專(zhuān)利名稱(chēng)：：野黃芩素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種野黃茶素
背景技術(shù)：
：野黃芩素，又名燈盞花乙素皂苷苷元，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是5，6,7，4-四羥基黃酮，與燈盞花乙素的區(qū)別在7位游離幾基，燈盞花乙素是燈盞花素注射液的主要成分，具有治療心腦血管疾病的作用，在臨床上具有很好的治療作用，而燈盞花素口服制劑的因?yàn)樯锢枚鹊停R床藥效作用不是很理想，大量文獻(xiàn)報(bào)道，燈盞花素在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物為野黃芩素，而野黃芩素的生物利用度比燈盞花素高幾倍(《燈盞花乙素普元不同給藥劑量的大鼠藥動(dòng)學(xué)比較》，車(chē)慶明等，中國(guó)新藥雜志2006年第15巻第18期)，因此，醫(yī)藥科研工作者認(rèn)為野黃茶素可以開(kāi)發(fā)成新藥，但野黃茶素在燈盞花中含量很低，所以，需要科研工作者解決野黃茶素原料的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，我們科研人員通過(guò)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)，將燈盞花素水溶液，調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)膒H值，在適當(dāng)?shù)臏囟认录尤胂阜磻?yīng)，調(diào)節(jié)pH值后，聚酰胺純化，得到含量大于98%的野黃芩素，本發(fā)明提取純化方法，以燈盞花素計(jì)得率更高，可以很好的解決提取率低難點(diǎn)。本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一種野黃茶素，通過(guò)下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至35。C-45。C，恒溫35。C-45。C，調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒溫35。C-45。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.Q-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙其中燈盞花素中燈盞花乙素含量大于等于50%小于100%。一種野黃茶素優(yōu)選下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至37°C-40°C,恒溫37°C-40°C,調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0,力口入消化酶，恒溫37°C-40。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。一種野黃茶素優(yōu)選下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45°C，恒溫35°C-45。C，調(diào)節(jié)pH值8.0-10.0,加入消化酶，恒溫35。C-45。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。一種野黃荅素優(yōu)選下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45。C,恒溫35°C-45。C，調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒溫35。C-45。C放置2-6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。一種野黃茶素優(yōu)選下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45°C，恒溫35°C-45°C,調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒溫35。C-45。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值3.0-5.0,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃芩素。一種野黃茶素優(yōu)選下述方法制備得到燈盞花素加水溶解完全，加熱至37°C-40°C,恒溫37°C-40。C,調(diào)節(jié)pH值8.0-10.0，加入消化酶，恒溫37。C-40。C放置2-6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-5.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%-80%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃芩素。野黃茶素為活性成分制備的藥物制劑。野黃茶素在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。其中制劑為片劑、膠嚢劑或顆粒劑。檢測(cè)分析方法高效液相色i普法色譜柱Cu反相色譜柱。色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0-10分鐘時(shí)，甲醇的比例由5%升至100°/。，0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由95%降至0%;10-20分鐘時(shí)，甲醇的比例由100%降至95%,0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由0齡至5°/。；對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取野黃茶素對(duì)照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱(chēng)取樣品，經(jīng)過(guò)處理后，放到容量瓶中，加曱醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積或峰高計(jì)算含量即得。制備方法提取率比較試驗(yàn)試驗(yàn)方法取燈盞花素，等分，分別按照本發(fā)明工藝方法和發(fā)明專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)?00410033687.5)工藝方法制備，得到野黃茶素，按照上述檢測(cè)方法，檢測(cè)其純度，計(jì)算得率。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表l:表l不同制備方法工藝比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>藥理試-瞼例試驗(yàn)例1對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，體重200-300g。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分組正常對(duì)照組，模型組，燈盞花乙素組、野黃茶素組組。正常對(duì)照組給予含氧洛氏液，模型組給予氮飽和洛氏液，實(shí)驗(yàn)藥物組給予含氮飽和藥物(實(shí)驗(yàn)藥物用洛氏液配置)。取大鼠，尾靜脈注射肝素鈉(1000U/kg)，15分鐘后擊暈，開(kāi)胸，將心臟迅速取出，移至貝i有4'C洛氏液的培養(yǎng)皿中，清洗心臟殘留血液，在液面下迅速把主動(dòng)脈接于灌流的套管上，并以線結(jié)扎固定。立即以含氧洛氏液進(jìn)行灌流。灌注壓70cm水柱，灌流溫度(38±5)。C,流速(11.5±0.5)mL/min。用蛙心夾夾住心尖部并與換能器相連，二道生理記錄儀描記心率變化。心臟復(fù)跳并心率顯示正常后，穩(wěn)定30min,再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。正常對(duì)照組，以含氧洛氏液持續(xù)灌流110min;模型組，以含氧洛氏液灌流30min后，改用氮飽和洛氏液灌注40min(此為缺氧灌注)，再恢復(fù)含氧洛氏液灌流40min;給藥組實(shí)驗(yàn)方法基本同模型組，僅在缺氧灌注時(shí)改用不同濃度的氮飽和受試藥物灌注。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表2。表2表對(duì)缺氧再給氧灌注損傷大鼠離體心臟冠脈流量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與才莫型纟且比4交，*P<0.05，**P<0.01。試驗(yàn)例2對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響實(shí)-瞼動(dòng)物Wistar大鼠，雌;維兼用，體重180—220g。實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)組即空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥物組、本發(fā)明藥物組。給藥量2mg/kg。每日灌胃給藥l次，連續(xù)7d,空白對(duì)照組給予等體積的蒸餾水。于末次給藥lh后用2.5%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥固定。用針電極刺入四肢皮下，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，作為基礎(chǔ)心電圖對(duì)照，然后尾靜脈注射垂體后葉素0.5U/kg，于10s內(nèi)注射完畢，立即記錄注射垂體后葉素后5s、10s、15s、30s、lmin、2min、3min的心電圖，觀察T波、ST4爻和心率的變化。以心電圖出現(xiàn)下列指標(biāo)一項(xiàng)者即為陽(yáng)性心肌缺血J點(diǎn)升高1.5mV以上，T波低平(降低原T波高度50°/。以上)、雙向、倒置，ST^:水平下移0.5mV，心律不齊。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表2。表2對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制備實(shí)施例實(shí)施例1燈盞花素加水溶解完全，加熱至35。C,恒溫35。C,調(diào)節(jié)pH值8.0，加入消化酶，恒溫35。C放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例2燈盞花素加水溶解完全，加熱至45°C,恒溫45°C，調(diào)節(jié)pH值12.0，加入消化酶，恒溫45。C放置12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗,再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例3燈盞花素加水溶解完全，加熱至4(TC,恒溫40'C,調(diào)節(jié)pH值10.0,加入消化酶，恒溫4(TC放置6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值4.0,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用60°/。乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例4燈盞花素加水溶解完全，加熱至37°C,恒溫37°C,調(diào)節(jié)pH值8.O,加入消化酶，恒溫37。C放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃茶素。實(shí)施例5燈盞花素加水溶解完全，加熱至40°C,恒溫40°C,調(diào)節(jié)pH值12.0，加入消化酶，恒溫4(TC放置12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。實(shí)施例6燈盞花素加水溶解完全，加熱至38°C,恒溫38。C,調(diào)節(jié)pH值9.5，加入消化酶，恒溫38'C放置5小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值4.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用35°/。乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例7燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C，恒溫35°C，調(diào)節(jié)pH值8.O，加入消化酶，恒溫35。C放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用25%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃茶素。實(shí)施例8燈盞花素加水溶解完全，加熱至45°C，恒溫45°C,調(diào)節(jié)pH值10.0，加入消化酶，恒溫45'C放置12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例9燈盞花素加水溶解完全，加熱至42。C，恒溫42。C,調(diào)節(jié)pH值9.O,加入消化酶，恒溫42。C放置11小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值5.5,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用85%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例10燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C，恒溫35。C,調(diào)節(jié)pH值8.O，加入消化酶，恒溫35T放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。實(shí)施例11燈盞花素加水溶解完全，加熱至45°C，恒溫45。C,調(diào)節(jié)pH值12.0，加入消化酶，恒溫45。C放置6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃茶素。實(shí)施例12燈盞花素加水溶解完全，加熱至36°C，恒溫36°C，調(diào)節(jié)pH值8.5,加入消化酶，恒溫36。C放置3小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用30%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃芩素。實(shí)施例13燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C，恒溫35°C，調(diào)節(jié)pH值8.O,加入消化酶，恒溫35t:放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值3.0,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。實(shí)施例14燈盞花素加水溶解完全，加熱至45。C，恒溫45。C，調(diào)節(jié)pH值12.0，加入消化酶，恒溫45。C放置12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值5.0,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例15燈盞花素加水溶解完全，加熱至39°C，恒溫39。C,調(diào)節(jié)pH值10.5，加入消化酶，恒溫39。C^:置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值4.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃芩素。實(shí)施例16燈盞花素加水溶解完全，加熱至37°C,恒溫37°C，調(diào)節(jié)pH值8.O，加入消化酶，恒溫37。C放置2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。實(shí)施例17燈盞花素加水溶解完全，加熱至40°C,恒溫40°C，調(diào)節(jié)pH值10.0,加入消化酶，恒溫4(TC放置6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值5.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用80°/。乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。實(shí)施例18燈盞花素加水溶解完全，加熱至37.5°C，恒溫37.5'C，調(diào)節(jié)pH值9.0，加入消化酶，恒溫37.5'C放置3小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值3.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用60%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃芩素。上述試驗(yàn)例中燈盞花素中燈盞花乙素含量大于等于50%小于100%。上述試驗(yàn)例制備的野黃茶素為活性成分制備的藥物制劑。其中制劑為片劑、膠嚢劑或顆粒劑。上述試驗(yàn)例制備的野黃茶素在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述消化酶可以由市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)所得，也可以通過(guò)現(xiàn)有4支術(shù)進(jìn)^f亍制備。權(quán)利要求1、一種野黃芩素，其特征在于燈盞花素加水溶解完全，加熱至35℃-45℃，恒溫35℃-45℃，調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒溫35℃-45℃放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素中燈盞花乙素含量大于等于50%小于100%。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素加水溶解完全，加熱至37。C-40。C，恒溫37。C-40。C,調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒溫37°C-40。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5,濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗,再用20%-90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥,得到野黃茶素。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45°C,恒溫35°C-45。C,調(diào)節(jié)pH值8.0-10.0,加入消化酶，恒溫35°C-45。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45°C,恒溫35。C-45。C，調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒溫35°C-45。C放置2-6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素加水溶解完全，加熱至35°C-45°C,恒溫35。C-45。C，調(diào)節(jié)pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒溫35。C-45。C放置2-12小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值3.0-5.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗,再用20%-90%乙醇洗,保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。7、根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種野黃茶素，其中燈盞花素加水溶解完全，加熱至37。C-40。C，恒溫37°C-40。C,調(diào)節(jié)pH值8.0-10.0，力口入消4匕酶，恒溫37°C-40。C放置2-6小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2.0-5.0，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%-80%乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃茶素。8、根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的一種野黃茶素為活性成分制備的藥物制劑。9、根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的一種野黃芩素在制備治療心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。10、根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物制劑，其中制劑為片劑、膠嚢劑或顆粒劑。全文摘要本申請(qǐng)公開(kāi)一種野黃芩素，其特征在于燈盞花素加水溶解完全，調(diào)節(jié)pH值8-12，加熱至50℃-80℃，恒溫50℃-80℃3-24小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值2-6.5，濃縮，濃縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得到野黃芩素。本發(fā)明工藝方法提取率高，野黃芩素純度高，可以作為藥物制劑活性成分使用。文檔編號(hào)C12P17/06GK101586132SQ20091008767公開(kāi)日2009年11月25日申請(qǐng)日期2009年7月2日優(yōu)先權(quán)日2009年7月2日發(fā)明者周小亮,周美吟,安曉雪申請(qǐng)人:周玲