專利名稱：一種用于殯葬的人類dna保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因?qū)W、DNA儲(chǔ)存、新型殯葬創(chuàng)新領(lǐng)域，更具體是涉 及一種用于殯葬的人類DNA保存方法。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)殯葬祭奠方式存在諸多弊端，主要有
第一，浪費(fèi)嚴(yán)重。據(jù)專家測(cè)算，全國(guó)每年民間用于冥品的花費(fèi)約 30億元。這還僅指燒化祭品等普通殯葬祭奠的花費(fèi)，若把近幾年日 漸流行的為祖先修墳立碑等特殊殯葬祭奠的花費(fèi)也計(jì)算在內(nèi)，其數(shù)目 就更是驚人。
第二，污染環(huán)境。按傳統(tǒng)殯葬祭奠方式進(jìn)行殯葬祭奠時(shí)，要焚燒 大量紙錢、冥鈔、錫箔、花圈等，造成煙霧繚繞，嚴(yán)重污染環(huán)境。城 市居民死后焚化的骨灰大多集中存放在骨灰堂中，故每天都有到骨灰 堂前燒紙殯葬祭奠的，使骨灰堂周圍經(jīng)常處在煙霧繚繞之中。遇到清 明及農(nóng)歷"十一"這兩個(gè)通行祭日，則不僅骨灰堂附近煙霧騰騰，煙 味剌鼻，而且市區(qū)的人行道上、十字路邊，也都是到處點(diǎn)火，處處冒 煙。
第三，極易釀成火災(zāi)。按傳統(tǒng)殯葬祭奠方式進(jìn)行殯葬祭奠時(shí)，其 焚燒祭品的行為在冬春季節(jié)極易釀成火災(zāi)。第四，修墳立碑占用耕地，影響耕作。近年來日漸興起的為祖先 修墳立碑的殯葬祭奠方式，不僅占用大量耕地，而且給耕作帶來很大 不便，尤其林立的石碑嚴(yán)重影響機(jī)械化耕作。
第五，強(qiáng)化和宣揚(yáng)了迷信思想，造成精神污染。傳統(tǒng)殯葬祭奠方 式是基于死后有靈，在陰間仍需花費(fèi)的迷信思想而設(shè)置的，其殯葬祭 奠行為都帶有嚴(yán)重的迷信色彩，因而殯葬祭奠時(shí)便會(huì)形成濃厚的迷信 氛圍，從而強(qiáng)化和宣揚(yáng)了迷信思想，造成精神污染。
殯葬祭奠方面存在的這些弊端，為殯葬方式改革提出了緊迫任 務(wù)。這便是革除愚昧迷信、污染環(huán)境且浪費(fèi)嚴(yán)重的傳統(tǒng)殯葬祭奠方 式，樹立科學(xué)、文明、衛(wèi)生、環(huán)保且又節(jié)儉樸素的新型殯葬祭奠方式。 為實(shí)現(xiàn)這一任務(wù)，改革中需堅(jiān)持興利除弊的原則， 一方面革除傳統(tǒng)殯 葬祭奠方式中的上述種種消極因素，另一方面則要保留其敬祖尊先、 提倡孝道等有利于精神文明建設(shè)的合理性因素，但最關(guān)鍵的是要盡快 探索出新型的殯葬祭奠方式以代替舊的殯葬祭奠方式。
DNA (Deoxyribonucleic acid)，即脫氧核糖核酸，又稱去氧核 糖核酸。人類DNA存在于所有有核細(xì)胞的細(xì)胞核中，其分子結(jié)構(gòu)為雙 螺旋形，由30億個(gè)堿基對(duì)組成，分子量約1011kd。主要組成成分是 腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸和胸腺嘧 啶脫氧核苷酸。DNA是人類的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)。生物體親子之間的相似 性和繼承性即遺傳信息都貯存在DNA分子中。基因是酒A分子上具有 遺傳效應(yīng)的功能片斷，它是生命的密碼，記錄和傳遞著生命的遺傳信 息。DNA保存是一種保存生命信息的生物科學(xué)技術(shù)。通過采集細(xì)胞樣 本、DNA提取、DNA質(zhì)量檢測(cè)，可以將人類DNA在常溫密閉和液氮深 低溫狀態(tài)下保存起來。液氮深低溫狀態(tài)下的DNA在理論上可以永遠(yuǎn)保 持其生物完整性。
DNA保存不同于普通象征意義的骨灰、靈位或墓地，DNA蘊(yùn)含著 親人一生完整的生命信息，是親人生命的延續(xù)，具有重大的保存價(jià)值 與紀(jì)念意義。也不同于普通記錄意義的"姓名式家譜"，保存親人DNA 就等于留下了一本"基因家譜"，記載了一個(gè)家族重要的基因歷史， 以備未來之需。遺傳學(xué)研究確定，很多家族遺傳病要經(jīng)過數(shù)代才顯現(xiàn) 出來。子孫后代通過査閱"基因家譜"，可以進(jìn)行基因比對(duì)，從而更 好地診斷和治療家族中存在的遺傳疾病。保存的DNA可以作為一份珍 貴的模板，將來用于后代的基因治療，為后世子孫徹底擺脫惡性腫瘤 等有遺傳傾向的疾病提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。保存的DNA在未來處理身份鑒 定時(shí)也會(huì)起到精確界定的作用。親人去世后，DNA如不及時(shí)保存將會(huì) 永久性滅失，將永遠(yuǎn)失去保存的機(jī)會(huì)。保存親人的DNA也是活著的人 對(duì)逝去親人表達(dá)親情的最有意義的方式。
DNA保存不會(huì)造成資源浪費(fèi)、環(huán)境污染和火災(zāi)，不占用耕地，科 技含量高，對(duì)于我國(guó)國(guó)家人類生物資源的保護(hù)具有戰(zhàn)略性意義，有利 于我國(guó)人民群眾的精神文明建設(shè)，具有科學(xué)、文明、衛(wèi)生、環(huán)保且又 節(jié)儉樸素的利國(guó)利民的重大意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)我國(guó)當(dāng)前傳統(tǒng)殯葬祭奠方式存在的種種弊端，提供一種用于殯葬的人類DNA保存的方法。
本發(fā)明采取了如下的技術(shù)方案
一種用于殯葬的人類DNA保存的方法，包括如下技術(shù)步驟
一. 口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢；
二. DNA提取;
三. DNA質(zhì)量檢測(cè)；
四. DNA儲(chǔ)存。
上述技術(shù)方案中，口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢步驟包括如下的 分步驟
(1) 樣本采集者為樣本提供者采集細(xì)胞樣本(樣本采集者可由 公司專業(yè)的服務(wù)人員或?yàn)闃颖咎峁┱呒覍?；樣本采集者先在樣品采 樣袋上寫好樣本編號(hào)、樣本提供者姓名及采集日期。字跡書寫需清晰， 不留空格；
(2) 采樣前，樣本采集者在采樣前需徹底洗凈雙手，擦干后， 戴好一次性PE手套(薄塑料消毒手套)；
(3) 沿采集袋右側(cè)虛線剪開(或整齊撕開)采集袋封口，手拿 采樣刷尾端后1/3處，取出采樣刷(避免手或其他部位觸及采樣刷前 端毛刷處，以避免污染)；
(4 )將采樣刷前端毛刷部分伸入樣本提供者口腔內(nèi) 一側(cè)內(nèi)頰黏 膜部按前、后、上、下方向輕輕旋轉(zhuǎn)或摩擦10次，換至另一側(cè)內(nèi)頰 部重復(fù)前述操作，取出采樣刷；
(5)采樣完成，將采樣刷自然晾干后，將采樣刷放入采樣袋內(nèi)；(6) 取另一根采樣刷進(jìn)行同一供者的樣本采集(重復(fù)上述第(4)、
(5)步驟)；
(7) 將采樣袋封口內(nèi)側(cè)預(yù)放的貼有雙面膠的折頁翻出，撕下雙 面膠膠貼，將采樣袋開口處粘貼牢靠；
(8) 由樣本采集員負(fù)責(zé)妥善保管含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋， 在不超過35'C的運(yùn)輸溫度下，立即送達(dá)基因檢測(cè)中心；由樣本提供 者家屬采集樣本的，將含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋放入快遞信封，按 注明地址快遞到基因檢測(cè)中心。
上述技術(shù)方案中，DNA提取步驟包括如下的分步驟
(1) DNA提取在GMP無菌條件下進(jìn)行；將刮取口腔粘膜上皮細(xì) 胞的兩支采樣刷的刷頭分別浸入含lml生理鹽水的1. 5ml印pendorf 管15min后，輕輕攪動(dòng).使刷頭上粘附的細(xì)胞落人生理鹽水中；然后 再把采樣刷浸入含lml生理鹽水的1. 5ml印pendorf管再輕輕攪動(dòng)， 10000r/min離心lmin，棄上清；
(2) 重復(fù)步驟(1);
(3) 兩管細(xì)胞并入一管內(nèi)，并加入300 u 1 TE和蛋白酶K溶液(終 濃度為200ug/ml)，混勻后置56'C消化1小時(shí)(振蕩)；加入1/4體積 的5mol/LNaCl溶液，用力搖動(dòng)15秒后置于4°C 15-20分鐘13000r /min離心3分鐘；
(4) 移上清液于另一 1. 5ml印pendorf管中；加入2. 5倍體積 無水乙醇(預(yù)冷)，混勻，置-2(TClh， 13000r/min離心10分鐘，棄 上清；(5) 沉淀用lml70。/。乙醇洗滌2次，室溫干燥；
(6) DNA溶于50y 1TE溶液中QOmmoI/LTr is-cl， 0. lmmol/L EDTA， pH 8. 0)。
上述技術(shù)方案中，DNA質(zhì)量檢測(cè)包括如下的分步驟
(1) 分光光度計(jì)使用前預(yù)熱穩(wěn)定至少15分鐘，先用100ulTE 校正零點(diǎn)；
(2) 吸取lulDNA樣品，加TE至100ul混勻，轉(zhuǎn)入分光光度 計(jì)的石英比色杯中，在260nm和280nm分別讀出光密度，根據(jù)0D260 值計(jì)算DNA樣品濃度；高純度DNA要求在260/280，介于1.8-2.0。
上述技術(shù)方案中，DNA儲(chǔ)存包括如下保存方式
1. DNA常溫防降解密閉保存；
2. DNA液氮深低溫保存。
其中，DNA常溫防降解密閉保存包括如下技術(shù)步驟
(1) 盛放DNA的水晶管孔經(jīng)超聲波洗滌，再高溫滅菌烘干后備 用。盛放DNA的水晶管孔設(shè)計(jì)為深色以防止紫外線照射。水晶紀(jì)念品 其余部分提前按照其家屬意愿將去世親人的個(gè)人資料(文字及圖片 等)合成入水晶紀(jì)念品中；
(2) 將含有DNA溶液100 u 1注入個(gè)性化水晶紀(jì)念品的密封管孔 內(nèi)，液面達(dá)到管孔頂端，采用真空泵將空氣抽成真空防止氧化，采用 水晶膠將其密封。
DNA液氮深低溫保存包括如下的技術(shù)步驟 (1) DNA的液氮深低溫保存將存放有基因的凍存管放入凍存盒，將凍存盒放入凍存架，將凍存架放入盛有液氮的液氮罐；液氮罐 在使用前必須認(rèn)真進(jìn)行檢查；首先要檢査外殼有無凹陷，真空排氣口 是否完好，若被碰壞，真空度則降低，嚴(yán)重進(jìn)氣時(shí)則不能保溫。檢查 罐內(nèi)部，若有異物必須取出以防內(nèi)槽被腐蝕。
(2) 液氮的監(jiān)測(cè)與充填24小時(shí)全天候自動(dòng)監(jiān)測(cè)液氮罐相關(guān)參 數(shù)，及時(shí)補(bǔ)充液氮。開關(guān)時(shí)要盡量減少蓋塞磨損；補(bǔ)充液氮時(shí)先打開 門窗；對(duì)于新罐、已解凍復(fù)溫及處于干燥狀態(tài)的罐在使用前先充入少 量液氮預(yù)冷，需緩慢進(jìn)行裝填，直至近熱平衡(氣化不劇烈)后再注 滿液氮；充填液氮時(shí)，不要將液氮倒在真空排氣口上，以免造成真空 度下降。充裝液氮時(shí)，宜用泵或長(zhǎng)管漏斗，其充注管要插至接近容器 底部，并須在容器中部留有空隙。注入容器內(nèi)的液面高度不能超過頸 管下端平面。操作中應(yīng)避免人體與液氮接觸，以免引起凍傷。操作及 取放冷凍物品時(shí)要輕拿輕放；
(3) 液氮罐的檢查和維護(hù)液氮罐在使用過程中要經(jīng)常進(jìn)行檢 查。檢査時(shí)可以用眼觀，也可以用手觸摸外殼，發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)當(dāng) 停止使用，更換新罐。特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時(shí)應(yīng)將液氮取出，讓 其自然溶化。在容器初次入冷凍物品后的2 3個(gè)小時(shí)，落實(shí)專人定 時(shí)觀察容器外表面是否出現(xiàn)冷凝水或有結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí) 及時(shí)維修或更換液氮罐。容器如需清洗，先用中性洗滌劑洗刷，再用
不高于50 x:的溫水沖洗干凈。洗后應(yīng)使用內(nèi)膽干燥(采用熱風(fēng)吹干，
其溫度不高于50 °C)并冷卻至常溫后，再充入液氮。容器應(yīng)放在陰 涼、通風(fēng)、干燥的環(huán)境中；長(zhǎng)期貯存時(shí)應(yīng)注意定時(shí)檢查液面和容器外表面有無冷凝水和結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí)及時(shí)維修或更換液氮
(4) 液氮罐的貯存與運(yùn)輸液氮罐應(yīng)當(dāng)存放在通風(fēng)良好的陰涼 處，不要在太陽光下直曬，防止傾倒。液氮罐在運(yùn)輸時(shí)必須裝木架在 內(nèi)并墊好軟墊，要固定牢靠。罐與罐之間要用填充物，防止顛簸撞擊， 嚴(yán)防傾倒。裝御車要嚴(yán)防碰撞，禁止拖拉；
(5) 檢測(cè)中心填寫《DNA質(zhì)量報(bào)告單》并及時(shí)反饋給儲(chǔ)戶家屬。
(6) 檢測(cè)中心每年按時(shí)(儲(chǔ)存日期的次年同日，以后以此類推) 根據(jù)實(shí)際的DNA儲(chǔ)存情況向儲(chǔ)戶提供一次《基因儲(chǔ)存質(zhì)控樣本檢測(cè)報(bào) 告》。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
經(jīng)過國(guó)內(nèi)外知名基因?qū)W專家共同研究、本發(fā)明設(shè)計(jì)出了用于殯葬
祭奠的人類DNA保存方法，為去世的人提供個(gè)性化的DNA儲(chǔ)存服務(wù)， 為去世的人保存一生完整的生命信息，為其親屬建立家族基因型譜 系，記載了該家族重要的基因歷史，用于未來其子孫后代基因比對(duì)和 基因治療，為后世子孫徹底擺脫惡性腫瘤等有遺傳傾向的疾病提供了 物質(zhì)基礎(chǔ)。保存的DNA在未來處理身份鑒定時(shí)也會(huì)起到精確界定的作 用。親人去世后，DNA如不及時(shí)保存將會(huì)永久性滅失，將永遠(yuǎn)失去保 存的機(jī)會(huì)。保存親人的DNA也是活著的人對(duì)逝去親人表達(dá)親情的最有 意義的方式。DNA保存不會(huì)造成資源浪費(fèi)、環(huán)境污染和火災(zāi)，不占用 耕地，科技含量高，對(duì)于我國(guó)國(guó)家人類生物資源的保護(hù)具有戰(zhàn)略性意 義，有利于我國(guó)人民群眾的精神文明建設(shè)，具有科學(xué)、文明、衛(wèi)生、環(huán)保且又節(jié)儉樸素的利國(guó)利民的重大意義。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明所要求 保護(hù)的范圍并不局限于實(shí)施方式所描述之范圍。
實(shí)施例1
提供一種用于殯葬的人類DNA保存的方法，包括如下技術(shù)步驟
1. 口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢
1.1.1樣本采集者為樣本提供者采集細(xì)胞樣本(樣本采集者可由 公司專業(yè)的服務(wù)人員或?yàn)闃颖咎峁┱呒覍?。樣本采集者先在樣品采 樣袋上寫好樣本編號(hào)、樣本提供者姓名及采集日期。字跡書寫需清晰， 不留空格。
1.1.2采樣前，樣本采集者在采樣前需徹底洗凈雙手，擦干后， 戴好一次性PE手套(薄塑料消毒手套)。
1. 1. 3沿采集袋右側(cè)虛線剪開(或整齊撕開)采集袋封口，手拿 采樣刷尾端后1/3處，取出采樣刷(避免手或其他部位觸及采樣刷前 端毛刷處，以避免污染)。
1. 1. 4將采樣刷前端毛刷部分伸入樣本提供者口腔內(nèi)一側(cè)內(nèi)頰黏 膜部按前、后、上、下方向輕輕旋轉(zhuǎn)或摩擦10次，換至另一側(cè)內(nèi)頰 部重復(fù)前述操作，取出采樣刷。
1.1.5采樣完成，將采樣刷自然晾干后，將采樣刷放入采樣袋內(nèi)。
1. 1. 6取另一根采樣刷進(jìn)行同一供者的樣本采集(重復(fù)上述第4、 5步驟)。1.1.7將采樣袋封口內(nèi)側(cè)預(yù)放的貼有雙面膠的折頁翻出，撕下雙
面膠膠貼，將采樣袋開口處粘貼牢靠。
1. 1. 8由樣本采集員負(fù)責(zé)妥善保管含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋，
在不超過35。C的運(yùn)輸溫度下，立即送達(dá)基因檢測(cè)中心。由樣本提供
者家屬采集樣本的，將含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋放入快遞信封，按 注明地址快遞到基因檢測(cè)中心。
2. DNA提取
2. 1DNA提取在GMP無菌條件下進(jìn)行。將刮取口腔粘膜上皮細(xì)胞 的兩支采樣刷的刷頭分別浸入含lml生理鹽水的1. 5ml印pendorf管 15min后，輕輕攪動(dòng).使刷頭上粘附的細(xì)胞落人生理鹽水中。然后再 把采樣刷浸入含lml生理鹽水的1.5ml印pendorf管再輕輕攪動(dòng)， 10000r/min離心lmin，棄上清。
2.2重復(fù)步驟1。
2. 3兩管細(xì)胞并入一管內(nèi)，并加入300 p 1 TE和蛋白酶K溶液(終 濃度為200ug/ml)，混勻后置56"C消化1小時(shí)(振蕩)。加入1/4體積 的5mol/LNaCl溶液，用力搖動(dòng)15秒后置于4°C 15-20分鐘13000r /min離心3分鐘。
2. 4移上清液于另一 1. 5ml印pendorf管中。加入2. 5倍體積無 水乙醇(預(yù)冷)，混勻.置-20。Clh。 13000r/min離心10分鐘，棄上 清。
2.5沉淀用lml 70%乙醇洗滌2次，室溫干燥。
2.6DNA溶于50p1TE溶液中(10mmoI/LTr is-cl， 0. lmmol/LEDTA， pH 8. 0)
3. DNA質(zhì)量檢測(cè)
3. 1分光光度計(jì)使用前預(yù)熱穩(wěn)定至少15分鐘，先用100 u 1TE校
正零點(diǎn)。
3.2吸取lulDNA樣品，加TE至100ul混勻，轉(zhuǎn)入分光光度計(jì) 的石英比色杯中，在260nm和280nm分別讀出光密度，根據(jù)OD260值 計(jì)算DNA樣品濃度。[計(jì)算公式DNA樣品濃度(ug/m1^ 0D260X50 XDNA稀釋倍數(shù)，DNA樣品純度二0D260/0D280]。高純度DNA要求在 260/280，介于1.8-2.0。
4. DNA儲(chǔ)存
4. 1DNA常溫防降解密閉保存；
4. 1. 1盛放DNA的水晶管孔經(jīng)超聲波洗滌，再高溫滅菌烘干后備 用。盛放DNA的水晶管孔設(shè)計(jì)為深色以防止紫外線照射。水晶紀(jì)念品 其余部分提前按照其家屬意愿將去世親人的個(gè)人資料(文字及圖片 等)合成入水晶紀(jì)念品中。
4. 1. 2將含有DNA溶液100 u 1注入個(gè)性化水晶紀(jì)念品的密封管 孔內(nèi)，液面達(dá)到管孔頂端，采用真空泵將空氣抽成真空防止氧化，采 用水晶膠將其密封。
4. 2DNA液氮深低溫保存
4.2. 1DNA的液氮深低溫保存將存放有基因的凍存管放入凍存 盒，將凍存盒放入凍存架，將凍存架放入盛有液氮的液氮罐。液氮罐 在使用前必須認(rèn)真進(jìn)行檢査。首先要檢査外殼有無凹陷，真空排氣口是否完好，若被碰壞，真空度則降低，嚴(yán)重進(jìn)氣時(shí)則不能保溫。檢查 罐內(nèi)部，若有異物必須取出以防內(nèi)槽被腐蝕。
4. 2. 2液氮的監(jiān)測(cè)與充填24小時(shí)全天候自動(dòng)監(jiān)測(cè)液氮罐相關(guān)參數(shù)，
及時(shí)補(bǔ)充液氮。開關(guān)時(shí)要盡量減少蓋塞磨損。補(bǔ)充液氮時(shí)先打開門窗。 對(duì)于新罐、已解凍復(fù)溫及處于干燥狀態(tài)的罐在使用前先充入少量液氮 預(yù)冷，需緩慢進(jìn)行裝填，直至近熱平衡(氣化不劇烈)后再注滿液氮。 充填液氮時(shí)，不要將液氮倒在真空排氣口上，以免造成真空度下降。 充裝液氮時(shí)，宜用泵或長(zhǎng)管漏斗，其充注管要插至接近容器底部，并 須在容器中部留有空隙。注入容器內(nèi)的液面高度不能超過頸管下端平 面。操作中應(yīng)避免人體與液氮接觸，以免引起凍傷。操作及取放冷凍 物品時(shí)要輕拿輕放。
4. 2. 3液氮罐的檢査和維護(hù)液氮罐在使用過程中要經(jīng)常進(jìn)行檢
査。檢查時(shí)可以用眼觀，也可以用手觸摸外殼，發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)當(dāng) 停止使用，更換新罐。特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時(shí)應(yīng)將液氮取出，讓
其自然溶化。在容器初次入冷凍物品后的2 3個(gè)小時(shí)，落實(shí)專人定
時(shí)觀察容器外表面是否出現(xiàn)冷凝水或有結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí) 及時(shí)維修或更換液氮罐。容器如需清洗，先用中性洗滌劑洗刷，再用
不高于50 "C的溫水沖洗干凈。洗后應(yīng)使用內(nèi)膽干燥(采用熱風(fēng)吹干， 其溫度不高于50 °C)并冷卻至常溫后，再充入液氮。容器應(yīng)放在陰 涼、通風(fēng)、干燥的環(huán)境中；長(zhǎng)期貯存時(shí)應(yīng)注意定時(shí)檢査液面和容器外 表面有無冷凝水和結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí)及時(shí)維修或更換液氮 罐。4. 2. 4液氮罐的貯存與運(yùn)輸液氮罐應(yīng)當(dāng)存放在通風(fēng)良好的陰涼 處，不要在太陽光下直曬，防止傾倒。液氮罐在運(yùn)輸時(shí)必須裝木架在 內(nèi)并墊好軟墊，要固定牢靠。罐與罐之間要用填充物，防止顛簸撞擊， 嚴(yán)防傾倒。裝御車要嚴(yán)防碰撞，禁止拖拉。
4. 2. 5檢測(cè)中心填寫《DNA質(zhì)量報(bào)告單》并及時(shí)反饋給儲(chǔ)戶家屬。 4. 2. 6檢測(cè)中心每年按時(shí)(儲(chǔ)存日期的次年同日，以后以此類推)
根據(jù)實(shí)際的DNA儲(chǔ)存情況向儲(chǔ)戶提供一次《基因儲(chǔ)存質(zhì)控樣本檢測(cè)報(bào)告》。
權(quán)利要求
1.一種用于殯葬的人類DNA保存的方法，其特征在于包括如下技術(shù)步驟(一)口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢；(二)DNA提?。?三)DNA質(zhì)量檢測(cè)；(四)DNA儲(chǔ)存。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法，其特征在于口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢步驟包括如下的分步驟(1) 樣本采集者為樣本提供者采集細(xì)胞樣本；樣本采集者先在 樣品采樣袋上寫好樣本編號(hào)、樣本提供者姓名及采集日期；字跡書寫 需清晰，不留空格；(2) 采樣前，樣本采集者在采樣前需徹底洗凈雙手，擦干后， 戴好一次性PE手套；(3) 沿采集袋右側(cè)虛線剪開采集袋封口，手拿采樣刷尾端后1/3 處，取出采樣刷；(4 )將采樣刷前端毛刷部分伸入樣本提供者口腔內(nèi) 一側(cè)內(nèi)頰黏 膜部按前、后、上、下方向輕輕旋轉(zhuǎn)或摩擦10次，換至另一側(cè)內(nèi)頰 部重復(fù)前述操作，取出采樣刷；(5) 采樣完成，將采樣刷自然晾干后，將采樣刷放入采樣袋內(nèi)；(6) 取另一根采樣刷進(jìn)行同一供者的樣本采集；(7) 將采樣袋封口內(nèi)側(cè)預(yù)放的貼有雙面膠的折頁翻出，撕下雙面膠膠貼，將采樣袋開口處粘貼牢靠；(8) 由樣本采集員負(fù)責(zé)妥善保管含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋， 在不超過35X:的運(yùn)輸溫度下，立即送達(dá)基因檢測(cè)中心；由樣本提供 者家屬采集樣本的，將含有相應(yīng)供者細(xì)胞的采樣袋放入快遞信封，按 注明地址快遞到基因檢測(cè)中心。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法， 其特征在于DNA提取步驟包括如下的分步驟(1) DNA提取在GMP無菌條件下進(jìn)行；將刮取口腔粘膜上皮細(xì) 胞的兩支采樣刷的刷頭分別浸入含lml生理鹽水的1. 5ml印pendorf 管15min后，輕輕攪動(dòng)，使刷頭上粘附的細(xì)胞落人生理鹽水中；然后 再把采樣刷浸入含lml生理鹽水的1. 5ml印pendorf管再輕輕攪動(dòng)， 10000r / min離心lmin，棄上清；(2) 重復(fù)步驟(1);(3) 兩管細(xì)胞并入一管內(nèi)，并加入300iilTE和蛋白酶K溶液， 混勻后置56"C消化1小時(shí)；加入1/4體積的5mol/L NaCl溶液，用 力搖動(dòng)15秒后置于4。C 15-20分鐘13000r/min離心3分鐘；(4) 移上清液于另一1.5ml印pendorf管中；加入2. 5倍體積 無水乙醇，混勻，置-20°Clh， 13000r/min離心IO分鐘，棄上清；(5) 沉淀用lml70。/。乙醇洗滌2次，室溫干燥；(6) DNA溶于50ulTE溶液中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法，其特征在于DNA質(zhì)量檢測(cè)包括如下的分步驟(1) 分光光度計(jì)使用前預(yù)熱穩(wěn)定至少15分鐘，先用lOOy 1TE 校正零點(diǎn)；(2) 吸取lulDNA樣品，加TE至100ul混勻，轉(zhuǎn)入分光光度 計(jì)的石英比色杯中，在260nm和280nm分別讀出光密度，根據(jù)0D260 值計(jì)算DNA樣品濃度；高純度DNA要求在260/280，介于1.8-2.0。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法， 其特征在于DNA儲(chǔ)存包括如下保存方式(1) DNA常溫防降解密閉保存；(2) DNA液氮深低溫保存。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法， 其特征在于DNA常溫防降解密閉保存包括如下技術(shù)步驟(1) 盛放DNA的水晶管孔經(jīng)超聲波洗滌，再高溫滅菌烘干后備 用；盛放DNA的水晶管孔設(shè)計(jì)為深色以防止紫外線照射；水晶紀(jì)念品 其余部分提前按照其家屬意愿將去世親人的個(gè)人資料合成入水晶紀(jì) 念品中；(2) 將含有DNA溶液100u 1注入個(gè)性化水晶紀(jì)念品的密封管孔 內(nèi)，液面達(dá)到管孔頂端，采用真空泵將空氣抽成真空防止氧化，采用 水晶膠將其密封。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于殯葬的人類DNA保存的方法， 其特征在于DNA液氮深低溫保存包括如下的技術(shù)步驟-(1) DNA的液氮深低溫保存將存放有基因的凍存管放入凍存盒，將凍存盒放入凍存架，將凍存架放入盛有液氮的液氮罐；液氮罐 在使用前必須認(rèn)真進(jìn)行檢査；首先要檢查外殼有無凹陷，真空排氣口 是否完好，若被碰壞，真空度則降低，嚴(yán)重進(jìn)氣時(shí)則不能保溫；檢查 罐內(nèi)部，若有異物必須取出以防內(nèi)槽被腐蝕；(2) 液氮的監(jiān)測(cè)與充填24小時(shí)全天候自動(dòng)監(jiān)測(cè)液氮罐相關(guān)參 數(shù)，及時(shí)補(bǔ)充液氮；開關(guān)時(shí)要盡量減少蓋塞磨損；補(bǔ)充液氮時(shí)先打開 門窗；對(duì)于新罐、己解凍復(fù)溫及處于干燥狀態(tài)的罐在使用前先充入少 量液氮預(yù)冷，需緩慢進(jìn)行裝填，直至近熱平衡后再注滿液氮；充填液 氮時(shí)，不要將液氮倒在真空排氣口上，以免造成真空度下降。充裝液 氮時(shí)，宜用泵或長(zhǎng)管漏斗，其充注管要插至接近容器底部，并須在容 器中部留有空隙；注入容器內(nèi)的液面高度不能超過頸管下端平面；操 作中應(yīng)避免人體與液氮接觸，以免引起凍傷；操作及取放冷凍物品時(shí) 要輕拿輕放；(3) 液氮罐的檢查和維護(hù)液氮罐在使用過程中要經(jīng)常進(jìn)行檢 査。檢査時(shí)可以用眼觀，也可以用手觸摸外殼，發(fā)現(xiàn)外表掛霜，應(yīng)當(dāng) 停止使用，更換新罐；特別是頸管內(nèi)壁附霜結(jié)冰時(shí)應(yīng)將液氮取出，讓 其自然溶化；在容器初次入冷凍物品后的2 3個(gè)小時(shí)，落實(shí)專人定 時(shí)觀察容器外表面是否出現(xiàn)冷凝水或有結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí) 及時(shí)維修或更換液氮罐；容器如需清洗，先用中性洗滌劑洗刷，再用 不高于50 °C的溫水沖洗干凈;洗后應(yīng)使用內(nèi)膽干燥并冷卻至常溫后， 再充入液氮；容器應(yīng)放在陰涼、通風(fēng)、干燥的環(huán)境中；長(zhǎng)期貯存時(shí)應(yīng) 注意定時(shí)檢査液面和容器外表面有無冷凝水和結(jié)霜現(xiàn)象，如出現(xiàn)異常情況時(shí)及時(shí)維修或更換液氮罐；(4) 液氮罐的貯存與運(yùn)輸液氮罐應(yīng)當(dāng)存放在通風(fēng)良好的陰涼 處，不要在太陽光下直曬，防止傾倒；液氮罐在運(yùn)輸時(shí)必須裝木架在 內(nèi)并墊好軟墊，要固定牢靠。罐與罐之間要用填充物，防止顛簸撞擊， 嚴(yán)防傾倒；裝御車要嚴(yán)防碰撞，禁止拖拉；(5) 檢測(cè)中心填寫《DNA質(zhì)量報(bào)告單》并及時(shí)反饋給儲(chǔ)戶家屬；(6) 檢測(cè)中心每年按時(shí)(儲(chǔ)存日期的次年同日，以后以此類推) 根據(jù)實(shí)際的DNA儲(chǔ)存情況向儲(chǔ)戶提供一次《基因儲(chǔ)存質(zhì)控樣本檢測(cè)報(bào) 告》。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于殯葬的人類DNA保存方法。本發(fā)明包括如下技術(shù)步驟(一)口腔粘膜上皮細(xì)胞采樣與送檢；(二)DNA提?。?三)DNA質(zhì)量檢測(cè)；(四)DNA儲(chǔ)存。經(jīng)過國(guó)內(nèi)外知名基因?qū)W專家共同研究、本發(fā)明設(shè)計(jì)出了用于殯葬祭奠的人類DNA保存方法，為去世的人提供個(gè)性化的DNA儲(chǔ)存服務(wù)，為去世的人保存一生完整的生命信息，為其親屬建立家族基因型譜系，記載了該家族重要的基因歷史，用于未來其子孫后代基因比對(duì)和基因治療，為后世子孫徹底擺脫惡性腫瘤等有遺傳傾向的疾病提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N15/10GK101525613SQ20091003881
公開日2009年9月9日 申請(qǐng)日期2009年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日
發(fā)明者敏 陸 申請(qǐng)人:敏 陸