專利名稱：兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料及其制作工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)中的微生物學(xué)科領(lǐng)域，其產(chǎn)品開發(fā)屬于益生菌健 康食品、飲料專業(yè)。
背景技術(shù)：
半個(gè)世紀(jì)以來，抗生素和疫苗作為對(duì)抗各種病原微生物的主要手段，
但MRSA、 VRE等各種較強(qiáng)耐藥性菌的出現(xiàn)，人類已經(jīng)已經(jīng)意識(shí)到抗生 素療法的局限性和不良后果。Fullerl989年提出益生菌，2002年FAO和 WHO確定益生菌的概念和效果。之后短短10年世界人類衛(wèi)生健康領(lǐng)域發(fā) 生了巨大變化，益生素、益生元的研究和產(chǎn)品開發(fā)成為了潮流。益生菌的 使用表現(xiàn)在醫(yī)藥治療用藥、液態(tài)口服使用、沖劑、膠囊，以及添加到其它 食品和藥品中共同使用等多種形式。該領(lǐng)域的研發(fā)、生產(chǎn)目前在乳酸菌、 雙歧桿菌的研究和應(yīng)用方面尤其突出。這方面的產(chǎn)品有傳統(tǒng)的酸奶、以及 新開發(fā)的各種酸奶，乳酸飲料、各種單和復(fù)合菌保健品、食品，還有用于 治療腸道疾病的益生菌制劑。1930年，日本京都帝國大學(xué)微生物教研室 的代田稔博士，成功地分離出來自人體腸道的乳酸桿菌，并倡導(dǎo)和實(shí)踐健 腸長壽開始乳酸菌市場(chǎng)七十多年歷久不衰，消費(fèi)者對(duì)乳酸菌有著充分的認(rèn) 知。資料顯示，近十年來，日本的乳酸菌飲料市場(chǎng)每年的銷售量都在60 億美元以上。例如使用到中國的Fancl、 Yakult產(chǎn)品。
目前液態(tài)益生菌飲料在市場(chǎng)上有酸奶、發(fā)酵植物奶(如酸豆奶、乳酸 菌果汁)、滅活菌飲料、以及部分相關(guān)的乳酸飲料。但活菌飲料都是同時(shí) 含有大量培養(yǎng)基或輔料的不透明液態(tài)，另外保質(zhì)期一般不到一個(gè)月，要求低溫保存，如酸奶、養(yǎng)樂多等。為此，如何制作一種含活菌、比較耐保存 的液體乳酸菌軟飲料，以改善人體消化、提高免疫力已成為人們急需解決 的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決現(xiàn)有技術(shù)之不足而提供的一種菌種的培 養(yǎng)條件要求不苛刻，發(fā)酵性能穩(wěn)定，發(fā)酵過程設(shè)備投資小，而且培養(yǎng)基簡(jiǎn) 單、便宜、容易獲得，用量很少，沒有幾乎不產(chǎn)生廢料的兩株乳酸菌為基 礎(chǔ)的益生菌軟飲料配方。
本發(fā)明的另一目的是提供一種兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的 制作工藝。
本發(fā)明是采用如下技術(shù)解決方案來實(shí)現(xiàn)上述目的 一種兩株乳酸菌為 基礎(chǔ)的益生菌軟飲料，其特征在于它含有植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的兩
個(gè)菌株Lactobaecillus plantrums SMB陽2 CGMCC No 2566、 Lactobacillus fermenti CMS-H002,其保藏號(hào)為CCTCC No. M206110;其飲料的成分 配方按重量百分比算包括水98.5%~99%，乳酸0.8%~1.5%，乙酸鈉0.3%。 ~0.6%。，檸檬酸銨0.6%。~0.9%)，磷酸氫二鈉0.6%。~0.9%o，硫酸鎂0.5%。 ~0.6。%。和余量的蔗糖和大豆蛋白。
作為上述方案的進(jìn)一步說明，所述植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的含量為 cfii》3Xl()7個(gè)/ml。
一種兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作工藝，其特征在于，它
包括如下步驟
a、準(zhǔn)備培養(yǎng)基材料以及制備Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑，以每100 克大豆，洗凈，浸泡7 9小時(shí)，取出放入豆?jié){機(jī)中，制作成去渣豆?jié){1000ml,放在干凈的容器中，加熱至沸騰，冷卻備用；
b、 菌種活化培養(yǎng)將兩菌種分別接種到兩個(gè)斜面MRS培養(yǎng)基，在培 養(yǎng)箱40士2。C，培養(yǎng)48小時(shí)，得到擴(kuò)大培養(yǎng)所需菌種；
c、 擴(kuò)大培養(yǎng)、生產(chǎn)發(fā)酵，以發(fā)酵槽內(nèi)三級(jí)靜態(tài)深層液體發(fā)酵為基礎(chǔ)， 每級(jí)發(fā)酵時(shí)間40 50小時(shí)，發(fā)酵溫度40±2°C，最后一級(jí)發(fā)酵所得菌液 經(jīng)沉淀、過濾、檢驗(yàn)后包裝成產(chǎn)品。
在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)過程中，在一升的三角瓶中，加入冷卻 的豆?jié){，占液體培養(yǎng)基1 3% (v/v)、 0.4 0.69&蔗糖(w/v)、 Runfor乳 酸菌培養(yǎng)基增效劑2 4%。(w/v)，制作1000ml培養(yǎng)基，在無菌的條件下 等量接種兩個(gè)菌種，搖勻后放置于培養(yǎng)箱中40士2。C溫度條件下，靜止發(fā) 酵45 50小時(shí)；生產(chǎn)發(fā)酵過程中，按所述擴(kuò)大培養(yǎng)同樣的方法，在200 升的培養(yǎng)槽中，配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將擴(kuò)大培養(yǎng)母液，按體積以2%的接種 量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40±2°C，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)， PH降到3 — 3.5之間，即可終止發(fā)酵。
在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)過程中，在一升的三角瓶中加入蔗糖 1 3(w/v)、 Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑5 7^(w/v)，以冷卻的豆?jié){加 滿至1000ml培養(yǎng)基，在無菌的條件下等量接種兩個(gè)菌種，搖勻后放置于 培養(yǎng)箱中40士2'C溫度條件下，靜止發(fā)酵48小時(shí)；生產(chǎn)發(fā)酵過程中，在 200升的培養(yǎng)槽中，以純凈水和所述擴(kuò)大培養(yǎng)過程得到的完全接種液配制 生產(chǎn)培養(yǎng)液，將擴(kuò)大培養(yǎng)母液，按體積以4%的接種量，接種，攪拌均勻， 控制發(fā)酵溫度40士2-C，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，PH降到3 — 3.5之間，即 終止發(fā)酵。
在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)后，以豆?jié){結(jié)晶粉加入蔗糖2 4%(w/w)， Runfor培養(yǎng)基增效劑0.5%。 (w/w)，攪拌菌勻，在H0 120。C 滅菌箱中，滅菌65 80分鐘，取出冷卻，倒入培養(yǎng)基重量的18 22%的 母液和干培養(yǎng)基重量的18 22%的水，攪拌均勻，倒入消毒滅菌好的發(fā) 酵桶中，密閉保溫發(fā)酵，40士2-C溫度條件下，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，然 后取出在40 5(TC的真空干燥機(jī)中干燥到水分10%以下，粉碎、包裝得 到生產(chǎn)發(fā)酵用接種劑干粉；在發(fā)酵過程，以所述擴(kuò)大培養(yǎng)同樣的方法，在 200升的培養(yǎng)槽中，配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將接種劑干粉，按重量比以1%的 接種量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40±2°C，靜止發(fā)酵45 50小 時(shí)，PH降到3—3.5之間，即終止發(fā)酵。
在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)后，以豆?jié){結(jié)晶粉加入蔗糖2 4%
(w/w)， Runfor培養(yǎng)基增效劑0. 5%。 (w/w)，攪拌菌勻，在H0 120。C 滅菌箱中，滅菌65 80分鐘，取出冷卻，倒入培養(yǎng)基重量的18 22%的 母液和干培養(yǎng)基重量的18 22%的水，攪拌均勻，倒入消毒滅菌好的發(fā) 酵桶中，密閉保溫發(fā)酵，40士2'C溫度條件下，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，然 后取出在40 5(TC的真空干燥機(jī)中干燥到水分10%以下，粉碎、包裝得 到生產(chǎn)發(fā)酵用接種劑干粉；生產(chǎn)發(fā)酵以固體培養(yǎng)接種劑作為完全培養(yǎng)物， 發(fā)酵生產(chǎn)活菌飲料，其方法為在200升的培養(yǎng)槽中，以純凈水和固體培養(yǎng) 完全接種劑配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將上步所得的接種劑干粉，按重量比以2 4%的接種量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40土2-C，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，PH降到3 — 3. 5之間，即終止發(fā)酵。
在所述工藝步驟c的沉淀、過濾、檢驗(yàn)過程中，將經(jīng)過發(fā)酵的發(fā)酵液， 在靜止沉淀的狀態(tài)下，吸取上清液，棄置沉淀渣子，上清液用550目的過 濾器，，過濾，檢驗(yàn)，得到乳酸菌飲料，裝瓶保存。本發(fā)明采用上述技術(shù)解決方案所能達(dá)到的有益效果是
1、 本發(fā)明設(shè)計(jì)了一個(gè)含植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌兩個(gè)菌株的保健飲 料配方，并設(shè)計(jì)了一套制作工藝，四個(gè)實(shí)用不同條件的工藝方案，以三級(jí) 靜態(tài)深層液體發(fā)酵、每級(jí)發(fā)酵時(shí)間48小時(shí)，發(fā)酵溫度40±2°C，最后一 級(jí)發(fā)酵所得菌液經(jīng)沉淀過濾即可包裝成產(chǎn)品，該加工工藝操作簡(jiǎn)便。生產(chǎn) 的產(chǎn)品為無色、清亮透明液體、略有發(fā)酵氣味、PH為2.5—4.5,保質(zhì)期 不低于兩個(gè)月，保質(zhì)期內(nèi)的兩菌種活菌總數(shù)cfU不低于3X 107個(gè)/1111。
2、 本發(fā)明選擇的兩個(gè)菌種，培養(yǎng)條件要求不苛刻，從溫度10-45。C都 能有效繁殖；發(fā)酵性能穩(wěn)定，擴(kuò)大培養(yǎng)液，連續(xù)8個(gè)月產(chǎn)酸、發(fā)酵，性能 都沒有明顯衰減；
3、 擴(kuò)大和生產(chǎn)用培養(yǎng)基一樣，簡(jiǎn)單、便宜、容易獲得，用量很少， 沒有幾乎不產(chǎn)生廢料。
4、 發(fā)酵過程采用發(fā)酵槽、深層、靜止發(fā)酵，不需要攪拌，由于工藝 過程的特點(diǎn)，過程設(shè)備投資??；其產(chǎn)品在常溫下就能保存2個(gè)月以上，而 同類產(chǎn)品卻要求低溫條件保質(zhì)期僅為一周。
具體實(shí)施例方式
如圖l、圖2所示，本發(fā)明的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料，使 用的益生菌是植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的兩個(gè)菌株Lactobaccillus plant證s SMB畫2 CGMCC No 2566、 Lactobacillus fermenti CMS陽膽2， 其保藏號(hào)為CCTCCNo. M206110,含量cfU》3X 1()7個(gè)/ml，其飲料的成 分配方按重量百分比算包括水98.5%~99%，乳酸0.8%~1.5%，乙酸鈉 0.3%)~0.6%。，檸檬酸銨0.6%0~0.9%>，磷酸氫二鈉0.6%。~0.9%。，硫酸鎂0.5%。 ~0.6%。和微量的蔗糖和大豆蛋白。種子培養(yǎng)基為普通的MRS培養(yǎng)基，擴(kuò)大發(fā)酵和生產(chǎn)培養(yǎng)基為大豆豆?jié){2%、 0.5%蔗糖、Runfor乳酸菌培養(yǎng)基 增效劑3%。(含有乙酸鈉、檸檬酸鞍、硫酸鎂等)。其中，Runfor乳酸菌 培養(yǎng)基增效劑配方為乙酸鈉20%、檸檬酸銨30%，磷酸氫二鈉30%， 硫酸鎂20%，以上成份均以無結(jié)晶水的純品為基礎(chǔ)。
本發(fā)明的工藝為發(fā)酵槽三級(jí)靜態(tài)深層發(fā)酵為基礎(chǔ)；40±2°C， 48小時(shí)。 發(fā)酵工藝以三步靜態(tài)發(fā)酵為基礎(chǔ)，依據(jù)不同的生產(chǎn)條件，提出了四個(gè)實(shí)施 工藝方案 實(shí)施例1
三步液體發(fā)酵
1培養(yǎng)基材料準(zhǔn)備
大豆豆?jié){準(zhǔn)備以100克大豆，洗凈，浸泡8小時(shí)，取出放入豆?jié){機(jī) 中，制作去渣豆?jié){1000ml，放在干凈的容器中，加熱至沸騰，冷卻備用。 Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑制備
準(zhǔn)備食品級(jí)、80目粉末狀的無水乙酸鈉、無水檸檬酸銨、無水磷酸 氫二鈉、無水硫酸鎂。
稱取乙酸鈉200克、檸檬酸銨300克，磷酸氫二鈉300克，硫酸鎂 200克混合即成為復(fù)合礦物鹽，裝瓶備用。
液體培養(yǎng)的用水以自來水經(jīng)直飲機(jī)超濾過濾，將水中的雜質(zhì)、細(xì)菌 過濾，經(jīng)檢驗(yàn)，過濾后的水已檢測(cè)不到細(xì)菌微生物。
2菌種活化培養(yǎng)將兩菌種分別接種到兩個(gè)斜面MRS培養(yǎng)基，在培 養(yǎng)箱40士2i:，培養(yǎng)48小時(shí)，得到擴(kuò)大培養(yǎng)所需菌種。
3擴(kuò)大培養(yǎng)在一升的三角瓶中，加入冷卻的豆?jié){，占液體培養(yǎng)基2% (v/v)、0.5。/。蔗糖(w/v)、Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑3%。(w/v)，制作1000ml培養(yǎng)基。在無菌的條件下等量接種兩個(gè)菌種，搖勻后放置于培養(yǎng)箱中40 士2。C溫度條件下，靜止發(fā)酵48小時(shí)。
所得培養(yǎng)液經(jīng)檢測(cè)，兩個(gè)菌都發(fā)酵生長良好，所得總菌濃度cfU為6 X10S個(gè)/ml， PH為3-3.5之間；剛開始發(fā)酵培養(yǎng)液為混濁均勻的黃色，PH 為6左右，3小時(shí)后，逐漸產(chǎn)生沉淀，上面變清；18個(gè)小時(shí)，PH降到4 一5之間，表明目標(biāo)菌正在繁殖、代謝產(chǎn)酸。
4生產(chǎn)發(fā)酵按擴(kuò)大培養(yǎng)同樣的方法，在200升的培養(yǎng)槽中，配制生 產(chǎn)培養(yǎng)液，將擴(kuò)大培養(yǎng)母液，按體積以2%的接種量，接種，攪拌均勻， 控制發(fā)酵溫度40'C， 48小時(shí)，PH降到3—3.5之間，即可終止發(fā)酵。
5沉淀、過濾上一步所得的發(fā)酵液，在靜止沉淀的狀態(tài)下，吸取上 清液，棄置沉淀渣子，上清液用550目的過濾器，過濾，得到透明、澄清 的最后乳酸菌飲料。味酸、略有發(fā)酵味，PH2.5—4.5之間，裝瓶保存。
6檢驗(yàn)在產(chǎn)品中取樣，稀釋處理，經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢可以看到大 量的兩個(gè)目標(biāo)菌， 一個(gè)是植物乳桿菌為短桿菌，發(fā)酵乳桿菌為長線狀桿菌。
取樣培養(yǎng)測(cè)得cfti〉5X10S個(gè)/ml，即可認(rèn)為合格，如未達(dá)到要求則要 補(bǔ)充培養(yǎng)基，以堿液中和酸，到5.5以上，繼續(xù)培養(yǎng)到合格含量。該產(chǎn)品 在室溫條件下保存2個(gè)月，不變質(zhì)，沒有明顯異味，保存兩個(gè)月時(shí)測(cè)得活 菌數(shù)cfU〉5Xl()7個(gè)/ml。 實(shí)施例2
生產(chǎn)發(fā)酵以濃縮液接種劑，作為完全培養(yǎng)物，生產(chǎn)活菌飲料 第1步、第2步與方案1相同；
第3步擴(kuò)大培養(yǎng)在一升的三角瓶中加入2。/。(w/v)蔗糖、Runfor乳酸 菌培養(yǎng)基增效劑6%<W/V)(含有乙酸鈉、檸檬酸鞍、硫酸鎂等)，以冷卻等量接種兩個(gè)菌種，搖勻 后放置于培養(yǎng)箱中40土2-C溫度條件下、靜止發(fā)酵48小時(shí)；
所得培養(yǎng)液經(jīng)檢測(cè)，兩個(gè)菌都發(fā)酵生長良好，所得總菌濃度cfii 〉108 個(gè)/ml， PH為3-3.5之間；剛開始發(fā)酵培養(yǎng)液為混濁均勻的黃色，PH為6 左右，略有沉淀產(chǎn)生；18個(gè)小時(shí)，PH降到4一5之間，表明目標(biāo)菌正在 繁殖、代謝產(chǎn)酸。搖勻，這樣就得到生產(chǎn)發(fā)酵以濃縮液接種劑。 實(shí)施例3
第三步為固體發(fā)酵的四步發(fā)酵法
1培養(yǎng)基材料準(zhǔn)備
大豆豆?jié){準(zhǔn)備以100克大豆，洗凈，浸泡8小時(shí)，取出放入豆?jié){機(jī) 中，制作去渣豆?jié){1000ml，放在干凈的容器中，加熱至沸騰，冷卻備用； Rimfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑制備
準(zhǔn)備食品級(jí)、80目粉末狀的無水乙酸鈉、無水檸檬酸銨、無水磷酸 氫二鈉、無水硫酸鎂。稱取乙酸鈉200克、檸檬酸銨300克，磷酸氫二鈉 300克，硫酸鎂200克混合即成為復(fù)合礦物鹽，裝瓶備用。
液體培養(yǎng)的用水以自來水經(jīng)直飲機(jī)超濾過濾，將水中的雜質(zhì)、細(xì)菌 過濾，經(jīng)檢驗(yàn)，過濾后的水已檢測(cè)不到細(xì)菌微生物。
2菌種活化培養(yǎng)將兩菌種分別接種到兩個(gè)斜面MRS培養(yǎng)基，在培 養(yǎng)箱40士2。C，培養(yǎng)48小時(shí)，得到擴(kuò)大培養(yǎng)所需菌種；
3擴(kuò)大培養(yǎng) 一升的三角瓶，按照加入冷卻的豆?jié){，占液體培養(yǎng)基 2% (v/v)、 0.5。/。(w/v)蔗糖、Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑3%。(w/v)，制作 1000ml液體培養(yǎng)基。在無菌的條件下等量接種兩個(gè)菌種，搖勻后放置于 培養(yǎng)箱中40士2-C溫度條件下、靜止發(fā)酵48小時(shí)。所得培養(yǎng)液經(jīng)檢測(cè)，兩個(gè)菌都發(fā)酵生長良好，所得總菌濃度cfU為6 Xl()S個(gè)/ml， PH為3-3.5之間；剛開始發(fā)酵培養(yǎng)液為混濁均勻的黃色，PH 為6左右，3小時(shí)后，逐漸產(chǎn)生沉淀，上面變清；18個(gè)小時(shí)，PH降到4 一5之間，表明目標(biāo)菌正在繁殖、代謝產(chǎn)酸。
4以豆槳結(jié)晶粉加入3% (w/w)蔗糖，0.5%。 (w/w)的Runfor培養(yǎng) 基增效劑，攪拌菌勻，在115"C滅菌箱中，滅菌70分鐘，取出冷卻，倒 入培養(yǎng)基重量的20%的母液和干培養(yǎng)基重量的20%的水，攪拌均勻，倒 入消毒滅菌好的發(fā)酵桶中，密閉保溫發(fā)酵，40士2。C溫度條件下，48小 時(shí)，然后取出在45-C的真空干燥機(jī)中干燥到水分10%以下，粉碎、包裝 得到生產(chǎn)發(fā)酵用接種劑干粉，顏色為黃色、有酸味的粉末；經(jīng)檢驗(yàn)，復(fù)合 菌含量cfU大于3 X 109個(gè)/克。
5生產(chǎn)發(fā)酵:按本方案中擴(kuò)大培養(yǎng)同樣的方法，在200升的培養(yǎng)槽中， 配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將上步所得的接種劑干粉，按重量比以1%的接種量， 接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度4(TC， 48小時(shí)，PH降到3—3.5之間， 即可終止發(fā)酵。
6沉淀、過濾上一步所得的發(fā)酵液，在靜止沉淀的狀態(tài)下，吸取上 清液，棄置沉淀渣子，上清液用550目的過濾器，過濾，得到透明、澄清 的最后乳酸菌飲料。味酸、略有發(fā)酵味，PH2.5—4.5之間。裝瓶保存。
7檢驗(yàn)在產(chǎn)品中取樣，稀釋處理，經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢可以看到大 量的兩個(gè)目標(biāo)菌， 一個(gè)是植物乳桿菌為短桿菌，發(fā)酵乳桿菌為長線狀桿菌。
取樣培養(yǎng)測(cè)得cfii〉5Xl()S個(gè)/ml，即可認(rèn)為合格，如未達(dá)到要求則要 補(bǔ)充培養(yǎng)基，以堿液中和酸，到5.5以上，繼續(xù)培養(yǎng)到合格含量。該產(chǎn)品 在室溫條件下保存2個(gè)月，不變質(zhì)，沒有明顯異味，保存兩個(gè)月時(shí)測(cè)得活菌數(shù)cfii〉5Xl()7個(gè)/ml。
此實(shí)例，由于中間產(chǎn)物是接種劑干粉，耐保存，便于運(yùn)輸、保存，有 利于擴(kuò)大培養(yǎng)和生產(chǎn)發(fā)酵不在一個(gè)地方或不在一個(gè)機(jī)構(gòu)的生產(chǎn)方式。 實(shí)施例4
生產(chǎn)發(fā)酵以固體培養(yǎng)接種劑作為完全培養(yǎng)物，發(fā)酵生產(chǎn)活菌飲料 此方案的第一、第二、第三、第四與方案3相同；
5生產(chǎn)發(fā)酵在200升的培養(yǎng)槽中，以潔凈水和固體培養(yǎng)完全接種劑 配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將上步所得的接種劑干粉，按重量比以3%的接種量， 接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度4(TC， 48小時(shí)，PH降到3—3.5之間， 即可終止發(fā)酵。
6沉淀、過濾上一步所得的發(fā)酵液，在靜止沉淀的狀態(tài)下，吸取上 清液，棄置沉淀渣子，上清液用550目的過濾器，過濾，得到透明、澄清 的最后乳酸菌飲料。味酸、略有發(fā)酵味，PH3—4之間，裝瓶保存。
7檢驗(yàn)在產(chǎn)品中取樣，稀釋處理，經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢可以看到大 量的兩個(gè)目標(biāo)菌， 一個(gè)是植物乳桿菌為短桿菌，發(fā)酵乳桿菌為長線狀桿菌。 取樣培養(yǎng)測(cè)得cfU〉5X10S個(gè)/ml，即可作為合格，如未達(dá)到要求則要補(bǔ)充 培養(yǎng)基，以堿液總和酸，到5.5以上，繼續(xù)培養(yǎng)到合格含量。該產(chǎn)品在室 溫條件下保存2個(gè)月，不變質(zhì)，沒有明顯異味，保存兩個(gè)月時(shí)測(cè)得活菌數(shù) cfb〉5X107個(gè)/ml。
此實(shí)例，由于中間產(chǎn)物是接種劑干粉，耐保存，便于運(yùn)輸、保存，有 利于擴(kuò)大培養(yǎng)和生產(chǎn)發(fā)酵不在一個(gè)地方或不在一個(gè)機(jī)構(gòu)的生產(chǎn)方式，這種 固體高濃度完全營養(yǎng)接種劑的使用，大大簡(jiǎn)化了生產(chǎn)發(fā)酵企業(yè)的工藝，以 及減少了設(shè)備的投入。以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)其限制；盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解。依然可以對(duì)發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行修改或者對(duì)部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案范圍當(dāng)中。
權(quán)利要求
1、一種兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料，其特征在于它含有植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的兩個(gè)活菌株，其飲料的成分配方按重量百分比算包括水98.5％～99％，乳酸0.8％～1.5％，乙酸鈉0.3‰～0.6‰，檸檬酸銨0.6‰～0.9‰，磷酸氫二鈉0.6‰～0.9‰，硫酸鎂0.5‰～0.6‰和余量的蔗糖和大豆蛋白。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料，其特 征在于所述植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的含量為cfii》9Xl(^個(gè)/ml。
3、 一種權(quán)利要求1或2所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的 制作工藝，其特征在于，它包括如下步驟a、 準(zhǔn)備培養(yǎng)基材料以及制備Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑，以每100 克大豆，洗凈，浸泡7 9小時(shí)，取出放入豆?jié){機(jī)中，制作成去渣豆?jié){ 1000ml，放在干凈的容器中，加熱至沸騰，冷卻備用；b、 菌種活化培養(yǎng)將兩菌種分別接種到兩個(gè)斜面MRS培養(yǎng)基，在培 養(yǎng)箱40士2i:，培養(yǎng)48小時(shí)，得到擴(kuò)大培養(yǎng)所需菌種；c、 擴(kuò)大培養(yǎng)、生產(chǎn)發(fā)酵，以發(fā)酵槽內(nèi)三級(jí)靜態(tài)深層液體發(fā)酵為基礎(chǔ)， 每級(jí)發(fā)酵時(shí)間40 50小時(shí)，發(fā)酵溫度40±2°C，最后一級(jí)發(fā)酵所得菌液 經(jīng)沉淀、過濾、檢驗(yàn)后包裝成產(chǎn)品。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作 工藝，其特征在于在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)過程中，在一升的三角 瓶中，加入冷卻的豆?jié){，占液體培養(yǎng)基l 3%(v/v)、0. 4 0. 6W蔗糖(w/v)、 Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑2 4%。(w/v)，制作1000ml培養(yǎng)基，在無菌 的條件下等量接種兩個(gè)菌種，搖勻后放置于培養(yǎng)箱中40土2。C溫度條件下，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)；生產(chǎn)發(fā)酵過程中，按所述擴(kuò)大培養(yǎng)同樣的方法， 在200升的培養(yǎng)槽中，配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將擴(kuò)大培養(yǎng)母液，按體積以2% 的接種量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40±2°C，靜止發(fā)酵45 50 小時(shí)，PH降到3—3.5之間，即可終止發(fā)酵。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作 工藝，其特征在于在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)過程中，在一升的三角 瓶中加入蔗糖1 3 (w/v)、 Runfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑5 7%。(w/v), 以冷卻的豆?jié){加滿至1000ml培養(yǎng)基，在無菌的條件下等量接種兩個(gè)菌種， 搖勻后放置于培養(yǎng)箱中40士2。C溫度條件下，靜止發(fā)酵48小時(shí)；生產(chǎn)發(fā) 酵過程中，在200升的培養(yǎng)槽中，以純凈水和所述擴(kuò)大培養(yǎng)過程得到的完 全接種液配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將擴(kuò)大培養(yǎng)母液，按體積以4%的接種量，接 種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40土2-C，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，PH降到 3—3.5之間，即終止發(fā)酵。
6、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作 工藝，其特征在于在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)后，以豆?jié){結(jié)晶粉加入 蔗糖2 4% (w/w)， Runfor培養(yǎng)基增效劑0. 5%。 (w/w)，攪拌菌勻，在 110 12(TC滅菌箱中，滅菌65 80分鐘，取出冷卻，倒入培養(yǎng)基重量的 18 22%的母液和干培養(yǎng)基重量的18 22%的水，攪拌均勻，倒入消毒 滅菌好的發(fā)酵桶中，密閉保溫發(fā)酵，40士2'C溫度條件下，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，然后取出在40 5(TC的真空干燥機(jī)中干燥到水分10X以下，粉 碎、包裝得到生產(chǎn)發(fā)酵用接種劑干粉；在發(fā)酵過程，以所述擴(kuò)大培養(yǎng)同樣 的方法，在200升的培養(yǎng)槽中，配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將接種劑干粉，按重量 比以1%的接種量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40士2。C，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，PH降到3 —3. 5之間，即終止發(fā)酵。
7、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作 工藝，其特征在于在所述工藝步驟c的擴(kuò)大培養(yǎng)后，以豆?jié){結(jié)晶粉加入 蔗糖2 4% (w/w)， Runfor培養(yǎng)基增效劑0. 5%。 (w/w)，攪拌菌勻，在 110 120'C滅菌箱中，滅菌65 80分鐘，取出冷卻，倒入培養(yǎng)基重量的 18 22%的母液和干培養(yǎng)基重量的18 22%的水，攪拌均勻，倒入消毒 滅菌好的發(fā)酵桶中，密閉保溫發(fā)酵，40士2r溫度條件下，靜止發(fā)酵45 50小時(shí)，然后取出在40 50匸的真空干燥機(jī)中干燥到水分10%以下，粉 碎、包裝得到生產(chǎn)發(fā)酵用接種劑干粉；生產(chǎn)發(fā)酵以固體培養(yǎng)接種劑作為完 全培養(yǎng)物，發(fā)酵生產(chǎn)活菌飲料，其方法為在200升的培養(yǎng)槽中，以純凈水 和固體培養(yǎng)完全接種劑配制生產(chǎn)培養(yǎng)液，將上步所得的接種劑干粉，按重 量比以2 4%的接種量，接種，攪拌均勻，控制發(fā)酵溫度40士2-C，靜止 發(fā)酵45 50小時(shí)，PH降到3—3.5之間，即終止發(fā)酵。
8、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料的制作 工藝，其特征在于在所述工藝步驟c的沉淀、過濾、檢驗(yàn)過程中，將經(jīng) 過發(fā)酵的發(fā)酵液，在靜止沉淀的狀態(tài)下，吸取上清液，棄置沉淀渣子，上 清液用550目的過濾器，過濾，檢驗(yàn)，得到乳酸菌飲料，裝瓶保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種兩株乳酸菌為基礎(chǔ)的益生菌軟飲料配方及其制作工藝，其特征在于，它以三級(jí)靜態(tài)深層液體發(fā)酵、每級(jí)發(fā)酵時(shí)間48小時(shí)，發(fā)酵溫度40±2℃，最后一級(jí)發(fā)酵所得菌液經(jīng)沉淀過濾即可包裝成產(chǎn)品；發(fā)酵試用種子培養(yǎng)基為普通的MSR培養(yǎng)基，擴(kuò)大發(fā)酵和生產(chǎn)液體發(fā)酵培養(yǎng)基為大豆豆?jié){2％、1.2％蔗糖、Rumfor乳酸菌培養(yǎng)基增效劑3‰(含有乙酸鈉、檸檬酸鞍、硫酸鎂等)。該加工工藝操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)的產(chǎn)品為無色、清亮透明液體、略有發(fā)酵氣味、pH為2.5-4.5，保質(zhì)期不低于兩個(gè)月，保質(zhì)期內(nèi)的兩菌種活菌總數(shù)cfu不低于3×10⁷個(gè)/ml。
文檔編號(hào)A23L2/38GK101637291SQ20091004186
公開日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者許民強(qiáng) 申請(qǐng)人:陳 斌