專利名稱：用β-半乳糖苷酶制備蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物傳感器領(lǐng)域，更具體的說，是涉及"種蔗糖生物傳感器 核微孔酶膜的制備方法。
背景技術(shù)：
蔗糖是一種非還原雙糖，不能用常規(guī)測定還原糖的方法進行測定。目前， 為了滿足快速、靈敏的檢測需要，采用蔗糖生物傳感器的檢測方法。國外已
有蔗糖生物傳感器研制成功的報道，但是需要3種以上的酶才能檢測，誤差
大，工藝復(fù)雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種只需要固定化兩種 酶即可獲得蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法。 本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)
一種用々-半乳糖苷酶制備蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法，其特征 在于，包括下述步驟
(1)稱取--環(huán)糊精溶于由低濃度NaOH與戊二醛組成的混合溶液中， 之后，60。C加熱處理直至晶體分散，并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多 聚/ -環(huán)糊精；然后用蒸餾水洗滌上迷成帶有活性醛基的多聚"-環(huán)糊精，直 至徹底除去多聚"-環(huán)糊精表面的NaOH,室溫晾干后碾磨成基本上大小均勻 的顆粒；其中，低濃度氫氧化鈉溶液中含有體積百分比為2.5-5°/。的戊二醛； 環(huán)糊精、低濃度NaOH與戊二醛組成的混合溶液的質(zhì)量體積比為7:100;
(2 )將上述帶有活性醛基的多聚々-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與混合酶 溶液充分混合后，25匸下反應(yīng)80分鐘使酶固定化；將上述固定化的酶均勻涂 滿兩張核微孔膜表面，制成三明治結(jié)構(gòu)的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜；其中， 所述混合酶溶液為由0. 003-0. 007g葡萄糖氧化酶、lmL活力單位為3000 unit/mL的(3-半乳糖香酶、0. Olg牛血清白蛋白混合而成，上述帶有活性醛基的多聚/ -環(huán)糊精顆粒作為固定材料與混合酶溶液的質(zhì)量體積比為10: 1。 帶有活性醛基的多聚"-環(huán)糊精晾干后碾磨的顆粒直徑為0. 8-1. 2mm。 本發(fā)明具有下述技術(shù)效果
本發(fā)明利用半乳糖苷酶通過戊二醛處理，控制反應(yīng)時間即可以使得 "-半乳糖苷酶轉(zhuǎn)化為特異性水解蔗糖酶的活性，同時利用戊二醛作為交聯(lián) 劑，用多聚^-環(huán)糊精作為載體對其進行固定化，即可制成蔗糖生物傳感器 核微孔酶膜，簡化了生產(chǎn)工藝。用本發(fā)明的方法制備的蔗糖生物傳感器核微 孔酶膜只需要固定化兩種酶即可即可獲得特異性、靈敏度和穩(wěn)定性優(yōu)于目'前 國際上需要固定化3種酶所制成的生物傳感器酶膜。
具體實施例方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明詳細(xì)說明。
本發(fā)明中使用的^-半乳糖苷酶來自于酸克魯維斯酵母(i7wj^e/Y 邁yc" 實施例1
制備混合酶溶液將0. 005g葡萄糖氧化酶、lmL活力單位為3000 unit/mL 的|3 -半乳糖苷酶、.0. Olg牛血清白蛋白充分混合，制成混合酶溶液。
稱取0. 7g々-環(huán)糊精溶于10ml由濃度為0. 2Mol/L的NaOH與占低濃度 氫氧化鈉溶液中的體積百分比為5%的戊二醛組成的混合溶液中，之后，60°C 加熱處理直至晶體分散，并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多聚々-環(huán)糊 精。然后用蒸餾水洗滌成帶有活性醛基的多聚々-環(huán)糊精，直至徹底除去多聚 / -環(huán)糊精表面的NaOH，晾干后碾磨成直徑為0. 8-1. 2mm的顆粒。
將上述0. lg帶有活性醛基的多聚/ -環(huán)糊精顆粒作為固定材料與10pl 上述制備的混合酶溶液充分混合后，25。C下反應(yīng)80分鐘使酶固定化。將適量 上述固定化的酶均勻涂抹于兩張核微孔膜表面，盡量涂滿，制成三明治結(jié)構(gòu) 的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜。
實施例2
制備混合酶溶液將0. Q07g葡萄糖氧化酶、lmL活力單位為3000 unit/mL 的P-半乳糖苷酶、0. Olg牛血清白蛋白充分混合，制成混合酶溶液。
稱取0. 7g 〃 -環(huán)糊精溶于10ml由濃度為0. 2Mol/L的NaOH與占低濃度氫 氧化鈉溶液中的體積百分比為2. 5°/。的戊二醛組成的混合溶液中，之后，60°C
4加熱處理直至晶體分散，并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多聚--環(huán)糊 精。然后用蒸餾水洗滌成帶有活性醛基的多聚/ -環(huán)糊精，直至徹底除去多聚
/ -環(huán)糊精表面的NaOH，晾干后碾磨成直徑為0. 8-1. 2mm左右的顆粒。
將上述0. lg帶有活性醛基的多聚々-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與10^1 上述制備的混合酶溶液充分混合后，25。C下反應(yīng)80分鐘使酶固定化。將上 述固定化的酶適量均勻涂抹于兩張核微孔膜表面，盡量涂滿，制成三明治結(jié) 構(gòu)的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜。 實施例3
制備混合酶溶液將0. 003g葡萄糖氧化酶、lmL活力單位為3000 unit/mL 的P -半乳糖苷酶、0. Olg牛血清白蛋白充分混合，制成混合酶溶液。
稱取O. 7g〃^不糊精溶于10ml由濃度為0. 2Mol/L的NaOH與占低濃度氳 氧化鈉溶液中的體積百分比為3°/。的戊二醛組成的混合溶液中，之后，6(TC加 熱處理直至晶體M,并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多聚"-環(huán)糊精。 然后用蒸餾水洗滌成帶有活性酪基的多聚/ -環(huán)糊精，直至徹底除去多聚"-環(huán)糊精表面的Na0H，晾干后碾磨成直徑為0. 8-1. 2mm的顆粒。
將上述0. lg帶有活性醛基的多聚々-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與lOpl 上述制備的混合酶溶液充分混合后，25。C下反應(yīng)80分鐘使酶固定化。將上 述固定化的酶適量均勻涂抹于兩張核微孔膜表面，盡量涂滿，制成三明治結(jié) 構(gòu)的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜。
通過本發(fā)明實施例1的方法所制成的酶膜用來測定蔗糖表明蔗糖濃度 在0%-3°/。 (g/100ml)范圍內(nèi)具有非常好的線性關(guān)系；測定的響應(yīng)時間《30 秒鐘；可以進行連續(xù)7天的測定，其測定結(jié)果保持穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1、一種用β-半乳糖苷酶制備蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法，其特征在于，包括下述步驟(1)稱取β-環(huán)糊精溶于由低濃度NaOH與戊二醛組成的混合溶液中，之后，60℃加熱處理直至晶體分散，并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精；然后用蒸餾水洗滌上述成帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精，直至徹底除去多聚β-環(huán)糊精表面的NaOH，室溫晾干后碾磨成基本上大小均勻的顆粒；其中，低濃度氫氧化鈉溶液中含有體積百分比為2.5-5％的戊二醛；β-環(huán)糊精、低濃度NaOH與戊二醛組成的混合溶液的質(zhì)量體積比為7∶100；(2)將上述帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與混合酶溶液充分混合后，25℃下反應(yīng)80分鐘使酶固定化；將上述固定化的酶均勻涂滿兩張核微孔膜表面，制成三明治結(jié)構(gòu)的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜；其中，所述混合酶溶液為由0.003-0.007g葡萄糖氧化酶、1mL活力單位為3000unit/mL的β-半乳糖苷酶、0.01g牛血清白蛋白混合而成，上述帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與混合酶溶液的質(zhì)量體積比為10∶1。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用半乳糖苦酶制備蔗糖生物傳感器核微 孔酶膜的方法，其特征在于，帶有活性醛基的多聚y5-環(huán)糊精晾干后碾磨的 顆粒直徑為0. 8-1. 2mm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用β-半乳糖苷酶制備蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法，旨在提供一種只需要固定化兩種酶即可獲得蔗糖生物傳感器核微孔酶膜的方法。包括下述步驟稱取β-環(huán)糊精溶于由低濃度NaOH與戊二醛組成的混合溶液中，之后，60℃加熱處理直至晶體分散，并發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精；然后用蒸餾水洗滌上述成帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精，直至徹底除去多聚β-環(huán)糊精表面的NaOH，室溫晾干后碾磨成基本上大小均勻的顆粒；將帶有活性醛基的多聚β-環(huán)糊精顆粒作為固定材料與混合酶溶液充分混合后，25℃下反應(yīng)80分鐘使酶固定化；將上述固定化的酶均勻涂滿兩張核微孔膜表面制成三明治結(jié)構(gòu)的蔗糖生物傳感器核微孔酶膜。
文檔編號C12N11/12GK101463349SQ20091006762
公開日2009年6月24日 申請日期2009年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月6日
發(fā)明者呂瑜峰, 龐廣昌, 李加鵬, 胡志和, 陳慶森 申請人:天津商業(yè)大學(xué)