專利名稱：：類產(chǎn)堿單胞mob13及其應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一株種微生物新菌株及其應用，具體涉及一種類產(chǎn)堿假單胞菌株及其在病害生物防治以及作物促生中的應用。
背景技術：
：小麥紋枯病(i^/zoctom'acereato)又稱立枯病、尖目艮斑病，是分布范圍甚廣的世界性病害之一。幾乎遍布世界各溫帶小麥種植地區(qū)。早在1934年國外就有小麥紋枯病報道，我國于1973年也發(fā)現(xiàn)了此病，但由于發(fā)病輕，面積小，一度沒有引起重視。90年代以來，隨著施肥水平不斷提高，紋枯病在我國長江中下游麥區(qū)廣泛發(fā)生，每年遭受紋枯病危害的麥田面積約占種植面積的五分之一，經(jīng)濟損失在數(shù)十億元以上。目前小麥紋枯病的化學防治主要有拌種、噴灑兩種方式。藥劑拌種以三哇類藥劑為主，藥劑拌種后枯白穗率防效達88.6%以上，增穗、增粒、增重效果明顯，增產(chǎn)10%-20%。春季噴藥防治小麥紋枯病的適期在小麥返青拔節(jié)期前后。目前防治小麥紋枯病藥劑主要為井崗霉素和三哇類藥劑。國外報道了從某些植物或樹木中獲得的精油以及一些細菌對小麥紋枯病的抑菌活性，雖然抑制的種與侵染我國小麥主要的種不同，但他們的研究為我們防治小麥紋枯病提供了一種思路。由于化學防治對環(huán)境的負面影響逐漸顯現(xiàn)，生物防治逐漸受到重視?，F(xiàn)在報道應用于小麥紋枯病生物防治的生防菌包括放線菌S024、蠟樣芽孢桿菌2011、2012、2013和枯草芽孢桿菌2014和木霉菌等。但將產(chǎn)堿假單胞菌應用與小麥紋枯病生物防治還未見報道。
發(fā)明內容3本發(fā)明的目的在于提供一株類產(chǎn)堿假單胞生防新菌株及其在植物病害生物防治以及促生中的應用。喊假單胞(尸A，(i(9m(9腦s戸ewJ(9a/c",/g"e/7M)新菌株MOB13。該菌株已于2008年11月26日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京巿朝陽區(qū)大屯路甲3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)保藏，分類命名為類產(chǎn)堿假單胞(/^e^/o附o"w/weMfiofl/ca/z'gewas),保藏號為CGMCCNo.2763。MOB13具體通過如下方法分離得到從小麥實驗田中釆集土樣，取5g的土溶解到在45ml無菌生理鹽水的三角瓶中，28°C,120rpm搖床震蕩10min后靜止10min,取100pl的上清液加入到裝有900(il生理鹽水的Eppendorf管中，進行連續(xù)梯度稀釋。分別取以上土壤懸浮液和10—2，10_3,10—4倍土壤懸浮液稀釋液100|al在NA培養(yǎng)基(牛肉膏5g/1,蛋白胨10g/l,NaC15g/l,瓊脂15g/1)平板上均勻涂板，超凈工作臺內吹干，每個濃度重復3次，，28。C溫箱內培養(yǎng)36h，用無菌牙簽挑取細菌單菌落劃線純化后，以小麥紋枯病菌為靶標菌，利用平板對峙法進行拮抗菌的初步篩選；對獲得的拮抗菌進行復篩，最終篩選出性狀優(yōu)良的生防菌株類產(chǎn)堿假單胞菌(尸wMAmo"w戸^/。a/c"/扭腦)MOB13CGMCCNo.2763。綜合假單胞菌的形態(tài)學特征、生理生化特性、16SrDNA序列和BIOLOG碳源利用的結果，將其鑒定為類產(chǎn)堿假單胞菌戶^^owo"w實驗表明，MOB13能產(chǎn)生與抗菌相關蛋白酶及與植物促生相關的生長素(IAA)，對辣椒疫霉病菌、小長喙霉病菌、桃褐病菌、西瓜枯萎病菌均有平板抑制作用。其對辣椒疫霉病、甘薯黑斑病、桃褐病、西瓜枯萎病等有潛在的防治效果，有很大的潛在環(huán)境經(jīng)濟效益。其對小麥等農作物有促生作用，對作物增產(chǎn)、增收也有潛在的價值。4本領域技術人員很容易想到將本發(fā)明菌株發(fā)酵液或菌懸液作為農藥的有效成分用于植物病害的生物防治，或者用于促進植物生長。本發(fā)明還提供M()B13發(fā)酵培養(yǎng)方法，包括菌種活化、種子液培養(yǎng)、發(fā)酵罐發(fā)酵等步驟，具體包括如下步驟1、菌種活化使用KB培養(yǎng)基，培養(yǎng)基配方為蛋白胨20g/l，甘油10ml/l，MgS04'7II201.5g/l，K2HP041.5g/l，瓊脂15g/l。將類產(chǎn)堿假單胞MOB13接種于KB培養(yǎng)基斜面上，28。C培養(yǎng)48h。2、種子液的培養(yǎng)種子培養(yǎng)用MY培養(yǎng)基，MY培養(yǎng)基的組成蔗糖5-10g/l，蛋白胨6-8g/l,酵母膏5-8g/l，NaCl3-5g/l，KH2P040.8-1.0g，MgSCV7H201-1.5g/l，pH值為7.0-7.2。將活化好的將類產(chǎn)堿假單胞尸wi/(io附(9"(ZS1戸eMdoa/ca/z'ge"es菌株MOB13用生理鹽水配制成108cfu/ml的菌懸液，以0.1。/。的接種量接種于MY液體培養(yǎng)基中，28'C搖床震蕩培養(yǎng)，轉速為180-200rpm，培養(yǎng)時間為40-48h。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為玉米漿10-15g/l,蔗糖5-8g/1，(NH4)2S048-10g/1,KH2P040.8-1.0g，MgS04'7H201-1.5g/l，CaC031-1.5g/1,pH值為7.0-7.5。把培養(yǎng)好的類產(chǎn)堿假單胞尸se^omo"w/weMtfoa/ca/ZgewwMOB13種子液以2%的接種量接入發(fā)酵罐中，28°C,攪拌速度為200rpm,通氣量為1:0.75-0.9(發(fā)酵液體積每分鐘通氣量體積)、罐壓1.8-2.2F/cm2。發(fā)酵48-60h菌量達到8-10xl08cfu/ml，獲得類產(chǎn)堿4叚單胞i^eM<io70w<xpseMdoa/ca/z'gewesMOB13發(fā)酵液。本發(fā)明類產(chǎn)堿假單胞菌MOB13對小麥紋枯病有較好的的防病效果，對小麥紋枯病的防治優(yōu)于井岡霉素，并能夠促進小麥生長，使株高增力口34.97%，根長增加17.34%。對辣椒疫霉病、甘薯黑斑病、桃褐病、西瓜枯蔞病等有潛在的防治效果，有很高的潛在環(huán)境經(jīng)濟效益。其對小麥等農作物有促生作用，對作物增產(chǎn)、增收也有潛在的價值。圖1顯示的是MOB13的16SrDNAPCR擴增產(chǎn)物的凝膠電泳圖片，圖中，1、Marker;2、空白對照；3、以MOB13基因組為模板擴增16SrDNA。圖2顯示的是MOB13對小麥紋枯病平板防治效果，其中，左邊植株為無菌水陰性對照，中間為20%井岡霉素可濕性粉劑陽性對照，右為MOB13菌懸液處理。圖3顯示的是MOB13對小麥紋枯病溫室防治效果，其中，左邊植株為無菌水陰性對照，中間為20%井岡霉素可濕性粉劑陽性對照，右為MOB13菌懸液處理。圖4顯示的是用脫脂牛奶平板對MOB13產(chǎn)蛋白酶的檢測。圖5顯示的是對MOB13產(chǎn)IAA的檢測，圖中，1、無菌水對照，2、MOB13(實際顏色呈紅色)。具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內容，但不應理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實質的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1MOB13的鑒定綜合假單胞菌的形態(tài)學特征、生理生化特性、16SrDNA序列和BIOLOG碳源利用的結果，將其鑒定為類產(chǎn)堿假單胞菌尸w^fow朋w具體鑒定結果如下1、革蘭氏染色陰性，電子顯微鏡觀察，菌體長橢圓形。2、生理生化特性類產(chǎn)堿假單胞菌尸化M(iowo"av戸ewciofl/c"/z'gg"e5MOB13CGMCCNO.2763生理生化特性如表1所示革蘭氏染色陰性，嚴格好氧，果聚糖、氧化酶、精氨酸雙水解、淀粉水解、明膠水解、卵磷脂酶、脂肪酶、葡萄糖氧化產(chǎn)酸產(chǎn)氣、H2S產(chǎn)生、陰柹.七葉靈利用、ot半乳糖酶反應、過氧化氫酶、脲酶-表l、類產(chǎn)堿假單胞菌MOB13生理生化特性里..................................._____________—一革蘭氏反應果聚糖產(chǎn)生氧化酶精氨酸雙水解淀粉水解明膠水解七葉靈利用oc半乳糖酶硝酸鹽還原卵磷脂酶脂肪酶葡萄糖氧化產(chǎn)酸產(chǎn)氣厭氧生長過氧化氫酶脲酶H2S產(chǎn)生耐鹽性過敏性壞死反應結果十十十-1-+1%十，陽性反應；-，陰性反應類產(chǎn)堿假單胞菌/wgw<iofl/ca//ge"esMOB13CGMCCNO.2763可利用吐溫40、糖原、D-果糖、L-丙氨酸等18種碳源作為唯一碳源，不能利用N-乙?；?D半乳糖胺、乙酸、木糖醇、m-肌醇等65種碳源作為唯一碳源，對纖維二糖、龍膽二糖、麥芽糖、7D-海藻糖等12種碳源的利用呈臨界狀態(tài)。表2、類產(chǎn)堿假單胞菌MOB13BIOLOG測定結果底鉤__________利.用狀.*——H——_______利用狀況'..水—a-環(huán)糊精+糊精+糖原+吐溫40+吐溫80+N-乙?；?D半乳糖胺—N-乙?；?D-葡萄糖胺—阿東糖醇—L-阿拉伯糖十D-阿糖醇—纖維二糖{/}赤藻糖醇—D-果糖+L-巖-藻糖—D-半乳糖+龍膽二糖{/}a-D-葡萄糖+m-肌醇—a-D-乳糖{/}乳酮糖{/}麥芽糖{/}D-甘露醇—D-甘露糖十D-蜜二糖+P-甲基D-葡萄苦—D-阿洛酮糖+D-棉子糖+L-鼠李糖—D-山梨醇{/}蔗糖+D-海藻糖{/}松二糖+木糖醇—甲基丙酮酸+單-甲基琥珀酸—乙酸—順-烏頭酸(丙烯三羧酸)—檸檬酸甲酸—D-乳糖酸內酯D-半乳糖醛酸D-葡糖酸D-氨基葡萄糖酸—D-葡糖醛酸—a-羥基丁酸—|3-羥基丁酸—Y-羥基丁酸p-羥基苯乙酸—衣庚酸—a-丁酮酸a-酮戊二酸—a-酮基戊酸—D,L-乳酸—丙二酸丙酸—奎尼酸—D-糖二酸癸二酸—丁二酸溴代丁二酸一乙酰胺酸葡糖醛酰胺丙酰胺{/}D-丙氨酸L-丙氨酸+L-丙氨酰甘氨酸{/}L-天門冬酰胺—L-天門冬氨酸—L-谷氨酸4甘氨酰-L-天冬氨酸甘氨酰-L-谷氨酸——L-組氨酸—羥基-L-脯氨酸——L-亮氨酸—L-鳥氨酸——L-苯丙氨酸—L-脯氨酸L-焦谷氨酸—D-絲氨酸—L-絲氨酸{/}L-蘇氨酸——D，L-肉堿氨基丁酸—腺苷{/}肌苷—尿苷一胸苷—苯乙胺—腐胺—2-氨基乙醇—2,3-丁二醇—丙二醇—D,L-a-磷酸甘油—葡糖-l-磷酸—6-磷酸葡萄糖—注"+"表示陽性，"-"表示陰性，"{/}"表示臨界狀態(tài)。3、16SrDNA序列分析方法是提取類產(chǎn)堿假單胞MOB13的基因組，用16S擴增通用引物8F:5CGGGATCCAGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCT3、和1506R:5'CGGGATCCTACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCC3'.在如下PCR體系中擴增50^擴增體系，10pmol引物，0.2mMdNTP,1.5mMMgCl2，2.5UTaqDNA聚合酶(TaKaRa),1xPCRbuffer(TaKaRa)，25ng基因組DNA作模板。PCR反應條件為94°C5min預變性，94。C變性30s，55。C退火30s，72。C延伸1min,30個循環(huán)后72'C充分延伸5min。PCR擴增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳分析，用OMEGA公司的純化試劑盒GelExtractionKit純化回收后連接TaKaRa公司的T載體pMD18-T。在Invitrogen公司用ABI3730DNA測序儀進行測序，結果如SEQIDNo.l所示。用BLAST程序在GenBank(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov)相應序列比對的結果表明類產(chǎn)堿假單胞菌尸化wcfowo"ay;we^/c^/ca//ge"esMOB13CGMCCN0.2763的16SrDNA序列與目前發(fā)表的類產(chǎn)堿假單胞i^eM^fomo"os戸ewJoa/ca/z'gewes相關菌株相比相似性最高，達至1」99%,表明其是產(chǎn)實施例2抑菌譜分析對病原真菌的平板抑制檢測方法。用打孔器打取5mm直徑的靶標病原真菌接種于PDA平板中央，假單胞與靶標菌成180。接種于靶標病原真菌兩測2.5cm處，25'C培養(yǎng)4到6天后測量病原真菌菌落直徑。以接種靶標真菌而不接種假單胞的平板為對照。抑制生長率按照如下公式計算抑制生長率-(C-7)/Cx100%C:對照真菌生長直徑T:接種MOB13后真菌生長直徑細菌的抑制情況。用PDA培養(yǎng)基活化MOB13后用生理鹽水配成108cfu/ml的菌懸液，用移液槍吸取5pl接種于PDA平板中央，培養(yǎng)48h后用3ml的氯仿以其蒸汽殺死菌體。將活化好的乾標細菌配成108cfu/ml的菌懸液，吸取50pl菌懸液加入到加入3ml融化后冷卻到5(TC的水瓊脂(0.7%瓊脂，pH7.0)中，迅速混句，立即倒入三氯甲烷殺死MOB13菌體的培養(yǎng)基上，鋪成均句的薄層，28。C培養(yǎng)36小時，觀察抑菌圈的情況。類產(chǎn)堿假單胞菌i^ewciom。"as/wg"(ioa/ca//g￡"￡sMOB13對部分病原真菌抑制結果如表3所示對辣椒疫霉病菌、小長喙霉病菌、桃褐病菌、西瓜枯萎病菌均有平板抑制作用。表3、類產(chǎn)堿假單胞菌MOB13對病原真菌平板抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>Fusari畫oxyspo廠umf.sp.vasinfect訓C/ac/ospo廠/.tv/77&//腦b-，沒有抑制作用jPseMt/o附oww/weM(ioa/ca/扭weyMOB13&風炳盡細困均無平板抑制作用，如表4所示。表4、類產(chǎn)堿假單胞菌M0B13對病原細菌的平板抑制作用病原細菌抑菌圈直徑(mm)Xgra6""e/^鵬廠/^ogew^K27々raZ^"er/鵬v他K308^4gnZac/^n'ww/ww^/^c^/tyC58/Is^z^towowas1co/rwg"/"ICMP5819BwrA^Wmoce戸。》ICMP5796-無抑制作用實施例3生防相關性狀檢測蛋白酶可以消解病菌的膜結構，也可以破環(huán)線蟲體表，是生防菌生防機理之一。蛋白酶的檢測用脫脂牛奶平板(胰蛋白胨5g,酵母抽提物2.5g,葡萄糖lg,7%的脫脂牛奶250ml,瓊脂15g，用水補足1000ml)檢測蛋白酶。把MOB13接種到脫脂牛奶平板中央，28X:培養(yǎng)72h,菌落周圍有透明圈出現(xiàn)表示蛋白酶陽性。如圖4所示類產(chǎn)堿假單胞菌i^ewcfowo"ay/weMt/oa/cfl/Zgewes1MOB13CGMCCN0.2763產(chǎn)生蛋白酶。IAA為植物激素，可以促進植物生長，細菌產(chǎn)生IAA對植物具有促生作用。將活化的MOB13菌株接種于NA培養(yǎng)基(蛋白胨5g/L,酵母抽提物1.5g/L，牛肉膏1.5g/L，NaC15g/L，0.5g/L色氨酸，pH7.0-7.2),28。C搖培一周后取樣5mL，12000rpm離心10min，取2mL上清，加入100|iL的10mM磷酸，4mL檢測液(1mL的0.5MFeCl3溶于50mL35%HCl()4),室溫反應25min后用分光光度計測530nm處光吸收。配制IAA純品水溶液并梯度稀釋，檢測不同濃度IAA溶液反應后在OD530nm處吸光值，繪制IAA含量標準曲線。經(jīng)測定MOB13產(chǎn)生IAA的量為171.37嗎/ml。如圖5所示，溶液顯紅色，表明類產(chǎn)喊假單胞菌尸化i^fowo腦s/wewt/。a/ca/z.geesMOB13CGMCCNO.2763產(chǎn)IAA。實施例4防效與促生1、平板檢測生防菌株MOB13對小麥紋枯病的生防能力，具體方法如下(l)將紋枯病菌用滅菌打孔器打孔，用接種針接到PDA平板上，放入28。C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7天左右長滿整個平板待用。(2)待紋枯病菌生長到第五天，用NA培養(yǎng)基將生防菌株MOB13活化24小時后，用滅菌牙簽將已活化的菌株接到制備好的PDA液體培養(yǎng)基中，28°C,160rpm,搖床搖培72小時。(3)待菌株搖培到48小時，將小麥種子用兩層紗布包好放入大培養(yǎng)皿中，清水浸濕。28"C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天用清水浸濕一次。培養(yǎng)48小時左右種子露白，挑選大小均勻飽滿且露白一直的小麥種子。(4)將培養(yǎng)好的MOB13生防菌菌懸液用無菌生理鹽水稀釋到108cfu/ml(OD600=0.8),取稀釋好的MOB13菌懸液、20%井岡霉素和無菌生理鹽水各5ml放入9mm直徑的指形管中，每個指形管中放入30粒催芽好的小麥種子，浸種3小時。(5)將催芽好的小麥種子擺放在制備好的紋枯病菌平板上，在接種種子的平板上鋪滿無菌蛭石，每個平板10粒，每個菌株做3個重復。(6)將蛭石澆濕，放入25。C,12h光照的日光溫室中培養(yǎng)，每天定時澆水。(7)曰光培養(yǎng)7天調查記錄出苗情況，15天后可調查病情指數(shù)，計算防效。圖2顯示了MOB13對小麥紋枯病平板防治效果。經(jīng)計算菌株MOB13的平板防效達到62.13%，與20%井岡霉素藥劑小麥紋枯病病情分級標準參照Lipps等方法。小麥苗期病情分級標準1級葉鞘變褐；2級葉鞘外有明顯紋枯病斑，病斑直徑〈0.5cm;3級葉鞘外有1至數(shù)個病斑，病斑直徑〉0.5cm;4級葉鞘內有病斑；5級莖桿有病斑或麥株枯死。病情指數(shù)=2(病級x相應病級苗數(shù))/5x總苗數(shù)xl00防效(％)=(對照病指-處理病指)/對照病指xl002、溫室檢測生防菌株M0B13對小麥紋枯病的防治效果，具體方法如下(1)生防菌M0B13菌懸液和小麥種子制備方法與平板檢測相同。(2)將小麥紋枯病菌接入玉米砂培養(yǎng)基中，置室溫培養(yǎng)，前兩天要稍加搖動，使菌絲生長均勻。菌絲長滿(IO天左右)后取出。將一定量的玉米砂繁殖的病菌與無菌土(草碳、蛭石、砂土、腐殖酸土以體積比l:1:1:1混合)按1:30的體積比混合均勻，制成菌土。(3)將生防菌菌懸液浸泡過的麥種播入裝菌土的花盆中(直徑10cm，高llcm),每盆種10粒。(4)以無菌水浸泡種子接種菌土作陰性對照，以20%井岡霉素可濕性粉劑稀釋100倍浸泡種子接種菌土作陽性對照，每個處理三個重復。出苗后二十天調查發(fā)病情況，調查病情指數(shù)和發(fā)病率并計算防效，方法同平板檢測。圖3顯示了MOB13對小麥紋枯病溫室防治效果。實驗結果表明，菌株M0B13的盆栽防效達到73.87%,高于20%井岡霉素藥劑處理的防效68%。3、田間檢測生防菌株MOB13對小麥紋枯病的防治效果，具體方法如下生防菌菌懸液、小麥種子和病土制備同溫室檢測。將制備的病土均勻撒到實驗田地塊，并翻耕地塊成為重病田塊。田間實驗設置三個處理，三個重復，小區(qū)面積為10m2，小區(qū)隨機排布。三個處理為無菌水浸種、生防菌MOB13浸種、20%井岡霉素浸種。播種40天后調查病情指數(shù)、發(fā)病率，計算防治效果。實驗結果表明菌株MOB13的田間防效達到75.85%,與20%井岡霉素藥劑處理的防效72.45%無顯著性差異。4、促生效果檢測方法(1)將活化的生防菌株MOB13放入搖床搖培(28°C，160r)48h。(2)小麥種子用兩層紗布包好放入大培養(yǎng)皿中，清水浸濕。28'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天用清水浸濕一次，培養(yǎng)48小時左右待種子露白。挑選大小均勻且飽滿的小麥種子六十粒左右，放入MOB13菌懸液中30粒，同時用無菌水浸種作對照。(3)取出浸泡的麥種，種到無菌平板上，每個平板10粒做3個平行，上面鋪上蛭石。(6)將蛭石繞濕，放入日光溫室中待出苗。(7)出苗15天后拔出小麥，測量其株高、根長。實驗結果得出MOB13可促進小麥生長，能促進株高增長34.97%,根長增長17.34%。對玉米、番癡—、黃瓜、大豆、綠豆的促生試驗結果表明均能夠促進玉米、番茶、黃瓜、大豆、綠豆株高增高28~42%，根長增長15~24%。通過上述實驗表明，類產(chǎn)堿假單胞菌尸WM^m，oy戸e^oa/ca/z'gewwMOB13CGMCCN0.2763對小麥紋枯病有較好的的防病效果，對小麥紋枯病的防治優(yōu)于井岡霉素，并能夠促進小麥生長，使株高增加34.97%,根長增加17.34%。對辣椒疫霉病、甘薯黑斑病、桃褐病、西瓜枯萎病等有潛在的防治效果，有很大的潛在環(huán)境經(jīng)濟效益。其對小麥等農作物有促生作用，對作物增產(chǎn)、增收也有潛在的價值。序列表說明SEQIDNo.1分別是MOB1316SrDNA的核苷酸序列；SEQIDNo.2&3是用于擴增MOB1316SrDNA的通用引物對。14序列表<11()〉'I'W農業(yè)人學<120〉類產(chǎn)堿'丫'.胞MOB13及-JL:應川<13()>K1IP08113413.1<160>3<17()>Patent:l:nversion3.5〈210>1<211>940<212〉腿〈213〉尸seuofcw;o朋sjDsei/abaJcaJi《e"esM0B1:〈400〉1cgtatcgg'attacl:g-ggcgtaagcgcgcgtaggtggtt:cgtgtg3犯g'CC60ccg'g'gctc肌cctgggaactctggcgagctagagtacggt卿gggtggt120gg'aatttcctgtgtagcggtg肌3tgcgtagatataggaaggaacaccagtggcgaaggc180gaccacctggactgatactgacactgaggtgcg肌agcgtggggagcaaacaggattaga240taccctg'gtag丄CC3Cg'CCgtaaacgatgtcaactagccgttgggt3CCttg3gtactta300gtggcgcagcagttgaccgcctggggagtacggccgc肌ggttaaaactc360acgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagca^icgc420g肌gaaccttacctggccttgacatgctgagaactttccaggtgccttcg480ggaactcagacacaggtgctgcatggctgtcglxagctcgtgtcgtg卿tgttgggtts540agtcccgtaacgagcgcaacccttgtcctta_gttaccagcacgttatggtgggcactcta600ag'gagactg'cccgg鄉(xiāng)卿gtggggatgacgtcaag'tcatcatggccct660tacggccagggctacacacg'tgctacaatggtcggtacaaagggttgcca兆ccg.cgagg720cgatcgtagtccggatcgcagtctgc犯ctcgactgcgtg780aagtcgg'aatcgctagtaatcgtgaatcagaatgtcacggcccgggcctt840gtacacaccg-cccgtcacaccatgggagtgggttgctccagtctaacctt900cggggggacggttaccacggagtgattcatgactggggtg940〈210〉2〈211〉38<212〉腿〈213〉人工序列〈400〉2cgggatccagagtttgal:cctggctcagaacgaacg.ct3815<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>權利要求1、類產(chǎn)堿假單胞(Pseudomonaspseudoalcaligenes)MOB13，保藏號為CGMCCNo.2763。2.權利要求1所述的菌株在生物農藥中的應用。3、含有權利要求1所述菌株或其發(fā)酵菌液的生物農藥。4、含有權利要求1所述菌株的菌劑。5、權利要求l所述菌株、權利要求3所述的生物農藥或權利要求4所述的菌劑在植物病害生物防治中的應用。6、如權利要求5所述的應用，其中所述植物病害為辣椒疫霉病、甘薯黑斑病、桃褐病、西瓜枯萎病或小麥紋枯病。7、權利要求1所述菌株或其發(fā)酵菌液在促進作物生長中的應用。8、如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述作為為小麥、玉米、番茄、黃瓜或大豆。全文摘要本發(fā)明提供了一種類產(chǎn)堿假單胞(Pseudomonaspseudoalcaligenes)新菌株MOB13，菌株保藏號為CGMCCNo.2763，其能產(chǎn)生與抗菌相關的IAA、蛋白酶。對部分植物病原真菌(Ceratocystisfimbriata、Fusarium.oxysporumf.sp.niveum、Monilinialaxa、Phytophthoracapsici)有平板抑制作用。以平板和盆栽、大田實驗檢測假單胞菌MOB13對小麥紋枯病的防治效果，其防效分別為62.13％和73.87％。對小麥有良好的促生作用，能促進株高增長34.97％，根長增長17.34％。文檔編號C12N1/20GK101463336SQ20091007620公開日2009年6月24日申請日期2009年1月5日優(yōu)先權日2009年1月5日發(fā)明者喬玉輝,吳文良,孟凡喬,娜鄔,郭巖彬申請人:中國農業(yè)大學