專利名稱：一種燃油毒性的檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種毒性檢測方法，尤其涉及一種燃油毒性的檢測方法。
背景技術：
各國汽車代用燃料的技術雖有不同，但目標都是預防石油燃料的枯竭和減少汽車 排放對環(huán)境的污染。目前，在眾多汽車代用燃料中倍受關注的是甲醇汽油和乙醇汽油。這 類燃料都是在汽油中通過添加甲醇或乙醇以部分取代價格正在不斷上升、資源已近枯竭的 汽油。在實際的應用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被證明能很好地用于汽車的燃油，但他們在 使用過程中是否安全呢？對汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有許多報道。發(fā)光細菌的毒性 測定方法是一個快速、經濟、有效的環(huán)境毒性物質評價手段，已成功地應用于重金屬污染土 壤的毒性評價以及水體污染毒性評價等方面。但是，應用發(fā)光細菌直接檢測汽油、甲醇汽油 和乙醇汽油三者毒性研究還末見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了 一種燃油毒性的檢測方法，可以方便地對燃油的毒性進行檢測。本發(fā)明的技術方案為首先，進行樣品處理稀釋液一 0. 85% NaCl溶液；稀釋液二 在稀釋液一中加入 吐溫-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀釋液一分別配制甲醇汽油添加劑(ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀釋液二分別配制樣品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，進行細菌培養(yǎng)基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培養(yǎng)基成分為混合鹽12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合鹽成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)12-16小時的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當濃度的菌懸 液。測試樣品配制成系列濃度梯度(93#汽油與ElO乙醇汽油的系列濃度為(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向測試管中依次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品 液的測試管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性測試儀檢測其發(fā)光度，并同時測定參 比毒物苯酚溶液系列濃度對發(fā)光菌發(fā)光的抑制曲線。每個濃度設三個平行樣，取平均值。每 種樣品液均配一對照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對照管中為上述稀釋液二；甲 醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑和苯酚的對照管中為上述稀釋液一)，并重復實驗3次。用直線內插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強度降低50%時樣品的濃度。 根據(jù)EC5tl值的大小，判斷樣品的毒性及其大小。最有對檢測數(shù)據(jù)進行處理，處理公式為
相對發(fā)光度(％)=樣品管發(fā)光值(脈沖數(shù))xl00 1 ； CX管發(fā)光值(脈沖數(shù))
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發(fā)明做進一步說明。本實施例中用到的材料為下表中的。 所用的試劑及儀器為吐溫-80，化學純。苯酚，分析純。乙醇，分析純，乙醇含量彡99. 7%，密度P (20°C) g/ml :0. 79。甲醇，分析純，甲醇含量彡99. 5%，密度P (20°C ) g/ml 0. 79。測試方法為首先，進行樣品處理稀釋液一 0. 85% NaCl溶液；稀釋液二 在稀釋液一中加入 吐溫-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀釋液一分別配制甲醇汽油添加劑1% (ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀釋液二分別配制樣品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，進行細菌培養(yǎng)基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培養(yǎng)基成分為混合鹽12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合鹽成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)12-16小時的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當濃度的菌懸 液。測試樣品配制成系列濃度梯度(93#汽油與ElO乙醇汽油的系列濃度為(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向測試管中依次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品 液的測試管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性測試儀檢測其發(fā)光度，并同時測定參 比毒物苯酚溶液系列濃度對發(fā)光菌發(fā)光的抑制曲線。每個濃度設三個平行樣，取平均值。每 種樣品液均配一對照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對照管中為上述稀釋液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑和苯酚的對照管中為上述稀釋液一)，并重復實驗3次。用直線內插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強度降低50%時樣品的濃度。 根據(jù)EC5tl值的大小，判斷樣品的毒性及其大小。最有對檢測數(shù)據(jù)進行處理，處理公式為
樣品管發(fā)光值(脈沖數(shù)、1() 賺峋/。) - crt發(fā)光值(脈沖數(shù))通過對上述測試結果進行分析，四批93#汽油樣品的EC5tl平均值為528. 82mg/L ； 四批ElO乙醇汽油樣品的EC5tl平均值為583. 30mg/L ；六批M50甲醇汽油樣品的EC5tl平均值 為904. 99mg/L。甲醇汽油添加劑的EC50為4924. 39mg/L，甲醇的EC50為4. 74X 104mg/L。乙 醇的EC5tl為3. 79X 104mg/L。由EC5tl的大小可知各樣品的毒性由大到小順序為93#汽油> ElO乙醇汽油>1150甲醇汽油> 甲醇汽油添加劑> 乙醇> 甲醇。因此我們認為，M50甲醇汽 油和ElO乙醇汽油的毒性主要是由汽油毒性引起的；M50甲醇汽油的毒性比93#汽油和ElO 乙醇汽油小，生物安全性比較好。
權利要求
一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于首先，進行樣品處理稀釋液一；0.85％NaCl溶液；稀釋液二在稀釋液一中加入吐溫 80至0.1％(v/v)。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于用稀釋液一分別配 制甲醇汽油添加劑(v/v)，甲醇10% (v/v)，乙醇10% (v/v)，苯酚1000mg/L。用稀釋 液二分別配制樣品93#汽油0. (v/v),E10乙醇汽油0. 1% (v/v)，M50甲醇汽油0. 16% (v/v)。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于然后，進行細菌培養(yǎng) 基菌液制備青?；【鶹ibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌株)培養(yǎng)基成分為混合鹽 12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至1000ml ；pH 9. 0?；旌消}成分:MgS04 19. 8%； MgC036 . 3 % ；MgBr2 0. 74 % ；MgCl2 0. 74 % ；CaC03 0. 22 % ；KC1 1. 76 % ；NaCI 66. 36 % ； Mg(HC03)24. 04%。以上配方中再加瓊脂2%即為固體培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于將培養(yǎng)12-16小時 的新鮮發(fā)光菌離心分離，加生理鹽水稀釋至適當濃度的菌懸液。測試樣品配制成系列濃度 梯度(93#汽油與E10乙醇汽油的系列濃度為(v/v, % ) 0. 02,0. 04,0. 06,0. 08,0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列濃度為(v/v, % ) :0.032，0.064，0.096，0. 128，0. 160)，再向測試管中依 次分別加入1.9mL系列濃度的樣品溶液。接著在裝有樣品液的測試管中各加入上述菌液 0. lmL，15min后用毒性測試儀檢測其發(fā)光度，并同時測定參比毒物苯酚溶液系列濃度對發(fā) 光菌發(fā)光的抑制曲線。每個濃度設三個平行樣，取平均值。每種樣品液均配一對照(CK)管 (汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的對照管中為上述稀釋液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加劑 和苯酚的對照管中為上述稀釋液一)，并重復實驗3次。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于用直線內插法求出 EC5Q。EC5(i是指在一定條件下發(fā)光強度降低50%時樣品的濃度。根據(jù)EC5(I值的大小，判斷樣 品的毒性及其大小。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種燃油毒性的檢測方法，其特征在于最有對檢測數(shù)據(jù)進 行處理，處理公式為相對發(fā)光度(％ ) J羊纖想(脈沖數(shù))xl0 反 ()CA管發(fā)光值(脈沖數(shù))
全文摘要
本發(fā)明涉及一種毒性檢測方法，尤其涉及一種燃油毒性的檢測方法。各國汽車代用燃料的技術雖有不同，但目標都是預防石油燃料的枯竭和減少汽車排放對環(huán)境的污染。目前，在眾多汽車代用燃料中倍受關注的是甲醇汽油和乙醇汽油。在實際的應用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被證明能很好地用于汽車的燃油，但他們在使用過程中是否安全呢？對汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有許多報道。但是，應用發(fā)光細菌直接檢測汽油、甲醇汽油和乙醇汽油三者毒性研究還來見報道。本發(fā)明提供了一種燃油毒性的檢測方法，可以方便地對燃油的毒性進行檢測。
文檔編號C12Q1/02GK101892284SQ20091005729
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月22日 優(yōu)先權日2009年5月22日
發(fā)明者張亞旦 申請人:張亞旦