專利名稱：一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，屬于食品添加劑技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
食品在儲(chǔ)藏和運(yùn)輸過程中和空氣中的氧接觸，所發(fā)生的氧化反應(yīng)會(huì)引起食物的變質(zhì)。 食物的變質(zhì)除了降低食品的營養(yǎng)，味與色發(fā)生劣變以外，往往還會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，危機(jī)人 體健康。因此在加工食品過程中都會(huì)在食物中添加抗氧化劑進(jìn)行食物的保鮮和防止氧化。
但是長期以來，食品行業(yè)一直使用的是合成抗氧化劑如BHT (二丁基羥基甲苯)、BHA (叔丁基4-羥基茴香醚)、TBHQ (叔丁基對苯二酚)和PG (沒食子酸丙脂)等。近年來， 各國健康衛(wèi)生機(jī)構(gòu)對于這些人工合成抗氧化劑的安全性問題進(jìn)行了廣泛的研究。世界衛(wèi)生 組織(FA0/WHO)、歐共體兒童保護(hù)組織(HACSG)、英國生物工業(yè)協(xié)會(huì)(BIBRA)、日本、美國 的政府和組織的研究表明，合成抗氧化劑具有諸多副作用，如對人體的肝、脾、肺均有不 利影響，會(huì)誘發(fā)惡性腫瘤等。所以FAO/冊0明確規(guī)定食品中合成抗氧化劑的添加量；美國 食品藥品管理局(FDA)建議在一般認(rèn)為安全的食物中盡量不用BHT;日本有關(guān)衛(wèi)生部門經(jīng)研 究曾做出禁止使用BHA的結(jié)論；對于TBHQ，雖然美國等少數(shù)國家批準(zhǔn)了它在某些油脂中的 使用，但歐盟、日本等國家認(rèn)為它的毒理試驗(yàn)資料尚不完善，故未批準(zhǔn)使用。總之，人工 合成抗氧化劑的對人體毒性使消費(fèi)者們在飲食時(shí)，普遍存在不安和恐懼心理。
因此現(xiàn)在具有安全性高、抗氧化能力強(qiáng)、無副作用、防腐保鮮等特點(diǎn)的天然食品抗氧 化劑日益受到重視。事實(shí)也證明，在人們長期食用的食品中，天然抗氧化劑成分的毒性遠(yuǎn) 遠(yuǎn)低于人工合成的抗氧化劑毒性，國際上流行的有機(jī)食品就是完全沒有污染物，不含任何 人工合成的食物。近年來世界各國從自然界尋求天然抗氧化劑的研究，開發(fā)廣譜、高效、 安全的天然抗氧化劑，成為當(dāng)今食品添加劑研究領(lǐng)域中的熱點(diǎn)之一。但是， 一般的天然食 品添加劑是從天然物質(zhì)中采用化學(xué)萃取方法提取其有效成分而成，但是萃取所用的溶劑往 往也是化學(xué)試劑，比如乙醚，甲醇等，雖經(jīng)揮發(fā)等處理，水平不等多少都有些殘留量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種無有機(jī)溶劑殘留、抗氧化能力全面且穩(wěn)定的食品添加劑的制 備方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，其特征在于，具體步驟為
第一步將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶
在各自的培養(yǎng)基上在30 4(TC培養(yǎng)45 50小時(shí)，在2 6。C保存?zhèn)溆茫?br> 第二步將第一步所得葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿 菌分別接種到LB培養(yǎng)液中，葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌、保加利亞乳桿 菌與LB培養(yǎng)液的重量比為25 30: 5 10: 10 15: 20 30: 100，在搖瓶內(nèi)在30-40。C培 養(yǎng)6-10小時(shí)；
第二步將發(fā)酵罐用溫度為120-125。C壓力為0. 142-0. 152 Mpa的蒸汽滅菌25_35min， 加入發(fā)酵基料，用巴氏消毒法在7(TC 80。C滅菌10-20min，所述發(fā)酵基料由以下以重量 份計(jì)的原料組成番茄醬下腳料l-3份、刺梨原汁下腳料2-4份、昆布0.5-2.0份、葵花 籽殼2-5份、豆粕1-3份，土豆汁3-5份、蜂蜜5-7份和水75-90份，滅菌后冷卻至25 4(TC，將第二步所得培養(yǎng)物按O. 1 1: IOO的重量比接種到所述發(fā)酵基料中，半密閉發(fā)酵 7-15天，直到發(fā)酵液的pH-4時(shí)結(jié)束發(fā)酵；
第四步將發(fā)酵液以速度1500-2500r/min離心3 8min，取上清液在溫度為20-25 。C、真空度為0. 001-0. 005兆帕的條件下將濾液濃縮到含水量為20-30wt%，在85-95。C滅 菌20-30min，得到水溶性天然抗氧化食品添加劑；將所述水溶性天然抗氧化食品添加劑與 卵磷脂和大豆磷脂以重量比100: 5-10: 15-25混合，在55-65。C乳化16-25小時(shí)，得到脂 溶性天然抗氧化食品添加劑。
進(jìn)一步，所述第一步中的葡萄酒孢漢遜酵母的培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成 葡萄糖30-50份、酵母膏4-8份、蛋白胨4-8份、瓊脂10-25份和蒸餾水500-800份。
所述第一步中的紫紅曲霉培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成糖度為8-20Brix的 麥芽汁80-120份和瓊脂1-3份。
所述第一步中的巴氏醋桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成:葡萄糖80-120份、 酵母膏8-15份、碳酸鈣15-30份、瓊脂15-30份和蒸餾水700-1200份。
所述第一步中的保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母膏5-10 份、蛋白胨5-10份、葡萄糖8-15份、磷酸二氫鉀O. l-0.4份、西紅柿汁(50) - (150) 份、吐溫80 0.3-0.8份、蒸餾水500-1000份和瓊脂粉10-30份。
所述第二步的LB培養(yǎng)液由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母提取液3-10份、蛋白 胨5-20份、氯化鈉3-10份、瓊脂10-30份和水800-1200份。
本發(fā)明選用了葡萄酒有孢漢遜酵母(他y se^'aspora 〃rar腿，ACCC20310)，紫紅曲霉(MwasrtAS1 p〃i77"re〃s, ACCC30140)， 巴氏醋桿菌"ce^9Z;s"er / a5^i/er_z'a/ "& ACCC10112)，保加利亞乳桿菌(L3cz^/7aw77"s /w^aric"s， ACCC10638)，進(jìn)行篩選馴服 培養(yǎng)后，加以協(xié)同復(fù)合發(fā)酵工藝的利用，多級好厭氧發(fā)酵，得到了多樣的生物代謝活性物 質(zhì)。所得的天然抗氧化食品添加劑是一種淡黃至褐色的液態(tài)制劑，有酸味，無有機(jī)溶劑殘 留，能夠抗多種的自由基離子對食品的氧化作用，因此其抗氧化能力的全面且穩(wěn)定性，總 抗氧化能力達(dá)到800—1000 U/ml。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例l
一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，具體步驟為 第一步將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶 在各自的培養(yǎng)基上在30'C培養(yǎng)45小時(shí)，在2。C保存?zhèn)溆茫?br> 第二步將第一步所得葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿
菌分別接種到LB培養(yǎng)液中，葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌、保加利亞乳桿 菌與LB培養(yǎng)液的重量比為25: 5: 10: 20: 100，在搖瓶內(nèi)在3(TC培養(yǎng)6小時(shí)；
第二步將發(fā)酵罐用溫度為120。C壓力為0. 142Mpa的蒸汽滅菌25min，加入發(fā)酵基 料，用巴氏消毒法在7(TC滅菌10min，所述發(fā)酵基料由以下以重量份計(jì)的原料組成番茄 醬下腳料1份、刺梨原汁下腳料2份、昆布0.5份、葵花籽殼2份、豆粕1份，土豆汁3 份、蜂蜜5份和水75份，滅菌后冷卻至25'C，將第二步所得培養(yǎng)物按O. 1: IOO的重量比 接種到所述發(fā)酵基料中，半密閉發(fā)酵7天，直到發(fā)酵液的pH=4時(shí)結(jié)束發(fā)酵；
第四步將發(fā)酵液以速度1500r/min離心3min，取上清液在溫度為20°C、真空度為 0.001兆帕的條件下將濾液濃縮到含水量為30wt%，在85'C滅菌20min，得到水溶性天然 抗氧化食品添加劑；將所述水溶性天然抗氧化食品添加劑與卵磷脂和大豆磷脂以重量比 100: 5: 15混合，在55'C乳化16小時(shí)，得到脂溶性天然抗氧化食品添加劑。
所述第一步中的葡萄酒孢漢遜酵母的培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖 30份、酵母膏4份、蛋白胨4份、瓊脂10份和蒸餾水500份。
所述第一步中的紫紅曲霉培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成糖度為8Brix的麥 芽汁80份和瓊脂1份。
所述第一步中的巴氏醋桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖80份、酵 母膏8份、碳酸鈣15份、瓊脂15份和蒸餾水700份。所述第一步中的保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母膏5份、
蛋白胨5份、葡萄糖8份、磷酸二氫鉀O. l份、西紅柿汁50份、吐溫80 0.3份、蒸餾 水500份和瓊脂粉10份。
所述第二步的LB培養(yǎng)液由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母提取液3份、蛋白胨5份、 氯化鈉3份、瓊脂10份和水800份。
實(shí)施例2
一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，具體步驟為
第一步將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶
在各自的培養(yǎng)基上在4(TC培養(yǎng)50小時(shí)，在6'C保存?zhèn)溆茫?br> 第二步將第一步所得葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿 菌分別接種到LB培養(yǎng)液中，葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌、保加利亞乳桿 菌與LB培養(yǎng)液的重量比為30: 10: 15: 30: 100，在搖瓶內(nèi)在4(TC培養(yǎng)10小時(shí)；
第三步將發(fā)酵罐用溫度為125。C壓力為0. 152Mpa的蒸汽滅菌35min，加入發(fā)酵基 料，用巴氏消毒法在80。C滅菌20niin，所述發(fā)酵基料由以下以重量份計(jì)的原料組成番茄 醬下腳料2份、刺梨原汁下腳料3份、昆布1份、葵花籽殼4份、豆粕2份，土豆汁4份、 蜂蜜6份和水80份，滅菌后冷卻至40'C，將第二步所得培養(yǎng)物按l: IOO的重量比接種到 所述發(fā)酵基料中，半密閉發(fā)酵15天，直到發(fā)酵液的pH=4時(shí)結(jié)束發(fā)酵；
第四步將發(fā)酵液以速度2500r/min離心8min，取上清液在溫度為25°C、真空度為 0.005兆帕的條件下將濾液濃縮到含水量為25wt%，在95'C滅菌30min，得到水溶性天然 抗氧化食品添加劑；將所述水溶性天然抗氧化食品添加劑與卵磷脂和大豆磷脂以重量比 100: 10: 25混合，在65'C乳化20小時(shí)，得到脂溶性天然抗氧化食品添加劑。
所述第一步中的葡萄酒孢漢遜酵母的培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖
30份、酵母膏4份、蛋白胨4份、瓊脂25份和蒸餾水800份。
所述第一步中的紫紅曲霉培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成糖度為20Brix的麥 芽汁120份和瓊脂3份。
所述第一步中的巴氏醋桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖120份、 酵母膏15份、碳酸鈣30份、瓊脂30份和蒸餾水1200份。
所述第一步中的保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成:酵母膏10份、 蛋白胨10份、葡萄糖15份、磷酸二氫鉀0. 4份、西紅柿汁150份、吐溫80 0. 8份、蒸 餾水1000份和瓊脂粉30份。所述第二步的LB培養(yǎng)液由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母提取液10份、蛋白胨 20份、氯化鈉10份、瓊脂30份和水1200份。
實(shí)施例3
一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，具體步驟為 第一步將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶
在各自的培養(yǎng)基上在35。C培養(yǎng)47小時(shí)，在4。C保存?zhèn)溆茫?br> 第二步將第一步所得葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿 菌分別接種到LB培養(yǎng)液中，葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌、保加利亞乳桿 菌與LB培養(yǎng)液的重量比為27: 7: 12: 25: 100，在搖瓶內(nèi)在35r培養(yǎng)8小時(shí)；
第三步將發(fā)酵罐用溫度為12rC壓力為0. 14服pa的蒸汽滅菌30rnin，加入發(fā)酵基 料，用巴氏消毒法在75T:滅菌15min，所述發(fā)酵基料由以下以重量份計(jì)的原料組成番茄 醬下腳料3份、刺梨原汁下腳料4份、昆布2份、葵花籽殼5份、豆粕3份，土豆汁5份、 蜂蜜7份和水90份，滅菌后冷卻至35i:，將第二步所得培養(yǎng)物按l: IOO的重量比接種到 所述發(fā)酵基料中，半密閉發(fā)酵10天，直到發(fā)酵液的PH=4時(shí)結(jié)束發(fā)酵；
第四步將發(fā)酵液以速度2000r/min離心5min，取上清液在溫度為22°C、真空度為 0.003兆帕的條件下將濾液濃縮到含水量為30wt%，在90'C滅菌25min，得到水溶性天然 抗氧化食品添加劑；將所述水溶性天然抗氧化食品添加劑與卵磷脂和大豆磷脂以重量比 100: 7: 20混合，在6(TC乳化25小時(shí)，得到脂溶性天然抗氧化食品添加劑。
所述第一步中的葡萄酒孢漢遜酵母的培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖 30份、酵母膏4份、蛋白胨4份、瓊脂15份和蒸餾水600份。
所述第一步中的紫紅曲霉培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成15Brix的麥芽汁90 份，瓊脂2份。
所述第一步中的巴氏醋桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖80份、酵 母膏10份、碳酸鈣15份、瓊脂20份和蒸餾水IOOO份。
所述第一步中的保加利亞乳桿菌培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母膏5份、 蛋白胨8份、葡萄糖10份、磷酸二氫鉀0.2份、西紅柿汁50份、吐溫80 0.3份、蒸餾 水900份和瓊脂粉20份。
所述第二步的LB培養(yǎng)液由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母提取液5份、蛋白胨IO 份、氯化鈉4份、瓊脂10份和水800份。
本發(fā)明所得食品添加劑的使用方法如下直接添加到食品中，本發(fā)明不可與降酸性添加劑同時(shí)使用；本發(fā)明產(chǎn)品可常溫避光放置保存，有效期為1年。 通過以下實(shí)驗(yàn)觀察本發(fā)明產(chǎn)品對食品抗氧化功能的效果
取新?lián)捜〔擞?、新鮮雞油、新鮮蘋果黃瓜泥為試驗(yàn)食品，根據(jù)脂肪含量計(jì)算出最佳的 添加濃度為200—1000PPM，直接添加并進(jìn)行攪拌。在添加后在80。C加熱5min后，以抗脂 質(zhì)過氧化能力的測定方法(由于脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)添加硫代巴比妥酸后，在 530nm有最大強(qiáng)吸收峰，用分光法進(jìn)行定量分析。)對樣品進(jìn)行過氧化指標(biāo)檢測，以未添加 本抗氧化劑為對照基數(shù)，測算其抗氧化能力。結(jié)果如下表
加熱后的
品種 添加時(shí)的抗氧化能力 _抗氧化能力
新榨菜油 80. 1-90. 2% 70. 8-87. 1%
新鮮雞油 72. 7-88. 5% 65. 6-83. 8%
新鮮果泥 64. 4-85. 3% 59. 0-78. 0%
以下抗氧化能力檢測數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明產(chǎn)品具有全面抵抗自由基的能力
1. 清除DPPH自由基能力的測定
1， 1-二苯基苦基苯肼(DPPH)是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，依據(jù)DPra在517nm處有一 強(qiáng)吸收，采用分光光度法進(jìn)行定量分析。
具體操作步驟(1)將120ummol/L DPPH溶液3. Oml與試樣液0. lml混合搖勻， 在黑暗中放置30min; (2)測定517nm吸光度；(3)計(jì)算公式:清除率(%) = [(Ac — (A「A,。) / AJ ] X100%，式中A。 0. lml無水乙醇與3. OmlDPPH溶液混合液的吸光度；A1: 0. lml 試樣液與3. OmlDPPH溶液混合液的吸光度；A,。 0. lml無水乙醇與0. lml試樣液混合液的 吸光度。
檢測結(jié)果表明重量濃度10%抗氧化食品添加劑的清除DPffl自由基能力87. 35%。
2. 抗脂質(zhì)過氧化能力的測定
由于脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)，添加硫代巴比妥酸(TBA)后，在530nm有最 大強(qiáng)吸收峰，采用分光光度法進(jìn)行定量分析。
具體操作步驟(1)將油樣0.2ml、重量濃度為3"/。的過氧化氫(新鮮配制)1.0ml、 重量濃度為1. 0%的TBA溶液5ml和試樣液0. 4ml混勻，37。C水浴溶解30min，自來水冷卻； (2)將(l)中所得溶液加入蒸餾水定容到10ml，加入三氯甲垸lml，蓋塞上下倒置10次，
910min靜置到澄清(如混濁可離心5min); (3)將(2)中所得溶液倒入比色杯，530nm(532nm) 測定吸光度；(4)計(jì)算抑制率(%) = [( AO - Ax) / AO) ] X 100%式中AO:對照溶液 的吸光度；Ax:試樣溶液的吸光度；
檢測結(jié)果表明本發(fā)明抗氧化食品添加劑的抗脂質(zhì)過氧化能力達(dá)90. 20%。
3. 清除羥自由基('OH)能力的測定:
羥自由基氧化水楊酸得到2， 3—二羥基苯甲酸，用其在510nm處的吸光值表示 0H 的多少。吸光值與'0H的量成正比。反應(yīng)體系中加入具有清除 0H作用的物質(zhì)即可降低 該吸光值。
具體操作步驟(1) A。 9mmol/L水楊酸(鄰羥基苯甲酸C7H603)乙醇溶液2ml 、 9鵬ol/L FeS(V溶液2ml、 8. 8咖ol/L &02溶液2ml與H20 2ml的混合液；Ax: 9咖ol/L水 楊酸(鄰羥基苯甲酸C7H603)乙醇溶液2ml、 9畫1/L FeS(V溶液2ml、 8. 8畫1/L H202 溶液2ml與試樣液2ml的混合液；9mmol/L水楊酸(鄰羥基苯甲酸C7H603)乙醇溶 液2ml、試樣液2ml與H20 4ml的混合液；(2)將(l)中的三種溶液在37。C水浴30min; (3)測量將(2)得到的三種溶液的510nm吸光度；(4)清除率(%) = [ ( A。 - ( Ax - Ax。 ) ) / A。) ] X 100%，式中A。無試樣空白對照液的吸光度；Ax:加入試樣后的吸光度；Ax。試 樣空白對照液吸光度。
檢測結(jié)果表明本發(fā)明重量濃度為20%的抗氧化食品添加劑的清除羥自由基( 0H)能力 達(dá)82.53%。
4. 清除超氧陰離子自由基(，(V)的能力的測定 鄰苯三酚在堿性條件迅速自氧化，自氧化過程中產(chǎn)生'02—， *02—加速鄰苯三酚自氧化
速率，同時(shí)生成有色中間產(chǎn)物，中間產(chǎn)物的積累在滯后30 45秒時(shí)與時(shí)間成良好的線性 關(guān)系， 一般維持4min左右，隨后減慢。有色產(chǎn)物在325nm有強(qiáng)烈的光吸收。
具體操作步驟(1)將50mmol/L Tris-HCl (二羥甲基氨基甲垸鹽酸鹽)(pH=8.2) 4. 5ml與4. 2ml蒸餾水的混合物在25。C水浴溶解20min; (2)將(l)中所得溶液加入25°C 水浴預(yù)熱過的3醒ol/L鄰苯三酚0.3ml; (3)迅速將(2)中所得溶液倒入比色杯，325nm下 每10s測定吸光度，計(jì)算線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的增加；(4) 50mraol/LTris-HCl (pH二8. 2) 4.5ml、蒸餾水2.2ml與試樣液2. 0ml的混合液，25'C水浴溶解20min; (5)將(4)中所得 溶液加入25。C水浴預(yù)熱過的3mraol/L鄰苯三酚溶液0. 3ml; (6)迅速將(5)中所得溶液倒 入比色杯，325nm下每10s測定吸光度，計(jì)算線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的增加；(7)計(jì)算 抑制率(％)=[(自氧化速率A。-加入試樣后自氧化速率A) / A。) ] X 100%。檢測結(jié)果表明本發(fā)明重量濃度為5%的抗氧化食品添加劑的清除超氧陰離子自由基 ( 02—)的能力達(dá)60. 01%。
5.總抗氧化能力的測定 采用總抗氧化能力測試盒(南京建成生物工程研究所生產(chǎn))的檢測方法。
具體操作步驟(l)用漩渦混勻器充分混勻，放置10分鐘，雙蒸水調(diào)零，lcm光徑， 5加nm處測各管吸光度；(2)計(jì)算公式總抗氧化能力(U/毫升)=(測定管OD值一對照管 OD值)+0.01 + 30X (反應(yīng)液總體積ml +取樣量ml) X樣品測試前稀釋倍數(shù)。
檢測結(jié)果表明本發(fā)明抗氧化食品添加劑的總抗氧化能力在921. 92 — 1103. 21 U/ml。
權(quán)利要求
1、一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，其特征在于，具體步驟為第一步將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶在各自的培養(yǎng)基上在30～40℃培養(yǎng)45～50小時(shí)，在2～6℃保存?zhèn)溆茫坏诙綄⒌谝徊剿闷咸丫奇邼h遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌分別接種到LB培養(yǎng)液中，葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌、保加利亞乳桿菌與LB培養(yǎng)液的重量比為25～30∶5～10∶10～15∶20～30∶100，在搖瓶內(nèi)在30-40℃培養(yǎng)6-10小時(shí)；第三步將發(fā)酵罐用溫度為120-125℃壓力為0.142-0.152Mpa的蒸汽滅菌25-35min，加入發(fā)酵基料，用巴氏消毒法在70℃～80℃滅菌10-20min，所述發(fā)酵基料由以下以重量份計(jì)的原料組成番茄醬下腳料1-3份、刺梨原汁下腳料2-4份、昆布0.5-2.0份、葵花籽殼2-5份、豆粕1-3份，土豆汁3-5份、蜂蜜5-7份和水75-90份，滅菌后冷卻至25～40℃，將第二步所得培養(yǎng)物按0.1～1∶100的重量比接種到所述發(fā)酵基料中，半密閉發(fā)酵7-15天，直到發(fā)酵液的pH＝4時(shí)結(jié)束發(fā)酵；第四步將發(fā)酵液以速度1500-2500r/min離心3～8min，取上清液在溫度為20-25℃、真空度為0.001-0.005兆帕的條件下將濾液濃縮到含水量為20-30wt％，在85-95℃滅菌20-30min，得到水溶性天然抗氧化食品添加劑；將所述水溶性天然抗氧化食品添加劑與卵磷脂和大豆磷脂以重量比100∶5-10∶15-25混合，在55-65℃乳化16-25小時(shí)，得到脂溶性天然抗氧化食品添加劑。
2、 如權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述第一步中的葡萄酒孢漢遜酵 母的培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖30-50份、酵母膏4-8份、蛋白胨4-8 份、瓊脂10-25份和蒸餾水500-800份。
3、 如權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述第一步中的紫紅曲霉培養(yǎng)基 由以下以重量份計(jì)的原料組成糖度為8-20Brix的麥芽汁80-120份和瓊脂1_3份。
4、 如權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述第一步中的巴氏醋桿菌培養(yǎng) 基由以下以重量份計(jì)的原料組成葡萄糖80-120份、酵母膏8-15份、碳酸鈣15-30份、 瓊脂15-30份和蒸餾水700-1200份。
5、 如權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述第一步中的保加利亞乳桿菌 培養(yǎng)基由以下以重量份計(jì)的原料組成酵母膏5-10份、蛋白胨5-10份、葡萄糖8-15份、磷酸二氫鉀0. 1-0.4份、西紅柿汁50-150份、吐溫80 0. 3-0.8份、蒸餾水500-1000份 和瓊脂粉10-30份。
6、如權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述第二步的LB培養(yǎng)液由以下以 重量份計(jì)的原料組成酵母提取液3-10份、蛋白胨5-20份、氯化鈉3-10份、瓊脂10-30 份和水800-1200份。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種天然抗氧化食品添加劑的制備方法，其特征在于，具體步驟為將葡萄酒孢漢遜酵母、紫紅曲霉、巴氏醋桿菌和保加利亞乳桿菌用茄子瓶在各自的培養(yǎng)基上培養(yǎng)后接種到LB培養(yǎng)液中，發(fā)酵后濃縮得到。本發(fā)明的天然抗氧化食品添加劑無有機(jī)溶劑殘留、抗氧化能力全面且穩(wěn)定。
文檔編號A23L3/3463GK101530234SQ20091004950
公開日2009年9月16日 申請日期2009年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月17日
發(fā)明者瀚 江 申請人:上海創(chuàng)博食品技術(shù)發(fā)展有限公司