專利名稱：一種女性皮膚美容基因檢測芯片及其檢測方法
丨美容基因檢測芯片及其檢測方法 本發(fā)明涉及基因多態(tài)性檢測芯片，尤其涉及一種女性美容基因檢測芯片及其應(yīng)
背景技術(shù)：
各類 if
完全統(tǒng)計，2007
1滿目的美容化妝品和服務(wù)項目一直是眾多女性關(guān)注與消費(fèi)的焦點(diǎn)。據(jù)不 i中國美容業(yè)已成為繼住房、汽車、旅游后的第4大消費(fèi)熱點(diǎn)，美容服務(wù)業(yè)
,并間接拉動了數(shù)千億元的其它消費(fèi)。預(yù) 計未來5年內(nèi)，中國美容業(yè)經(jīng)濟(jì)年產(chǎn)值將超過5000億元。都市女性在美容方面的投入每年 可達(dá)數(shù)千元至上萬元,甚至幾十萬元。但是女性面對種類繁多、功能各異的美容化妝品和服 務(wù)，時常顯得無所適從，難以抉擇。由于個體差異的存在，相同的美容品對于不同女性的作 用效果不盡相同。這使得女性在使用各種美容化妝品或服務(wù)時常常遇到令人困擾的問題， 甚至威脅到身體健康。針對美容業(yè)的投訴和消費(fèi)糾紛也時常發(fā)生。如果引入基因檢測的技 術(shù)方法,則上述問題能夠迎刃而解?；驒z測能夠確定每個人不同的基因型,進(jìn)而確定其獨(dú) 特的體質(zhì)、膚質(zhì)等，在此基礎(chǔ)上為女性量身定做與眾不同的美容方案，科學(xué)合理地使用美容 產(chǎn)品，既達(dá)到了美容的效果又避免了危險的發(fā)生。在美容領(lǐng)域運(yùn)用基因檢測是一種經(jīng)濟(jì)、安 全、高效的方式,將會受到廣大女性的歡迎。本發(fā)明涉及的女性美容相關(guān)基因包括

運(yùn)用生物芯片技術(shù)對上述基因及突變位點(diǎn)進(jìn)行大規(guī)模高通量的檢測，能夠在短時 間內(nèi)迅速的得到各位點(diǎn)的基因型信息,其檢測結(jié)果可作為女性選擇合適美容產(chǎn)品和服務(wù)的 依據(jù)，量身制定與眾不同的美容方案，大大節(jié)省了時間和精力，并且避免不良反應(yīng)的發(fā)生， 同時也是個體化基因檢測的重要組成部分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種女性美容基因檢測芯片，能使女性了解自己 的身體特性，合理科學(xué)地選擇美容產(chǎn)品和服務(wù)。為此，本發(fā)明還要提供應(yīng)用該芯片檢測女性 美容相關(guān)基因多態(tài)性的方法。為了解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)在本發(fā)明的一個方面，提供了一種女性美容基因檢測芯片，包括固相載體和探針， 所述探針與待測的女性美容相關(guān)基因的核苷酸序列和/或其互補(bǔ)序列進(jìn)行雜交。本發(fā)明中所述固相載體可選用領(lǐng)域周知的載體，只要所述載體與所述反應(yīng)物相 容，不會影響檢測結(jié)果就可以。優(yōu)選的，本發(fā)明所述固相載體選材為玻片、硅片、硝酸纖維素 膜、尼龍膜和高分子材料中的一種或它們的任意組合。所述待測女性美容相關(guān)基因包括XRCCl、ERCCl、ERCC2、GPR44、EGRU CYSLTR1、 SODl、S0D2、BCL-2、TP53、KL, GSTPl、GSTMl、TNF 和 LEP 基因。所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其衍生物。所述探針的長度沒 有限制，只要能完成與目的核苷酸序列特異性結(jié)合。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對,最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補(bǔ)的長度以15-25個堿基對之間的為最佳。所述探針的自身互補(bǔ) 序列最好少于6個堿基對，以免影響雜交效率。本發(fā)明檢測芯片的探針為DNA,包括(1)與待測 XRCCl 基因雜交的(a) SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 2 所示序列，(b) SEQ IDNO 1 SEQ ID NO 2所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :1 SEQ IDNO 2所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(2)與待測 ERCCl 基因雜交的(a) SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 4 所示序列，(b) SEQ IDNO 2 SEQ ID NO 4所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 2 SEQ IDNO 4所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(3)與待測 ERCC2 基因雜交的(a) SEQ ID NO 5 SEQ ID NO 8 所示序列，(b) SEQ IDNO 5 SEQ ID NO 8所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 5 SEQ IDNO 8所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(4)與待測 GPR44 基因雜交的(a) SEQ ID NO :9 SEQ ID N0:10 所示序列，(b) SEQ IDNO :9 SEQ ID NO : 10所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :9 SEQ IDNO 1()所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(5)與待測 EGRl 基因雜交的(a) SEQ ID NO :11 SEQ ID NO 12 所示序列，(b) SEQ IDNO 11 SEQ ID NO 12所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO : 11 SEQID NO 12所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(6)與待測CYSLTR1基因雜交的仏仏已卩ID NO : 13 SEQ ID NO 14所示序列, (b) SEQ IDNO 13 SEQ ID NO 14所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 13 SEQID NO 14所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(7)與待測 SODl 基因雜交的(a) SEQ ID NO : 15 SEQ ID NO 16 所示序列，(b) SEQ IDNO 15 SEQ ID NO 16所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 15 SEQID NO 16所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(8)與待測 S0D2 基因雜交的(a) SEQ ID NO : 17 SEQ ID NO 18 所示序列，(b) SEQ IDNO 17 SEQ ID NO 18所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO: 17 SEQID NO 18所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(9)與待測 BCL-2 基因雜交的(a) SEQ ID NO 19 SEQ ID NO 22 所示序列，(b) SEQ IDNO 19 SEQ ID NO 22所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 19 SEQID NO 22所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(10)與待測 TP53 基因雜交的(a) SEQ ID NO 23 SEQ ID NO 26 所示序列，(b) SEQ IDN0:23 SEQ ID NO :26所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :23 SEQID NO 26所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(11)與待測 KL 基因雜交的(a) SEQ ID NO 27 SEQ ID NO 28 所示序列，(b) SEQ IDN0:27 SEQ ID NO :28所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :27 SEQID NO 28所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(12)與待測GSTPl基因雜交的(a) SEQ ID NO 29 SEQ ID N0:30所示序列， (b) SEQ IDNO 29 SEQ ID NO 30所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 29 SEQID NO 30所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(I3)與待測GSTMl基因雜交的(a) SEQ ID NO =3I SEQ ID NO:32所示序列， (b) SEQ IDNO 31 SEQ ID NO 32所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 31 SEQID NO :32所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(14)與待測 TNF基因雜交的(a) SEQ ID NO :33 SEQ ID NO :34所示序列，(b) SEQ IDNO 33 SEQ ID NO 34所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 33 SEQID NO 34所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列； (15)與待測 LEP 基因雜交的(a) SEQ ID NO 35 SEQ ID NO 86 所示序列，(b) SEQ IDN0:35 SEQ ID NO :36所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈,(c)與SEQ ID NO 35 SEQID NO 36所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；優(yōu)選的，本發(fā)明檢測芯片的探針選自SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 36所示序列。所述探針序列可包含1 10個錯配堿基,較佳地,可包含1 5個錯配堿基,更佳 地,可包含1 2個錯配堿基。本發(fā)明檢測芯片還包括至少一種對照探針，所述對照探針選自陰性對照探針、陽 性對照探針、雜交對照探針和固定化對照探針。所述探針可通過連接臂固定于固相載體上。連接臂可以為探針形成雙鏈的部分提 供--個自由的空間以減少空間位阻,有助于雜交反應(yīng)的進(jìn)行[Afanassiev V, Hanemann V, Wolfl S. Preparation of DNA and protein micro arrays on glass slides coated with an agarose film. Nucleic Acids Res, 2000, 28 :e66 ；USA Patent No. 5556752]。連接臂 越長,雜交效率越高。典型的連接臂包括15 30個功能基團(tuán)長度。連接臂可以選用適當(dāng) 形式的功能基團(tuán)，如Poly T(A、C或G)、C原子或聚乙烯乙二醇與Poly T(A、C或G)的嵌合 體、聚乙醇、聚酷、聚氨、聚硫酸酷和其組合物。所述探針或連接臂通過連接分子固定于固相載體上。探針固定到載體上可以通過 C-C鍵實現(xiàn),例如,聚三氟氯乙烯表面；或更好的用硅氧烷鍵(玻璃或二氧化硅作支持物時 使用)。硅氧烷鍵鍵合可以通過支持物和連接分子的三氯甲硅烷基或三烷氧基甲硅烷基等 基團(tuán)反應(yīng)完成。氨基烷基硅烷、輕基烷基硅烷、2-輕乙基一氨丙基三乙氧基硅烷、輕乙基一 氨丙基三乙氧基硅烷或輕丙基三乙氧基硅烷都是很有用的表面吸附基團(tuán)。所述探針可以被修飾，修飾方法可以是5，-NH2修飾、5，-SH修飾、5，-Poly T(A、C 或G)修飾、5’-生物素修飾、3’-NH2修飾、3’-SH修飾、3’-Poly 丁(八丄或6)修飾和3’-生 物素修飾等。所述探針可以有一條或幾條,甚至全部都是經(jīng)過標(biāo)記的，所述標(biāo)記包括熒光素標(biāo) 記、生物素標(biāo)記、放射性元素標(biāo)記、酶標(biāo)記和熒光共振能量轉(zhuǎn)移標(biāo)記。在本發(fā)明的另一方面,提供了一種應(yīng)用上述芯片對女性美容基因檢測的方法,包 括如下步驟(1)在固相載體表面點(diǎn)載與待測女性美容相關(guān)基因的核苷酸序列和/或其互補(bǔ)序 列進(jìn)行雜交的探針；(2)抽提待測樣品的核酸；(3)制備待測女性美容相關(guān)基因的目的核苷酸序列；(4)標(biāo)記步驟⑶的目的核苷酸序列；
(5)在適于與步驟(1)所述的點(diǎn)載在固相載體上的探針進(jìn)行雜交的條件下，加入 經(jīng)標(biāo)記的目的核苷酸序列，并使其反應(yīng)足夠時間；(6)檢測雜交反應(yīng)的結(jié)果。在本發(fā)明的另一方面,還提供了一種應(yīng)用上述芯片對女性美容基因檢測的方法， 包括如下步驟(1)標(biāo)記與待測女性美容相關(guān)基因的核苷酸序列和/或其互補(bǔ)序列進(jìn)行雜交的探 針； (2)抽提待測樣品的核酸；(3)制備待測女性美容相關(guān)基因的目的核苷酸序列；(4)在固相載體表面點(diǎn)載步驟(3)所述的目的核苷酸序列；(5)在適于與步驟(4)所述的點(diǎn)載在固相載體上的目的核苷酸序列進(jìn)行雜交的條 件下,加入經(jīng)標(biāo)記的探針,并使其反應(yīng)足夠時間；(6)檢測雜交反應(yīng)的結(jié)果。所述目的核苷酸序列的制備可包括擴(kuò)增的步驟，用分離的靶樣本中含核酸的細(xì)胞 直接擴(kuò)增，也可用抽提的靶核酸直接擴(kuò)增。如用磁珠從全血中分離白細(xì)胞，直接用分離的白 細(xì)胞或用全血抽提的核酸作模板，擴(kuò)增目的核酸序列。擴(kuò)增得到的單鏈或雙鏈的DNA或RNA 可含有熒光或生物素標(biāo)記,標(biāo)記的DNA或RNA可不經(jīng)純化直接用于雜交。與本發(fā)明中所述 芯片雜交的優(yōu)選靶核苷酸分子是單鏈核酸分子，雙鏈核酸分子經(jīng)過變性等處理后也于本發(fā) 明所述芯片雜交。目的核苷酸序列可使用任何適當(dāng)?shù)臄U(kuò)增方法進(jìn)行富集，如聚合酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction, PGR)、多重 PCR、連接 鏈反應(yīng)(ligase chain reaction, LCR)、滾環(huán)擴(kuò)增(rolling cycle amplification, RCA)、基于核酸序列的擴(kuò)增(nucleic acid sequence-based amplification, NASBA)^ S ^ JT iff (strand displacement amplification, SDA)禾口車專錄介導(dǎo)的擴(kuò)增(transcription medicated ampl ification, TMA)寸。在本發(fā)明的一個實施例中，目的核苷酸序列的制備采用PCR擴(kuò)增方法，該方法所 用引物含有SEQ ID N0:37 SEQ ID NO 72所示序列的核苷酸鏈或其互補(bǔ)鏈。所述探針或目的核苷酸序列都適合用于標(biāo)記。探針在合成引入標(biāo)記，目的核苷酸 序列可以在擴(kuò)增中弓丨入標(biāo)記,或者擴(kuò)增后用合適的方法弓I入標(biāo)記。合適的標(biāo)記包括熒光標(biāo)記、放射性同位素標(biāo)記、發(fā)色團(tuán)、發(fā)光體、FRET、酶、生物素 或有特殊結(jié)合配體的配基。本發(fā)明方法的雜交可在任何適當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行，如25°C 65°C，所述雜交時間為 2分鐘 18小時?？梢愿淖冸s交條件以提高或降低雜交的嚴(yán)謹(jǐn)程度、雜交特異性。本發(fā)明女性美容基因檢測芯片及其應(yīng)用，能使受檢者掌握自身體質(zhì)、膚質(zhì)等特點(diǎn)， 量身制定適合自己的美容方案，選擇合理的美容產(chǎn)品，避免美容過程中不良反應(yīng)的發(fā)生，節(jié) 省了時間和精力。


圖1是本發(fā)明的實施例1中多重PCR擴(kuò)增后的電泳檢測結(jié)果圖2是本發(fā)明的實施例1中PCR產(chǎn)物片段化后的電泳檢測結(jié)果圖；圖3是本發(fā)明實施例1的女性美容基因檢測芯片的雜交結(jié)果圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)--步詳細(xì)的說明。實施例1反向雜交1.基因芯片的制備(1)探針溶解將SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 36所示序列探針的每條探針用TE溶液稀釋,終濃度為IOmM0將濃度為IOmM的探針與濃度為200mM的PBS溶液于384孔板中等體積混合，以 粘膠片封好384孔板，室溫下振蕩2分鐘,離心，-20°C保存，以備點(diǎn)樣使用。(2)點(diǎn)樣將預(yù)先設(shè)計并合成好的探針通過接觸式點(diǎn)樣或噴墨式點(diǎn)樣點(diǎn)載到玻片、硅片等材 質(zhì)的固相載體片基上。片基采用Cell Associates CSS-100醛基片基，GeneMachine公司 的OminigridlOO型號的點(diǎn)樣儀，在濕度:65-75% (以FullMoon片基為準(zhǔn))，溫度為25°C的 條件下點(diǎn)樣，點(diǎn)樣完畢后,放置半小時后,將芯片取出，室溫干燥保存。2.待測樣品的處理和標(biāo)記(1)人基因組DNA的抽提及目的基因的擴(kuò)增采用FlexiGene DNA Kit (250) (QIAGEN, Cat. No. 51206)試劑盒抽提人外周血中基 因組DNA。取1 μ 1進(jìn)行電泳(1°/α京脂糖凝膠，0. 5XTBE,EB，80MV, 1. 5小時電泳)，在FR-200 紫外與可見分析裝置上拍攝照片，并對照marker (Lambda DNA/EcoRI+HindIII)進(jìn)行定量。用XRCCl 基因的引物(SEQ ID NO 37 38)、ERCCl 基因的引物(SEQ ID NO 39 40)、ERCC2 基因的引物(SEQ ID NO 41 44)、GPR44 基因的引物(SEQ ID NO 45 46)、 EGRl 基因的引物(SEQ ID KO 47 48)、CYSLTR1 基因的引物(SEQ ID KO 49 50) ,SODl 基因的引物(SEQ ID NO 51 52)、S0D2基因的引物(SEQ ID NO 53 54)、BCL_2基因的 引物(SEQID NO 55 58)、TP53基因的引物(SEQ ID NO 59 62)、KL基因的引物(SEQ ID NO 63 64)、GSTPl 基因的引物(SEQ ID NO 65 66)、GSTMl 基因的引物(SEQ ID NO 67 68)、’TNF基因的引物(SEQ ID NO 69 70)和LEP基因的引物(SEQ ID NO :71 72) 進(jìn)行目的核苷酸序列的擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增用30 μ 1反應(yīng)體系進(jìn)行，反應(yīng)體系是0.3mM dNTP、 IOmM Tris-HCl,50mM KCl、2mM MgCl2,20% Q solution(Qiagen)、上游和下游引物的濃度 0. 16 μ M、基因組 DNA 10ng, Taq 酶 0. 6U(Takara)。應(yīng)用 Touch-down PCR 反應(yīng)程序[Don RH, Cox PT, Wainwright BJ, Baker K, Mattick JS. Touchdown‘ PCR to circumvent spurious priming during gene amplification. Nucleic Acids Res, 1991,19 :4008] 94tC變性5min ；94°C變性40s，64°C退火lmin，每個循環(huán)降低0. 5°C，72°C延伸50s，共10個 循環(huán)；然后94°C變性40s, 59°C退火40s，72°C延伸50s，共30個循環(huán)；最后72°C延伸5min。 PCR結(jié)束后用1.5%瓊脂糖凝膠檢測擴(kuò)增結(jié)果。當(dāng)進(jìn)行多重PCR反應(yīng)時,將SEQ ID NO 37 SEQ ID NO -J2所示序列的引物放入 一個反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增，體系為50 μ 1。多重PCR的反應(yīng)體系為每種dNTP 0. 3 μ mol/L, Tricine-KOH (PH = 8. 7)40mmol/L, KCl 16mmol/L, MgCl23. Smmol/L, BSA 3. 75μ g/ml，每條弓 |物 2iimol/L, DNA 80ng 和 2. 2 X Titanium Taq DNA 聚合酶(Clontech, USA)。多重 PC R 反應(yīng)條件95°C變性3min ；95°C變性30s，66°C退火2min，68°C延伸4min，共40個循環(huán)；最 后68°C延長lOmin。PCR擴(kuò)增后,取3 u 1 PCR反應(yīng)產(chǎn)物做瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果見圖 1。這些PGR產(chǎn)物經(jīng)處理后可用于下面的雜交步驟。(2) PCR產(chǎn)物純化和片斷化每個樣品的所有PCR 產(chǎn)物混合，用 QIA quick PCR Purification Kit(Qiagen, Cat. No. 28106)純化。純化的PCR產(chǎn)物經(jīng)測定濃度后，用DNase I進(jìn)行片段化。片段化的反 應(yīng)體系包括30 u 1純化PCR產(chǎn)物(10 u g), 4 11 1的10 X DNase I緩沖液，0. 12 u ！的DNase 1,5. 88 u 1的ddH20。反應(yīng)條件為37°C溫浴5min,然后95°C 15min。片段化后的產(chǎn)物跑4% 瓊脂糖凝膠，保證絕大多數(shù)的片段處于30-200個堿基對，電泳檢測結(jié)果如圖2所示。(3)熒光素標(biāo)記利用脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶在3’末端進(jìn)行熒光素標(biāo)記,標(biāo)記的40 U 1反應(yīng)體系包括 25 u 1片段化PCR產(chǎn)物,8 y 1的5X脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶緩沖液，ly 1的CY3-N6_ddCTP (ImM), 3 u 1的脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(20U/ u 1)，3 11 1的ddH20。反應(yīng)條件為37°C溫浴120min，然后 95°C 加熱 15min。3.雜交、洗滌和結(jié)果檢測 熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物95。C變性lOmin,立即置于冰上，用于雜交，雜交反應(yīng) 20ii 1 體系包括熒光素標(biāo)記的 PCR 產(chǎn)物 15ii 1，20XSSPE 1. 2u 1,1% Triton 0. 2u 1, lOXDenhandts 0. 9y 1’ 甲酰胺 0. 5u 1, ddli20 2. 2 u 1。反應(yīng)條件為 48°C 溫浴 120min，然 后相繼用1 X洗滌緩沖液I (5 X SSC, 0. 1 % SDS)、1 X洗滌緩沖液11 (2 X SSC, 0. 1 % SDS)和 1 X洗滌緩沖液III (1 X SSC)在42°C各洗滌lOmin,最后用ddH20洗滌0. 5min。洗滌后的芯片，經(jīng)甩千后，用GenePix 4000B共聚焦激光掃描儀進(jìn)行掃描(也可以 用其他的激光掃描儀)。掃描雜交后的芯片得到的雜交結(jié)果如圖3所示，再用GenePix Pro 處理圖像得到數(shù)據(jù)文件,然后對數(shù)據(jù)文件進(jìn)行分析就可以得到女性美容基因檢測結(jié)果,從 而指導(dǎo)受檢者選擇合理適當(dāng)?shù)拿廊莓a(chǎn)品及服務(wù)。序列表<110>上海生物芯片有限公司<120> —種女性皮膚美容基因基因檢測芯片及其檢測方法<160>72<170>PatentIn version 3. 5<210>1<211 >16<212>DNA<213>人工序列<400>1ccctcccgga ggtaag 16<210>2<211>16<212>DNA





<213>人工序列 <400>2
ccctcccaga ggtaag
<210>3
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
gtgcgcaatg tgccct <210>4 <211>16 <212>DNA <213>人工序列 <400>4
gtgcgcaatg tgccct
<210>5
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<400>5
gctgcccgac gaagt
<210>6
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<400>6
gctgcccaac gaagt
<210>7
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<400>7
gagacgctga agaggatag
<210>8
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<400>8
gagacgctgc agaggatag
16
16


<210>9
<211>18 <212>DNA <218>人工序列 <400>9
cagcactcca cctcttta 18 <210>10 <211>18 <212>DNA <213>人工序歹丨J <400>10
cagcactcta cctcttta 18 <210>11 <211>18 <212>DNA <213>人工序列 <400>11
catggattaa ggtggctc 18
<210>12
<211>18
<212>DNA
<213>人工序歹丨J
<400>12
catggattag ggtggctc 18
<210>13
<211>20
<212>DNA
<218>人工序列
<400>13
tgtctacatt. cagaaagcat 20
<210>14
<211>20
<212>DNA
<213>人工序歹丨J
<400>14
tgtctacatt tagaaagcat 20
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列[o176] <400>15
taagaatgat acggtatcca20
<2]()>16[o179] <211>19[o1801 <212>DNA
<213>人工序列
{400>]6
ataCaaaaaa ttagctggg19[o]84] <210>17
<2工1)22
<212>DNA[o187] <213>人工序列[o]88] (400>17
tt taataatg gcgagagaga t t22
8
] <211>22[o192] <212>DM
<2i3>人工序列
(400>18[o195] tttaataatg gtgagagaga tt22[o196] <210>19
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
gcaggttccg gctcaa16
<2 10>20
<211>16
<2工2>DNA
<213>人工序列
<400>20
gcaggttctg gctcaa16
<210>2l
<211>17
<213>人工序列
(400>2l
ctgtacaacg aaCCCCC
<210>22
<211>17
<212>DM
<2]3>人工序列
<400)22
ctgtacaatg aaccccc1 7
<2 10>23
<2¨>]7
<212>DM
<213>人工序列
<400>23
aaattcttcg tggccat]7
<2 10>24
<211>17
<212>DM
<2門>人工序列
<400>24
aaattctttg tggccat1 7
<2 10>25
<2]l>23
<2 l 2>DNA
<213>人工序列
<400)25
taataatttt gcacttacac agc23
<2 10>26
<211>23
<2 l 2>DNA
<2]3>人工序列
4400>26
taataatttt gtacttacac agc23
<2 10>27
<2¨>]6
<212>DM
<213>人工序列
<400>27
gtgagaccat tgcccgl 6
<2 10)28
<211>16
<213>人工序列<400>28gtgagaccgt tgcccg1<210>29<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>29tgacacacgc tcttcaagg1<210>30<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>30tgacacacac tcttcaagg19<210>31<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>31ccaaaagatc ctgagttgc19<210>32<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>32ccaaaagata ctgagttgc19<210>33<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>33ttattgactg tggaaagaac a 21<210>34<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>34ttattgacta tggaaagaac a 21
<210>35 <211>16 <212>DNA <21.3〉人工序列 <400>35
cttgagcacc caaggg16
<210>36
<211>16
<212>DNA
<213>人工序歹丨J
<400X36
cttgagcatc caaggg16
<210>37
<211>19
<212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature
<223>引物 <400>37
ccccaagtac agccaggtc 19 <210>38 <211>20 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<22l>misc—feature <223>引物 <400>38
tgccccgctc ctctgagtag 2C
<210>39
<211)24
<212>DNA
<213>人工序歹丨J
<220>
<221>misc—feature <223>引物 <400>39
gtgcgaggag gcaggaggtg tggg
<210>40
<211>24 <212>DNA <21.3〉人工序列 <220>
<221>misc_feature <223>引物 <400>40
tgttgcactg ggcacctcca ggcc24
<210>41
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>mi sc—feature <223>引物 <400>41
ctgt.tggt.gg gtgcccgtat ctgttggtct. 30
<210>42
<211>31
<212>DNA
<213>人工序歹丨J
<400>42
taatatcggg gctcaccctg cagcacttcc t 31
<210>43
<211>19
<212>DNA
<213〉人工序列
<220>
<221>misc_feature <223>引物 <400>43
gcccgctctg gattatacg19
<210>44
<211>19
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc feature
<223>引物 <400>44
ctatcatctc ctggccccc <210>45 <211>20<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物 <400>45
cttcctaggc tgcttactga20
<210>46 <211>25 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>misc_feature
<223>引物 <400>46
ctgagacctg aagaggtaaa gaagt 25 <210>47 <211>20 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<22l>misc—feature
<228>引物 <400>47
gt.gatt.ctca ttggcctggt20
<210>48 <211>20 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>raisc—feature <223>引物 <400>48
tactattccc cagccagcag20
<210>49 <211>25
<212>DNA <218>人工序列 <220>
<221>misc_feature <223>引物 <400>49
aattgttgct ttgaccctct cctat 2 <210>50 <211>23 <212>DNA <213>人工序列 <220>
<221>mi sc—feature <223>引物 <400>50
ggtacataag tcacgctgga caa 23
<210>51
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc—feature <223>引物 <400>51
ggcagaaagc aaaataaaaa ga 22
<210>52
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature <223>引物 <400>52
aaagtatttt cttgctaaat gtc 23 <210>53 <211>20 <212>DNA
<213>人工序列<220><22 l>misc—feature<223> 引物<400>53aagaaataca gagcggagat<210>54<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><22 Dtnisc—feature<223> 引物<400>54aacgtagcca ctagacaaaa<210>55<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>55ccaagaagcc agagcagt<210>56<211>19<212>DNA<218>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>56ctcccacaac catcatcaa<210>57<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><22 Dmisc—feature
<223> 引物<400>57caactcataa gactttggga ta 22<210>58 <211>18<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>58ctcagccaat ctttcagc 18<210>59<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>59aaaggaatga attggcttgg 20<210>60<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc—feature<223> 引物<400>60cattgagtcc gcctgctc 18<210>61<211 >18<212>DNA<213>人工序列<220><22Draisc—feature<223> 引物<400>61ctggacagcc cataaacg 18
<210>62<211>18<212>DNA<218>人工序列<220>
<221>misc_feature<223> 引物<400>62agagccctgg<210>63<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><22 Dmisc—feature<223> 引物<400>63gtcatgtcca ccttcacg 18<210>64<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><22 DmiscJeature<223> 引物<400>64gcctgtcctc tatcctttg 19<210>65<211>18<212>DNA<213> 人工序歹Ij<220><221>misc_feature<223> 引物<400>65attgaacaag atgctgga 18<210>66<211>18<212>DNA
<213>人工序列<220><221>misc—feature<223> 引物<400>66ggcgcagaat tacttaca 18
<210>67<211 >18<212>DNA<213>人工序歹丨J<220><22Draisc—feature<223> 引物<400>67cgtttaatcg ggactgct 18<210>68<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>68ctaatggccc ttccttgt 18<210>69<211>18<212>DNA<218>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>69tgaatgcagc aaaatagc 18<210>70<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><22 Dmisc—feature
<223> 引物<400>70tgaaccaatg gggtaaga 18<210>71<211>18<212>DNA
<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>71atgagtggct aaggctat 18<210>72<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223> 引物<400>72ttcttccctt cattcttc 18
權(quán)利要求
一種女性美容基因檢測芯片，包括固相載體和探針，其特征在于，所述探針與待測女性美容相關(guān)基因的核苷酸序列和/或其互補(bǔ)序列進(jìn)行雜交。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測芯片，其特征在于，所述待測女性美容相關(guān)基因包括 XRCCl、ERCCl、ERCC2、GPR44、EGRl、CYSLTR1、SOD1、S0D2、BCL-2、TP53、KL、GSTP1、GSTMl、TNF和LEP基因。
3.如權(quán)利要求1或2所述的檢測芯片,其特征在于,所述探針為DNA、RNA、DNA-RNA嵌 合體、PNA或其衍生物。
4.如權(quán)利要求3所述的檢測芯片，其特征在于，所述探針為DNA,包括 (1)與待測XRCCl基因雜交的(a)SEQ ID NO :1 SEQ ID NO :2所示序列，(b) SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 2所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :1 SEQ ID NO 2 所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(2)與待測ERCCl基因雜交的(a)SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 4所示序列，(b) SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 4所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 2 SEQ ID NO 4 所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(3)與待測ERCC2基因雜交的(a)SEQ ID NO :5 SEQ ID NO :8所示序列，(b) SEQ ID NO 5 SEQ ID NO 8所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 5 SEQ ID NO 8 所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(4)與待測GPR44基因雜交的(a)SEQ ID NO :9 SEQ ID NO 10所示序列，(b) SEQ ID NO 9 SEQ ID NO 10所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 9 SEQ ID NO 10所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(5)與待測EGRl基因雜交的(a)SEQ ID N0:11 SEQ ID NO 12所示序列，(b) SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO 12所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 12所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(6)與待測CYSLTR1 基因雜交的(a) SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO 14 所示序列，(b) SEQ ID :N0:13 SEQ ID NO :14所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:13 SEQ ID NO 14所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(7)與待測SODl基因雜交的(a)SEQ ID N0:15 SEQ ID NO : 16所示序列，(b) SEQ ID N0:15 SEQ ID NO 16所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:15 SEQ ID N0: 16所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(8)與待測S0D2基因雜交的(a)SEQ ID N0:17 SEQ ID NO 18所示序列，(b) SEQ ID N0:17 SEQ ID NO 18所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:17 SEQ ID N0: 18所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(9)與待測BCL-2基因雜交的(a)SEQ ID NO: 19 SEQ ID N0:22所示序列，(b) SEQ ID N0:19 SEQ ID NO :22所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:19 SEQ ID NO 22所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(10)與待測TP53基因雜交的(a)SEQ ID NO 23 SEQ ID N0:26所示序列，(b) SEQ ID KO 28 SEQ ID KO 26所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO 28 SEQ ID NO 26所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(11)與待測KL基因雜交的(a)SEQ ID NO 27 SEQ ID N0:28所示序列，(b) SEQ IDN0:27 SEQ ID NO :28所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:27 SEQ ID NO: 28所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(12)與待測GSTPl基因雜交的(a)SEQ ID NO 29 SEQ ID N0:30所示序列，(b) SEQ ID NO 29 ~ SEQ ID NO :30所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:29 SEQ ID NO 30所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(13)與待測GSTMl基因雜交的(a)SEQ ID NO :31 SEQ ID N0:32所示序列，(b) SEQ ID NO :31 SEQ ID NO 32所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID NO :31 SEQ ID NO 82所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(14)與待測TNF基因雜交的(a)SEQ ID NO 33 SEQ ID NO 34所示序列，(b) SEQ ID N0:33 SEQ ID NO :34所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:33 SEQ ID NO: 34所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列；(15)與待測LEP基因雜交的(a)SEQ ID NO 35 SEQ ID NO :36所示序列，(b) SEQ ID N0:35 SEQ ID NO :36所示序列中每條序列的互補(bǔ)鏈，(c)與SEQ ID N0:35 SEQ ID NO: 36所示的序列中每條序列有至少70%同源性的序列。
5.如權(quán)利要求4所述的檢測芯片,其特征在于，所述探針選自SEQIDNO :1 SEQ ID NO 86所示序列。
6.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述芯片對女性美容基因檢測的方法,其特征在于,包括如下 步驟(1)在固相載體表面點(diǎn)載權(quán)利要求1所述的探針；(2)抽提待測樣品的核酸；(3)制備待測的女性美容相關(guān)基因的目的核苷酸序列；(4)標(biāo)記步驟(3)的目的核苷酸序列；(5)在適于與步驟(1)所述的點(diǎn)載在固相載體上的探針進(jìn)行雜交的條件下,加入經(jīng)標(biāo) 記的目的核苷酸序列，并使其反應(yīng)足夠時間；(6)檢測雜交反應(yīng)的結(jié)果。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述目的核苷酸序列的標(biāo)記采用包 括熒光素標(biāo)記、生物素標(biāo)記、電化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、放射性元素標(biāo)記或酶標(biāo)記。
8.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述芯片對女性美容基因檢測的方法，其特征在于,包括如下 步驟(1)標(biāo)記權(quán)利要求1所述的探針；(2)抽提待測樣品的核酸；(3)制備待測的女性美容相關(guān)基因的目的核苷酸序列；(4)在固相載體表面點(diǎn)載步驟(3)所述的目的核苷酸序列；(5)在適于與步驟(4)所述的點(diǎn)載在固相載體上的目的核苷酸序列進(jìn)行雜交的條件 下，加入經(jīng)標(biāo)記的探針,并使其反應(yīng)足夠時間；(6)檢測雜交反應(yīng)的結(jié)果。
9.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,步驟(1)所述的探針標(biāo)記采用包括熒光素標(biāo) 記、生物素標(biāo)記、熒光共振能量轉(zhuǎn)移標(biāo)記、電化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、放射性元素標(biāo)記或酶標(biāo)記。
10.如權(quán)利要求6或8所述的方法,其特征在于，所述步驟(3)的目的核苷酸序列的制備包括PCR擴(kuò)增反應(yīng),該反應(yīng)所用引物含有SEQ ID N0:37 SEQID NO :72所示序列的核苷 酸鏈或其互補(bǔ)鏈。
11.如權(quán)利要求6或8所述的方法，其特征在于，所述步驟(5)中的雜交溫度為25°C 65°C,雜交時間為2分鐘 18小時。
12.權(quán)利要求1所述的檢測芯片在指導(dǎo)女性美容檢測中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及基因多態(tài)性檢測芯片，公開了一種女性美容基因檢測芯片，包括固相載體和探針，所述探針與待測女性美容相關(guān)基因的核苷酸序列和/或其互補(bǔ)序列進(jìn)行雜交。本發(fā)明還公開了應(yīng)用所述芯片對女性美容基因檢測的方法。本發(fā)明的檢測芯片能使女性加強(qiáng)對自身的認(rèn)識，根據(jù)自身的特點(diǎn)合理科學(xué)地選擇美容產(chǎn)品和服務(wù)，避免不良反應(yīng)的發(fā)生。
文檔編號C12Q1/68GK101845482SQ20091004799
公開日2010年9月29日 申請日期2009年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月23日
發(fā)明者盛海輝, 郜恒駿, 陳然 申請人:上海芯超生物科技有限公司