專利名稱：一種細(xì)菌厭氧呼吸過程細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種細(xì)菌厭氧呼吸過程細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力pmf的測定 方法，從而表征細(xì)菌厭氧呼吸產(chǎn)生的能量。
背景技術(shù)：
厭氧呼吸是一類在無氧或低氧條件下進(jìn)行的，以氧氣以外物質(zhì)為呼吸鏈末端電子受體的 生物氧化過程，是一類產(chǎn)能效率較低的呼吸形式。厭氧呼吸的一般過程為1)電子供體在特 異性酶的作用下被氧化脫下電子，電子沿電子傳遞鏈按電勢由低到高傳遞，最后交給末端電 子受體;2)在電子傳遞過程中，偶聯(lián)H+由細(xì)菌胞質(zhì)向胞外運(yùn)輸，形成跨膜的H+濃度梯度，
把化學(xué)能轉(zhuǎn)化為電勢能；3) H+在電化學(xué)電勢驅(qū)動(dòng)下，通過菌體細(xì)胞膜上的FoFrATP酶分子 的特殊通道回流到細(xì)菌胞質(zhì)，同時(shí)釋放自由能偶聯(lián)ATP的合成。
在細(xì)菌呼吸過程中，能量產(chǎn)生是核心的內(nèi)容。在生理?xiàng)l件下合成一個(gè)ATP分子所需自由 能大約為+40 50kJ/mo1，每合成一分子ATP大約需要2 3個(gè)H+跨膜。因此細(xì)菌由細(xì)菌胞質(zhì)向 胞外運(yùn)輸?shù)腍+量就可以顯示細(xì)菌能產(chǎn)生ATP的量。雖然體外測定ATP的方法有很多，但是對于 完整的細(xì)胞來說，直接測定其產(chǎn)生的ATP仍然比較困難。能量的產(chǎn)生依賴于細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子 動(dòng)力pmf (proton-motive force)的存在，pm薩生是細(xì)菌呼吸產(chǎn)能的基礎(chǔ)和前提，是細(xì)菌呼吸 產(chǎn)能的一種表征，可以通過測定pm沫反映細(xì)菌呼吸產(chǎn)生的能量。
然而細(xì)菌厭氧呼吸是一類產(chǎn)能效率較低的呼吸形式，其呼吸過程中細(xì)胞膜內(nèi)外的pmf差較 微弱。如何準(zhǔn)確測定細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)胞膜內(nèi)外pmf是細(xì)菌厭氧呼吸產(chǎn)能研究中的技術(shù)難 點(diǎn)。
對于細(xì)菌呼吸過程中質(zhì)子動(dòng)力的測定技術(shù)，在國際上基本有兩種方法。 一種是丫啶橙顯 色雙波長分光光度法測定pmf。這種方法的基本原理是根據(jù)丫啶橙在不同pH條件下光吸收的 最大波長的不同來指示體系中pH的變化，從而達(dá)到測定pm鵬目的。 一般采用的v4柳和^53o的 差值變化來表征在細(xì)菌呼吸過程的pm撤變化。這種方法對于那些在493nm或530nm有光吸收 的電子受體物質(zhì)則不適用。另一種方法是采用電極測試法直接測定pmf。上述兩種方法測定的 都是pm飾脈沖變化，即整個(gè)呼吸過程中H+被泵出細(xì)胞膜及回流的瞬時(shí)變化，不能準(zhǔn)確表征 能量的產(chǎn)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種快速、準(zhǔn)確、適用范圍廣的測定細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi) 外質(zhì)子動(dòng)力pmf的方法，從而表征細(xì)菌厭氧呼吸產(chǎn)生的能量。
本發(fā)明所述的測定細(xì)菌厭氧呼吸過程細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)的方法，主要利用脂溶 性的羧基試劑二環(huán)己基碳二亞胺DCCD與細(xì)胞膜上F0FrATP酶分子上的Fo蛋白亞基結(jié)合， 使H+無法回到細(xì)胞膜內(nèi)，在厭氧呼吸條件下，是通過控制DCCD的量，使所有F(^-ATP酶 分子上的Fo蛋白亞基都能結(jié)合上DCCD，使得電子傳遞產(chǎn)生的H+都滯留在膜外，測定此時(shí) 的pH變化即可準(zhǔn)確反應(yīng)細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)，從而表征細(xì)菌厭氧呼吸過程中產(chǎn)生的 ATP的量。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)
本發(fā)明所述的細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)的測定方法，包括以下步
驟
(a) 將待測細(xì)菌培養(yǎng)至穩(wěn)定生長期，收集菌體，去除培養(yǎng)基；
(b) 配置反應(yīng)液在M9緩沖液的基礎(chǔ)上添加待測細(xì)菌所需的單一電子供體和單一電子 受體，所述的M9緩沖液是含有5.7mmol/LNa2HP(V12H20， 3.3mmol/L KH2P04，
18.0mmol/L NH4C1的水溶液；
(c) 確定加入反應(yīng)液中DCCD的用量
分別在若干相同體積的(b)步驟配置的反應(yīng)液中加入不同劑量的二環(huán)己基碳 二亞胺DCCD，形成若干含有不同濃度DCCD的反應(yīng)液，使各反應(yīng)液的DCCD的 濃度呈一濃度梯度；在各反應(yīng)液中分別加入(a)步驟收集的菌體，使各反應(yīng)液中 的菌體濃度相同，在無氧條件下測定各反應(yīng)液的pH值變化，以pH值出現(xiàn)下降過 程最后趨于穩(wěn)定的反應(yīng)液的DCCD劑量為測試用量；
(d) 測定厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力
在(b)步驟配置的反應(yīng)液中加入(c)步驟測定的DCCD—種測試用量，所述 的反應(yīng)液的體積與(c)步驟中一種未加入DCCD的反應(yīng)液的體積相同，由此形成 測定反應(yīng)液，在該測定反應(yīng)液中加入(a)步驟的收集的菌體，使得菌體濃度與所 加入的該種DCCD測試用量的(c)步驟反應(yīng)液中的菌體濃度相同，在無氧條件下 測定反應(yīng)液的pH值變化，pH值出現(xiàn)降低過程直至穩(wěn)定不變，測定的pH變化值即 為細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力。 本發(fā)明所述的(d)步驟中在反應(yīng)液中加入的DCCD測試用量是(c)步驟中確定的各 DCCD測試用量中的最小劑量。
本發(fā)明還可以在所述的反應(yīng)液中添加單一碳源，礦質(zhì)元素和維生素，本發(fā)明還可根據(jù)細(xì)
5菌的具體生理特性添加必需的生長因子，可以保持細(xì)菌的生長。
本發(fā)明所述的單一碳源，礦質(zhì)元素，維生素以待測細(xì)菌常規(guī)需要的組份和含量即可。
本發(fā)明所述的單一電子供體，單一電子受體，可根據(jù)細(xì)菌的呼吸類型來選擇，其濃度選 擇以不影響細(xì)菌的存活為準(zhǔn)，并且電子供體提供電子的量等于或大于電子受體接受電子的量。
本發(fā)明所述的去除培養(yǎng)基是應(yīng)用0.8%生理鹽水進(jìn)行洗滌。
本發(fā)明可以選擇反應(yīng)液體積的10%的菌液收集的菌體。
本發(fā)明所述的礦質(zhì)元素的組份及含量可為1.0mmol/L MgS04、 0.5g/L MnS04、 0.1g/L ZnS04、 O.Olg/L CuS04、 O.Olg/L A1K(S04)、 l.Og/L NaCl、 0.1 g/L FeCl2、 0.1 g/L CaCl2和 CoCl20.1g/L。
本發(fā)明所述的維生素的組份及含量可為2mg/L生物素、2mg/L葉酸、10mg/L維生素 B6、 5 mg/L維生素B2、 5 mg/L維生素B1、 5 mg/L煙酸、5 mg/L泛酸、0.1 mg/L維生素 B12、 5 mg/L對氨基苯甲酸和5mg/L硫辛酸。
本發(fā)明所述的細(xì)菌可采用脫色希瓦氏菌S12，所述的單一碳源為琥珀酸鈉，終濃度為10 mmol/L，所述的單一電子供體為甲酸鈉，終濃度為10 mmol/L，單一電子受體檸檬酸鐵，終 濃度為lmmol/L或者單一電子受體為覓菜紅，其終濃度為0.1mmol/L。
本發(fā)明所述的細(xì)菌還可為大腸桿菌￡. co/!'DH5a ，所述的單一碳源為琥珀酸鈉，終濃度 為10mmol/L，所述的單一電子供體為甲酸鈉，終濃度為10mmol/L，單一電子受體檸檬酸鐵， 終濃度為lmmol/L。
本發(fā)明可以先將DCCD溶解于丙酮中,配fi含有DCCD的母液，然后再加入到反應(yīng)液中,
以方便使用。
本發(fā)明所述的DCCD測試用量以使所有FoFrAT:P酶分子上的Fc蛋白亞基都能結(jié)合上 DCCI:),其最小用量為恰好使所有FoFrAT:P酶分子上的F(.)蛋白亞基都能結(jié)合上DCCI:)，其最 大用量以不影響細(xì)菌的生存為界。
本發(fā)明所述的一種測定細(xì)菌厭氧呼吸過程細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)的方法，通過實(shí)驗(yàn) 證明本方法測定的細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)與現(xiàn)有技術(shù)如丫啶橙雙波長分光光度法測定的 結(jié)果或者理論分析結(jié)果是一致的，但是本發(fā)明不受電子受體是否在493nm或530nm具有光吸 收的影響，因此應(yīng)用范圍更廣，而且由于采用DCCD抑制了 H+的回流，測定的不是pmf的 脈沖變化，且本方法操作簡單，快速、準(zhǔn)確的測定細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)，表征細(xì)菌厭 氧呼吸產(chǎn)生的能量。


圖1是不同濃度DCCD條件下脫色希瓦氏菌S12厭氧鐵呼吸的pmf變化，其中1表示DCCD 濃度為0.01mol/L; 2表示DCCD濃度為0.0001mol/L; 3表示DCCD濃度為Omol/L; 圖2是0.01mol/LDCCD條件下使用丫啶橙雙波長分光光度法和本發(fā)明的方法測定的脫色希瓦 氏菌S12厭氧鐵呼吸的pmf變化，其中1是應(yīng)用本發(fā)明的方法測定的鐵呼吸的pmf變化，2 是丫啶橙雙波長分光光度法測定的鐵呼吸的pmf變化；
圖3是不同濃度DCCD條件下脫色希瓦氏菌S12厭氧偶氮呼吸的pmf變化，其中1表示DCCD
濃度為O.Olmol/L; 2表示DCCD濃度為Omol/L; 3表示DCCD濃度為0.0001mol/L;
圖4是大腸桿菌DH5 a和脫色希瓦氏菌S12的在DCCD為O.Olmol/L條件下測定的pmf變化，
其中1表示大腸桿菌DH5 a的pH值變化，2表示脫色希瓦氏菌S12的pH值變化；
圖5是O.Olmol/LDCCD條件下使用丫啶橙雙波長分光光度法和本發(fā)明的方法測定的大腸桿菌
DH5a厭氧鐵呼吸的pmf變化，其中I表示使用本發(fā)明的方法測定的厭氧鐵呼吸的pmf變化，
2表示使用丫啶橙雙波長分光光度法測定的厭氧鐵呼吸的pmf變化。
具體實(shí)施例方式
本實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步闡述，并不是對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1:脫色希瓦氏菌S12厭氧三價(jià)鐵呼吸pmf的測定
(1) 簡易厭氧裝置的設(shè)計(jì)
150mL具蓋試劑瓶，打出三個(gè)合適大小的氣孔，其中一個(gè)接進(jìn)氣管(進(jìn)氣管一段接入通 氣玻璃管，另一端接入氮?dú)夤薜臍鈮河?jì))， 一個(gè)插入排氣管(排氣管直接與大氣連接)，另外 一個(gè)插入pH電極。試劑瓶內(nèi)置反應(yīng)液，于30 35'C水浴搖床培養(yǎng)，整個(gè)反應(yīng)裝置可方便移動(dòng)。 反應(yīng)前試劑瓶內(nèi)液體需要鼓吹氮?dú)?0min上驅(qū)趕溶液中的溶解氧，充氣完畢立刻封閉進(jìn)氣管和 排氣管，使整個(gè)反應(yīng)體系保持近乎無氧狀態(tài)。
(2) 配置反應(yīng)液
(a) 配置M9緩沖液，使得其含有5.7mmol/LNa2HPCV12H20、 3.3mmol/LKH2P04和 18.0mmol/LNH4Cl，在M9緩沖液中加入甲酸鈉作為單一電子供體，終濃度為10mmol/L;檸 檬酸鐵作為單一電子受體，終濃度為lmmol/L，從而形成反應(yīng)液；
(b) 然后在反應(yīng)液中再加入琥珀酸鈉作為單一碳源，終濃度為10mmol/L，礦質(zhì)元素 和維生素，所述的礦質(zhì)元素的組份及含量(終濃度)為1.01mmol/LMgSO4、 0.5g/LMnSO4、 0.1g/LZnSO4、 0.01g/L CuS04、 O.Olg/L A1K(S04)、 L0g/LNaCl、 O.lg/L FeCl2、 O.lg/L CaCl2 和CoCl20.1g/L，所述的維生素組份及含量(終濃度)為2mg/L生物素、2mg/L葉酸、10 mg/L 維生素B6、 5 mg/L維生素B2、 5 mg/L維生素Bl、 5 mg/L煙酸、5 mg/L泛酸、0.1 mg/L維 生素B12、 5 mg/L對氨基苯甲酸和5mg/L硫辛酸。(3)確定反應(yīng)液中添加DCCD的合適用量
先將DCCD溶于丙酮中，本步驟加入的DCCD和丙酮，經(jīng)過測定分析不會(huì)引起反應(yīng)液 pH值的變化，然后分別在步驟(2)中的(b)小步驟配置的反應(yīng)液中加入二環(huán)己基碳二亞胺 DCCD，使得形成含有DCCD濃度分別為0mol/L， 0.0001 mol/L, 0.01mol/L的三種反應(yīng)液。 接種脫色希瓦氏菌S12于10mLLB液體培養(yǎng)基中，于200rpm， 30 35'C搖床培養(yǎng)14小時(shí)左 右，使細(xì)菌剛剛進(jìn)入穩(wěn)定生長期。9000xg離心15min收集菌體，使用0.8%NaCl的生理鹽水 洗滌兩次，去除殘留培養(yǎng)基，菌體最后重懸于lmL0.8WNaCl的生理鹽水并接入100mL的上 述配置的含有O.Ol mol/LDCCD的反應(yīng)液(含有其余兩種濃度DCCD的測定方法同于本測定) 的試劑瓶中，置于30 35'C水浴搖床中，旋緊三孔膠塞蓋，鼓吹氮?dú)?0min以后封閉進(jìn)氣管 和排氣管，使得測定體系內(nèi)保持無氧環(huán)境。由此刻開始，每隔5min記錄一次pH變化，每次 測定前先搖勻試劑瓶內(nèi)反應(yīng)液以保證pH電極感應(yīng)的均一性。
其測定結(jié)果如圖1所示，由圖1可見0.0001mol/L的DCCD沒有完全抑制FoF,-ATP酶的 活性，pH沒有發(fā)生降低變化。當(dāng)使用0.01mol/L的DCCD時(shí)，隨著脫色希瓦氏菌S12鐵呼吸 的進(jìn)行，三價(jià)鐵隨之還原成二價(jià)鐵，溶液淺黃色褪去，隨之溶液中的pH也逐漸降低，說明 鐵呼吸電子傳遞產(chǎn)生的H+由于DCCD抑制了 FoF,-ATP酶活性而無法回流到細(xì)胞膜內(nèi)，從而 引起溶液pH的降低，因此0.01mol/L的DCCD可以完全抑制細(xì)菌膜上的F化-ATP酶活性， 選定0.01mol/L的DCCD為本實(shí)驗(yàn)的測試用量。 (3)測定細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)
在步驟(2)中的(b)小步驟配置的反應(yīng)液中加入DCCD，其終濃度為0.01mol/L，由此 配置的液體為測定反應(yīng)液。
接種脫色希瓦氏菌S12于10mLLB液體培養(yǎng)基中，于200rpm， 30 35'C搖床培養(yǎng)14小 時(shí)左右，使細(xì)菌剛剛進(jìn)入穩(wěn)定生長期。9000xg離心15min收集菌體，使用0.8%NaCl的生理 鹽水洗滌兩次，去除殘留培養(yǎng)基，菌體最后重懸于lmL0.8XNaCl的生理鹽水并接入100mL 的本步驟配置的含有0.01mol/LDCCD的測定反應(yīng)液中，試劑瓶置于30 35'C水浴搖床中， 旋緊三孔膠塞，鼓吹氮?dú)?0min以后封閉進(jìn)氣管和排氣管。由此刻開始，每隔5min記錄一次 pH變化，每次測定前先搖勻試劑瓶內(nèi)反應(yīng)液以保證pH電極感應(yīng)的均一性，其測定結(jié)果如圖 2所示，其測定的pH差值為0.077，而由丫啶橙雙波長分光光度法測定pmf為0.076，該方法 與使用丫啶橙雙波長分光光度法測定pmf的結(jié)果相同。
實(shí)施例2:脫色希瓦氏菌S12厭氧偶氮呼吸pmf的測定
本實(shí)施同實(shí)施例l，只是將莧菜紅作為單一電子受體，其終濃度為0.1mmol/L。本次測定結(jié)果如圖3所示，pH差值為0.034。
理論上lmmol/L的檸檬酸鐵作為末端電子受體時(shí)產(chǎn)生的氫離子濃度是以0.1mmol/L克菜 紅作為電子受體時(shí)產(chǎn)生的氫離子的2.5倍，實(shí)施例l測定pH差值為0.077，實(shí)施例2測定的pH差 值為0.034，兩者接近2.5倍，與理論值基本相符合。
實(shí)施例3:大腸桿菌DH5 a厭氧三價(jià)鐵呼吸pmf的測定
本實(shí)施例基本同于實(shí)施例1,只是待測菌為大腸桿菌DH5 a ，首先配置與實(shí)施例l步驟 (2)中的(b)小歩驟配置的一樣的反應(yīng)液，然后在反應(yīng)液中加入DCCD,使得形成含有DCCD 濃度分別為Omol/L， 0.0001 mol/L, 0.01mol/L的三種反應(yīng)液，接入到上述反應(yīng)液的菌體體積 同樣為反應(yīng)液體積的10%的穩(wěn)定生長期的菌液收集的菌體，經(jīng)過測定能完全抑制細(xì)菌膜上的 F必-ATP酶活性的反應(yīng)液中DCCD的濃度為0.01mol/L，因此本實(shí)施例的測定反應(yīng)液同實(shí)施 例1的測定反應(yīng)液，測定大腸桿菌DH5a細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力(pmf)的測定方法也同于實(shí) 施例1的步驟(3)，只是以大腸桿菌DH5a為待測細(xì)菌。
本次測定結(jié)果如圖4所示，pH差值為0.082，而用丫啶橙雙波長分光光度法測定pmf為 0.080,該方法與使用丫啶橙雙波長分光光度法測定pmf的結(jié)果相同，其結(jié)果見于圖5。
權(quán)利要求
1. 一種細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力的測定方法，其特征在于包括以下步驟(a)將待測細(xì)菌培養(yǎng)至穩(wěn)定生長期，收集菌體，去除培養(yǎng)基；(b)配置反應(yīng)液在M9緩沖液的基礎(chǔ)上添加待測細(xì)菌所需的單一電子供體和單一電子受體，所述的M9緩沖液是含有5.7mmol/L Na2HPO4·12H2O，3.3mmol/L KH2PO4，18.0mmol/L NH4Cl的水溶液；(c)確定加入反應(yīng)液中DCCD的用量分別在若干相同體積的(b)步驟配置的反應(yīng)液中加入不同劑量的二環(huán)己基碳二亞胺DCCD，形成若干含有不同濃度DCCD的反應(yīng)液，使各反應(yīng)液的DCCD的濃度呈一濃度梯度；在各反應(yīng)液中分別加入(a)步驟收集的菌體，使各反應(yīng)液中的菌體濃度相同，在無氧條件下測定各反應(yīng)液的pH值變化，以pH值出現(xiàn)下降過程最后趨于穩(wěn)定的反應(yīng)液的DCCD劑量為測試用量；(d)測定厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力在(b)步驟配置的反應(yīng)液中加入(c)步驟測定的DCCD一種測試用量，所述的反應(yīng)液的體積與(c)步驟中一種未加入DCCD的反應(yīng)液的體積相同，由此形成測定反應(yīng)液，在該測定反應(yīng)液中加入(a)步驟的收集的菌體，使得菌體濃度與所加入的該種DCCD測試用量的(c)步驟反應(yīng)液中的菌體濃度相同，在無氧條件下測定反應(yīng)液的pH值變化，pH值出現(xiàn)降低過程直至穩(wěn)定不變，測定的pH變化值即為細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于(d)步驟中在反應(yīng)液中加入的DCCD測試用量是(c)步驟中確定的各DCCD測試用量中的最小劑量。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于在所述的反應(yīng)液中添加單一碳源，礦質(zhì)元素和維生素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于步驟(a)中所述的去除培養(yǎng)基是應(yīng)用0.8%生理鹽水洗滌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于在(c)步驟和(d)步驟中加入到反應(yīng)液中的所述的菌體量為占反應(yīng)液體積10%的菌液收集的菌體。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的測定方法，其特征在于所述的礦質(zhì)元素的組份及含量為l.Olmmol/LMgS04、 0.5g/LMnSO4、 0.1g/LZnSO4、 O.Olg/L CuS04、 0.01g/LA1K(S04)、 1.0g/LNaCl、0.1 g/L FeCl2、 0.1 g/L CaCl2禾卩CoCl20.1g/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的測定方法，其特征在于所述的維生素的組份及含量為2mg/L生物素、2mg/L葉酸、10mg/L維生素B6、 5 mg/L維生素B2、 5 mg/L維生素B1、 5 mg/L煙 酸、5mg/L泛酸、0.1mg/L維生素B12、 5 mg/L對氨基苯甲酸和5mg/L硫辛酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的測定方法，其特征在于所述的待測細(xì)菌為脫色希瓦氏菌S12， 所述的單一碳源為琥珀酸鈉，終濃度為1Ommol/L，所述的單一電子供體為甲酸鈉，終濃 度為10 mmol/L，單一電子受體檸檬酸鐵，終濃度為lmmol/L或者單一電子受體為覓菜 紅，其終濃度為0.1mmol/L。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的測定方法，其特征在于所述的待測細(xì)菌為大腸桿菌DH5a， 所述的單一碳源為琥珀酸鈉，終濃度為10mmol/L，所述的單一電子供體為甲酸鈉，終濃 度為10mmol/L，單一電子受體擰檬酸鐵，終濃度為lmmol/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力的測定方法，旨在提供一種快速、準(zhǔn)確、適用范圍廣的測定細(xì)菌厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力pmf的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟將待測細(xì)菌培養(yǎng)至穩(wěn)定生長期，收集菌體，去除培養(yǎng)基；配置反應(yīng)液；確定加入反應(yīng)液中DCCD的用量；測定厭氧呼吸過程中細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力。本發(fā)明用于環(huán)境修復(fù)和治理中。本發(fā)明主要用于測定細(xì)菌厭氧呼吸過程細(xì)菌膜內(nèi)外質(zhì)子動(dòng)力，從而表征細(xì)菌厭氧呼吸的產(chǎn)能。
文檔編號C12Q1/02GK101475978SQ20091003670
公開日2009年7月8日 申請日期2009年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者孫國萍, 許玫英, 陳杏娟 申請人:廣東省微生物研究所