提供及描述而進(jìn)一步詳述。根據(jù)本發(fā)明，包含月經(jīng)干細(xì)胞及諸如超低溫保存劑、細(xì)胞培養(yǎng)基或藥妝劑的其它試劑的組合物亦于下文提供且描述。收集及輸送月經(jīng)干細(xì)胞根據(jù)本發(fā)明的方法及制程，月經(jīng)干細(xì)胞系藉由首先在月經(jīng)期間使用具備收集套組的收集裝置來(lái)收集包括月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流而獲得。月經(jīng)流可在月經(jīng)的任何時(shí)間收集，包括(但不限于)月經(jīng)時(shí)期的重度日、中度日或輕度日。視情況，可自供體收集外周血液的樣本以供比較傳染病分析用。可出于收集用于處理出月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本的目的向供體提供收集套組。舉例而言，可提供月經(jīng)干細(xì)胞收集套組以收集、處理及封裝月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本以供運(yùn)送。該收集套組可包含輸送容器，諸如盒、袋或適合于(視情況)于低溫下運(yùn)送月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本的其它容器(例如Nanocool、Styrofoam或隔熱容器)；收集裝置，諸如Mooncup、Divacup,Instead杯或適合于收集月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本的任何其它衛(wèi)生收集裝置；至少一個(gè)尺寸合適的無(wú)菌收集容器，諸如50ml管或其它合適尺寸的管；用于懸浮至少一個(gè)月經(jīng)流樣本的收集培養(yǎng)基；至少一個(gè)塑料拉鏈袋；至少一條吸收毛巾；至少一個(gè)生物危害品袋；無(wú)菌4X4紗布；用于包覆至少一個(gè)收集容器的封口膜；及消毒清潔小毛巾或抹布。在收集至少一個(gè)包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流樣本之前，可對(duì)供體身份指定一寄存編號(hào)，該編號(hào)可在本發(fā)明的實(shí)施中使用以鑒別由該供體所收集的任何樣本。用于收集套組的收集培養(yǎng)基可包含DPBS與肝素的混合物。具有必要pH值的合適的相當(dāng)組織培養(yǎng)基可替代DPBS使用。舉例而言，肝素可以約1000單位/毫升的濃度提供。在一實(shí)施例中，收集培養(yǎng)基可包含具有200單位的處于約1000單位/毫升濃度下的肝素的約10毫升DPBS。收集套組的培養(yǎng)基可藉由將約0.20毫升肝素以1000單位/毫升的濃度添加至約10毫升DPBS中來(lái)制備?？捎谑占瘶颖厩皩⒋梭w積置于無(wú)菌收集容器中。在另一實(shí)施例中，收集培養(yǎng)基可包含杜氏磷酸鹽緩沖生理食鹽水(Dulbecco'sPhosphateBufferSaline,DPBS)(Mediatech或合適替代培養(yǎng)基的其它制造商)，其不含鈣、鎂或酚紅；抗生素，其可包括盤尼西林(Penicillin)(約100單位/毫升)、鏈霉素(Str印tomyocin)(約100微克/毫升)、兩性霉素B(AmphotericinB)及/或其它合適的抗生素；及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基或合適抗凝劑約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素，該抗凝劑系諸如A⑶、CPD、CPDA或CPDA-I。收集培養(yǎng)基可使用無(wú)菌技術(shù)來(lái)制備。可用消毒劑清潔陰道區(qū)域以為收集至少一個(gè)包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流樣本作準(zhǔn)備。在一實(shí)施例中，消毒劑可提供于小毛巾上。供體接著可根據(jù)收集裝置的使用說(shuō)明書(shū)將先前已用肥皂及水清潔的收集裝置置于陰道內(nèi)。須在供體的月經(jīng)期間將該收集裝置置于陰道內(nèi)以收集月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本。在一實(shí)施例中，可在月經(jīng)的重度日期間將收集裝置置于陰道內(nèi)。在一替代實(shí)施例中，可在月經(jīng)的中度日或輕度日期間將收集裝置置于陰道內(nèi)。應(yīng)將收集裝置在陰道內(nèi)維持一定時(shí)間以收集月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本。舉例而言，可將收集裝置在陰道內(nèi)維持約3小時(shí)或更短時(shí)間。收集樣本的額外時(shí)間可為必需的。在陰道內(nèi)維持約3小時(shí)后，可接著移除含有月經(jīng)流樣本的收集裝置。月經(jīng)流樣本可包含約0.Iml至約5ml體積的月經(jīng)血液、組織、體液及月經(jīng)干細(xì)胞。可接著將月經(jīng)流樣本轉(zhuǎn)移至無(wú)菌收集管中的收集培養(yǎng)基中。月經(jīng)流樣本向無(wú)菌容器中的轉(zhuǎn)移可藉由將月經(jīng)流樣本自收集裝置傾入容器中的培養(yǎng)基中來(lái)進(jìn)行以為將月經(jīng)流樣本運(yùn)送至處理設(shè)施作準(zhǔn)備。該容器應(yīng)加以封蓋或以其它方式密封以防止月經(jīng)流樣本與收集培養(yǎng)基的溶液泄漏。密封件亦應(yīng)防止空氣進(jìn)入收集容器內(nèi)部。在一實(shí)施例中，可將具有相應(yīng)密閉蓋的容器用封口膜包覆且封裝以供輸送?？蓪⒁粋€(gè)以上月經(jīng)流樣本收集，轉(zhuǎn)移至容器且準(zhǔn)備運(yùn)送至處理設(shè)施。若收集一個(gè)以上月經(jīng)流樣本，則可將于收集管中的收集培養(yǎng)基中的各所收集樣本維持于冰箱中直至收集最后一個(gè)樣本為止。一旦收集所有月經(jīng)流樣本，即可接著封裝該等樣本以供運(yùn)送。在一實(shí)施例中，月經(jīng)干細(xì)胞可由在子宮內(nèi)膜或子宮頸區(qū)域中所進(jìn)行的帕帕尼科拉烏試驗(yàn)(Papanicolaoutest)或任何活組織檢查來(lái)制備。取得后在運(yùn)送及于處理設(shè)施處處理的過(guò)程中，可將包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流的至少一個(gè)樣本維持于低溫下?？蓪⑷菁{月經(jīng)流與培養(yǎng)基的溶液的任何密封容器封裝供運(yùn)送以在運(yùn)送至處理設(shè)施期間將各樣本維持于約rc至約25°C的范圍內(nèi)的溫度下。在一實(shí)施例中，在運(yùn)送至處理設(shè)施期間可將各樣本維持于約1°C至約15°C的溫度范圍內(nèi)。在另一實(shí)施例中，在取得后及在整個(gè)運(yùn)送中，可將所收集的月經(jīng)流樣本維持于室溫或周圍空氣溫度下。含有包含月經(jīng)干細(xì)胞及收集培養(yǎng)基的月經(jīng)流樣本的各收集容器可藉由將該收集容器置于以袋子拉鏈功能密封的大塑料拉鏈袋中而封裝以供輸送。可將封裝有殺菌容器的大塑料袋置于第二個(gè)大拉鏈袋中且亦密封?？蓪蓷l吸收毛巾置于輸送容器的底部。若正使用Nanocool裝置，則不需要額外冰。泡沫磚或其它裝置可用于冷卻載運(yùn)月經(jīng)流樣本的輸送容器。可將充滿濕冰的袋置于吸收毛巾之上。可將密封袋中的殺菌容器置于冰袋之下。可將其余吸收毛巾置于冰袋之上。將輸送容器關(guān)閉，緊固且密封。其它合適的容器可用于容器的輸送，只要該容器在運(yùn)送期間將包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流樣本維持于約l°c與約25°C之間的溫度下即可。舉例而言，其它合適的容器包括(但不限于)由TherapakCorporation出售的冷卻及隔熱運(yùn)送容器、任何類型的隔熱容器或經(jīng)設(shè)計(jì)用于運(yùn)送的苯乙烯泡沫盒(Styrofoambox)。在運(yùn)送的至少兩個(gè)小時(shí)內(nèi)可接觸承運(yùn)方以獲取含有于收集培養(yǎng)基中的至少一個(gè)月經(jīng)流樣本的輸送容器。承運(yùn)方可為AirNet或適合于輸送生物材料的其它較佳快遞或諸如FedEx或UPS的其它運(yùn)送公司。輸送容器應(yīng)在收集后約5個(gè)小時(shí)至約125個(gè)小時(shí)內(nèi)到達(dá)處理設(shè)施。在一實(shí)施例中，輸送容器可在收集后約24個(gè)小時(shí)至約72個(gè)小時(shí)的間到達(dá)處理設(shè)施。在另一實(shí)施例中，輸送容器可在約24個(gè)小時(shí)至約48個(gè)小時(shí)的間到達(dá)處理設(shè)施。輸送容器不應(yīng)儲(chǔ)存于熱環(huán)境中。處理設(shè)施接收輸送容器且為各供體樣本的識(shí)別信息編目錄以在處理包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流樣本期間使用。適當(dāng)障壁及個(gè)人保護(hù)措施可在處理設(shè)施處處理包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流的任何樣本期間使用。一旦在處理設(shè)施處接收輸送容器，即可將具有月經(jīng)流樣本的各容器自輸送容器移除，置于冰盤中(或冰箱中)的冰上，且轉(zhuǎn)移至生物安全柜(BSC)中的清潔室中以自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞、收集月經(jīng)干細(xì)胞且稍后處理以供使用及/或超低溫保存。處理設(shè)施處的月經(jīng)流處理由處理設(shè)施接收月經(jīng)流樣本且記錄至處理設(shè)施系統(tǒng)中。一旦在處理設(shè)施處接收月經(jīng)流樣本，即可在整個(gè)處理期間將其維持于約1°C至約25°C的溫度下?？稍贐SC及離心機(jī)中使用無(wú)菌技術(shù)處理各月經(jīng)流樣本。當(dāng)在BSC中工作時(shí)以70%IPA頻繁擦拭手套。在處理月經(jīng)流樣本之前于無(wú)菌條件下置放BSC中處理所需的所有其它材料，包括(但不限于)紅色頂端管、針、注射器、紅色頂端管的托架、BacT瓶、酒精墊、50ml錐形管、50ml錐形管的托架及移液器。在已對(duì)BSC消毒后設(shè)置所有無(wú)菌供應(yīng)品。可將制程所使用的所有無(wú)菌供應(yīng)品置于盤或無(wú)菌鋪巾中。無(wú)菌供應(yīng)品可包括針、注射器及置于BSC中的其它材料，該等材料包括紅色頂端管、紅色頂端管的托架、血液培養(yǎng)瓶、酒精墊、50ml錐形收集管、50ml錐形收集管的托架、移液管及冰盤?；谥圃焐痰恼f(shuō)明書(shū)，將所有培養(yǎng)基及試劑較佳置于冰上且儲(chǔ)存于約1°C至約15°C之間下，但亦可為約2°C至約8°C。緩沖生理食鹽水培養(yǎng)基(DPBS)或合適的替代品可在月經(jīng)干細(xì)胞分離過(guò)程期間使用。DPBS培養(yǎng)基包含具有約5ml至約IOml肝素(肝素鈉1，000USP單位/毫升-AmericanPharmaceuticalPartners)的約100毫升DPBS0在處理設(shè)施處接收月經(jīng)流樣本的第一天，可對(duì)包含月經(jīng)干細(xì)胞的各月經(jīng)流試樣進(jìn)行第1階段處理。首先，可對(duì)容納月經(jīng)流樣本的收集容器外部進(jìn)行消毒，接著離心。可使收集容器中的月經(jīng)流樣本經(jīng)受離心、密度梯度離心、過(guò)濾及/或淀粉沉降。離心在一實(shí)施例中，在約4°C下月經(jīng)流樣本的離心可以約2000rpm進(jìn)行歷時(shí)約7分鐘。離心后，可接著自離心機(jī)移除月經(jīng)流樣本的各試樣?？蓪?duì)收集容器外部消毒，接著將收集管轉(zhuǎn)移至BSC中以抽吸上清液。可使離心塊再懸浮于約IOmlDPBS或相當(dāng)替代品中，且接著對(duì)其進(jìn)行第2階段處理。亦可根據(jù)如本文所述的可選凈化步驟處理離心塊。密度梯度離心在另一實(shí)施例中，月經(jīng)流樣本的離心可使用密度梯度液進(jìn)行。舉例而言，密度梯度液可為淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)基(約20°C下密度1.077-1.083g/ml-Cellgro)或?yàn)榭删哂休^高或較低密度的其它合適梯度液。使含有月經(jīng)流樣本、收集培養(yǎng)基及密度梯度液的錐形收集管經(jīng)受離心。舉例而言，可在約15°C至約30°C之間、較佳約20°C下將錐形收集管以約14，OOOrpm離心約30分鐘而無(wú)需應(yīng)用制動(dòng)器以減緩離心機(jī)。作為密度梯度離心的結(jié)果，白血球?qū)有纬捎谏锨逡号c密度梯度液的界面處。該白血球?qū)雍邪栽陆?jīng)流樣本獲得的月經(jīng)干細(xì)胞的所要細(xì)胞群。將白血球?qū)由戏降纳锨逡撼槲涟籽驅(qū)由戏郊s5ml且摒棄。藉由使白血球?qū)泳従彍u旋且在白血球?qū)犹幱肐Oml移液管刮拭錐形管側(cè)面來(lái)移除白血球?qū)印?yīng)盡可能與白血球?qū)右黄鹗占钚◇w積的密度梯度液?？赊饤壥Ｓ嗝芏忍荻纫杭昂屑t血球的離心塊?？稍谑覝叵乱栽噭┘凹?xì)胞進(jìn)行密度梯度分離。若將細(xì)胞冷卻，則分離不會(huì)提供最佳細(xì)胞回收?？蓪⑺占陌籽?qū)又糜?0ml錐形收集管中且用洗滌溶液使體積達(dá)到約30ml?？山又诩s15°C至約30°C的間下使細(xì)胞懸浮液以約2000rpm離心歷時(shí)約7分鐘。離心后，可接著自離心機(jī)移除試樣且可對(duì)收集容器外部消毒，接著將收集管轉(zhuǎn)移至BSC中以抽吸上清液?？墒闺x心塊再懸浮于約IOmlDPBS中且接著對(duì)其進(jìn)行第2階段處理。亦可根據(jù)如本文所述的可選凈化步驟處理離心塊。過(guò)濾在又一實(shí)施例中，可在無(wú)菌過(guò)濾器中使月經(jīng)流樣本經(jīng)受過(guò)濾。該無(wú)菌過(guò)濾器可為約40微米、約70微米或約100微米。過(guò)濾可包含在約1°C至約30°C之間下使包含月經(jīng)干細(xì)胞的月經(jīng)流樣本以約2000rpm離心約7分鐘。離心后，可接著自離心機(jī)移除試樣且可對(duì)收集容器外部消毒，接著將收集管轉(zhuǎn)移至BSC中以抽吸上清液?？墒闺x心塊再懸浮于約IOmlDPBS中且接著對(duì)其進(jìn)行第2階段處理。亦可根據(jù)本文所述的可選凈化步驟處理離心塊。淀粉沉降在又一實(shí)施例中，可藉由淀粉沉降來(lái)處理月經(jīng)流樣本。在一實(shí)施例中，羥乙基淀粉可以1比5的比率使用，亦即，約1毫升淀粉比約5毫升月經(jīng)流樣本。可根據(jù)上述比率混合各月經(jīng)流樣本?？墒够旌衔锝?jīng)受離心以有助于以約50g沉降約6分鐘。亦可在有或無(wú)上述離心步驟的情況下使混合物沉降歷時(shí)約30分鐘或至多約兩小時(shí)。沉降后，移除包含月經(jīng)干細(xì)胞的白血球?qū)忧沂蛊浣?jīng)受離心以濃縮該等月經(jīng)干細(xì)胞。離心包含在約1°C至約30°C之間下使懸浮于DPBS中的月經(jīng)干細(xì)胞以約2000rpm離心約7分鐘。離心后，可接著自離心機(jī)移除試樣且對(duì)收集容器外部消毒，接著將收集管轉(zhuǎn)移至BSC中以抽吸上清液?？墒闺x心塊再懸浮于約IOmlDPBS中且接著對(duì)其進(jìn)行第2階段處理。亦可根據(jù)本文所述的可選凈化步驟處理離心塊。凈化可使如根據(jù)離心、密度梯度離心、過(guò)濾或淀粉沉降之上述步驟中的任一者所收集的月經(jīng)干細(xì)胞的樣本經(jīng)歷可選凈化過(guò)程。在首先計(jì)算樣本的總體積后可移除離心塊周圍的過(guò)量流體?？墒闺x心塊再懸浮于約5ml凈化培養(yǎng)基中。凈化培養(yǎng)基可用于凈化月經(jīng)流樣本。凈化培養(yǎng)基包含于合適培養(yǎng)基中的至少一種抗生素。作為非限制性實(shí)例，抗生素可包含萬(wàn)古霉素(Vancomycin)、凱福隆(ClaforarOJSJ米卡星(Amikacin)、慶大霉素(Gentamycin)及兩性霉素B中的至少一者。合適的培養(yǎng)基可包含漢克斯平衡鹽溶液(HanksBalancedSaltSolution,HBSS)或其它培養(yǎng)基。若以干式提供，則抗生物可需要復(fù)水。在一實(shí)施例中，凈化培養(yǎng)基可包含以下濃度的抗生素50yg/ml萬(wàn)古霉素、250μg/ml凱福隆、100μg/ml阿米卡星、120μg/ml慶大霉素及2.7μg/ml兩性霉素B?？股氐钠渌鼭舛人娇蔀楹线m的。舉例而言，凈化培養(yǎng)基可藉由將約IOmlHBSS添加至萬(wàn)古霉素的約Ig小瓶中以獲得約100mg/ml的濃度而制成。將約Iml的100mg/ml濃度的萬(wàn)古霉素添加至約199mlHBSS中以獲得約500μg/ml的濃度。將約Iml的約500μg/ml濃度的萬(wàn)古霉素添加至最終小瓶中用于制備凈化培養(yǎng)基。將約2mlHBSS添加至約500毫克/小瓶的凱福隆中以獲得約250mg/ml的濃度。將約Iml的約250mg/ml凱福隆溶液添加至約99mlHBSS中以獲得約2500μg/ml的凱福隆濃度。將約Iml的約2500μg/ml濃度的凱福隆添加至凈化培養(yǎng)基的最終小瓶中。將約10mlHBSS添加至阿米卡星的約Ig小瓶中以獲得約100mg/ml的濃度。將約Iml的約100毫克/小瓶濃度的阿米卡星添加至約99mlHBSS中以獲得約1ΟΟΟμg/ml。將約Iml阿米卡星添加至最終小瓶中以制備凈化培養(yǎng)基。將約IOmlHBSS添加至慶大霉素的約Ig小瓶中以獲得約100mg/ml的濃度。將約Iml的約100mg/ml濃度的慶大霉素添加至約99mlHBSS中以獲得約1000μg/ml濃度。將約1.2ml的約1000μg/ml慶大霉素溶液添加至最終小瓶中以制備凈化培養(yǎng)基。將約2ml兩性霉素B添加至約8ml無(wú)菌水中以制備約50μg/ml濃度的兩性霉素B。約0.540ml(27μg)兩性霉素B系用以制備最終濃度的兩性霉素B。對(duì)于抗生素溶液而言，凈化培養(yǎng)基可于50ml無(wú)菌管中藉由添加約Iml的500μg/ml萬(wàn)古霉素、約Iml的2500μg/ml凱福隆、約Iml的1000μg/ml阿米卡星、約1.2ml的1000μg/ml慶大霉素及約0.540ml(27μg)兩性霉素B以構(gòu)成約4.74ml培養(yǎng)基來(lái)制備。將1000單位/毫升的約0.200ml肝素添加至抗生素溶液中且將約5.06mlHBSS添加至抗生素溶液中以形成最終體積IOml的凈化培養(yǎng)基?？蓪⑴囵B(yǎng)基儲(chǔ)存于約2°C至約8°C下直至使用?？墒闺x心塊再懸浮于約5ml凈化培養(yǎng)基中。若凝塊或其它巨分子存在，則細(xì)胞可需要過(guò)濾。若再懸浮的細(xì)胞因凝塊或出于任何其它原因而需要過(guò)濾，則可使用100微米過(guò)濾器過(guò)濾樣本。對(duì)于過(guò)濾而言，可使用100微米過(guò)濾器或更小尺寸過(guò)濾器(視懸浮液中的凝塊尺寸而定)及無(wú)菌50ml錐形管過(guò)濾懸浮液。一旦懸浮液穿過(guò)過(guò)濾器，即可使用額外抗生素培養(yǎng)基洗滌該過(guò)濾器。為凈化起見(jiàn)可培育凈化培養(yǎng)基中的經(jīng)過(guò)濾或未經(jīng)過(guò)濾的細(xì)胞。在一實(shí)施例中，于清潔室中在冰箱中將凈化培養(yǎng)基中的經(jīng)過(guò)濾或未經(jīng)過(guò)濾細(xì)胞在約2°C至約8°C下培育約20小時(shí)至約30小時(shí)。培育期間，可將細(xì)胞置于旋轉(zhuǎn)器上或以每小時(shí)約一次翻轉(zhuǎn)歷時(shí)培育的頭5個(gè)小時(shí)。凈化過(guò)程結(jié)束時(shí)，接著對(duì)包含月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行第2階段處理。在經(jīng)受或不經(jīng)受凈化過(guò)程的情況下，包含月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液可根據(jù)第2階段處理來(lái)處理。第2階段處理包含使DPBS或凈化培養(yǎng)基中的細(xì)胞懸浮液經(jīng)受離心。在一實(shí)施例中，在約4°C下細(xì)胞懸浮液的離心可以約2000rpm進(jìn)行歷時(shí)約7分鐘。離心之后及轉(zhuǎn)移至BSC之前，可對(duì)容納月經(jīng)干細(xì)胞的管外部消毒。一旦于BSC中，即可移除上清液，在管底部留下細(xì)胞離心塊。可使細(xì)胞再懸浮于約10mlDPBS中，混合且在約4°C下以約2000rpm離心約7分鐘。離心后，可將容器凈化，接著轉(zhuǎn)移至BSC中。月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)菌學(xué)分析可在處理中的此時(shí)進(jìn)行。在BSC中，且使用無(wú)菌技術(shù)，可使用無(wú)菌注射器移除包含月經(jīng)干細(xì)胞的離心塊上方的約5ml上清液。可將約4ml上清液置于厭氧血液培養(yǎng)瓶中且可將約Iml上清液置于好氧血液培養(yǎng)瓶中。該等瓶可經(jīng)組態(tài)以供BacT/Alert系統(tǒng)中使用?？山又鶕?jù)制造商的說(shuō)明書(shū)使用BacT/Alert系統(tǒng)培育該等瓶。BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶及系統(tǒng)系作為用于實(shí)施本發(fā)明的合適測(cè)試系統(tǒng)的一實(shí)例而提供?？墒褂闷渌线m的自動(dòng)或手動(dòng)血液培養(yǎng)試樣瓶及系統(tǒng)，只要其依照21C.F.R.部分610.12或經(jīng)驗(yàn)證效能與此CFR部分類似即可?？勺噪x心塊上方移除剩余上清液。使包含細(xì)胞的離心塊再懸浮于DPBS中達(dá)到約5.1ml且混合?？蓪⒓s100μ1細(xì)胞等分至管中以供處理后測(cè)試以獲得細(xì)胞計(jì)數(shù)及生存力。可使用自動(dòng)或手動(dòng)血球計(jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。可使用錐蟲(chóng)藍(lán)或其它方法進(jìn)行細(xì)胞生存力分析。懸浮于DPBS中的剩余細(xì)胞可準(zhǔn)備超低溫保存、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞選擇或治療或藥妝使用。超低溫保存對(duì)于超低溫保存而言，可將懸浮于DPBS中的剩余細(xì)胞置于冰上歷時(shí)至少約15分鐘以為超低溫保存作準(zhǔn)備。該準(zhǔn)備可包含將超低溫保存培養(yǎng)基添加至月經(jīng)干細(xì)胞中且接著利用控速冷凍器或其它合適的冷凍器系統(tǒng)(急降冷凍(dump-freeze)監(jiān)控或冷凍容器(Nalgene))對(duì)混合物進(jìn)行若干降溫步驟以使該等月經(jīng)干細(xì)胞的溫度降至約-90°C的最終溫度。合適的控速冷凍器包括(但不限于)CryomedThermoForma控速冷凍器7454(ThermoElectron,Corp.)、Planar控速冷凍器Kryo10/16(TSScientific)、Gordinier、Bio-Cool-FTS系統(tǒng)及AsymptoteEF600、BIOSTORCBS2100系列。可制備包含培養(yǎng)基及DMSO的超低溫保存培養(yǎng)基?？蓪⒓s3mlDPBS添加至諸如50ml錐形管的容器中?？蓪⒓sIml人類血清白蛋白(HSA)添加至約3mlDPBS中且接著在冰上冷卻約10分鐘。將約Iml經(jīng)冷卻的99%DMSO添加至HSA及DPBS中以制備最終超低溫保存培養(yǎng)基?？山又鴮⒊蜏乇４媾囵B(yǎng)基及細(xì)胞樣本置于冰上歷時(shí)約15分鐘，隨后將該超低溫保存培養(yǎng)基添加至該細(xì)胞樣本中。分批處理可用于將超低溫保存培養(yǎng)基等分至細(xì)胞樣本中。舉例而言，可將約100μ1細(xì)胞懸浮液的單一等分試樣與約3mlDPBSUmlHSA及約Iml的99%DMSO組合。可將約200μ1細(xì)胞懸浮液的約2份等分試樣與約6mlDPBS,2mlHSA及約2ml的99%DMSO組合?？蓪⒓?xì)胞樣本的約5份等分試樣與約15mlDPBS、約5mlHSA及約5ml的99%DMSO組合?？蓪⒓?xì)胞樣本的約10份等分試樣與約30mlDPBS、約IOmlHSA及約IOml的99%DMSO組合。在一替代實(shí)施例中，可使用其它超低溫保存培養(yǎng)基。舉例而言，具有超低溫保存劑的超低溫保存培養(yǎng)基可用于維持解凍后高細(xì)胞生存力成果，諸如CryoStorCSlO或CS5(Biolife)、補(bǔ)充有丙二醇及蔗糖的胚胎超低溫保存培養(yǎng)基(Vitrolife)、或SAGE培養(yǎng)基(CooperSurgical)0甘油可與諸如DMSO的其它超低溫保存劑一起使用，或可以于具有合適蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基中約10%的濃度單獨(dú)使用?？蓪⒊蜏乇４媾囵B(yǎng)基添加至細(xì)胞樣本中?？蓪⒊蜏乇４媾囵B(yǎng)基逐滴添加至懸浮于DPBS中的月經(jīng)干細(xì)胞中直至所懸浮的月經(jīng)干細(xì)胞與超低溫保存培養(yǎng)基的總混合物的體積達(dá)到超低溫保存細(xì)胞混合物的最終所要體積為止?？蓪⒆罱K超低溫保存細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至2X5ml條形碼冷凍四級(jí)瓶(cryoquat)中，其中QC樣本儲(chǔ)存于5ml小瓶的蓋中。使用移液器移除樣本的約200μ1等分試樣且將其等分至QC蓋中。已填充蓋后，將剩余4.8ml試樣添加至5ml小瓶中。應(yīng)將樣本送至進(jìn)行傳染病及其它分析。應(yīng)將冷凍小瓶置于CRY0MED冷凍器中且對(duì)其進(jìn)行控速降溫至處于或低于約_85°C的溫度。應(yīng)將經(jīng)超低溫保存的試樣轉(zhuǎn)移至貯倉(cāng)中以儲(chǔ)存于-150°C或更低溫度下的液氮蒸氣中。應(yīng)對(duì)對(duì)傳染病測(cè)試呈陽(yáng)性的任何樣本進(jìn)行檢疫。可將對(duì)傳染病測(cè)試呈陰性的任何樣本轉(zhuǎn)移至不同永久儲(chǔ)存?zhèn)}?？稍诳厮倮鋬銎髦谐绦蚧韵陆禍夭襟E，首先降低超低溫保存劑與月經(jīng)干細(xì)胞的混合物?？墒古c超低溫保存劑組合的月經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)受控速降溫以為最終儲(chǔ)存于冷凍器中作準(zhǔn)備?？厮俳禍乜山?jīng)設(shè)計(jì)以維持細(xì)胞生存力。Cryo-Med冷凍器(ThermoElectronCorp.)、液氮缸及攜帶型Cryo-Med冷凍器可用于控速降溫以為最終儲(chǔ)存于冷凍器中作準(zhǔn)備?？稍诶鋬鲂∑炕蚶鋬龃惺辜?xì)胞經(jīng)受控速降溫以達(dá)到約-90°C的溫度。對(duì)于在冷凍袋中所收集的月經(jīng)干細(xì)胞的樣本而言，可使細(xì)胞經(jīng)受以下控速降溫概況在約4°C下等待，1.0°C/分鐘至-6.0°C(樣本)，25.0°C/分鐘至-50.0°C(腔室)，10.0°C/分鐘至_14.0°C(腔室)、1.0°C/分鐘至_45.0°C(腔室)、10.0°C/分鐘至-90.O0C(腔室)及結(jié)束(樣本處于或低于-85.O0C)。對(duì)于在冷凍小瓶中所收集的月經(jīng)干細(xì)胞的樣本而言，可使細(xì)胞經(jīng)受以下控速降溫概況在4.0°C下等待，1.O0C/分鐘至-3.O0C(腔室)，10.O0C/分鐘至-20.0°C(腔室)，1.O0C/分鐘至-40.O0C(腔室)，10.O0C/分鐘至-90.0°C(腔室)及結(jié)束?！┏蜏乇４鎰┡c月經(jīng)干細(xì)胞的混合物處于或低于約_85°C，即將超低溫保存小瓶轉(zhuǎn)移至低溫儲(chǔ)存單元中且在處于或低于約-135°C的溫度下的液氮蒸氣中儲(chǔ)存，或另外可將小瓶?jī)?chǔ)存于液氮的液相中。舉例而言，合適的低溫儲(chǔ)存單元包括(但不限于)LN2冷凍器MVE1830(ChartIndustries)。流式細(xì)胞儀分析月經(jīng)干細(xì)胞的任何所收集樣本可藉由錐蟲(chóng)藍(lán)經(jīng)由染料排除測(cè)試總細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞生存力。亦可分析月經(jīng)干細(xì)胞的樣本的表現(xiàn)細(xì)胞標(biāo)記的細(xì)胞的存在?？山逵墒褂醚蛴?jì)、流式細(xì)胞儀或適合于獲得細(xì)胞計(jì)數(shù)的其它方式(諸如ViCelKBeckmanCoulter))的手動(dòng)計(jì)數(shù)或適合于對(duì)呈現(xiàn)于顯微鏡影像上的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的軟件來(lái)量化細(xì)胞的處理前樣本、處理后樣本及任何其它樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞生存力?？山逵闪魇郊?xì)胞儀分析處理前細(xì)胞。若紅血球存在，則可藉由將約36ml蒸餾水及約4ml的10溶胞溶液添加至50ml管中來(lái)制備IXNH4Cl溶胞溶液(StemKit)?？蓪⒚總€(gè)委托者約100μ1處理前樣本添加至兩個(gè)管中以進(jìn)行分析。一管用于⑶34+/生存力分析且第二管用于異純系對(duì)照(isocliniccontrol)。可將約20μ1CD45-FITC/CD34-PE添加至各管底部。應(yīng)將約20μ17-AAD生存力染料添加至管中?？墒够旌衔餃u旋且接著在免受光照下于約15°C至約30°C下培育至少20分鐘?？山又鴮⒓sIml的IXNH4Cl溶胞溶液添加至各管中且使其渦旋?？蓪⒒旌衔镌诩s15°C至約30°C下培育約20分鐘?？蓪⒓sIOOyLStem-Count熒光球添加至各管中且使其渦旋。接著應(yīng)將樣本在流式細(xì)胞儀上運(yùn)作以供分析?？山逵闪魇郊?xì)胞儀分析處理后細(xì)胞?？勺許temKit藉由將約36ml蒸餾水及4ml的10溶胞溶液添加至50ml管中來(lái)制備IXNH4Cl溶胞溶液。可將每個(gè)委托者約50μ1處理后樣本添加至兩個(gè)管中以進(jìn)行分析。一管用于⑶34+/生存力分析且第二管用于異純系對(duì)照。可將約10μL7-AAD生存力染料添加至各管中?？蓪⒓s10μ1⑶45-FITC/CD34-PE添加至第一管中?？蓪⒓s10μ1⑶45-FITC/CTRL-PE添加至第二管中?？墒够旌衔餃u旋且接著在免受光照下于約15°C至約30°C下培育至少20分鐘?？山又鴮⒓sIml的IXNH4Cl溶胞溶液添加至各管中且使其渦旋?？蓪⒒旌衔镌诩s15°C至約30°C下培育約20分鐘?？蓪⒓s100μLStem-Coimt熒光球添加至各管中且使其渦旋。接著應(yīng)將樣本在流式細(xì)胞儀上運(yùn)作以供分析。月經(jīng)干細(xì)胞的新鮮樣本及先前經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞的解凍樣本亦可藉由流式細(xì)胞儀分析以分析細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞生存力及其它細(xì)胞特征。新鮮樣本亦可于細(xì)胞溶解后根據(jù)以下方案來(lái)分析。經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞須根據(jù)本文所述的解凍過(guò)程來(lái)解凍。在細(xì)胞樣本須解凍的狀況下，細(xì)胞可需要在解凍后或在細(xì)胞培養(yǎng)后即刻進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析以評(píng)估某一細(xì)胞繼代?？蓪⒔?jīng)超低溫保存的樣本在37°C水浴中攪動(dòng)而不使細(xì)胞完全解凍?？蓪⒃摰燃?xì)胞轉(zhuǎn)移至約Iml經(jīng)冷卻的洗滌培養(yǎng)基中且藉由翻轉(zhuǎn)來(lái)混合?？蓪颖疽约s2000rpm離心約7分鐘?？梢瞥锨逡呵沂辜?xì)胞懸浮于約100μ1洗滌培養(yǎng)基(25%HSA，DNAse，肝素及HBSSw/Ca+與Mg+)中?？山又鴮⒃賾腋〉募?xì)胞在BloodBankSerofuge中離心約1分鐘?？蓛A析上清液且使細(xì)胞再懸浮于約1.2ml鞘流中且使其渦旋?？舍槍?duì)許多細(xì)胞表面標(biāo)記來(lái)分析鞘流中的細(xì)胞。舉例而言且并非限制性地，可將細(xì)胞于鞘流中的約100μ1樣本添加至含有下列試劑(各管中每一試劑10μ1或20μ1體積)的各管中且接著使管渦旋以將如表A中所述的試劑與樣本混合。表A流式細(xì)胞儀負(fù)荷示意表<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>在室溫(15_30°C)下培育20分鐘。免受光照。若運(yùn)作含有RBC的新鮮樣本，則添加500μ1溶胞溶液且在室溫下再培育10分鐘且免受光照。若運(yùn)作密度梯度液或經(jīng)解凍樣本，則不溶解。若不溶解樣本，則在培育20分鐘后用Iml洗滌培養(yǎng)基洗滌。離心1分鐘且接著傾析上清液。若溶解樣本，則將樣本離心1分鐘且傾析溶胞液。添加Iml洗滌培養(yǎng)基，渦旋，再次離心且接著再次傾析。將500μL鞘流添加至各管中，渦旋且在FC500流式細(xì)胞儀上運(yùn)作。在細(xì)胞標(biāo)記分析之前，可對(duì)新鮮細(xì)胞樣本或經(jīng)解凍樣本進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù)?？墒褂肒asumi-3對(duì)照細(xì)胞或其它對(duì)照細(xì)胞設(shè)置許多陽(yáng)性對(duì)照用于流式細(xì)胞儀分析。用于細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞生存力分析的材料包括(但不限于)流式細(xì)胞儀，Isoflow鞘流，CoulterClenz清潔劑，及包括(但不限于)CD45-FITC/CD34-PE、CD45_FITC/異純系對(duì)照-PE、7-AAD生存力染料、Stem-Count熒光球、10X濃縮氯化銨(NH4Cl)溶胞溶液及22%牛白蛋白溶液的試劑。參見(jiàn)StemKitCD34+HPC列舉套組包裝插頁(yè)-03版(PNIM2390)；BeckmanCoulterProductCorrectiveAction,CXP2.0&2.IPanelInterruption-3/10/06，PCA-M-D-1013；14.3StemLab，創(chuàng)建號(hào)200706260856,3.2.1版。用于流式細(xì)胞儀的材料亦包括(但不限于)=Isoflow鞘流；CoulterClenz清潔劑；及使用前約20_25°C的以下試劑CD117-PE、CD29-FITC、CD34-ECD、CD44-FITC、CD45-ECD、CD90-PC5、CD105-PE、CD166-PE、IgG-FITC,IgG-PE,IgG-ECD,IgGl_PC5、HLA-I-FITC、CD133-PE、HLA-IIECD、CD9-FITC、CD54-PE、CD10-PC5、CD59-FITC、CD63-PE、CD13-PC5、CD49e_FITC、CD81-PE、CD49f_PC5、CD44-FITC、CD38-PC5、CD29-FITC、CD105-PE、CD41-ECD、CD3-PC5、CD19-FITC、NAN0G-FITC、SSEA3-PE、SSEA4-PE、CD14-FITC、CD56-PE、7_AAD生存力染料、IOX濃縮氯化銨(NH4Cl)溶胞溶液、洗滌培養(yǎng)基(包含HBSS(具有Ca+與Mg+的漢克斯液)500ml、肝素5ml、人類血清白蛋白25%50ml、DNASE-I安瓿)、Kasumi_3細(xì)胞株-CD117+細(xì)胞、定時(shí)器及渦旋式混合器。在一替代實(shí)施例中，細(xì)胞可藉由類似于先前所述的流式細(xì)胞儀方法的替代流式細(xì)胞儀方法來(lái)分析，該等先前所述的流式細(xì)胞儀方法包括使用對(duì)照及制備月經(jīng)干細(xì)胞的新鮮樣本、處理前樣本、處理后樣本或經(jīng)解凍樣本的方法。細(xì)胞標(biāo)記亦可藉由免疫組織化學(xué)分析來(lái)評(píng)估。可在流式細(xì)胞儀的前分析各樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)。若樣本含有>3.5XIO6個(gè)細(xì)胞，則可評(píng)估全板。若樣本含有<3.5XIO6個(gè)細(xì)胞，則較少管可為必需的。若流動(dòng)測(cè)試需在需要解凍的冷凍樣本上進(jìn)行，則在37°C水浴中攪動(dòng)小瓶而不使細(xì)胞完全解凍?？筛鶕?jù)對(duì)于先前所討論的流式細(xì)胞儀分析法的方法來(lái)處理經(jīng)解凍樣本且視細(xì)胞數(shù)而定根據(jù)下表B將其添加至若干管中。表B流式細(xì)胞儀負(fù)荷示意表<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>可將各管在約15°C至約30°C下培育約20分鐘。免受光照。若運(yùn)作含有RBC的新鮮樣本，則添加500μ1溶胞溶液且在相同溫度下培育約10分鐘且免受光照。若運(yùn)作密度梯度液或經(jīng)解凍樣本，則不溶解。若不溶解樣本，則在培育約20分鐘后用Iml洗滌培養(yǎng)基洗滌且離心約1分鐘且接著傾析上清液。若溶解樣本，則將樣本離心約1分鐘且傾析溶胞液。添加約Iml洗滌培養(yǎng)基，渦旋，再次離心且接著再次傾析。添加約Iml鞘流，渦旋且在FC500或合適的替代流式細(xì)胞儀上運(yùn)作。細(xì)胞選擇可如本文所述針對(duì)月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者來(lái)選擇細(xì)胞。亦可使細(xì)胞經(jīng)受陰性選擇步驟以移除不當(dāng)細(xì)胞。在細(xì)胞選擇過(guò)程中，可使用無(wú)菌技術(shù)。細(xì)胞選擇可用于新鮮細(xì)胞、處理后細(xì)胞、先前經(jīng)超低溫保存的解凍細(xì)胞及培養(yǎng)中的細(xì)胞。細(xì)胞選擇可對(duì)少至2，500,000個(gè)細(xì)胞及多達(dá)10，000,000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行。亦可自包含少于2，500,000個(gè)細(xì)胞的樣本或包含多于10，000，000個(gè)細(xì)胞的樣本選擇細(xì)胞。用于細(xì)胞選擇的材料包括(但不限于):DNase；Pulmozyme(Genentech.Inc.)_1安瓿；有待陰性或陽(yáng)性選擇的任何抗細(xì)胞表面標(biāo)記，例如抗⑶117抗體(SantaCruz104D2或BDBioscience的YB5.58)、山羊抗小鼠IgG微珠；及磁場(chǎng)。可在約4°C下將包含獲自月經(jīng)干細(xì)胞的新鮮樣本、處理后樣本、經(jīng)解凍樣本或經(jīng)培養(yǎng)樣本的月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液以約300g離心約10分鐘?？稍诓粩_動(dòng)細(xì)胞離心塊的情況下移除上清液?？梢约s100μ1工作緩沖液及約20μ1抗細(xì)胞表面抗體使小球再懸浮。在一實(shí)施例中，抗細(xì)胞表面抗體為抗CD117抗體。可將溶液中的細(xì)胞在冰上培育約20分鐘至約25分鐘。培育后，可將約2ml工作緩沖液添加至細(xì)胞中且輕微混合?？稍诩s4°C下將混合物以約300g離心約10分鐘。離心后，可在不擾動(dòng)離心塊的情況下抽吸上清液?？墒闺x心塊再懸浮于約80μ1工作緩沖液中?？蓪⒓s20μ1山羊抗小鼠IgG添加至細(xì)胞懸浮液中且輕微混合。可將混合物在冰上培育約30分鐘。培育后，可藉由添加約2ml工作緩沖液且接著將溶液混合來(lái)洗滌細(xì)胞。可在約4°C下將細(xì)胞以約300g離心約10分鐘。管柱可用于使經(jīng)選擇細(xì)胞與未經(jīng)選擇細(xì)胞分離。管柱可藉由將其于約500μ1工作緩沖液中潤(rùn)濕來(lái)制備。離心后，可在不擾動(dòng)離心塊的情況下抽吸上清液?？墒闺x心塊再懸浮于約500μ1工作緩沖液中。為避免細(xì)胞黏附，可將額外DNase添加至細(xì)胞中。可使用移液管將細(xì)胞懸浮液添加至管柱中。經(jīng)抗體標(biāo)記的細(xì)胞(陽(yáng)性溶離份)應(yīng)附著于經(jīng)受由MACS分離器提供的磁場(chǎng)的管柱。未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞(陰性溶離份)應(yīng)流經(jīng)管柱且應(yīng)加以收集。細(xì)胞懸浮液流經(jīng)管柱且以陰性溶離份的形式收集后，可使用每次洗滌500μ1工作緩沖液將管柱洗滌至少3次。各洗滌液可在下次洗滌前完全流經(jīng)管柱。各洗滌液可與陰性溶離份一起收集?？梢瞥s100μ1陰性溶離份以供分析?？墒褂醚蛴?jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)且使用錐蟲(chóng)藍(lán)或另一方法進(jìn)行生存力分析。表型分析可使用如先前所討論的流式細(xì)胞儀或使用另一流式細(xì)胞儀方法來(lái)進(jìn)行。陰性溶離份可準(zhǔn)備超低溫保存或?qū)⑵渲糜谂囵B(yǎng)物中以供進(jìn)一步細(xì)胞生長(zhǎng)及擴(kuò)增及稍后處理。收集陰性溶離份且洗滌管柱后，可將另一管置于管柱下以收集陽(yáng)性溶離份?？蓪⒓sIml工作緩沖液添加至管柱中且自該管柱移除磁場(chǎng)。應(yīng)收集工作緩沖液及陽(yáng)性溶離份。柱塞可用于自陽(yáng)性溶離份的管柱移除盡可能多的經(jīng)標(biāo)記細(xì)胞?？梢瞥s100μ1陽(yáng)性溶離份以供分析，該分析包括(但不限于)使用錐蟲(chóng)藍(lán)或流式細(xì)胞儀的細(xì)胞計(jì)數(shù)及生存力分析。可將陽(yáng)性溶離份超低溫保存，培養(yǎng)或準(zhǔn)備供治療或藥妝用。選擇表現(xiàn)MSC細(xì)胞標(biāo)記的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟可根據(jù)如圖3至圖6、圖8至圖10、圖13至圖19、圖21至圖24及圖26至圖28所示的本發(fā)明實(shí)施例中的任一者來(lái)進(jìn)行。詳言之，選擇可(a)在超低溫保存前，(b)在細(xì)胞培養(yǎng)的至少一個(gè)步驟之前及/或之后，或(c)在解凍經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞之后發(fā)生。選擇表現(xiàn)某些細(xì)胞標(biāo)記的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟提供表現(xiàn)所選細(xì)胞標(biāo)記的富集細(xì)胞群，其可根據(jù)本發(fā)明的方法用于進(jìn)一步細(xì)胞培養(yǎng)、超低溫保存或治療或藥妝用途。在一實(shí)施例中，自細(xì)胞群選擇表現(xiàn)⑶117的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含以抗人⑶117抗體標(biāo)記月經(jīng)干細(xì)胞且接著以能與抗人⑶117抗體結(jié)合的磁性標(biāo)記抗體標(biāo)記⑶117干細(xì)胞-抗人⑶117抗體復(fù)合物。另外，該方法包含以抗人⑶117抗體標(biāo)記表現(xiàn)⑶117的任何細(xì)胞且接著以能與抗人⑶117抗體結(jié)合的磁性標(biāo)記抗體標(biāo)記⑶117細(xì)胞-抗人⑶117抗體復(fù)合物。選擇表現(xiàn)CD117的月經(jīng)干細(xì)胞的方法可包括選擇根據(jù)本發(fā)明的方法中的任一者所收集的表現(xiàn)⑶117的任何細(xì)胞。分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含將包含⑶117細(xì)胞、抗人⑶117抗體及磁性標(biāo)記抗體的復(fù)合物暴露于磁場(chǎng)以使磁性標(biāo)記抗體及復(fù)合物的其余部分吸引至管柱且經(jīng)管柱洗滌所有其它CD117陰性細(xì)胞以供分析。在選擇表現(xiàn)⑶117的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟中，可將細(xì)胞與工作緩沖液(具有Dnase的MACS分離電泳緩沖液，Miltenyi)的細(xì)胞懸浮液維持于低溫下。其它磁性分離套組可適用(R&DSystems)。若如本發(fā)明的實(shí)施例中所證實(shí)，選擇表現(xiàn)⑶117的子宮內(nèi)膜/月經(jīng)細(xì)胞的步驟(a)在超低溫保存前，(b)在細(xì)胞培養(yǎng)的至少一個(gè)步驟之前及/或之后，或(c)在解凍經(jīng)超低溫保存之細(xì)胞之后進(jìn)行，則細(xì)胞懸浮液可包含懸浮于洗滌溶液中的細(xì)胞群?？蓪⒓?xì)胞懸浮液以約300g離心約10分鐘?？墒闺x心塊懸浮于具有抗人⑶117抗體的工作緩沖液中。舉例而言，該工作緩沖液可包含(例如)處于約PH7.2的？83、牛血清白蛋白、EDTA及約0.09%迭氮化合物(或合適溶液)(BDBiosciences)?？墒闺x心塊懸浮于(例如)約100μ1工作緩沖液及約5μg的對(duì)人類⑶117有親和力的經(jīng)純化抗體中。抗體可為單株抗體或多株抗體?？贵w可為經(jīng)純化的IgG或能結(jié)合人類CD117的其它抗體。抗體可為小鼠抗CD117抗體。舉例而言，抗體可為單株小鼠抗人CD117抗體(作為104D2購(gòu)自SantaCruz或作為YB5.58購(gòu)自BDBiosciences)。將包含細(xì)胞、工作緩沖液及抗⑶117抗體的溶液培育歷時(shí)一培育時(shí)段。舉例而言，培育時(shí)段可包含于冰上約20分鐘至約25分鐘之間。或者，若溫度為至少約2°C至約8°C，則培育時(shí)段可縮短至小于約20分鐘，或若溫度為至少室溫，則培育時(shí)段可縮短至約5分鐘至約10分鐘。培育時(shí)段后，可用工作緩沖液洗滌具有細(xì)胞的溶液以移除未結(jié)合的抗體且接著離心。舉例而言，離心可以約300g進(jìn)行約10分鐘。離心后，抽吸上清液且可儲(chǔ)存以供分析，且使離心塊懸浮于工作緩沖液中。舉例而言，工作緩沖液的體積可為約80μ1。將附著有微珠且對(duì)抗人⑶117抗體具有親和力的第二批抗體添加至用于懸浮離心塊的工作緩沖液中。微珠可包含(例如)氧化鐵及多醣。微珠系生物可降解的。微珠可經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得。舉例而言，第二批抗體對(duì)對(duì)人類⑶117具有親和力的抗體(諸如山羊抗小鼠IgG抗體)有特異性?？贵w可為單株抗體或多株抗體?？贵w可能夠與小鼠抗體的輕鏈及/或重鏈接合?？贵w可為(例如)經(jīng)MiltenyiBiotec以產(chǎn)品130-048-401購(gòu)得的山羊抗小鼠IgG微珠結(jié)合物。上述山羊抗小鼠IgG的兩(2)毫升小瓶可用于總共約1.0Χ109個(gè)未分離細(xì)胞。將細(xì)胞懸浮液培育歷時(shí)第二培育時(shí)段。舉例而言，培育時(shí)段可處于約30分鐘至約35分鐘的范圍內(nèi)。或者，當(dāng)培育在約2°C至約8°C下進(jìn)行時(shí)培育時(shí)段可小于約30分鐘，或當(dāng)培育在約室溫下進(jìn)行時(shí)培育時(shí)段可為約5分鐘至約10分鐘。培育時(shí)段完成后，用工作緩沖液(諸如約2ml工作緩沖液)洗滌細(xì)胞，且接著將細(xì)胞離心。舉例而言，離心可以約300g進(jìn)行約10分鐘?？沙槲锨逡呵覍⑵鋬?chǔ)存以供分析，且使含有細(xì)胞的離心塊懸浮于工作緩沖液(諸如約500μ1工作緩沖液)中。細(xì)胞分離可使用分離⑶117干細(xì)胞的MS管柱自工作緩沖液中的細(xì)胞懸浮液分離⑶117干細(xì)胞。舉例而言，可使用MS管柱(MiltenyiBiotec)或其它合適的管柱?；蛘?，可使用分離細(xì)胞的其它合適方法。經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的包含單元式多機(jī)座MS管柱及微珠的MiniMACS套組可用于CD117細(xì)胞選擇。MS管柱可藉由將其用工作緩沖液沖洗而制備。舉例而言，用于沖洗管柱的工作緩沖液的體積可為約500μ1。將管柱置于經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的MACS分離器或提供磁場(chǎng)的合適分離器的磁場(chǎng)中。用移液管或能轉(zhuǎn)移一定體積液體的其它裝置將工作緩沖液中的細(xì)胞懸浮液添加至管柱中。與附著至微珠的抗體結(jié)合的經(jīng)抗人⑶117抗體標(biāo)記的⑶117細(xì)胞因MACS分離器的磁場(chǎng)而固持于管柱中。任何未經(jīng)標(biāo)記細(xì)胞連同工作緩沖液一起應(yīng)流經(jīng)管柱且可收集于無(wú)菌管中以用于細(xì)胞表型及細(xì)胞計(jì)數(shù)?？蓪⒘鹘?jīng)管柱的未經(jīng)標(biāo)記細(xì)胞鑒別為陰性溶離份?？稍谔砑蛹?xì)胞懸浮液后用工作緩沖液洗滌管柱。舉例而言，可將管柱洗滌至少3次或任何次數(shù)，使所有或大體上所有未經(jīng)標(biāo)記細(xì)胞穿過(guò)管柱?？墒占瘉?lái)自洗滌步驟的流出物以用于細(xì)胞表型及計(jì)數(shù)。亦可將該流出物鑒別為陰性溶離份。可在洗滌管柱后自該管柱收集經(jīng)標(biāo)記的⑶117干細(xì)胞。藉由將無(wú)菌管置于管柱下且自磁場(chǎng)移除管柱來(lái)收集經(jīng)標(biāo)記的⑶117細(xì)胞。一旦自磁場(chǎng)移除管柱，經(jīng)標(biāo)記的⑶117細(xì)胞即穿過(guò)管柱進(jìn)入無(wú)菌管?？山逵蓪⒐ぷ骶彌_液添加至管柱中使其流經(jīng)管柱而洗出管柱中的殘余經(jīng)標(biāo)記的CD117干細(xì)胞，且視情況藉由柱塞沖提管柱以釋放細(xì)胞?？蓪⑺占慕?jīng)標(biāo)記⑶117細(xì)胞鑒別為陽(yáng)性溶離份。為獲得更純化的經(jīng)標(biāo)記⑶117細(xì)胞群，可在先前所揭示的洗滌程序之后視情況使陽(yáng)性溶離份流經(jīng)管柱至少一次以上?？蓪㈥?yáng)性溶離份以約300g離心約10分鐘且抽吸上清液?？墒闺x心塊懸浮于約5ml工作緩沖液中。用血球計(jì)分析陽(yáng)性溶離份及陰性溶離份以獲得活細(xì)胞的總計(jì)數(shù)。藉由流式細(xì)胞儀分析陰性溶離份以供表型分析?？梢暻闆r藉由流式細(xì)胞儀分析陽(yáng)性溶離份以供表型分析。含有表現(xiàn)MSC細(xì)胞標(biāo)記(諸如⑶117或其它細(xì)胞標(biāo)記)的干細(xì)胞的陽(yáng)性溶離份可準(zhǔn)備用于根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)超低溫保存且在本文中進(jìn)一步詳述。將約Iml人血清白蛋白、約3mlDPBS及約ImlDMSO添加至約5ml陽(yáng)性溶離份中。或者，可在將細(xì)胞準(zhǔn)備用于超低溫保存的步驟中使用其它培養(yǎng)基，諸如完全培養(yǎng)基、牛血清白蛋白、胎小牛血清、胎牛血清、蛋白血漿溶離份或自體血清。將含有MSC的溶液混合且在冰上冷卻約10分鐘。添加約ImlDMSO作為超低溫保存劑。或者，約6%HES羥乙基淀粉與約5%DMSO的約Iml混合物可用作超低溫保存劑。將所得溶液等分至冷凍小瓶中?；蛘?，可將所得溶液等分至適合于超低溫保存的任何容器(諸如超低溫保存袋)中。接著根據(jù)如本文中進(jìn)一步詳述的本發(fā)明的控速冷凍器程序?qū)⒗鋬鲂∑砍蜏乇４嬗诳厮倮鋬銎?Cryomed)中。一旦含有MSC的溶液達(dá)到約-90°C的目標(biāo)溫度，即將冷凍小瓶轉(zhuǎn)移至長(zhǎng)期儲(chǔ)存冷凍器中且儲(chǔ)存于約-135°C或更低溫度下?；蛘?，可將冷凍小瓶或其它合適的超低溫保存容器置于經(jīng)監(jiān)控的急降冷凍器中且冷凍至約-80°C且接著轉(zhuǎn)移至長(zhǎng)期儲(chǔ)存冷凍器中處于約-135°C或更低溫度下的液氮蒸氣相中?；蛘?，陽(yáng)性溶離份可用于根據(jù)本發(fā)明的方法接種培養(yǎng)燒瓶且培養(yǎng)細(xì)胞?？山又约?xì)胞培養(yǎng)物選擇MSC且根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行超低溫保存。根據(jù)本發(fā)明所獲得的細(xì)胞可在使用CD117選擇的本發(fā)明實(shí)施的任何時(shí)刻藉由其它合適制程及方法選擇或分離。舉例而言，并非使用本文所述的CD117選擇制程及方法，超低溫保存前、解凍后或自細(xì)胞培養(yǎng)物獲得的本發(fā)明細(xì)胞可藉由血清剝奪使用于培養(yǎng)物中的血清剝奪培養(yǎng)基在合適的溫度及條件下濃縮約2周至約4周或其它合適時(shí)段。血清剝奪培養(yǎng)基可在有或無(wú)ES-FBS的情況下使用。準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)可將包含根據(jù)本發(fā)明的方法所收集的月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液進(jìn)一步培養(yǎng)以為進(jìn)一步選擇步驟、超低溫保存或治療或藥妝用途作準(zhǔn)備。包含月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液在根據(jù)本發(fā)明濃縮后或在超低溫保存及解凍后可準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)。適用時(shí)，解凍步驟包含對(duì)于含有約5ml待解凍的超低溫保存細(xì)胞的各小瓶制備以Histopaque(Sigma-Aldrich)購(gòu)得的密度梯度培養(yǎng)基的約15ml等分試樣且接著對(duì)于含有約5ml待解凍的超低溫保存細(xì)胞的各小瓶制備張氏完全培養(yǎng)基(Chang'scompletemedia)、DMEM完全培養(yǎng)基或IMDM完全培養(yǎng)基或其它合適培養(yǎng)基的約25ml等分試樣。如本文所述，來(lái)自處理后、密度梯度及細(xì)胞選擇的新鮮細(xì)胞樣本亦可接種于培養(yǎng)物中。張氏完全培養(yǎng)基包含約325ml作為產(chǎn)品12571-063的MEMa培養(yǎng)基(Gibco)，添加20%張氏培養(yǎng)基以包括約90ml張氏B(基礎(chǔ))C110(18%v/v)(IrvineScientific)、約IOml來(lái)自補(bǔ)充C106的張氏培養(yǎng)基C(2%v/v)(IrvineScientific)、約5ml盤尼西林/鏈霉素(以于0.85%生理食鹽水中的10，000單位/毫升盤尼西林G鈉及IO1OOOyg/ml硫酸鏈霉素制備的液體)(Gibco-15140-122)、約5mlL-麩胺酰胺200mM(100X)(Gibco-25030-081)及約75mlES-胎牛血清(15%v/v)(Gibco-10439-024)張氏培養(yǎng)基可以完全培養(yǎng)基(IrvineScientific)形式購(gòu)得?？墒褂冒?但不限于)完全培養(yǎng)基、DNAse(Genentech,Inc.50242-100-40號(hào))、TrypLEExpress(Gibco，12605-010號(hào))及DPBS(Mediatech，MT21_031CV)的材料使經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞解凍。須自于液氮蒸氣中的儲(chǔ)存中移除經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞且將其置于37°C水浴中?？蓪⒓?xì)胞在水浴中攪動(dòng)且不完全解凍。可將部分解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至具有DNAse的經(jīng)冷卻張氏完全培養(yǎng)基中且藉由翻轉(zhuǎn)來(lái)混合?？梢悦縄OOml張氏培養(yǎng)基約10滴來(lái)添加DNAse。可將各約5ml的細(xì)胞制劑添加至約25ml經(jīng)冷卻張氏培養(yǎng)基中?？蓪腋∫阂约s120g離心約5分鐘?？沙槲锨逡呵沂辜?xì)胞再懸浮于適當(dāng)培養(yǎng)基中以為細(xì)胞培養(yǎng)作準(zhǔn)備?；蛘咔胰衾鋬霾⒎潜匦?，諸如當(dāng)在無(wú)超低溫保存步驟的情況下培養(yǎng)包含月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液時(shí)，可藉由將約5ml等分試樣置于含有約Img經(jīng)Pulmozyme購(gòu)得的DNAse的經(jīng)冷卻張氏完全培養(yǎng)基的約25ml等分試樣中來(lái)稀釋細(xì)胞懸浮液?？山逵煞D(zhuǎn)混合經(jīng)稀釋的細(xì)胞懸浮液。將懸浮液以約840g離心約7分鐘。抽吸上清液同時(shí)不擾動(dòng)離心塊。使離心塊達(dá)到約30ml張氏完全培養(yǎng)基的總體積。移除少量細(xì)胞懸浮液以供分析，該分析包括用血球計(jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及使用錐蟲(chóng)藍(lán)或其它合適的生存力測(cè)試方法進(jìn)行生存力測(cè)試。將約30ml懸浮液鋪于以Hist0Paque(Sigma-Aldrich)購(gòu)得的密度梯度溶液或其它合適的培養(yǎng)基上，且在無(wú)制動(dòng)器的情況下以約420g離心約30分鐘。在不破壞白血球?qū)拥那闆r下自離心機(jī)移除管。抽吸上清液且收集白血球?qū)?。用張氏完全培養(yǎng)基使白血球?qū)舆_(dá)到約20ml且以約840g洗滌約7分鐘。抽吸上清液，且使離心塊懸浮于高達(dá)約IOml的張氏完全培養(yǎng)基中，但亦可高達(dá)約20ml或約30ml或甚至小于約10ml。移除懸浮液的等分試樣(諸如約100μ1)以進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及生存力分析。經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞的培養(yǎng)可以約48小時(shí)繼代時(shí)間將細(xì)胞以約2000個(gè)細(xì)胞/平方公分涂布。若使用較高濃度的細(xì)胞，則繼代可以約24小時(shí)時(shí)間間隔發(fā)生。經(jīng)非組織培養(yǎng)物處理的Τ75燒瓶可用于將約150，000個(gè)細(xì)胞涂于約15ml完全培養(yǎng)基中。可在5%CO2恒溫箱中培育經(jīng)涂布的細(xì)胞直至亞融合(subconfluent)約80%為止?？墒辜?xì)胞經(jīng)受多次繼代。當(dāng)細(xì)胞即將自燒瓶分離時(shí)，可自該燒瓶抽吸培養(yǎng)基。可接著用約5ml無(wú)鈣或鎂的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)沖洗燒瓶。將所附著的細(xì)胞洗滌一次后可接著移除PBS。將約2ml胰蛋白酶樣酶或其它合適的酶溶液添加至T75燒瓶中(每T25燒瓶lml)，在約37°C下預(yù)加溫?？蓴噭?dòng)燒瓶以用酶樣溶液涂覆細(xì)胞?？稍诩s37°C下于恒溫箱中將具有酶樣溶液的燒瓶培育約5分鐘。培育后，可將燒瓶在固體表面上輕扣以驅(qū)逐細(xì)胞?？捎眉s2ml完全培養(yǎng)基稀釋燒瓶的內(nèi)含物以沖洗且終止反應(yīng)?？蓪⒓?xì)胞用約2ml至約5mlDPBS洗滌且轉(zhuǎn)移至50ml離心管中以供洗滌。可將該管以約120g離心約5分鐘。離心后可摒棄上清液，且可使所收集的細(xì)胞懸浮于張氏完全培養(yǎng)基中。約7ml細(xì)胞懸浮液可用于在T25燒瓶中培養(yǎng)且約15ml用于在T75燒瓶中培養(yǎng)。用于細(xì)胞培養(yǎng)的張氏完全培養(yǎng)基包含約325mlMEMα培養(yǎng)基(Gibco12571-063號(hào))、約90ml張氏B(基礎(chǔ)培養(yǎng)基)(18%v/v)(IrvineScientific,Cl10)、約IOml張氏C(2%v/v)(IrvineScientific，補(bǔ)充C106)、約5ml盤尼西林/鏈霉素(10,000單位/毫升盤尼西林G鈉與10，000μg/ml硫酸鏈霉素(Gibco15140-122號(hào)))、約5mlL-麩胺酰胺200mM(100X)(Gibco,25030-081號(hào))及約75mlES-胎牛血清(15%v/v)(Gibco10439-024號(hào))。解凍及培養(yǎng)方法的替代實(shí)施例自液氮蒸氣移除細(xì)胞后，在37°C水浴中攪動(dòng)冷凍小瓶而不使細(xì)胞完全解凍?？蓪⒉糠纸鈨龅募?xì)胞轉(zhuǎn)移至具有DNAse的經(jīng)冷卻張氏培養(yǎng)基中且藉由翻轉(zhuǎn)輕微混合。對(duì)于各5ml的細(xì)胞懸浮液而言，可使用約25ml的經(jīng)冷卻張氏培養(yǎng)基?？梢訧OOml經(jīng)冷卻張氏培養(yǎng)基約10滴將DNAse添加至張氏培養(yǎng)基中?？蓪⒓?xì)胞懸浮液以約120g離心約5分鐘?？沙槲锨逡呵铱蓪⒓?xì)胞置于先前所討論的抗生素培養(yǎng)基中。在約37°C下培育至少約12小時(shí)后，可使用張氏完全培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞?？山又鴮⒔?jīng)洗滌的細(xì)胞接種用于細(xì)胞培養(yǎng)。在一實(shí)施例中，可將經(jīng)解凍的細(xì)胞以約40，000個(gè)細(xì)胞/平方公分或1，000，000個(gè)細(xì)胞/T-25涂布?？梢?8小時(shí)繼代時(shí)間將細(xì)胞以2000個(gè)細(xì)胞/平方公分涂布。若涂布更多細(xì)胞，則繼代可在約24小時(shí)時(shí)間間隔內(nèi)發(fā)生。經(jīng)非組織培養(yǎng)物處理的T75燒瓶可用于將約150，000個(gè)細(xì)胞涂于約15ml完全培養(yǎng)基中?？稍?%CO2恒溫箱中培育細(xì)胞直至亞融合至80%為止。當(dāng)細(xì)胞即將自燒瓶分離時(shí)，可自該燒瓶抽吸培養(yǎng)基?？山又眉s5ml無(wú)鈣或鎂的磷酸鹽緩沖溶液沖洗燒瓶。在已將所附著的細(xì)胞洗滌至少一次后可移除PBS。可將約2ml胰蛋白酶樣酶添加至T75燒瓶中(對(duì)于T25燒瓶為1ml)，在約37°C下預(yù)加溫，且可攪動(dòng)燒瓶以用酶涂覆細(xì)胞?？稍诩s37°C下于恒溫箱中將具有酶的燒瓶培育約5分鐘。培育后，可將燒瓶在固體表面上緩緩輕扣以驅(qū)逐細(xì)胞?？捎眉s2ml完全培養(yǎng)基稀釋燒瓶的內(nèi)含物以沖洗且終止反應(yīng)。用約2ml至約5mlDPBS洗滌細(xì)胞且將再懸浮的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至50ml離心管中以供洗滌?？蓪⒃摴芤约s120g離心約5分鐘。離心后可摒棄上清液，且可使所收集的細(xì)胞懸浮于張氏完全培養(yǎng)基中且用于下一次繼代。約7ml可用于T25燒瓶且約15ml用于T75燒瓶。其它細(xì)胞培養(yǎng)方法可將懸浮液中的細(xì)胞以約40，000個(gè)細(xì)胞/平方公分接種至未經(jīng)處理的培養(yǎng)燒瓶中的張氏完全培養(yǎng)基、DMEM完全培養(yǎng)基(具有高葡萄糖或低葡萄糖)或其它合適培養(yǎng)基中?？稍诩s37°C的溫度下在約5%CO2中于CO2恒溫箱(ThermoElectronCorp.或BioscienceTechnologies)中或在任何其它合適的恒溫箱系統(tǒng)中培育燒瓶。監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物的濁度及PH值變化。若pH值偏高，則應(yīng)更換約50%培養(yǎng)基?？蓪孔畛跖嘤s7天或直至培養(yǎng)基顯著處于如由培養(yǎng)基中的酚紅指示劑的顏色所指示的范圍外為止。若約7天后pH值保持穩(wěn)定，則必要時(shí)將培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基(本文中亦稱作"未用培養(yǎng)基")更換。更換幾乎所有培養(yǎng)基。第7天更換培養(yǎng)基后，至第8天細(xì)胞可開(kāi)始融合至第21天止。一旦達(dá)到約70-80%融合，即可次培養(yǎng)細(xì)胞。使用諸如TrypLEExpress(Gibco)的胰蛋白酶樣酶或任何其它合適的酶次培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物以提供足夠細(xì)胞來(lái)根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行細(xì)胞選擇。舉例而言，細(xì)胞選擇可用約10，000，000個(gè)細(xì)胞來(lái)進(jìn)行。細(xì)胞選擇亦可用多于或少于約10，000，000個(gè)細(xì)胞來(lái)進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明，可在合適時(shí)間自細(xì)胞培養(yǎng)物收集細(xì)胞。為收集細(xì)胞，附著細(xì)胞應(yīng)自燒瓶分離。為使細(xì)胞自燒瓶分離，經(jīng)由自動(dòng)移液管抽吸培養(yǎng)基。接著用約5ml無(wú)鈣或鎂的磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)沖洗燒瓶。接著自己洗滌至少一次的附著有細(xì)胞的燒瓶移除PBS。應(yīng)將較佳在約37°C下預(yù)加溫的約Iml胰蛋白酶樣重組酶(諸如TrypLEExpress(Gibco))或任何其它合適的酶添加至燒瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)物中。攪動(dòng)燒瓶以用酶涂覆細(xì)胞。應(yīng)在約37°C下將具有酶的燒瓶培育約5分鐘。培育后，應(yīng)將燒瓶在固體表面上緩緩輕扣以驅(qū)逐細(xì)胞。應(yīng)用約2ml張氏完全培養(yǎng)基稀釋燒瓶且將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中以用張氏完全培養(yǎng)基、DMEM完全培養(yǎng)基(具有高葡萄糖或低葡萄糖)或其它合適的培養(yǎng)基洗滌。應(yīng)將該管以約IOOg離心約7分鐘。抽吸上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于合適體積的張氏完全培養(yǎng)基、DMEM完全培養(yǎng)基(具有高葡萄糖或低葡萄糖)或其它合適培養(yǎng)基中。此時(shí)，可根據(jù)本發(fā)明的細(xì)胞選擇方法自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇細(xì)胞。一旦選擇，即可將細(xì)胞涂于皮氏培養(yǎng)皿(Petridish)上，接種至培養(yǎng)燒瓶中，或根據(jù)本發(fā)明超低溫保存?？墒褂脧埵贤耆囵B(yǎng)基(約15%FBS)將細(xì)胞涂于9cm2皮氏培養(yǎng)皿中?；蛘撸蓪⒓?xì)胞置于具有通風(fēng)蓋的培養(yǎng)燒瓶中。若培養(yǎng)基的PH值變高，則可用張氏完全培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞。適當(dāng)生長(zhǎng)后，必要時(shí)，可使用胰蛋白酶樣酶使細(xì)胞自皮氏培養(yǎng)皿或培養(yǎng)燒瓶分離且接著使用張氏完全培養(yǎng)基將其置于未經(jīng)處理的培養(yǎng)燒瓶中。適當(dāng)生長(zhǎng)后，可使用諸如TrypLEExpress(Gibco)的胰蛋白酶樣酶使細(xì)胞分離且接著接種至新鮮未經(jīng)處理的培養(yǎng)燒瓶中?？芍貜?fù)此過(guò)程以維持所要細(xì)胞生長(zhǎng)。若培養(yǎng)基的PH值偏高，則可用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞，或可將約50%培養(yǎng)基或其它合適的量用新鮮培養(yǎng)基置換。此時(shí)，可根據(jù)本發(fā)明的細(xì)胞選擇方法自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇細(xì)胞。可將所選細(xì)胞涂于皮氏培養(yǎng)皿上，接種至培養(yǎng)燒瓶中，或根據(jù)本發(fā)明超低溫保存。在本發(fā)明的實(shí)施中遵循由美國(guó)食品及藥品管理局(UnitedStatesFoodandDrugAdministration)在美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)(CodeofFederalRegulations)中所確立的現(xiàn)行藥品優(yōu)良制造規(guī)范(currentGoodManufacturingPractices,cGMP)標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行組織優(yōu)良操作規(guī)范(currentGoodTissuePractices,cGTP)。本發(fā)明的制程、方法及系統(tǒng)的上述步驟可替代地如圖2至圖28中所說(shuō)明來(lái)體現(xiàn)。M2-01細(xì)胞在一實(shí)例中，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施收集月經(jīng)干細(xì)胞。詳言之，在月經(jīng)周期期間由供體收集約0.4ml本文中命名為且稱作M2-01的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。將約0.4ml月經(jīng)流樣本自收集裝置傾入收集管中的約IOml收集培養(yǎng)基中。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(Mediatech)，約100單位/毫升的盤尼西林，約100微克/毫升的鏈霉素，及處于每毫升DPBS約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。月經(jīng)流樣本于收集后約24小時(shí)內(nèi)到達(dá)處理設(shè)施。在到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)包含于具有抗生素的收集培養(yǎng)基中的約10.Oml月經(jīng)流樣本的收集容器消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°C的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約Iml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果為對(duì)好氧及厭氧微生物呈陰性。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2mlDPBS中。作為處理后樣本收集約Iml細(xì)胞懸浮液且藉由細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力來(lái)分析。使用血球計(jì)所進(jìn)行的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示處理后樣本中收集約7，500,000個(gè)細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的方法使用FC500流式細(xì)胞儀進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析以鑒別存在于處理后樣本中的月經(jīng)干細(xì)胞上的某些細(xì)胞表面標(biāo)記。如圖29a至圖29j所示，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0.4%的濃度收集⑶117+細(xì)胞。另夕卜，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約58%的濃度收集CD45陰性細(xì)胞。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約17%的濃度收集CD44+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約3%的濃度收集CD166+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約8.0%的濃度收集CD105+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約6.8%的濃度收集CD90+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約0.1%的濃度收集⑶29+細(xì)胞，且結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0.的濃度收集⑶34+細(xì)胞。亦使用7AAD進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析以評(píng)估細(xì)胞生存力。結(jié)果指示月經(jīng)干細(xì)胞有約95%存活。根據(jù)本發(fā)明的方法培養(yǎng)剩余細(xì)胞懸浮液。詳言之，將一部分細(xì)胞懸浮液鋪于15ml的1.083g/ml密度梯度溶液(Histopaque，Sigma-Aldrich)上。在無(wú)制動(dòng)器的情況下將細(xì)胞懸浮液以約420g離心約30分鐘。抽吸上清液，且將白血球?qū)右瞥抑糜诠苤小埵贤耆囵B(yǎng)基添加至白血球?qū)又幸允箍傮w積達(dá)到約30ml。將溶液以約840g洗滌兩次歷時(shí)約7分鐘?；诘诙蜗礈於x心后，移除上清液留下離心塊，且將約15ml張氏完全培養(yǎng)基添加至管中以使離心塊懸浮。移除約100μL懸浮液以用血球計(jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)分析且使用錐蟲(chóng)藍(lán)進(jìn)行生存力分析。第1天將約1，000,000個(gè)細(xì)胞以約40，000個(gè)細(xì)胞/平方公分接種至Τ25未經(jīng)處理培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。在約37°C溫度下，于約5%CO2中培育燒瓶。第8天，細(xì)胞經(jīng)歷第1代且更換培養(yǎng)基。如本揭示案中所用，繼代一般涉及藉由用自動(dòng)移液管抽吸培養(yǎng)基而使細(xì)胞自燒瓶分離。用約5ml無(wú)鈣或鎂的磷酸鹽緩沖生理食鹽水(PBS)沖洗燒瓶。接著在已將附著有細(xì)胞的燒瓶洗滌一次后，移除PBS。將約Iml于約37°C下預(yù)加溫的胰蛋白酶樣酶(TrypLEExpress-Gibco)添加至燒瓶中且攪動(dòng)燒瓶以用酶涂覆細(xì)胞。在約37°C下于恒溫箱中將具有酶的燒瓶培育約5分鐘。培育后，將燒瓶在固體表面上緩緩輕扣以驅(qū)逐細(xì)胞。用約2ml完全培養(yǎng)基稀釋燒瓶的內(nèi)含物，且將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中以供洗滌。將該管以約IOOg離心約7分鐘。離心后摒棄上清液，且使所收集的細(xì)胞懸浮于張氏完全培養(yǎng)基中且置于至少一個(gè)新的T25或T75未經(jīng)處理的細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶中。細(xì)胞培養(yǎng)物的其它繼代在第10天、第14天、第19天、第21天、第24天、第26天、第29天、第32天及第35天發(fā)生。第8天，收集約165，000個(gè)細(xì)胞且根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)方法將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第10天，收集約270，000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第14天，收集約840，000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第19天，收集約2，200,000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第21天，收集約5，000,000個(gè)細(xì)胞，其中約3，500，000個(gè)細(xì)胞系用于細(xì)胞表型。第24天，收集約3，000,000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第26天，收集約4，900,000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第29天，收集約14，800,000個(gè)細(xì)胞且將其接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中，其中約11，100，000個(gè)細(xì)胞系用于陽(yáng)性選擇表現(xiàn)⑶117的細(xì)胞且約3，500，000個(gè)細(xì)胞系用于表型分析，且將約200，000個(gè)細(xì)胞接種至培養(yǎng)物中。第32天，收集約1，300,000個(gè)，其中約1，000,000個(gè)細(xì)胞系用于流動(dòng)表型且將約300，000個(gè)細(xì)胞接種于未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。第29天且如先前所討論，根據(jù)如本文所述的本發(fā)明的選擇方法對(duì)自培養(yǎng)物收集的細(xì)胞進(jìn)行CD117選擇。CD117干細(xì)胞選擇前，移除各細(xì)胞培養(yǎng)物的等分試樣以供分析，結(jié)果展示于表C中。詳言之，用小鼠抗人⑶-117抗體標(biāo)記所收集的細(xì)胞。將約10，000,000個(gè)所收集細(xì)胞離心且抽吸上清液。使離心塊懸浮于約100μ1含有約5μg作為產(chǎn)品104D2(SantaCruz)的經(jīng)純化小鼠抗人⑶117單株抗體(IgG1)的工作緩沖液中。經(jīng)BDBiosciences購(gòu)得的工作緩沖液含有PH值約7.2的PBS、牛血清白蛋白、EDTA及約0.09%迭氮化合物。將含有細(xì)胞及抗體的溶液在冰上培育約20分鐘至約25分鐘。用工作緩沖液洗滌細(xì)胞以移除未結(jié)合的抗體，且將含有細(xì)胞及抗體的溶液以約300g離心約10分鐘。離心后，抽吸上清液且將其摒棄，且使離心塊懸浮于約80μ1工作緩沖液中。用能與小鼠IgG的重鏈及/或輕鏈接合的山羊抗小鼠抗體標(biāo)記CD117干細(xì)胞-抗體復(fù)合物。使磁性微珠附著至山羊抗小鼠抗體上。將山羊抗小鼠IgG抗體添加至工作緩沖液中的懸浮離心塊中且在冰上培育約30分鐘至約35分鐘。培育后，將細(xì)胞用約2ml工作緩沖液洗滌且以約300g離心約10分鐘。抽吸上清液且使最終細(xì)胞懸浮于約500μ1工作緩沖液中。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使包含所收集的干細(xì)胞及溶液(包括工作緩沖液)的細(xì)胞懸浮液保持冷卻以防止非特異性標(biāo)記細(xì)胞。MS管柱(MiltenyiBiotec)系藉由將約500μ1工作緩沖液經(jīng)該管柱沖洗來(lái)制備。經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的Minimacs系用于CD117干細(xì)胞選擇。將管柱置于經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的MACS分離器的磁場(chǎng)中。經(jīng)由移液管將細(xì)胞懸浮液添加至管柱中。未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞及工作溶液流經(jīng)管柱且收集于無(wú)菌管中用于表型分析及細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陰性CD117細(xì)胞溶離份。在添加細(xì)胞懸浮液后用工作緩沖液將管柱洗滌3次。將無(wú)菌管置于管柱下，將該管柱自磁場(chǎng)移除以使陽(yáng)性溶離份穿過(guò)管柱且進(jìn)入該無(wú)菌管中。將約Iml工作緩沖液添加至管柱中，且將柱塞推經(jīng)管柱以釋放細(xì)胞的陽(yáng)性溶離份。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陽(yáng)性CD117細(xì)胞溶離份。用血球計(jì)分析陽(yáng)性及陰性溶離份以獲得活細(xì)胞的總數(shù)。藉由流式細(xì)胞儀分析陰性溶離份。在整個(gè)處理及培養(yǎng)的各個(gè)步驟中分析M2-01細(xì)胞，結(jié)果展示于圖30a至圖30e中且如下表C中所概述表C:M2-01流式細(xì)胞儀及培養(yǎng)繼代號(hào)CD117-PECD44-FITC(陽(yáng)性)CD45-ECD(陰性)7AAD-TEST7AAD-ISOCD166CD105CD29CD34CD90M2-01P00.40%17.70%58.90%95.40%95.10%3.70%8.00%0.10%0.10%6.80%M2-01P440.30%88.30%77.10%97.50%97.50%94.70%16.10%81.10%0.10%84.90%M2-01P72.10%89.20%87.70%95.20%95.60%91.00%33.00%82.90%0.20%67.90%M2-01P82.50%70.80%94.50%97.30%95.30%陽(yáng)性M2-01FRAC7.20%93.60%83.30%95.80%91.90%陰性M2-01FRAC4.50%94.10%86.40%94.70%92.80%92.00%45.60%90.40%0.10%79.60%M2-02C細(xì)胞在另一實(shí)例中，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施收集月經(jīng)干細(xì)胞。詳言之，在月經(jīng)周期期間由供體收集約小于1.0ml本文中命名為且稱作M2-02C的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。將月經(jīng)流樣本自收集裝置傾入收集管中的約10ml收集培養(yǎng)基中。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(Mediatech)，約100單位/毫升的盤尼西林，約100微克/毫升的鏈霉素，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。月經(jīng)流樣本于收集后約小于24小時(shí)內(nèi)到達(dá)處理設(shè)施。在到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)包含約10.0ml月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基的收集容器消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°C的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約1ml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果為對(duì)好氧及厭氧微生物呈陰性。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2ml緩沖生理食鹽水中。作為處理后樣本收集約1ml細(xì)胞懸浮液且藉由流式細(xì)胞儀分析來(lái)分析以獲得細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力。使用血球計(jì)進(jìn)行處理樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)。處理樣本中收集約19，700,000個(gè)細(xì)胞。使用FC500流式細(xì)胞儀進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析以鑒別細(xì)胞表面標(biāo)記。如圖31a至圖31iii所示，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0.2%的濃度收集CD117+細(xì)胞。另外，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約97%的濃度收集CD45陰性細(xì)胞。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約的濃度收集CD44+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約0.的濃度收集CD166+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約的濃度收集CD105+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約0.4%的濃度收集⑶90+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約0.5%的濃度收集⑶29+細(xì)胞，且結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0%的濃度收集CD34+細(xì)胞。結(jié)果亦指示如藉由7AAD所測(cè)定所收集的約99%細(xì)胞存活。將所有懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至一50ml錐形收集管中，且使用洗滌溶液使細(xì)胞懸浮液的體積達(dá)到約31ml的總體積。藉由密度梯度離心來(lái)濃縮約一半的30ml細(xì)胞懸浮液。藉由包括密度梯度離心及體積縮減、濃縮及洗滌的方法來(lái)處理細(xì)胞。使細(xì)胞懸浮液達(dá)到約30ml且用約15ml淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)基的密度梯度液(于約20°C下密度1.077-1.080g/ml-Cellgro)鋪于下方。在無(wú)制動(dòng)器的情況下于約20°C的溫度下對(duì)細(xì)胞懸浮液及密度梯度液以約14，000rpm進(jìn)行離心歷時(shí)約30分鐘。白血球?qū)有纬汕液性陆?jīng)干細(xì)胞群。抽吸白血球?qū)由戏街锨逡呵覍⑵滢饤?。連同一些洗滌溶液及盡可能小的體積的密度梯度液一起移除白血球?qū)?。摒棄剩余密度梯度液及含有紅血球的離心塊。將白血球?qū)又糜?0ml錐形收集管中且用洗滌溶液使體積達(dá)到約30ml。在約20°C的室溫下使細(xì)胞懸浮液以約2000rpm離心歷時(shí)約7分鐘。離心后，移除接近錐形收集管頂部的約1ml上清液且將其用于接種BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶。在約37°C下將血液培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果指示上清液及細(xì)胞懸浮液不含有任何好氧或厭氧微生物。抽吸剩余上清液，同時(shí)小心留下包含月經(jīng)干細(xì)胞的離心塊。將約1，000,000個(gè)細(xì)胞以約40，000個(gè)細(xì)胞/平方公分接種至T25未經(jīng)處理培養(yǎng)燒瓶中的15%張氏完全培養(yǎng)基中。在37°C溫度下于約5%C02中培育燒瓶。第6天及第1代，收集約80，000個(gè)細(xì)胞；第11天，324，000個(gè)細(xì)胞；第17天，600，000個(gè)細(xì)胞；第9天，2，900，000個(gè)(提供2，300，000個(gè)用于細(xì)胞表型)；第22天，1，200，000個(gè)；第24天，2，600，000個(gè)；第29天，26，800，000個(gè)細(xì)胞(3，500，000個(gè)用于細(xì)胞表型，10，000，000個(gè)用于⑶117選擇，超低溫保存131，000,000個(gè)，接種200，000個(gè)細(xì)胞用于培養(yǎng))。在細(xì)胞培養(yǎng)中收集細(xì)胞與培養(yǎng)基的等分試樣用于表型分析及有效性評(píng)估。根據(jù)本文中對(duì)于涉及所有細(xì)胞株的所有細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)所述的方法進(jìn)行表型分析及有效性評(píng)估。在細(xì)胞培養(yǎng)期間使用涉及所有細(xì)胞株的血球計(jì)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。自評(píng)估所收集的數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞株M2-02C最初對(duì)⑶117、⑶166、⑶105、⑶29、⑶90及⑶44呈陽(yáng)性且以高百分率的生存力對(duì)⑶45呈陰性。表D細(xì)胞培養(yǎng)期間M2-02C的流式細(xì)胞儀結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>第4代經(jīng)培養(yǎng)的M2-02C的流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果系呈現(xiàn)于圖32a至圖32iii中。經(jīng)培養(yǎng)的樣本包含根據(jù)本發(fā)明接種的約1，000，000個(gè)細(xì)胞。結(jié)果指示在第4代以細(xì)胞群的約0.0%的濃度收集⑶117+細(xì)胞。另外，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約82%的濃度收集⑶45-細(xì)胞。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約93%的濃度收集CD44+細(xì)胞。結(jié)果亦指示如藉由7AAD所測(cè)定所收集的約99%細(xì)胞存活。對(duì)于M2-02C的第8代，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約14%的濃度收集CD117+細(xì)胞。另外，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約84%的濃度收集CD45-細(xì)胞。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約93.3%的濃度收集CD44+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約93%的濃度收集CD166+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約90%的濃度收集CD105+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約87%的濃度收集CD90+細(xì)胞，以細(xì)胞群的約85%的濃度收集⑶29+細(xì)胞，且結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0.2%的濃度收集⑶34+細(xì)胞。結(jié)果亦指示如藉由7AAD所測(cè)定所收集的約97%細(xì)胞存活。根據(jù)本發(fā)明的方法且如本文所述對(duì)處于第4代的細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞進(jìn)行CD117干細(xì)胞選擇。用小鼠抗人⑶-117抗體標(biāo)記所收集的細(xì)胞。將約10，000，000個(gè)所收集細(xì)胞離心且抽吸上清液。使離心塊懸浮于約100u1含有約5ug作為產(chǎn)品104D2(SantaCruz)的經(jīng)純化小鼠抗人⑶117單株抗體(IgGD的工作緩沖液中。經(jīng)BDBiosciences購(gòu)得的工作緩沖液含有PH值約7.2的PBS、牛血清白蛋白、EDTA及約0.09%迭氮化合物。將含有細(xì)胞及抗體的溶液在冰上培育約20分鐘至約25分鐘。用工作緩沖液洗滌細(xì)胞以移除未結(jié)合的抗體，且將含有細(xì)胞及抗體的溶液以約300g離心約10分鐘。離心后，抽吸上清液且將其摒棄，且使離心塊懸浮于約80yl工作緩沖液中。用能與小鼠IgG的重鏈及/或輕鏈接合的山羊抗小鼠抗體標(biāo)記CD117干細(xì)胞-抗體復(fù)合物。使磁性微珠附著至山羊抗小鼠抗體上。添加山羊抗小鼠IgG抗體且在冰上培育約30分鐘至約35分鐘。培育后，將細(xì)胞用約2ml工作緩沖液洗滌且以約300g離心約10分鐘。抽吸上清液且使最終細(xì)胞懸浮于約500yl工作緩沖液中。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使包含所收集的干細(xì)胞及溶液(包括工作緩沖液)的細(xì)胞懸浮液保持冷卻以防止非特異性標(biāo)記細(xì)胞。MS管柱(MiltenyiBiotec)系藉由將約500u1工作緩沖液經(jīng)該管柱沖洗來(lái)制備。經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的Minimacs系用于CD117干細(xì)胞選擇。將管柱置于經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的MACS分離器的磁場(chǎng)中。經(jīng)由移液管將細(xì)胞懸浮液添加至管柱中。未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞及工作溶液流經(jīng)管柱且于無(wú)菌管中收集用于表型分析及細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陰性CD117細(xì)胞溶離份。在添加細(xì)胞懸浮液后用工作緩沖液將管柱洗滌3次。將無(wú)菌管置于管柱下，將該管柱自磁場(chǎng)移除以使陽(yáng)性溶離份穿過(guò)管柱且進(jìn)入該無(wú)菌管中。將約1ml工作緩沖液添加至管柱中，且將柱塞推經(jīng)管柱以釋放細(xì)胞的陽(yáng)性溶離份。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陽(yáng)性CD117細(xì)胞溶離份。在其它以密度梯度液處理、CD117選擇及隨后培養(yǎng)的各個(gè)步驟中用血球計(jì)及流式細(xì)胞儀分析陽(yáng)性及陰性溶離份，一般對(duì)于陽(yáng)性及陰性溶離份而言結(jié)果展示于表D中且對(duì)于陽(yáng)性溶離份而言結(jié)果展示于下表E中。M2-03E細(xì)胞在另一實(shí)例中，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施收集月經(jīng)干細(xì)胞。詳言之，在月經(jīng)周期期間由供體收集本文中命名為且稱作M2-03E的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。將月經(jīng)流樣本自收集裝置傾入收集管中的約10ml收集培養(yǎng)基中。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(MediateCh)，約100單位/毫升的盤尼西林，約100微克/毫升的鏈霉素，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。月經(jīng)流樣本于收集后約小于24小時(shí)內(nèi)到達(dá)處理設(shè)施。在到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)包含約10.0ml月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基的收集容器消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°C的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約1ml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下，將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果為對(duì)好氧及厭氧微生物呈陰性。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2ml緩沖生理食鹽水中。作為處理后樣本收集約1ml細(xì)胞懸浮液且藉由流式細(xì)胞儀分析來(lái)分析以獲得細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力。使用血球計(jì)進(jìn)行處理樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果指示根據(jù)本發(fā)明在處理后樣本中收集約5，200，000個(gè)細(xì)胞。在FC500流式細(xì)胞儀上進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約0.5%的濃度收集⑶117+細(xì)胞。另外，結(jié)果指示以細(xì)胞群的約88.4%的濃度收集⑶45陰性細(xì)胞。結(jié)果指示以細(xì)胞群的約2.的濃度收集CD44+細(xì)胞。結(jié)果亦指示如藉由7AAD所測(cè)定所收集的約97.0%細(xì)胞存活。第0天將約4，000,000個(gè)細(xì)胞以約40，000個(gè)細(xì)胞/平方公分接種至T75未經(jīng)處理的培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。在約37°C溫度下，于約5%C02中培育燒瓶。第10天于第1代，更換培養(yǎng)基。其它繼代系在第14天、第16天、第19天、第22天及第26天發(fā)生。第26天于第5代，收集細(xì)胞用于根據(jù)本發(fā)明的選擇方法進(jìn)行CD117選擇。用小鼠抗人⑶-117抗體標(biāo)記所收集的細(xì)胞。將約10，000,000個(gè)所收集細(xì)胞離心且抽吸上清液。使離心塊懸浮于約100ill含有約5i!g作為產(chǎn)品104D2(SantaCruz)的經(jīng)純化小鼠抗人⑶117單株抗體(IgGD的工作緩沖液中。經(jīng)BDBiosciences購(gòu)得的工作緩沖液含有PH值約7.2的PBS、牛血清白蛋白、EDTA及約0.09%迭氮化合物。將含有細(xì)胞及抗體的溶液在冰上培育約20分鐘。用工作緩沖液洗滌細(xì)胞以移除未結(jié)合的抗體，且將含有細(xì)胞及抗體的溶液以約300g離心約10分鐘。離心后，抽吸上清液且將其摒棄，且使離心塊懸浮于約80u1工作緩沖液中。用能與小鼠IgG的重鏈及/或輕鏈接合的山羊抗小鼠抗體標(biāo)記CD117干細(xì)胞-抗體復(fù)合物。使磁性微珠附著至山羊抗小鼠抗體上。添加山羊抗小鼠IgG抗體且在冰上培育約30分鐘。培育后，將細(xì)胞用約2ml工作緩沖液洗滌且以約300g離心約10分鐘。抽吸上清液且使最終細(xì)胞懸浮于約500yl工作緩沖液中。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使包含所收集的干細(xì)胞及溶液(包括工作緩沖液)的細(xì)胞懸浮液保持冷卻以防止非特異性標(biāo)記細(xì)胞。MS管柱(MiltenyiBiotec)系藉由將約500u1工作緩沖液經(jīng)該管柱沖洗來(lái)制備。經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的Minimacs用于CD117干細(xì)胞選擇。將管柱置于經(jīng)MiltenyiBiotec購(gòu)得的MACS分離器的磁場(chǎng)中。經(jīng)由移液管將細(xì)胞懸浮液添加至管柱中。未經(jīng)標(biāo)記的細(xì)胞及工作溶液流經(jīng)管柱且于無(wú)菌管中收集用于表型分析及細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陰性CD117細(xì)胞溶離份。在添加細(xì)胞懸浮液后用工作緩沖液將管柱洗滌3次。將無(wú)菌管置于管柱下，將該管柱自磁場(chǎng)移除以使陽(yáng)性溶離份穿過(guò)管柱且進(jìn)入該無(wú)菌管中。將約1ml工作緩沖液添加至管柱中，且將柱塞推經(jīng)管柱以釋放細(xì)胞的陽(yáng)性溶離份。將具有所收集的流出物的管標(biāo)記為陽(yáng)性CD117細(xì)胞溶離份。用血球計(jì)分析陽(yáng)性及陰性溶離份以獲得活細(xì)胞的總數(shù)。在張氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)陽(yáng)性溶離份。第0天將約900，000,000,000個(gè)細(xì)胞以約3，000個(gè)細(xì)胞/平方公分接種至4個(gè)T25未經(jīng)處理的培養(yǎng)燒瓶中的張氏培養(yǎng)基中。在約37°C溫度下于約5%C02中培育燒瓶。第3天，細(xì)胞經(jīng)歷第1代且更換培養(yǎng)基。其它繼代在第3天、第6天及第8天發(fā)生。第8天于第3代，收集約24，000,000個(gè)細(xì)胞且根據(jù)本發(fā)明的超低溫保存方法將約20，500，000個(gè)細(xì)胞超低溫保存。將剩余經(jīng)⑶117陽(yáng)性選擇的細(xì)胞接種至培養(yǎng)物中且經(jīng)歷若干更多次繼代。在經(jīng)陽(yáng)性選擇的細(xì)胞的培養(yǎng)物的第5代，細(xì)胞呈現(xiàn)如表E所列的細(xì)胞表面標(biāo)記。表E:M2-02C/M2-03E流式細(xì)胞儀分析陽(yáng)性陽(yáng)性<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>將經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞稍后解凍且根據(jù)R.Gonzalez等人，PluripotentmarkerexpressionanddifferentiationofhumansecondtrimesterMSC,Biochem.Biophys,Res.Commun.(2007)中所述的細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞儀方法、核型分析、分化方法及RNA提取及RT-PCR方法來(lái)分析。將經(jīng)超低溫保存的細(xì)胞解凍且根據(jù)Gonzalez的培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)一個(gè)繼代。第1代細(xì)胞系藉由Gonzalez的流式細(xì)胞儀方法、核型方法及分化方法來(lái)分析。如圖33中所示的流式細(xì)胞儀結(jié)果指示該等細(xì)胞對(duì)如圖34中特定展示的⑶117及SSEA-4以及⑶44、⑶105、⑶166、⑶90、⑶49f、MHCI、⑶29及⑶9呈陽(yáng)性且證實(shí)共同定位于經(jīng)分離細(xì)胞上。細(xì)胞亦對(duì)CXCR4呈陽(yáng)性。細(xì)胞對(duì)CD38、CD133、CD45、CD34、MHCII及LIN呈陰性。如圖35a中所示，細(xì)胞在培養(yǎng)物中以約24至約36小時(shí)的速率倍增。亦如圖35b中所示，初始細(xì)胞培養(yǎng)以50，000個(gè)細(xì)胞起始且至培養(yǎng)的第26天止生長(zhǎng)至48，000,000個(gè)。亦如圖35b中所示，RT-PCR分析顯示第12代細(xì)胞表現(xiàn)多能性標(biāo)記Oct-4，而非S0X-2或Nanog。根據(jù)Gonzalez的方法的核型分析指示細(xì)胞顯然為正常雌性核型且在無(wú)染色體畸變的情況下維持二倍體細(xì)胞。如圖39中所示，第12代細(xì)胞顯示大于50%的端粒酶活性。RT-PCR結(jié)果系展示于圖35b中且說(shuō)明細(xì)胞至少表現(xiàn)多能性標(biāo)記0ct_4。根據(jù)Gonzalez方法的分化分析的結(jié)果顯示細(xì)胞具有分化成神經(jīng)譜系、心臟譜系、成軟骨譜系、成骨譜系及成脂譜系的能力。根據(jù)神經(jīng)譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，細(xì)胞展現(xiàn)藉由表現(xiàn)如圖36中所示由少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞所表現(xiàn)的標(biāo)記04及GalC而分化成神經(jīng)組織的能力。神經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞亦表現(xiàn)如圖36中所示由神經(jīng)元細(xì)胞及神經(jīng)祖細(xì)胞所表現(xiàn)的Tub3、Map2及波形蛋白。當(dāng)于含有FDF的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天，且接著添加FGF、PDGF及EGF歷時(shí)約7天，接著在不包括EGF的FGF及PDGF中培養(yǎng)5天時(shí)，細(xì)胞表現(xiàn)如圖36中所示的04及GalC、神經(jīng)元標(biāo)記MapU^形蛋白及星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記GFAP。RT-PCR說(shuō)明細(xì)胞在RNA水平上表現(xiàn)神經(jīng)標(biāo)記，包括巢蛋白(Nestin)、NCAM及Nurr-I。RT-PCR數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞具有以45-50%的比率分化成多個(gè)神經(jīng)表型的潛力。根據(jù)心臟譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，細(xì)胞展現(xiàn)分化成心臟譜系的能力。心臟誘導(dǎo)的細(xì)胞表現(xiàn)亦如圖37中所示由心臟細(xì)胞所表現(xiàn)的肌動(dòng)蛋白及肌鈣蛋白。根據(jù)成軟骨譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，如圖38c及圖38d中所示，細(xì)胞展現(xiàn)分化成成軟骨譜系的能力。成軟骨分化細(xì)胞以艾爾遜藍(lán)染色對(duì)由成軟骨組織類型所表現(xiàn)的硫酸蛋白聚糖呈陽(yáng)性。根據(jù)成脂譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，如圖38e及圖38f中所示，細(xì)胞展現(xiàn)該等細(xì)胞分化成成脂譜系的能力。成脂分化細(xì)胞以油紅0染色對(duì)由成脂組織所表現(xiàn)且亦如圖38f中特定展示的脂肪空泡呈陽(yáng)性。根據(jù)成骨譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，如圖38a及圖38b中所示，細(xì)胞展現(xiàn)以茜素紅S低染色的成骨組織的典型的鈣沈積物。根據(jù)心臟譜系分化的Gonzalez方法的結(jié)果，如圖37中所示，細(xì)胞展現(xiàn)分化成心臟譜系的能力。如圖37中所示，在使用8μMAza或800μMSNAP使細(xì)胞分化后，細(xì)胞對(duì)心臟標(biāo)記肌動(dòng)蛋白、肌鈣蛋白及連接蛋白43呈陽(yáng)性染色。RT-PCR數(shù)據(jù)證實(shí)當(dāng)細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)成細(xì)胞聚集體時(shí)，該等細(xì)胞在RNA水平上表現(xiàn)心臟標(biāo)記。數(shù)據(jù)顯示細(xì)胞在細(xì)胞及分子水平上以約50%至約60%的比率表現(xiàn)心源性標(biāo)記。研究實(shí)例進(jìn)行研究以分析收集月經(jīng)流樣本的替代方法的結(jié)果。研究集中于測(cè)定根據(jù)月經(jīng)流收集方法使用收集杯及具有及替代地不具有抗生素的收集培養(yǎng)基所收集的月經(jīng)干細(xì)胞的總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞生存力。研究亦集中于在收集后約4小時(shí)至約112小時(shí)的間到達(dá)處理設(shè)施后月經(jīng)流樣本的溫度，其中月經(jīng)流樣本系于冰上或另外在室溫下輸送。共有161個(gè)根據(jù)研究所收集及分析的月經(jīng)流樣本。如下處理全部月經(jīng)流樣本(a)皆根據(jù)本發(fā)明，使用收集裝置收集46個(gè)月經(jīng)流樣本，將其置于包含抗生素的收集培養(yǎng)基中且于冰上輸送；(b)皆根據(jù)本發(fā)明，使用收集裝置收集34個(gè)月經(jīng)流樣本，將其置于無(wú)抗生素的收集培養(yǎng)基中且在室溫下運(yùn)送；及(c)皆根據(jù)本發(fā)明，使用收集裝置收集81個(gè)月經(jīng)流樣本，將其置于無(wú)抗生素的收集培養(yǎng)基中，且于冰上輸送。到達(dá)處理設(shè)施后即分析各樣本以評(píng)估到達(dá)時(shí)的溫度及總月經(jīng)流樣本體積。處理后使用血球計(jì)評(píng)估總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)且藉由錐蟲(chóng)藍(lán)排除染料評(píng)估細(xì)胞生存力。評(píng)估總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞生存力分析之前對(duì)各樣本進(jìn)行第1階段處理及可選凈化制程及第2階段處理。如圖40中所示，對(duì)所有樣本所評(píng)估的平均細(xì)胞計(jì)數(shù)為約7，900,000個(gè)細(xì)胞。生存力范圍為每個(gè)樣本約6%至約100%。如圖41中所示，所收集的所有樣本的平均細(xì)胞生存力為如藉由錐蟲(chóng)藍(lán)染料排除所測(cè)定的約74%。月經(jīng)流樣本到達(dá)時(shí)所量測(cè)的溫度對(duì)于由研究所分析的所有樣本而言處于約5.8°C至約25°C的范圍內(nèi)。如圖42中所示，月經(jīng)流樣本到達(dá)時(shí)所量測(cè)的平均溫度為約15°C。收集培養(yǎng)基中月經(jīng)流樣本的總體積在約5ml至約30ml的范圍內(nèi)。如圖43中所示，收集培養(yǎng)基中月經(jīng)流樣本的平均體積為約11ml。亦評(píng)估使用收集裝置收集且置于包含抗生素的收集培養(yǎng)基中并于冰上輸送的46個(gè)月經(jīng)流樣本。在約6.6°C至約16.9°C的范圍內(nèi)的溫度下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施，其中該組到達(dá)時(shí)的平均溫度處于約10.5°C。此組中的月經(jīng)流樣本在樣本收集后約4小時(shí)至約112小時(shí)之間到達(dá)處理設(shè)施，其中該組的平均時(shí)間為約47.9小時(shí)。包含收集培養(yǎng)基中的月經(jīng)流的月經(jīng)流樣本體積處于約5ml至約30ml的范圍內(nèi)，其中該組的平均值為11.5ml。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的細(xì)胞生存力且其系處于約6%至約100%生存力范圍內(nèi)，其中平均值為約72%生存力。僅三個(gè)樣本經(jīng)評(píng)估具有小于50%的生存力。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)且計(jì)數(shù)系在約200，000個(gè)細(xì)胞至約9，240，000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，具有約9，240，000個(gè)細(xì)胞的平均值。根據(jù)本發(fā)明的超低溫保存方法將處理后月經(jīng)細(xì)胞超低溫保存且接著解凍以為額外評(píng)估細(xì)胞生存力及總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)作準(zhǔn)備。在所培養(yǎng)的經(jīng)解凍樣本中，藉由錐蟲(chóng)藍(lán)所評(píng)估的細(xì)胞生存力指示生存力處于約60%至約100%的范圍內(nèi)。在經(jīng)解凍樣本中，總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)處于約100,000個(gè)細(xì)胞至約13，000，000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，其中平均值為約3，240，000個(gè)細(xì)胞。亦評(píng)估使用收集裝置收集、置于無(wú)抗生素的收集培養(yǎng)基中且于室溫下輸送的34個(gè)月經(jīng)流樣本。在約21°C至約25°C的范圍內(nèi)的溫度下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施，其中該組到達(dá)時(shí)的平均溫度為約22.8°C。此組中的月經(jīng)流樣本在樣本收集后約7小時(shí)至約94小時(shí)之間到達(dá)處理設(shè)施，其中該組的平均時(shí)間為約37小時(shí)。包含收集培養(yǎng)基中的月經(jīng)流的月經(jīng)流樣本體積處于約7.4m1至約17.5ml的范圍內(nèi)，其中該組的平均值為10.8ml。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的細(xì)胞生存力且其系處于約12%至約100%生存力范圍內(nèi)，其中平均值為約80%的生存力。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)且其系處于約300，000個(gè)細(xì)胞至約50，000，000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，具有約11，600，000個(gè)細(xì)胞的平均值。根據(jù)本發(fā)明的超低溫保存方法將處理后月經(jīng)細(xì)胞超低溫保存且接著解凍以為額外評(píng)估細(xì)胞生存力及總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)作準(zhǔn)備。在經(jīng)解凍樣本中，藉由錐蟲(chóng)藍(lán)所評(píng)估的細(xì)胞生存力指示生存力處于約37%至約100%的范圍內(nèi)。在經(jīng)解凍樣本中，總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)處于約100，000個(gè)細(xì)胞至約5，900,000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，其中平均值為約1，620,000個(gè)細(xì)胞。亦評(píng)估使用收集裝置收集、置于無(wú)抗生素的收集培養(yǎng)基中且于冰上輸送的81個(gè)月經(jīng)流樣本。在約5.8°C至約25.8°C的范圍內(nèi)的溫度下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施，其中該組到達(dá)時(shí)的平均溫度為約15.5°C。此組中的月經(jīng)流樣本在樣本收集后約2.5小時(shí)至約164小時(shí)之間到達(dá)處理設(shè)施，其中該組的平均時(shí)間為約54.6小時(shí)。包含收集培養(yǎng)基中的月經(jīng)流的月經(jīng)流樣本體積處于約5.Iml至約21.5ml的范圍內(nèi)，其中該組的平均值為10.8ml。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的細(xì)胞生存力且其系處于約10%至約100%生存力范圍內(nèi)，其中平均值為約73%生存力。對(duì)處理后樣本評(píng)估該組的總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)且其系處于約100，000個(gè)細(xì)胞至約42，000,000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，具有約5，840，000個(gè)細(xì)胞的平均值。根據(jù)本發(fā)明的超低溫保存方法將處理后月經(jīng)細(xì)胞超低溫保存且接著解凍以為額外評(píng)估細(xì)胞生存力及總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)作準(zhǔn)備。在經(jīng)解凍樣本中，藉由錐蟲(chóng)藍(lán)所評(píng)估的細(xì)胞生存力指示生存力處于約45%至約100%的范圍內(nèi)。在經(jīng)解凍樣本中，總成核細(xì)胞計(jì)數(shù)處于約100，000個(gè)細(xì)胞至約48，300,000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)，其中平均值為約8，450,000個(gè)細(xì)胞。月經(jīng)干細(xì)胞純系根據(jù)本發(fā)明的收集方法自四個(gè)不同供體收集月經(jīng)流樣本且自該等月經(jīng)流樣本發(fā)展MSC純系。月經(jīng)干細(xì)胞純系-M2-014-02根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施獲得若干不同月經(jīng)干細(xì)胞純系。詳言之，收集約30ml本文中命名為且稱作M2-014-02的月經(jīng)流樣本。在月經(jīng)周期期間由供體收集包含月經(jīng)流及收集培養(yǎng)基的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置用肥皂及水清潔且置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(Mediatech)，約100單位/毫升的盤尼西林，約100微克/毫升的鏈霉素，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。自收集起約17小時(shí)后，對(duì)收集培養(yǎng)基中的約30ml月經(jīng)流樣本進(jìn)行處理以分離及收集月經(jīng)干細(xì)胞。在約10°c下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施。到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°c的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約Iml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果為對(duì)好氧及厭氧微生物呈陰性。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2mlDPBS中。作為處理后樣本收集約Iml細(xì)胞懸浮液且針對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力來(lái)分析。使用血球計(jì)進(jìn)行總細(xì)胞計(jì)數(shù)，其指示處理后樣本中收集約41，000，000個(gè)細(xì)胞。所收集的細(xì)胞證實(shí)超低溫保存前約75%的生存力。將經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍，胰蛋白酶化且培養(yǎng)。培養(yǎng)前，分析解凍后的月經(jīng)干細(xì)胞。解凍后樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示約7，000,000個(gè)月經(jīng)細(xì)胞以約66%生存力存在。培養(yǎng)前，以兩步稀釋法用20%張氏培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升、約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升、約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升及約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升。將約0.2ml各稀釋液個(gè)別添加至96孔盤中的84個(gè)孔中，其余12個(gè)孔系用DPBS填充以潤(rùn)濕該盤。約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有0.5個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有1.0個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升產(chǎn)生具有2個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有3個(gè)細(xì)胞/孔的盤。在倒立式顯微鏡下針對(duì)單細(xì)胞查核各孔。每隔4天至6天用新鮮20%張氏培養(yǎng)基更換出培養(yǎng)基。使具有單細(xì)胞的孔生長(zhǎng)至50%融合，此時(shí)使細(xì)胞胰蛋白酶化且將細(xì)胞接種于具有20%張氏培養(yǎng)基的T-25燒瓶中。自孔移除某些細(xì)胞以用于根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)前，自盤收集6個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞純系且根據(jù)本文中對(duì)于細(xì)胞表面特征所揭示的方法藉由流式細(xì)胞儀分析各純系。各純系的細(xì)胞表面特征的概述系展示于表F中。表F:月經(jīng)干細(xì)胞純系<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>月經(jīng)干細(xì)胞純系-Μ2-015-03根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施獲得若干不同月經(jīng)干細(xì)胞純系。詳言之，收集約30ml本文中命名為且稱作M2-015-03的月經(jīng)流樣本。在月經(jīng)周期期間由供體收集包含月經(jīng)流及收集培養(yǎng)基的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置用肥皂及水清潔且置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的杜氏磷酸鹽緩沖生理食鹽水(DPBS)(Mediatech)，約100單位/毫升的盤尼西林，約100微克/毫升的鏈霉素，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。自收集起約6小時(shí)后，對(duì)收集培養(yǎng)基中的約23ml月經(jīng)流樣本進(jìn)行處理以分離及收集月經(jīng)干細(xì)胞。在約10°c下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施。到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°c的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約Iml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果為對(duì)好氧及厭氧微生物呈陰性。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2mlDPBS中。作為處理后樣本收集約Iml細(xì)胞懸浮液且針對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力來(lái)分析。使用血球計(jì)所進(jìn)行的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示處理后樣本中收集約1，000，000個(gè)細(xì)胞。所收集的細(xì)胞證實(shí)超低溫保存前約18%的生存力。將經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍，胰蛋白酶化且培養(yǎng)。培養(yǎng)前，分析解凍后月經(jīng)干細(xì)胞。解凍后樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示約300，000個(gè)月經(jīng)細(xì)胞以約60%的生存力存在。培養(yǎng)前，以用20%張氏培養(yǎng)基處理的兩步稀釋法將細(xì)胞稀釋至約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升、約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升、約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升及約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升。將約0.2ml各稀釋液個(gè)別添加至96孔盤中的84個(gè)孔中，其余12個(gè)孔用DPBS填充以潤(rùn)濕該盤。約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有0.5個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有1.0個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升產(chǎn)生具有2個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有3個(gè)細(xì)胞/孔的盤。在倒立式顯微鏡下針對(duì)單細(xì)胞查核各孔。每隔4-6天用新鮮20%張氏培養(yǎng)基更換出培養(yǎng)基。使具有單細(xì)胞的孔生長(zhǎng)至50%融合，此時(shí)使細(xì)胞胰蛋白酶化且將細(xì)胞接種于具有20%張氏培養(yǎng)基的T-25燒瓶中。自孔移除某些細(xì)胞以用于根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。在第2代，自盤收集兩個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞純系且培養(yǎng)。根據(jù)本文中對(duì)于細(xì)胞表面特征所揭示的方法藉由流式細(xì)胞儀分析各純系。各純系的細(xì)胞表面特征的概述系展示于表G中。表G月經(jīng)干細(xì)胞純系<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>月經(jīng)干細(xì)胞純系-M2-017-03根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施獲得若干不同月經(jīng)干細(xì)胞純系。詳言之，收集約30ml本文中命名為且稱作M2-015-03的月經(jīng)流樣本。在月經(jīng)周期期間由供體收集包含月經(jīng)流及收集培養(yǎng)基的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置用肥皂及水清潔且置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(Mediatech)，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中且在無(wú)冰的情況下藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。自收集起約28小時(shí)后，對(duì)收集培養(yǎng)基中的約8ml月經(jīng)流樣本進(jìn)行處理以分離及收集月經(jīng)干細(xì)胞。在約23°C下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施。到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置于冰上。在約18°C的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約Iml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果指示受糞腸球菌(E.faecalis)污染。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2mlDPBS中。作為處理后樣本收集約Iml細(xì)胞懸浮液且針對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力來(lái)分析。使用血球計(jì)所進(jìn)行的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示處理后樣本中收集約800，000個(gè)細(xì)胞。所收集的細(xì)胞證實(shí)超低溫保存前約87%的生存力。將經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍，胰蛋白酶化且培養(yǎng)。培養(yǎng)前，分析解凍后月經(jīng)干細(xì)胞。解凍后樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示約200，000個(gè)月經(jīng)細(xì)胞以約63%的生存力存在。培養(yǎng)前，以兩步稀釋法用20%張氏培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升、約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升、約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升及約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升。將約0.2ml各稀釋液個(gè)別添加至96孔盤中的84個(gè)孔中，其余12個(gè)孔系用DPBS填充以潤(rùn)濕該盤。約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有0.5個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有1.0個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升產(chǎn)生具有2個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有3個(gè)細(xì)胞/孔的盤。在倒立式顯微鏡下針對(duì)單細(xì)胞查核各孔。每隔4天至6天用新鮮20%張氏培養(yǎng)基更換出培養(yǎng)基。使具有單細(xì)胞的孔生長(zhǎng)至50%融合，此時(shí)使細(xì)胞胰蛋白酶化且將細(xì)胞接種于具有20%張氏培養(yǎng)基的T-25燒瓶中。自孔移除某些細(xì)胞以用于根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)至第1代期間，兩性霉素B系與盤尼西林/鏈霉素一起包括于培養(yǎng)基中。在第3代，根據(jù)本文中對(duì)于細(xì)胞表面特征所揭示的方法藉由流式細(xì)胞儀分析培養(yǎng)物中的各純系。各純系的細(xì)胞表面特征的概述系展示于表H中。表H:月經(jīng)干細(xì)胞純系<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>月經(jīng)干細(xì)胞純系-M2-54-02根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施獲得若干不同月經(jīng)干細(xì)胞純系。詳言之，收集約12ml本文中命名為且稱作M2-54-02的月經(jīng)流樣本。在月經(jīng)周期期間由供體收集包含月經(jīng)流及收集培養(yǎng)基的月經(jīng)流樣本。將無(wú)菌收集裝置用肥皂及水清潔且置于供體的陰道內(nèi)歷時(shí)足以收集月經(jīng)流樣本的時(shí)間。收集培養(yǎng)基包含無(wú)鈣、鎂或酚紅的DPBS(Mediatech)，及處于每毫升DPBS培養(yǎng)基約10單位至約20單位的范圍內(nèi)的無(wú)保存劑肝素。將月經(jīng)流樣本及收集培養(yǎng)基密封于收集管中，于冰上包裝于收集容器中，且藉由運(yùn)送而輸送至處理設(shè)施。自收集起約73小時(shí)后，對(duì)收集培養(yǎng)基中的約12ml月經(jīng)流樣本進(jìn)行處理以分離及收集月經(jīng)干細(xì)胞。在約20°C下月經(jīng)流樣本到達(dá)處理設(shè)施。到達(dá)處理設(shè)施后即對(duì)月經(jīng)流樣本及具有抗生素的收集培養(yǎng)基消毒，將其轉(zhuǎn)移至清潔室中，且置放于冰上。在約18°C的溫度下將收集容器以約2000rpm離心約7分鐘且接著消毒。抽吸約5ml上清液樣本且將其用于接種兩個(gè)BacT/ALERT血液培養(yǎng)瓶，約4ml進(jìn)入好氧培養(yǎng)瓶中且約Iml進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)瓶中。在約37°C下將培養(yǎng)瓶在BacT/ALERT系統(tǒng)中培育約14天。結(jié)果指示受表皮葡萄球菌(S.epidermidis)污染。抽吸剩余上清液且將其摒棄。使離心塊懸浮于約2mlDPBS中。作為處理后樣本收集約Iml細(xì)胞懸浮液且針對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)、流動(dòng)分析及生存力來(lái)分析。使用血球計(jì)所進(jìn)行的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示處理后樣本中收集約800，000個(gè)細(xì)胞。所收集的細(xì)胞證實(shí)超低溫保存前約72%的生存力。將經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞解凍且胰蛋白酶化且培養(yǎng)。培養(yǎng)前，分析解凍后的月經(jīng)干細(xì)胞。解凍后樣本的總細(xì)胞計(jì)數(shù)指示約21，000,000個(gè)月經(jīng)細(xì)胞以約92%的生存力存在。培養(yǎng)前，以兩步稀釋法用20%張氏培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升、約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升、約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升及約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升。將約0.2ml各稀釋液個(gè)別添加至96孔盤中的84個(gè)孔中，其余12個(gè)孔用DPBS填充以潤(rùn)濕該盤。約2.5個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有0.5個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約5.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有1.0個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約10.0個(gè)細(xì)胞/毫升產(chǎn)生具有2個(gè)細(xì)胞/孔的盤。約15.0個(gè)細(xì)胞/毫升稀釋液產(chǎn)生具有3個(gè)細(xì)胞/孔的盤。在倒立式顯微鏡下針對(duì)單細(xì)胞查核各孔。每隔4-6天用新鮮20%張氏培養(yǎng)基更換出培養(yǎng)基。使具有單細(xì)胞的孔生長(zhǎng)至50%融合，此時(shí)使細(xì)胞胰蛋白酶化且將細(xì)胞接種于具有20%張氏培養(yǎng)基的T-25燒瓶中。自孔移除某些細(xì)胞以用于根據(jù)本發(fā)明的方法進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)前，自培養(yǎng)物收集1個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞純系且根據(jù)本文中對(duì)于細(xì)胞表面特征所揭示的方法藉由流式細(xì)胞儀來(lái)分析。各純系的細(xì)胞表面特征的概述系展示于表I中。表I:月經(jīng)干細(xì)胞純系<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>治療用途本發(fā)明的月經(jīng)干細(xì)胞可藉由將該等細(xì)胞與合適的細(xì)胞培養(yǎng)基或醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑組合來(lái)制備。舉例而言，本發(fā)明的月經(jīng)干細(xì)胞可經(jīng)制備以根據(jù)GMP(藥品優(yōu)良制造規(guī)范)輸注或移植。合適的培養(yǎng)基或稀釋劑可包括組織培養(yǎng)基(包括分析證書(shū)上所記錄的適當(dāng)測(cè)試及結(jié)果)，諸如HBSS、IMDM、RPMI、αMEM、M199及DMEM，該等組織培養(yǎng)基可需要HEPES緩沖液以維持適當(dāng)pH值來(lái)供養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞?？梢约s0.2%的最小值添加蛋白質(zhì)，但可以高達(dá)約30%添加。所使用的蛋白質(zhì)包括人血清白蛋白、人血漿蛋白溶離份、胎牛血清(若使用動(dòng)物產(chǎn)品，則其須包括如美國(guó)食品及藥品管理局所需的適當(dāng)安全測(cè)試)或牛血清白蛋白。若細(xì)胞處于凝聚、團(tuán)簇或凝塊的危險(xiǎn)下，則培養(yǎng)基可需要抗凝劑。抗凝劑可包括肝素(由于保存劑可潛在影響干細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞的增殖能力，因此無(wú)保存劑為較佳)、酸性檸檬酸鹽右旋糖、檸檬酸鹽磷酸鹽右旋糖或可使用對(duì)與活細(xì)胞組合安全的任何合適抗凝劑。細(xì)胞可在于其中擴(kuò)增的細(xì)胞培養(yǎng)基中運(yùn)送，只要其對(duì)輸注或移植安全即可。細(xì)胞可在注射器中短距離運(yùn)送，例如，當(dāng)產(chǎn)品正于醫(yī)院中制備且亦于該醫(yī)院中投與時(shí)。另外，產(chǎn)品可在無(wú)菌袋中輸送，該等無(wú)菌袋可包括或不包括氣體交換。短距離運(yùn)送的產(chǎn)品亦可在細(xì)胞將耐受短距離且在該短距離中保持存活的任何其它類型無(wú)菌容器中輸送，該無(wú)菌容器可包括無(wú)菌錐形管或可為圓形或正方形的無(wú)菌平底容器。若產(chǎn)品于4小時(shí)以上長(zhǎng)距離運(yùn)送，則其可在允許氣體交換的袋中發(fā)送。該袋亦可以允許空氣交換的組態(tài)來(lái)運(yùn)送。可將產(chǎn)品袋置于將允許在該產(chǎn)品袋正于其中運(yùn)送的容器中進(jìn)行適當(dāng)氣體交換的托架上。包括細(xì)胞的容器可針對(duì)維持月經(jīng)干細(xì)胞的合適溫度而最優(yōu)化。若細(xì)胞需要冷環(huán)境，則可使用冰包或其它冷卻裝置。若細(xì)胞需要約20°C至約24°C的室溫，則可需要凝膠包以維持此溫度。一旦細(xì)胞到達(dá)設(shè)施以供輸注或移植，即可將該等細(xì)胞置于所監(jiān)測(cè)的溫度環(huán)境中?？蓪?chǔ)存以供日后使用的細(xì)胞以超低溫保存方式于干運(yùn)裝置中運(yùn)送以維持小于或等于-150°C的溫度?？蓪⒁猿蜏乇４娣绞竭\(yùn)送的細(xì)胞用解凍及輸注指令發(fā)送且潛在地需要培養(yǎng)基以維持供治療用的最佳活細(xì)胞產(chǎn)品。應(yīng)使用合適的輸送機(jī)構(gòu)以將產(chǎn)品輸送至輸注部位?？墒褂迷S多不同類型的輸送服務(wù)，諸如醫(yī)藥快遞服務(wù)、快遞服務(wù)或諸如UPS、DHL或FedEx的公司。當(dāng)快遞員了解產(chǎn)品需要(諸如干運(yùn)裝置歷時(shí)旅途持續(xù)時(shí)間須保持豎立)時(shí)，培養(yǎng)基中的月經(jīng)干細(xì)胞具有更大的安全輸送機(jī)會(huì)。若將運(yùn)送裝置側(cè)放，則其可能迅速損失液氮負(fù)荷且不能保持其有效溫度。藥妝應(yīng)用所用術(shù)語(yǔ)藥妝品系關(guān)于包含(a)至少一種對(duì)產(chǎn)品使用者具有影響的生物活性成份及(b)至少一種藥妝學(xué)上可接受的載劑的調(diào)配物或組合物。該生物活性成份可為(例如)根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施所收集的MSC，或由本發(fā)明的MSC、遺傳工程化MSC或分化MSC所產(chǎn)生的生長(zhǎng)因子或其它組合物、化學(xué)品或蛋白質(zhì)。進(jìn)一步舉例而言，MSC、分化MSC或遺傳工程化MSC可于培養(yǎng)物中生長(zhǎng)以產(chǎn)生所要細(xì)胞產(chǎn)物，諸如能用作藥妝品的生長(zhǎng)因子或其它生物活性成份?？勺訫SC、分化MSC或遺傳工程化MSC所生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基或其它培養(yǎng)基收集生長(zhǎng)因子或其它生物活性成份?？山?jīng)由離心步驟自細(xì)胞培養(yǎng)基或其它培養(yǎng)基收集生長(zhǎng)因子或其它生物活性成份以收集上清液中的所要成份，可稍后處理所要成份以純化或濃縮該成份。藥妝品可被視為在某些應(yīng)用中及在適當(dāng)條件下可提供醫(yī)學(xué)或類藥物效益的化妝品。舉例而言，在某些應(yīng)用中，藥妝品可影響皮膚的底層結(jié)構(gòu)，減少皺紋深度，或逆轉(zhuǎn)或改善光氧化或老齡化對(duì)皮膚的影響。藥妝品可尤其適用作護(hù)膚產(chǎn)品、護(hù)發(fā)產(chǎn)品、組織或器官修飾或增益、及防曬產(chǎn)品。在某些實(shí)施例中，藥妝組合物包含包括脂質(zhì)體、環(huán)糊精、聚合物系統(tǒng)或玻糖醛酸或相關(guān)化合物中的至少一者的傳遞系統(tǒng)。藥妝組合物包含藥妝學(xué)上可接受的載齊U。適合于局部應(yīng)用的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或調(diào)配物通常亦將為藥妝學(xué)上可接受的載劑或調(diào)配物。局部化妝或藥妝軟膏、洗劑或凝膠組合物通常含有于諸如醫(yī)藥乳膏基質(zhì)、水包油乳液、油包水乳液、凝膠或類似物的化妝學(xué)上可接受的載劑或藥妝學(xué)上可接受的載劑中的約1至99%、約5至95%、約20至75%或約5至20%的濃度的包含經(jīng)調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基或其提取物的活性成份。供局部使用的各種化妝及藥妝組合物包括含有經(jīng)調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基或提取物及適當(dāng)載劑的滴劑、酊劑、洗劑、乳膏、油膏、血清、溶液及軟膏。各組合物中經(jīng)調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基或提取物的最佳百分率系根據(jù)組合物的調(diào)配及所要治療效果而改變。視產(chǎn)品類型、組合物性質(zhì)、組合物使用的位置、所要效果及類似者而定，藥妝品可包含許多化妝學(xué)上、藥妝學(xué)上或醫(yī)藥學(xué)上可接受的調(diào)配物中的任一者。盡管專有調(diào)配在調(diào)配技術(shù)中常見(jiàn)，但調(diào)配師將能夠在無(wú)不當(dāng)實(shí)驗(yàn)的情況下確定或易于選擇用于特定應(yīng)用的適當(dāng)調(diào)配物。本發(fā)明組合物的適當(dāng)載劑通常將含有成份，諸如通常在化妝及藥妝領(lǐng)域中所發(fā)現(xiàn)的彼等成份油、蠟或其它標(biāo)準(zhǔn)脂肪物質(zhì)；或習(xí)知膠凝劑及/或增稠劑；乳化劑；保濕劑；潤(rùn)膚劑；防曬劑；親水性或親脂性活性劑，諸如神經(jīng)酰胺；對(duì)抗自由基的試劑；殺菌劑；錯(cuò)隔劑；保存劑；堿化劑或酸化劑；芳香劑；界面活性劑；填充劑；天然產(chǎn)物或天然產(chǎn)物的提取物，諸如蘆薈或綠茶提取物；維生素；或著色材料。此等多種成份的量將視組合物的用途及所要化妝或藥妝效果而變。化妝學(xué)上及藥妝學(xué)上可接受的成份及調(diào)配物的討論可尤其見(jiàn)于FDACosmeticsHandbook，U.S.FoodandDrugAdministration；HandbookofCosmeticandPersonalCareAdditives,AshandAsh，compilers，1994，ChemicalPublishing，NewYork，N.Y.；Bennett'sCosmeticFormulary，1993，ChemicalPublishingCo.；Harry'sCosmeticology,第7片反，Wilkinson及Moore,1982及第8片反，Rieger,2000,ChemicalPublishing；CosmeticBenchReference—2001，AllerudPublishingCorp.；CTFACompendiumofCosmeticIngredientComposition，Nikitakis及McEwen編，1990，Cosmetic，Toiletry，andFragranceAssociation,Washington,D.C.，SurfactantEncyclopedia,第2次修訂片反，Rieger,1996,AlluredPublishing；TheChemistryandManufactureofCosmetics，第2片反，DeNavarre,VanNostrand，Princeton，N.J.；EncyclopediaofCommonNaturalIngredientsUsedinFood，Drugs，andCosmetics，Leung,1996,JohnWiley；AConsumer'sDictionaryofCosmeticIngredients,第5版，Winter,1999,ThreeRiversPress,NewYork,N.Y.；Cosmeceuticals:ActiveSkinTreatment,1998,AlluredPublishing；HandbookofCosmeticScienceandTechnology,Knowlton及Pearce,1993,ElsevierAdvancedTechnology,Oxford,UK；Personal-CareFormulas,1997,AlluredPublishing；BeginningCosmeticChemistry,ScheulIer及Romanowski,1999,AlluredPublishing；及SkinPermeation!FundamentalsandApplication,Zatz，1993，AlluredPublishing。醫(yī)藥學(xué)上可接受的成份及調(diào)配物的討論可尤其見(jiàn)于Remington‘sPharmaceuticalSciences,第18版，Gennaro編，1990,MackPublishing中。定義除非如本文所用的下列術(shù)語(yǔ)所使用的情形另外表明，否則該術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有下文所陳述的定義。DMEM意謂杜氏最低必需培養(yǎng)基(Dulbecco'sMinimalEssentialMedium)。DMSO意謂二甲亞砜。DNAse意謂用于分解非活細(xì)胞已溶解后所發(fā)現(xiàn)的DNA的脫氧核糖核酸酶。DPBS意謂杜氏磷酸鹽緩沖生理食鹽水。HBSS意謂漢克斯(Hank's)平衡鹽溶液。肝素為具有抗凝特性的葡糖胺聚糖。HSA意謂作為可充當(dāng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的豐富血漿蛋白的人血清白蛋白。LSM意謂用于進(jìn)行密度梯度細(xì)胞分離的淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)基。μg意謂微克。μ1及μL同義使用以意謂微升。ml及mL同義使用以意謂毫升。X意謂乘以，亦即乘以濃度或稀釋度。其它合適的替代試劑、產(chǎn)品及制造商可替代本文所提及的特定試劑、產(chǎn)品及制造商而使用。在不脫離其廣泛發(fā)明概念的情況下可對(duì)上述實(shí)施例作出修改。在已描述本發(fā)明的較佳實(shí)施例的情況下，其它實(shí)施例、改編、變更、修改及相當(dāng)配置將為熟習(xí)此項(xiàng)技術(shù)者所明白。此等及其它實(shí)施例應(yīng)理解為處于隨附申請(qǐng)專利范圍的范疇內(nèi)。權(quán)利要求一種用于獲得月經(jīng)干細(xì)胞的方法，該方法包含下列步驟a)自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞；及b)處理該自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含以離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉淀中的至少一個(gè)方法處理該月經(jīng)流。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中處理自該月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含針對(duì)至少一種包含下列的細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49e、⑶49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含針對(duì)至少一種包含下列的細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49e、⑶49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中處理分離自該月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中處理該月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含選擇月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中處理月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法包含超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中該方法包含解凍經(jīng)超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞及處理經(jīng)解凍的月經(jīng)干細(xì)胞的進(jìn)一步步驟。13.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法包含制備包含月經(jīng)干細(xì)胞及維持月經(jīng)干細(xì)胞存活的細(xì)胞培養(yǎng)基的治療組合物的進(jìn)一步步驟。14.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該方法包含制備包含月經(jīng)干細(xì)胞和藥妝制劑的藥妝組合物的進(jìn)一步步驟。15.一種自月經(jīng)流收集月經(jīng)干細(xì)胞的方法，該方法包含a)在一月經(jīng)周期期間取得月經(jīng)流；b)將該月經(jīng)流輸送至一處理設(shè)施；c)將月經(jīng)干細(xì)胞自月經(jīng)流分離而成細(xì)胞制劑；及d)處理該月經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞制劑。16.一種自月經(jīng)流收集月經(jīng)干細(xì)胞的系統(tǒng)，該系統(tǒng)包含a)一月經(jīng)干細(xì)胞分離器，其中月經(jīng)干細(xì)胞分離器將月經(jīng)干細(xì)胞自月經(jīng)流分離；b)一月經(jīng)干細(xì)胞收集器，其中該月經(jīng)干細(xì)胞收集器收集月經(jīng)干細(xì)胞；及c)一月經(jīng)干細(xì)胞處理器，其中該月經(jīng)干細(xì)胞處理器制備供治療用或供超低溫保存的月經(jīng)干細(xì)胞。17.一種超低溫保存月經(jīng)干細(xì)胞的方法，該方法包含下列步驟a)自月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞；b)收集自月經(jīng)流分離的月經(jīng)干細(xì)胞；及c)超低溫保存分離自該月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中自該月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含經(jīng)由離心、密度梯度離心、過(guò)濾或沉降中的至少一種處理該月經(jīng)流。19.如權(quán)利要求17所述的方法，其中收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含至少一個(gè)針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含至少一個(gè)培養(yǎng)所選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。21.如權(quán)利要求17所述的方法，其中收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟包含至少一個(gè)自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。23.一種月經(jīng)干細(xì)胞群，其通過(guò)包含下列步驟的方法獲得a)從月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流中分離月經(jīng)干細(xì)胞；及b)收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞。24.一種用于富集收集自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞群的方法，該方法包含下列步驟a)從月經(jīng)期間所收集的月經(jīng)流中分離月經(jīng)干細(xì)胞；及b)收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞。25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該方法包含至少一個(gè)針對(duì)下列細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類。26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該方法包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。27.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該方法包含至少一個(gè)選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟及至少一個(gè)培養(yǎng)所選擇的月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。28.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該方法包含至少一個(gè)培養(yǎng)月經(jīng)干細(xì)胞的步驟及至少一個(gè)自細(xì)胞培養(yǎng)物選擇月經(jīng)干細(xì)胞的步驟。29.一種用于富集表達(dá)⑶117的月經(jīng)干細(xì)胞群的方法，該方法包含下列步驟a)自月經(jīng)流分離月經(jīng)干細(xì)胞；b)收集分離自月經(jīng)流的月經(jīng)干細(xì)胞；及c)選擇表達(dá)⑶117的月經(jīng)干細(xì)胞。30.一種月經(jīng)干細(xì)胞群，其包含至少一種下列細(xì)胞標(biāo)記⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類。31.一種經(jīng)富集化的細(xì)胞群，其包含a)表達(dá)至少一種包含下列的細(xì)胞標(biāo)記⑶9、⑶10、⑶13、⑶29、⑶44、⑶49e、⑶49f、⑶59、⑶81、⑶105、⑶166及HLAI類的月經(jīng)干細(xì)胞；及b)較低表達(dá)或不表達(dá)包含CD3及HLAII類的細(xì)胞標(biāo)記中的至少一者的月經(jīng)干細(xì)胞。32.—種組合物，其包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及超低溫保存劑。33.一種組合物，其包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基。34.一種組合物，其包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及藥妝劑。35.一種組合物，其包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及維持細(xì)胞存活的保存劑。36.一種組合物，其包含至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)基，該組合物位于一容器中以為該至少一個(gè)月經(jīng)干細(xì)胞的治療用途作準(zhǔn)備。全文摘要本發(fā)明提供包含月經(jīng)干細(xì)胞(MSC)的組合物及關(guān)于獲得其的方法、制程及系統(tǒng)。MSC系經(jīng)由處理月經(jīng)期間收集的月經(jīng)流而得?？蓪SC超低溫保存，經(jīng)各個(gè)培養(yǎng)及選擇步驟處理以為超低溫保存作準(zhǔn)備，或經(jīng)處理以供治療或藥妝用?？蓪⒔?jīng)超低溫保存的MSC解凍以為治療及藥妝用途作準(zhǔn)備。MSC表現(xiàn)CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166及HLAI類且其CD3及HLAII類表現(xiàn)較少或不表現(xiàn)。文檔編號(hào)C12N5/00GK101802171SQ200880014529公開(kāi)日2010年8月11日申請(qǐng)日期2008年3月3日優(yōu)先權(quán)日2007年3月1日發(fā)明者朱莉·G·阿利克遜,默西迪絲·A·沃爾頓申請(qǐng)人:干細(xì)胞國(guó)際公司