專利名稱：用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其制備方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用化學(xué)試劑，更具體地說(shuō)，涉及使用14C-UBT(Urea BreathTest，尿素呼氣試驗(yàn))來(lái)診斷幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染的試劑，其制備方法以及使用該試劑的試劑盒。

背景技術(shù)：
幽門螺桿菌是1983年澳大利亞學(xué)者羅賓·沃倫(J.Robin Warren)和巴里·馬歇爾(Barry J.Marshall)從一個(gè)慢性活動(dòng)性胃炎患者胃粘膜活檢標(biāo)本中首先分離到的，他們也因此獲得2005年度“諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)”。
人是幽門螺桿菌的唯一自然宿主，人群感染率很高，全世界人群感染率高達(dá)30～50％。幽門螺桿菌可以導(dǎo)致很多疾病的發(fā)生，因此對(duì)它的臨床診斷和治療是非常重要的。
尿素[14C]呼氣試驗(yàn)是目前國(guó)際國(guó)內(nèi)普遍采用的幽門螺桿菌診斷方法，由于其無(wú)痛苦、無(wú)創(chuàng)傷、準(zhǔn)確、快速、安全的特點(diǎn)，該方法已是國(guó)際上公認(rèn)的Hp診斷金標(biāo)準(zhǔn)之一。
尿素[14C]呼氣試驗(yàn)中關(guān)鍵步驟是14CO2的吸收和閃爍測(cè)量。2007年1月23日，提出的專利申請(qǐng)CN 200710073016公開了一種“診斷幽門螺桿菌的試劑盒”，其至少包括吸收劑、閃爍體、極性溶劑等不同組分。在實(shí)際臨床使用時(shí)，患者先向吸收劑中吹氣，吹完后交給醫(yī)生。醫(yī)生要將閃爍液和極性溶劑按要求進(jìn)行配制，再將配制后的溶液加入吸收劑中才能進(jìn)行測(cè)量。
采用這種試劑盒存在的主要問題是使用不便、需要醫(yī)生進(jìn)行較多的溶液配制和轉(zhuǎn)移工作，操作步驟多，容易導(dǎo)致意外或較大誤差。
此外，采用這種試劑盒還進(jìn)一步存在以下問題 1、極性溶劑，如水、甲醇、乙醇等，它們?cè)陂W爍測(cè)量中有淬滅作用，導(dǎo)致測(cè)量效率降低，方法的靈敏度相應(yīng)降低甚至導(dǎo)致假陰性的出現(xiàn)； 2、使用的如甲醇、乙醇、小分子的烷基苯類物質(zhì)等具有刺激性氣味、毒性強(qiáng)、易揮發(fā)且易燃易爆； 3、病人使用不安全在實(shí)際使用中，會(huì)出現(xiàn)病人不了解使用方法而導(dǎo)致的吸收劑誤服事件，而吸收劑中存在的物質(zhì)可能導(dǎo)致急性或慢性中毒反應(yīng)； 4、原材料使用量大、生產(chǎn)環(huán)節(jié)較多，不利于降低生產(chǎn)成本。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的使用不便、需要醫(yī)生進(jìn)行較多的溶液配制和轉(zhuǎn)移工作，操作步驟多，容易導(dǎo)致意外或較大誤差的缺陷提供一種操作步驟少，便于醫(yī)生使用的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是構(gòu)造一種用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，包括下列組分 CO2吸收劑 0.3～0.5毫升； 有機(jī)溶劑 2～3毫升； 乳化劑0.7～2毫升； 閃爍體0.01～0.038克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述CO2吸收劑包括乙醇胺。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述有機(jī)溶劑包括直鏈烷基苯。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述乳化劑包括聚山梨酯、壬基聚氧乙烯醚、辛基聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一種。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述乳化劑包括 聚山梨酯0.7～1.1毫升； 脂肪醇聚氧乙烯醚0.1～0.2毫升。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述閃爍體包括 2，5-二苯基噁唑 0.01～0.02克， 1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)0.0001～0.0003克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述閃爍體包括 2，5-二苯基噁唑0.01～0.036克， 1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯 0.0005～0.0018克。
在本發(fā)明所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中，所述試劑進(jìn)一步包括酚酞指示劑。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的另一技術(shù)方案是構(gòu)造一種制備上述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑的方法，包括S1按照上述配方獲取各種原料； S2將閃爍體、有機(jī)溶劑和乳化劑混合； S3加入吸收劑。
在本發(fā)明所述方法中，所述步驟S3之前，進(jìn)一步包括將酚酞指示劑和吸收劑混合并攪拌均勻。
在本發(fā)明所述方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述步驟S2進(jìn)一步包括S21、將閃爍體加熱溶解到有機(jī)溶劑中，冷卻到室溫后與乳化劑混合并攪拌均勻。
在本發(fā)明所述方法的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述步驟S2進(jìn)一步包括S22、閃爍體、有機(jī)溶劑和乳化劑混合并在常溫下攪拌直至所述閃爍體全部溶解。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的再一技術(shù)方案是構(gòu)造一種試劑盒，包括尿素[14C]膠囊和吹氣用的導(dǎo)管；其中所述試劑盒進(jìn)一步包括上述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
實(shí)施本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑、其制備方法和試劑盒，通過將CO2的吸收和閃爍測(cè)量所需要的所有物質(zhì)合并在一起，減少操作步驟，大大方便醫(yī)生的使用。
更進(jìn)一步地，本發(fā)明未使用有刺激性氣味、毒性強(qiáng)、易揮發(fā)、易燃易爆的化學(xué)物質(zhì)，對(duì)醫(yī)生和患者的人身安全和健康、對(duì)環(huán)境安全和保護(hù)都非常有意義；此外由于不使用強(qiáng)極性溶劑，使測(cè)量效率大大提高，同樣實(shí)驗(yàn)條件下，DPM(disintegrations per minute，每分鐘衰變)值可以比現(xiàn)有的檢測(cè)試劑盒高30％以上；且對(duì)臨床中出現(xiàn)的臨界值附近的弱陽(yáng)性的判斷有積極作用，可提高測(cè)量方法的靈敏度，減少假陰性的出現(xiàn)；再者生產(chǎn)環(huán)節(jié)由多種溶液配制及分裝減少為一種，試劑使用量降低30％左右，有利于生產(chǎn)成本降低，減少對(duì)環(huán)境造成的不利影響。

具體實(shí)施例方式 為了更好地理解本發(fā)明，下面用實(shí)例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，但本發(fā)明的實(shí)施方案并不局限于這些實(shí)例。
實(shí)施例1 稱取0.72g 2，5-二苯基噁唑(以下簡(jiǎn)稱PPO)、0.036g 1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯(以下簡(jiǎn)稱bis-MSB)，量取50ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入20ml聚山梨酯乳化劑和4ml脂肪醇聚氧乙烯醚乳化劑，然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。隨后，將0.035g酚酞指示劑加入10ml乙醇胺中，攪拌均勻后備用。
按每閃爍瓶0.4ml乙醇胺和3.5ml閃爍溶劑進(jìn)行分裝即可得本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。使用時(shí)患者用吹氣用導(dǎo)管向閃爍瓶中吹氣，溶液由紅色變?yōu)槿榘咨珪r(shí)停止吹氣，輕輕搖勻后直接放入閃爍測(cè)量?jī)x上進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)測(cè)量結(jié)果對(duì)患者是否感染幽門螺桿菌進(jìn)行診斷。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知悉，聚山梨酯又稱吐溫，是為山梨醇脂肪酸酯和環(huán)氧乙烷的縮合物，在一般精細(xì)化工店或化學(xué)試劑公司分吐溫20，吐溫40，吐溫60，吐溫80。在本發(fā)明中優(yōu)選吐溫60或吐溫80。
在本實(shí)施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.4ml，直鏈烷基苯2.36ml，PPO 0.0340g，bis-MSB 0.00170g，聚山梨酯乳化劑0.94ml，脂肪醇聚氧乙烯醚乳化劑0.19ml。
實(shí)施例2 稱取0.24gPPO、0.012g bis-MSB，量取40ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入14ml辛基聚氧乙烯醚(又稱曲拉通X-100)然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。
隨后，按每閃爍瓶0.45ml乙醇胺和2.7ml閃爍溶劑進(jìn)行分裝。使用時(shí)患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測(cè)量?jī)x上進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)測(cè)量結(jié)果對(duì)患者是否感染幽門螺桿菌進(jìn)行診斷。
在本實(shí)施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.45ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.012g，bis-MSB 0.0006g，曲拉通X-1000.7ml。
實(shí)施例3 稱取0.25gPPO、0.032g 1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯(簡(jiǎn)稱POPOP)，量取40ml直鏈烷基苯一起放入200ml燒杯中，置于恒溫磁力攪拌器上加熱攪拌下溶解，冷卻至室溫后，加入20ml壬基聚氧乙烯醚乳化劑，然后攪拌均勻獲得閃爍溶劑。
隨后，按每閃爍瓶0.45ml乙醇胺和3.0ml閃爍溶劑進(jìn)行分裝。使用時(shí)患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測(cè)量?jī)x上進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)測(cè)量結(jié)果對(duì)患者是否感染幽門螺桿菌進(jìn)行診斷。
在本實(shí)施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.45ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.0125g，POPOP 0.0016g，壬基聚氧乙烯醚乳化劑1ml。
實(shí)施例4 稱取0.48gPPO、0.024g bis-MSB，量取40ml直鏈烷基苯和20ml壬基聚氧乙烯醚一起放入200ml燒杯中，置于磁力攪拌器上攪拌直至固體全部溶解。
隨后，按每閃爍瓶0.3ml乙醇胺和3.0ml閃爍溶劑進(jìn)行分裝。使用時(shí)患者用吹氣管向閃爍瓶中吹氣3分鐘以上，停止吹氣后輕輕搖勻直接放入閃爍測(cè)量?jī)x上進(jìn)行測(cè)量，根據(jù)測(cè)量結(jié)果對(duì)患者是否感染幽門螺桿菌進(jìn)行診斷。
在本實(shí)施例中，每瓶所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑中約含乙醇胺0.3ml，直鏈烷基苯2ml，PPO 0.024g，bis-MSB 0.0012g，壬基聚氧乙烯醚乳化劑1ml。
本領(lǐng)域技術(shù)人員知悉，獲得本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑后，可采用多種方法將其與尿素[14C]膠囊和吹氣用的導(dǎo)管一起構(gòu)造試劑盒，在此就不再對(duì)其進(jìn)行累述了。下面通過對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其構(gòu)成的試劑盒的性能。
對(duì)照實(shí)驗(yàn) 用本發(fā)明中的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑代替目前的液體閃爍法幽門螺桿菌檢測(cè)試劑盒中的集氣劑和閃爍配制液，按如下方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，考察本方法和現(xiàn)有試劑盒的符合率，為了便于說(shuō)明，將現(xiàn)有技術(shù)中的試劑盒稱為試劑盒A，將本發(fā)明的試劑盒稱為試劑盒B，所述試劑盒B是基于實(shí)施例1-3中的試劑制成的。
1、實(shí)驗(yàn)步驟 1)、受試者應(yīng)在早上空腹時(shí)或進(jìn)食兩小時(shí)以后受試。
2)、領(lǐng)取試劑盒A適量。
3)、受試者用約20ml涼飲用水送服試劑盒A中尿素[14C]膠囊一粒后，靜坐25分鐘。
4)、取試劑盒A中CO2集氣劑一瓶打開，用吹氣管向液體中吹氣，當(dāng)集氣劑由紫紅色變成無(wú)色時(shí)停止吹氣，若超過3分鐘變色不全亦停止吹氣。
5)、取試劑盒B，將其中的閃爍瓶一瓶并打開，通過吹氣管向液體中吹氣，3分鐘時(shí)停止吹氣，或者當(dāng)溶液從紫紅色變成乳白色時(shí)停止吹氣(在含酚酞指示劑的實(shí)施例中)。
6)、在試劑盒A中CO2集氣劑瓶中加入4.5ml稀釋閃爍液。
7)、在同一臺(tái)液閃儀上測(cè)試劑盒A和試劑盒B的DPM。
2、結(jié)果計(jì)算和陽(yáng)性判斷 將測(cè)得的試劑盒A的DPM減去本底DPM，試劑盒B的DPM減去本底DPM。減本底后的值大于等于200時(shí)，可判斷受試者為幽門螺桿菌陽(yáng)性，否則為陰性。
3、對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果 用上述方法分三次對(duì)312例正常體檢人進(jìn)行了對(duì)照實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用試劑盒A檢測(cè)和試劑盒B檢測(cè)，得到的結(jié)果基本一致，根據(jù)本發(fā)明制得的試劑盒B陽(yáng)性率稍高一點(diǎn)。具體統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表。

說(shuō)明根據(jù)實(shí)例一二三制得的試劑盒B檢出結(jié)果是完全一致的，商用試劑盒A檢出的陽(yáng)性樣本在實(shí)例一二三中可以全部檢出。
在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，除了采用酚酞指示劑之外，還可選擇其他的pH指示劑，本發(fā)明不受所選pH指示劑的種類的限制。除本發(fā)明中公開的組分外，本發(fā)明的試劑還可包括其他助劑。比如，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，還進(jìn)一步包括增敏劑和/或甜味劑。所述增敏劑可包括檸檬酸和/或蘋果酸。所述甜味劑可包括安賽蜜和/或阿斯巴甜。
在本發(fā)明的其他優(yōu)選實(shí)施例中，也可選用其他有機(jī)溶劑，乳化劑，或者將多種乳化劑和有機(jī)溶劑混合使用，只要能夠保持上述測(cè)量效果即可。
雖然以上描述了本發(fā)明的各種實(shí)施例，應(yīng)當(dāng)理解，其目的僅在于舉例說(shuō)明，而沒有限制性。本領(lǐng)域的技術(shù)人員知悉，在不離開本發(fā)明的精神和范圍情況下，在形式上和細(xì)節(jié)上還可做各種的改變。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍不當(dāng)僅局限于以上描述的任一實(shí)施例，而應(yīng)該依照權(quán)利要求及其等同來(lái)限定。
權(quán)利要求
1.一種用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，包括下列組分
CO2吸收劑 0.3～0.5毫升；
有機(jī)溶劑 2～3毫升；
乳化劑0.7～2毫升；
閃爍體0.01～0.038克。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述CO2吸收劑包括乙醇胺；所述有機(jī)溶劑包括直鏈烷基苯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述乳化劑包括聚山梨酯、壬基聚氧乙烯醚、辛基聚氧乙烯醚和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述乳化劑包括
聚山梨酯0.7～1.1毫升；
脂肪醇聚氧乙烯醚0.1～0.2毫升。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述閃爍體包括
2，5-二苯基噁唑0.01～0.02克，
1，4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯 0.0001～0.0003克。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述閃爍體包括
2，5-二苯基噁唑0.01～0.036克，
1，4-雙(2-甲基苯乙烯基)苯 0.0005～0.0018克。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑，其特征在于，所述試劑進(jìn)一步包括酚酞指示劑。
8.制備權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑的方法，其特征在于，包括
S1按照上述配方獲取各種原料；
S2將閃爍體、有機(jī)溶劑和乳化劑混合；
S3加入吸收劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于，所述步驟S3之前，進(jìn)一步包括將酚酞指示劑和吸收劑混合并攪拌均勻；且
所述步驟S2進(jìn)一步包括
S21、將閃爍體加熱溶解到有機(jī)溶劑中，冷卻到室溫后與乳化劑混合并攪拌均勻，或
S22、將閃爍體、有機(jī)溶劑和乳化劑混合并在常溫下攪拌直至所述閃爍體全部溶解。
10.一種試劑盒，包括尿素[14C]膠囊和吹氣用的導(dǎo)管，其特征在于，還包括如權(quán)利要求1-7中任一權(quán)利要求所述用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑及其制備方法和試劑盒，其中所述試劑包括，CO2吸收劑0.3～0.5毫升；有機(jī)溶劑2～3毫升；乳化劑0.7～2毫升；閃爍體0.01～0.038克。實(shí)施本發(fā)明的用于診斷幽門螺桿菌感染的試劑、其制備方法和試劑盒，通過將CO2的吸收和閃爍測(cè)量所需要的所有物質(zhì)合并在一起，減少操作步驟，大大方便醫(yī)生的使用。更進(jìn)一步地，同樣實(shí)驗(yàn)條件下，DPM值可以比現(xiàn)有的檢測(cè)試劑盒高30％以上；且對(duì)臨床中出現(xiàn)的臨界值附近的弱陽(yáng)性的判斷有積極作用，可提高測(cè)量方法的靈敏度，減少假陰性的出現(xiàn)；再者試劑使用量降低30％左右，有利于生產(chǎn)成本降低，減少對(duì)環(huán)境造成的不利影響；且使用更加安全。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101724681SQ200910110128
公開日2010年6月9日 申請(qǐng)日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月6日
發(fā)明者沈桂富, 郭春生, 黃晉杰 申請(qǐng)人:深圳市中核海得威生物科技有限公司