專利名稱：鑒別日本鰻鱺精子活力的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及水產養(yǎng)殖魚類精子活力檢測。
背景技術：
日本鰻鱺是優(yōu)良的水產養(yǎng)殖對象，也是出口創(chuàng)匯的當家品種，到目前為止，日本鰻 鱺的人工繁殖仍屬世界難題，獲得正常的、活力好的精子是成功實現其人工繁殖的前提條 件之一。在日本鰻鱺的人工繁殖過程中，都需要對親本進行催熟和催產處理，不同的催產 方法和藥物劑量都會對精子的活力產生較大影響，因此，客觀準確評價日本鰻鱺精子的活 力具有非常重要的理論意義與應用價值。在評價魚類精子活力時，目前主要有以下幾種方 法一、利用普通顯微鏡觀察記錄精子的活動狀況和運動時間，這種方法受人為因素的影響 較大，不能客觀反應精子的活動狀況；二、利用魚類精子直接開展受精試驗，統(tǒng)計受精率、孵 化率、出膜率等，這種方法受外界環(huán)境因子較多，且隨著不同魚類的早期發(fā)育時間的長短周 期有較大變化；三、用計算機輔助分析系統(tǒng)(CASA)分析精子的運動速率和運動距離等，這 種方法能客觀反應精子的活動情況，但儀器設備較為昂貴。

發(fā)明內容
本發(fā)明需要解決的技術問題是提供一種鑒別日本鰻鱺精子活力的方法。
本發(fā)明的技術方案配備試劑盒、紫外分光光度計，采集日本鰻鱺精子，其特征是 用試劑盒在紫外分光光度計下分別測定精子中總ATP酶、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物 歧化酶(S0D)和過氧化氫酶(CAT)的活性，精子中ATP酶的活性高于3. 14±0.61U/ml， LDH的活性高于2266. 67 ±313. 25U/L， SOD的活性高于220. 47 ±32. 94U/ml， CAT的活 性高于48. 51±5. 94U/ml，為精子活力較好；精子中ATP酶的活性介于1. 83±0. 43U/ml 和3. 14±0. 61U/ml之間，LDH的活性介于1195. 91 ±198. 51U/L和2266. 67±313. 25U/ L之間，SOD的活性介于84. 16±22. 11U/ml和220. 47±32. 94U/ml之間，CAT的活性介于 21.8±4. 14U/ml和48. 51±5. 94U/ml之間，為精子活力一般；精子中ATP酶的活性低于 1. 83±0. 43U/ml， LDH的活性低于1195. 91 ±198. 51U/L, SOD的活性低于84. 16±22. 11U/ ml， CAT的活性低于21. 8±4. 14U/ml，為精子活力差。 本發(fā)明的突出特點是研究了經過不同催產方法處理的日本鰻鱺精子，相關能量代 謝酶和抗氧化酶活性有較大變化，提供了鑒別精子中總ATP酶、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化 物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性的相應數據，并通過精子相關能量代謝酶活性檢 測，根據酶活性的高低鑒別日本鰻鱺精子的活力。運用這種方法鑒別日本鰻鱺精子活力較 為準確和客觀，鑒別率可達到98%以上。
具體實施例方式
在日本鰻鱺的繁殖季節(jié)，用不同的方法分別催產日本鰻鱺的精子，采集經不同催 產方法獲得的精子，每組取5尾魚精子，用試劑盒(按照南京建成生物工程研究所公開的該產品操作指導書進行)在紫外分光光度計下分別測定每組精子中總ATP酶、乳酸脫氫 酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活性，每個樣重復三次，結果取平 均值，運用統(tǒng)計軟件對結果進行分析處理，精子中ATP酶的平均活性高于3. 14士0.61U/ ml， LDH的平均活性高于2266. 67±313. 25U/L， SOD的平均活性高于220. 47±32. 94U/ml， CAT的平均活性高于48. 51±5. 94U/ml，為精子活力較好；精子中ATP酶的平均活性介于 1. 83±0. 43U/ml和3. 14±0. 61U/ml之間，LDH的平均活性介于1195. 91±198. 51U/L和 2266. 67±313. 25U/L之間，SOD的平均活性介于84. 16±22. 11U/ml和220. 47±32. 94U/ml 之間，CAT的平均活性介于21. 8±4. 14U/ml和48. 51 ±5. 94U/ml之間，則為精子活力一般; 精子中ATP酶的平均活性低于1. 83±0. 43U/ml， LDH的平均活性低于1195. 91 ±198. 51U/ L，S0D的平均活性低于84. 16±22. llU/ml， CAT的平均活性低于21. 8±4. 14U/ml，則為精子 活力差。
權利要求
鑒別日本鰻鱺精子活力的方法，配備試劑盒、紫外分光光度計，采集日本鰻鱺精子，其特征是用試劑盒在紫外分光光度計下分別測定精子中總ATP酶、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活性，精子中ATP酶的活性高于3.14±0.61U/ml，LDH的活性高于2266.67±313.25U/L，SOD的活性高于220.47±32.94U/ml，CAT的活性高于48.51±5.94U/ml，為精子活力較好；精子中ATP酶的活性介于1.83±0.43U/ml和3.14±0.61U/ml之間，LDH的活性介于1195.91±198.51U/L和2266.67±313.25U/L之間，SOD的活性介于84.16±22.11U/ml和220.47±32.94U/ml之間，CAT的活性介于21.8±4.14U/ml和48.51±5.94U/ml之間，為精子活力一般；精子中ATP酶的活性低于1.83±0.43U/ml，LDH的活性低于1195.91±198.51U/L，SOD的活性低于84.16±22.11U/ml，CAT的活性低于21.8±4.14U/ml，為精子活力差。
全文摘要
鑒別日本鰻鱺精子活力的方法，需要提供鑒別日本鰻鱺精子活力的方法，本發(fā)明配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是用試劑盒在紫外分光光度計下測定精子中相關能量代謝酶和抗氧化酶的活性，精子中ATP酶的活性高于3.14±0.61U/ml，LDH的活性高于2266.67±313.25U/L，SOD的活性高于220.47±32.94U/ml，CAT的活性高于48.51±5.94U/ml，為活力較好；精子中ATP酶的活性低于1.83±0.43U/ml，LDH的活性低于1195.91±198.51U/L，SOD的活性低于84.16±22.11U/ml，CAT的活性低于21.8±4.14U/ml，為活力差。
文檔編號C12Q1/00GK101776576SQ200910045179
公開日2010年7月14日 申請日期2009年1月12日 優(yōu)先權日2009年1月12日
發(fā)明者馮廣朋, 劉鑒毅, 莊平, 張濤, 江琪, 章龍珍, 趙峰, 閆文罡, 黃曉榮 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所