專利名稱：發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸
(Arachidonic Acid，簡(jiǎn)稱AA)的方法。
背景技術(shù)：
花生四烯酸是全順式A-5, 8， 11， 14-二十碳四烯酸，分子式為C加H32: 02，花生四烯酸屬于"-6脂肪酸，由于人體內(nèi)不具備相應(yīng)的酶系統(tǒng)來(lái)合成特定 的不飽和雙鍵，因此被認(rèn)為是人體必需脂肪酸。在多數(shù)花生四烯酸代謝途徑中， 它被磷醋化形成細(xì)胞膜磷脂，對(duì)維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)非常關(guān)鍵。因其含有4個(gè)不飽
和雙鍵，使得分子具有很大的流動(dòng)性，即使在ot:以下也能保持液體狀態(tài)，這也
保證了在生理溫度下哺乳動(dòng)物的細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性。同時(shí)它還參與調(diào)節(jié) 各種細(xì)胞活動(dòng)，如調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、細(xì)胞生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能(Weems YS, W a丄， 2007， Prostaglandins Other Lipid Mediat. 84: 163-173.)等；此外它對(duì)嬰 幼兒的神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是大腦的發(fā)育至關(guān)重要(Maekawa M, e"丄，2009， PLoS ONE. 4: 5085.)。另外，雙鍵也是花生四烯酸抗氧化作用的來(lái)源，它可以在無(wú) 酶介導(dǎo)的條件下發(fā)生氧化反應(yīng)，也可以通過(guò)以下三種氧化酶進(jìn)行反應(yīng)環(huán)氧化 酶(cycloocygenase， COX)、脂氧化酶(lipoxygenase, L0X)、細(xì)胞色素P450， 其反應(yīng)產(chǎn)物包括前列腺素、血栓烷、白細(xì)胞三烯(Zarini S, eta丄，2006， J Biol Chem. 281: 10134-10142.)以及其他生物活性產(chǎn)物。而這些生物活性物質(zhì)對(duì)細(xì) 胞信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白的代謝、血液流變學(xué)、血管彈性、白細(xì)胞功能和血小板激活 等具有重要的調(diào)節(jié)作用，且花生四烯酸本身也具有很好的生物活性(CowplandC，et s丄'2006， Clin Exp Pharmacol Physiol. 33: 183-188.)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng) 用葡萄糖和卡巴可(carbacol)刺激細(xì)胞后，花生四烯酸的含量分別增加一倍和 十倍，推測(cè)相關(guān)的生理反應(yīng)都可能由釋放的花生四烯酸來(lái)介導(dǎo)(Liu BH, "s丄， 2005， J Anim Sci. 83: 1516-1525.)?；ㄉ南┧嶙鳛槿梭w必需脂肪酸發(fā)揮著 無(wú)可替代的作用，其應(yīng)用前景廣闊。
花生四烯酸主要來(lái)源有植物、動(dòng)物組織、魚油以及微生物和微藻類等，但花 生四烯酸在動(dòng)物組織中含量低， 一般小于0.2。/。(wt/wt)，來(lái)源也有限，而微生物 發(fā)酵法則為生產(chǎn)花生四烯酸開辟了新途徑，它具有不受原材料及氣候限制、生 長(zhǎng)周期短、培養(yǎng)工藝簡(jiǎn)單、花生四烯酸含量高等特點(diǎn)，近幾年己成為國(guó)內(nèi)外研 究的熱點(diǎn)。尤其是日本、美國(guó)等國(guó)家已先后問(wèn)世了卜亞麻酸、二高-Y—亞麻酸、 花生四烯酸的發(fā)酵產(chǎn)品，現(xiàn)正著手開發(fā)二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸的發(fā)酵 產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)在這一領(lǐng)域的研究起步較晚。雖對(duì)微生物發(fā)酵生產(chǎn)花生四烯酸方面 作了初步的研究，但還存在著生物量偏低，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)的問(wèn)題，因此離大規(guī)模 生產(chǎn)花生四烯酸還存在一定的距離。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法。 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
首先利用麩皮，加水煮沸，加入葡萄糖和KH2P04，培養(yǎng)出種子培養(yǎng)基。 采用產(chǎn)花生四烯酸的普通被孢霉保藏菌種，制成孢子懸液，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，
獲得發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。
黃豆加水，浸泡、煮沸，降溫至60'C后，加入a-淀粉酶和糖化酶，保溫、
過(guò)濾，得黃豆糖化液。在黃豆糖化液中，加入酵母粉，牛肉膏，NaN03和KH2P04，調(diào)節(jié)pH為6.0-6.4，
配制成發(fā)酵培養(yǎng)基。
在發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入的種子培養(yǎng)基形成混合培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵 結(jié)束后，抽濾、烘干至恒重、粉碎，石油醚抽提油脂，再經(jīng)分離純化油脂得花 生四烯酸純品。
具體過(guò)程是 . 1、花生四烯酸的種子培養(yǎng)基的制備
取新鮮麩皮，加水煮沸0.5-1.5小時(shí)，過(guò)濾出麩皮浸汁備用；取麩皮浸汁,
分別加入葡萄糖和KH2P04，攪拌溶解，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的pH為6. 0 6.4之間。然后置于搖床上，培養(yǎng)溫度24 26。C，搖床轉(zhuǎn)速為150 200rpm,培養(yǎng) 時(shí)間2 3天，培養(yǎng)出種子培養(yǎng)基；采用產(chǎn)花生四烯酸的普通被孢霉保藏菌種， 經(jīng)斜面活化后，無(wú)菌水洗下孢子，制成孢子懸液；將孢子懸液在搖床上繼續(xù)擴(kuò) 大培養(yǎng)2 3天，獲得用于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。 具體配方
麩皮 1000 g
水 1200 1800ml
葡萄糖 44 100g
KH2P04 0.5 2.0g 2、發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
黃豆糖化液黃豆加水，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹，降溫至60 'C后，同時(shí)加入a-淀粉酶和糖化酶，維持溫度在55-6(TC之間，保溫12-14小時(shí)， 過(guò)濾，得黃豆糖化液備用。具體配方:
黃豆 水
100 g 400 600ml
a-淀粉酶 2 2.5g
糖化酶 0.25 1.25g 在黃豆糖化液中，加入酵母粉，牛肉膏，NaN03和KH2P04，充分?jǐn)嚢韬?配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，用H3P04調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的酸堿度，使pH為6.0-6.4。 具體配方
黃豆糖化液
酵母粉
牛肉膏
NaNO
lOOOmL 10畫20g 2-6g 2畫6g 0.6-2.6g
KH2P04
3、發(fā)酵培養(yǎng)
在發(fā)酵培養(yǎng)基，加入備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng)基，混合培養(yǎng)基中 種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 1 10;保持混合培養(yǎng)基的溫度在26 。C 3(TC之間，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為100-250rpm，通氣量為1.5-2.0 vvm， 進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間7 8天。發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體40-6(TC烘干至恒 重、粉碎，石油醚抽提油脂。氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分 離純化油脂得花生四烯酸純品。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果原料易購(gòu)，價(jià)格低廉，培 養(yǎng)基制配方便，發(fā)酵工藝簡(jiǎn)便，花生四烯酸合成穩(wěn)定，產(chǎn)量在1.35-1.55g/L，解決了花生四烯酸的發(fā)酵生產(chǎn)效率和產(chǎn)量低的問(wèn)題，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
1、花生四烯酸的種子培養(yǎng)基的制備
取新鮮麩皮lOOOg，加水1300mL，煮沸1小時(shí)，取出浸汁；加入葡萄糖100g， KH2P041.5g，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的pH至6.2。然后置于搖床上，培養(yǎng)溫 度為26"C，搖瓶轉(zhuǎn)速為200rpm，培養(yǎng)2天。按普通的產(chǎn)花生四烯酸的被孢霉斜 面保藏菌種活化后，用8mL無(wú)菌水洗下孢子，按每100mL種子培養(yǎng)基加入8mL 孢子懸液接入搖瓶中，并按上述所述的種子培養(yǎng)條件進(jìn)行種子擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得 用于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。 2、發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
200g的黃豆，加入去離子水卯OmL，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹， 降溫至60。C后，同時(shí)加入5g的a-淀粉酶和2g的糖化酶，維持溫度在55-6(TC 之間，保溫12小時(shí)，過(guò)濾，得到黃豆糖化液；
取1000 mL黃豆糖化液，加入15g酵母粉，5g牛肉膏，5g NaN03和2g KH2P04 ，調(diào)節(jié)pH為6.0，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
3、發(fā)酵培養(yǎng)
取1000 mL發(fā)酵培養(yǎng)基，加入100 mL備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng)基， 混合培養(yǎng)基中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 10;保持混合培養(yǎng)基的 溫度在26"C，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為200rpm，通氣量為2.0vvm，進(jìn)行培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間7天。發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體5(TC烘干至恒重、粉碎，石油醚 抽提油脂。氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分離純化油脂得花生四烯酸純品。 實(shí)施例2:
1、 花生四烯酸的種子培養(yǎng)基的制備
取新鮮麩皮lOOOg，加水1800mL，煮沸0.5小時(shí)，取出浸汁；加入葡萄糖 40g， KH2P04 l.Og，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的pH至6.4。然后置于搖床上， 培養(yǎng)溫度為28"C，搖瓶轉(zhuǎn)速為150rpm，培養(yǎng)2天。按普通的產(chǎn)花生四烯酸的被 孢霉斜面保藏菌種活化后，用8mL無(wú)菌水洗下孢子，按每100mL種子培養(yǎng)基加 入8mL孢子懸液接入搖瓶中，并按上述所述的種子培養(yǎng)條件進(jìn)行種子擴(kuò)大培養(yǎng)， 獲得用于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
200g的黃豆，加入去離子水400mL，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹， 降溫至60。C后，同時(shí)加入4.0g的a-淀粉酶和l.Og的糖化酶，維持溫度在55-60 。C之間，保溫14小時(shí)，過(guò)濾，得到黃豆糖化液；
取1000mL黃豆糖化液，加入10.0g酵母粉，3.0g牛肉膏，3.0gNaNO3和 0.6gKH2PO4 ，調(diào)節(jié)pH為6.0，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
3、 發(fā)酵培養(yǎng)
取1000 mL發(fā)酵培養(yǎng)基，加入300 mL備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng)基， 混合培養(yǎng)基中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 3;保持混合培養(yǎng)基的 溫度在30。C，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為250rpm，通氣量為1.5vvm，進(jìn)行培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間8天。發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體5(TC烘干至恒重、粉碎，石油醚 抽提油脂。氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分離純化油脂得花生實(shí)施例3
1、 花生四烯酸的種子培養(yǎng)基的制備
取新鮮麩皮lOOOg，加水1500mL，煮沸1.5小時(shí)，取出浸汁；加入葡萄糖 60g， KH2P04 0.5g，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的pH至6.3。然后置于搖床上， 培養(yǎng)溫度為26。C，搖瓶轉(zhuǎn)速為150rpm，培養(yǎng)2天。按普通的產(chǎn)花生四烯酸的被 孢霉斜面保藏菌種活化后，用8mL無(wú)菌水洗下孢子，按每100mL種子培養(yǎng)基加 入8mL孢子懸液接入搖瓶中，并按上述所述的種子培養(yǎng)條件進(jìn)行種子擴(kuò)大培養(yǎng)， 獲得用于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
200g的黃豆，加入去離子水500mL，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹， 降溫至6(TC后，同時(shí)加入4.5g的a-淀粉酶和1.5g的糖化酶，維持溫度在55-60 。C之間，保溫13小時(shí)，過(guò)濾，得到黃豆糖化液；
取1000mL黃豆糖化液，加入15.0g酵母粉，6.0g牛肉膏，3.0gNaNO3和 2.6gKH2P04 ，調(diào)節(jié)pH為6.0，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
3、 發(fā)酵培養(yǎng)
取1000 mL發(fā)酵培養(yǎng)基，加入200 mL備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng)基， 混合培養(yǎng)基中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 5;保持混合培養(yǎng)基的 溫度在3(TC，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為250rpm，通氣量為1.5vvm，進(jìn)行培養(yǎng)， 培養(yǎng)時(shí)間7天。發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體55t:烘干至恒重、粉碎，石油醚 抽提油脂。氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分離純化油脂得花生 四烯酸純品。 實(shí)施例4:1、 花生四烯酸的種子培養(yǎng)基的制備
取新鮮麩皮lOOOg，加水1800mL，煮沸1.0小時(shí)，取出浸汁；加入葡萄糖 80g， KH2P04 1.2g，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的pH至6.2。然后置于搖床上， 培養(yǎng)溫度為28"，搖瓶轉(zhuǎn)速為220rpm，培養(yǎng)2天。按普通的產(chǎn)花生四烯酸的被 孢霉斜面保藏菌種活化后，用8mL無(wú)菌水洗下孢子，按每100mL種子培養(yǎng)基加 入8mL孢子懸液接入搖瓶中，并按上述所述的種子培養(yǎng)條件進(jìn)行種子擴(kuò)大培養(yǎng)， 獲得用于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。
2、 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備
200g的黃豆，加入去離子水1200mL，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹， 降溫至6(TC后，同時(shí)加入4.0g的a-淀粉酶和0.5g的糖化酶，維持溫度在55-60 °〇之間，保溫14小時(shí)，過(guò)濾，得到黃豆糖化液；
取1000mL黃豆糖化液，加入20.0g酵母粉，2.0g牛肉膏，6.0gNaNO3和 2.0gKH2PO4 ，調(diào)節(jié)pH為6.0，得到發(fā)酵培養(yǎng)基。
3、 發(fā)酵培養(yǎng)
取1000 mL發(fā)酵培養(yǎng)基，加入1000 mL備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng) 基，混合培養(yǎng)基中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 1;保持混合培養(yǎng) 基的溫度在26。C，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為150rpm，通氣量為1.5 vvm，進(jìn)行 培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間8天。發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體6(TC烘干至恒重、粉碎， 石油醚抽提油脂。氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分離純化油脂 得花生四烯酸純品。 ..
權(quán)利要求
1、發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是首先利用麩皮，加水煮沸，加入葡萄糖和KH2PO4，培養(yǎng)出種子培養(yǎng)基；采用產(chǎn)花生四烯酸的普通被孢霉保藏菌種，制成孢子懸液，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基；黃豆加水，浸泡、煮沸，降溫至60℃后，加入a-淀粉酶和糖化酶，保溫、過(guò)濾，得黃豆糖化液；在黃豆糖化液中，加入酵母粉，牛肉膏，NaNO3和KH2PO4，調(diào)節(jié)pH為6.0-6.4，配制成發(fā)酵培養(yǎng)基；在發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入的種子培養(yǎng)基形成混合培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵結(jié)束后，抽濾、烘干至恒重、粉碎，石油醚抽提油脂，再經(jīng)分離純化油脂得花生四烯酸純品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的種子培 養(yǎng)基制備過(guò)程是在新鮮麩皮中加水后煮沸時(shí)間0.5-1.5小時(shí)，過(guò)濾出麩皮浸汁備用； 取麩皮浸汁，分別加入葡萄糖和KH2P04，攪拌溶解，用少量H3P04調(diào)節(jié)浸汁液的 pH為6. 0 6.4之間；然后置于搖床上，培養(yǎng)溫度24 26。C，搖床轉(zhuǎn)速為150 200rpm，培養(yǎng)時(shí)間2 3天。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的培養(yǎng)種 子培養(yǎng)基中具體配方是麩皮1000 g，水1200 1800ml,葡萄糖44 100g， KH2P04 0.5 2.0g。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的培養(yǎng)種 子擴(kuò)大培養(yǎng)基是先采用產(chǎn)花生四烯酸的普通被孢霉保藏菌種，經(jīng)斜面活化后，無(wú)菌 水洗下孢子，制成孢子懸液；將孢子懸液在搖床上繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)2 3天，獲得用 于發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的培養(yǎng)種子擴(kuò)大培養(yǎng)基具體配方是麩皮1000 g，水1200 1800ml，葡萄糖44 100g，KH2PO4 0.5 2.0g。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的黃豆糖 化液制備過(guò)程是黃豆加水，浸泡3小時(shí)后，煮沸使其充分膨脹，降溫至60。C后， 同時(shí)加入a-淀粉酶和糖化酶，維持溫度在55-60'C之間，保溫12-14小時(shí)，過(guò)濾， 得黃豆糖化液備用。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的黃豆糖 化液制備過(guò)程具體配方是黃豆100g，水400 600ml， a-淀粉酶2 2.5g，糖化酶 0.25 1.25g。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的發(fā)酵培 養(yǎng)基制備過(guò)程是在黃豆糖化液中，加入酵母粉，牛肉膏，NaN03和KH2P04，充 分?jǐn)嚢韬笈渲瞥砂l(fā)酵培養(yǎng)基，用H3P04調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的酸堿度，使pH為6.0-6.4。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的發(fā)酵培 養(yǎng)基制備過(guò)程具體配方是:黃豆糖化液lOOOmL，酵母粉10-20g，牛肉膏2-6g，NaN03 2-6g， KH2PO40.6-2.6g。
10、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的發(fā)酵培養(yǎng)基制備過(guò)程是在發(fā)酵培養(yǎng)基，加入備用的種子培養(yǎng)基，形成混合培養(yǎng)基，混合培養(yǎng)基中種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比例為1 : 1 10;保持混合培養(yǎng)基的溫 度在26" 3(TC之間，攪拌并通氣，攪拌轉(zhuǎn)速為100-250rpm，通氣量為1.5-2.0 vvm， 進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間7 8天。
11、 根據(jù)權(quán)利要求l、 9所述的發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的方法，其特征是所述的發(fā) 酵培養(yǎng)基制備過(guò)程是發(fā)酵結(jié)束后，抽濾，收集菌體40-6(TC烘干至恒重、粉碎， 石油醚抽提油脂；氣相色譜法測(cè)定油脂中花生四烯酸含量，再經(jīng)分離純化油脂得花 生四烯酸純品。
全文摘要
本發(fā)明涉及發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸方法。其特征是利用麩皮，加水煮沸，加入葡萄糖和KH₂PO₄，培養(yǎng)出種子培養(yǎng)基；采用產(chǎn)花生四烯酸的普通被孢霉保藏菌種，制成孢子懸液，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)，獲得發(fā)酵法生產(chǎn)花生四烯酸的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基；黃豆加水，浸泡、煮沸，降溫至60℃后，加入a-淀粉酶和糖化酶，保溫、過(guò)濾，得黃豆糖化液；在黃豆糖化液中，加入酵母粉，牛肉膏，NaNO₃和KH₂PO₄，調(diào)節(jié)pH為6.0-6.4，配制成發(fā)酵培養(yǎng)基；在發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入的種子培養(yǎng)基形成混合培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵結(jié)束后，抽濾、烘干至恒重、粉碎，石油醚抽提油脂，再經(jīng)分離純化油脂得花生四烯酸純品。本發(fā)明具有原料易購(gòu)，價(jià)格低廉，培養(yǎng)基制配方便，發(fā)酵工藝簡(jiǎn)便，產(chǎn)量在1.35-1.55g/L，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P7/64GK101638677SQ20091011165
公開日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2009年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月6日
發(fā)明者吳松剛, 斌 江, 黃建忠 申請(qǐng)人:廈門金達(dá)威集團(tuán)股份有限公司;內(nèi)蒙古金達(dá)威藥業(yè)有限公司