專利名稱：體外組織的培養(yǎng)方法及其多孔隙載體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種體外組織的培養(yǎng)方法及其多孔隙載體，其是將擷取 的組織塊置入中空多孔隙分解載體中，并供給養(yǎng)分使組織以三度空間方式 向周圍多孔隙基材的孔洞生長，以獲得新生的組織。
背景技術(shù)：
眾所周知，當(dāng)人體組織或器官因意外傷害或疾病老化等因素而遭受破 壞無法修復(fù)時(shí)，往往會(huì)造成病患肢體的殘疾或威脅到病患的生命，進(jìn)一步 導(dǎo)致對(duì)家庭及社會(huì)重大的負(fù)擔(dān)及損失。因此尋求一種合適的修補(bǔ)替代組織 或器官，為目前研究者所不斷努力的目標(biāo)。
近年來，隨著生物科技的進(jìn)步，生物、醫(yī)用材料與組織細(xì)胞的培養(yǎng)技 術(shù)已相互結(jié)合，逐漸發(fā)展出組織工程此一新的研究領(lǐng)域。希望未來，受損 的組織或器官可經(jīng)由組織工程的再造技術(shù)，在體外修補(bǔ)或重建一個(gè)新的組 織或器官，替代受損的部位，以恢復(fù)病患的健康或延續(xù)病患的生命。
根據(jù)目前的組織工程技術(shù)的內(nèi)容，需要擷取病患或捐贈(zèng)者一小部分健 康的組織，經(jīng)體外大量培養(yǎng)組織細(xì)胞后，植入一可分解性的多孔隙基材， 利用其三度空間架構(gòu)，讓組織細(xì)胞貼附并生長于其上，當(dāng)組織細(xì)胞逐漸成 長成為三度空間的組織塊后，再植回病患所需修補(bǔ)的部位。從組織學(xué)的觀 點(diǎn)來看， 一塊組織除了含有其特定的組成細(xì)胞外，細(xì)胞與細(xì)胞間由三度空 間的細(xì)胞外間質(zhì)(extracellularmatrix, ECM)所包覆，此間質(zhì)除了維持其細(xì)胞架構(gòu)外，亦可表現(xiàn)該組織特定的功能。
以軟骨組織的培養(yǎng)為例，目前體外的軟骨三度空間培養(yǎng)，已證實(shí)軟骨
細(xì)胞于瓊脂(agarosegd)中的三度空間培養(yǎng)，可維持其于組織中原有的細(xì)胞 形態(tài)及功能，而經(jīng)兩度空間培養(yǎng)變異轉(zhuǎn)化的軟骨細(xì)胞，亦可在瓊脂三度空 間培養(yǎng)時(shí)，回復(fù)原有的軟骨細(xì)胞形態(tài)。在模擬細(xì)胞外間質(zhì)的架構(gòu)方面，目 前已開發(fā)出多種不同材料如膠原蛋白(collagen)或聚乳酸甘醇酸 (poly(glycolic co-Lactic)acid(PLGA))及不同結(jié)構(gòu)，如纖維網(wǎng)狀或多孔隙的人 工基材。目前面臨最大的問題為
1、 組織細(xì)胞在兩度空間的培養(yǎng)皿中大量培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，由于組織中的三 度空間排列轉(zhuǎn)為兩度空間成長，細(xì)胞將發(fā)生去分化(dedifferentiation)的現(xiàn)象， 因而失去細(xì)胞于原來組織中的形態(tài)及功能。
2、 此外，細(xì)胞的植入(seeding)亦是一項(xiàng)不易克服的問題，因?yàn)橐峁?細(xì)胞足夠發(fā)展為組織的空間，多孔隙基材的孔徑需大于細(xì)胞的尺徑，當(dāng)細(xì) 胞與培養(yǎng)基混合液植入多孔隙基材時(shí)，細(xì)胞往往會(huì)自載體流出，不易保持 于基材內(nèi)，為克服此問題，目前的做法有兩種
一種是靜態(tài)的植入法，先將所培養(yǎng)的細(xì)胞濃度調(diào)整至106cdlS/ml以上 的高濃度，然后利用多孔隙基材本身的含水性，將所植入的細(xì)胞含于基材 內(nèi)，待細(xì)胞貼附于基材后，再加入大量的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，此方法雖然可 以確知有多少量的細(xì)胞植入基材內(nèi)，且可植入高濃度的細(xì)胞進(jìn)入材料內(nèi)， 然而，細(xì)胞的分布還是會(huì)受到重力的因素所影響，導(dǎo)致上下層的細(xì)胞分布 不均，此外，為防止細(xì)胞溢出，能與細(xì)胞混合的培養(yǎng)基的體積相當(dāng)有限， 因此貼附的效果及存活率亦需考量。
另一種為動(dòng)態(tài)的細(xì)胞植入法，目前一般采用攪拌式反應(yīng)器(spinner flask)，以水流攪拌的方式將細(xì)胞自培養(yǎng)基帶入基材內(nèi)部，此方法可得到較 佳的細(xì)胞貼附率及相較靜態(tài)植入方式更均勻的細(xì)胞分布，然而，所要使用 的細(xì)胞數(shù)較高，實(shí)際貼在材料內(nèi)部的細(xì)胞數(shù)亦不易確知，而且細(xì)胞是由外
4而內(nèi)植入，外圍的細(xì)胞數(shù)還是會(huì)較內(nèi)部的細(xì)胞密度為高，當(dāng)組織培養(yǎng)時(shí)， 外圍的細(xì)胞生長速率較高將形成一層阻礙，阻止內(nèi)部細(xì)胞的養(yǎng)分交換，從 而導(dǎo)致材料內(nèi)外細(xì)胞生長明顯的不均。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)及弊端，本發(fā)明人經(jīng)過長期地研究和實(shí)驗(yàn)， 創(chuàng)造出本發(fā)明的技術(shù)方案。
本發(fā)明的主要目的是提供一種體外組織的培養(yǎng)方法，至少包含下列步
驟提供一具有空腔的多孔隙載體；將組織塊經(jīng)酶部分溶解；將經(jīng)酶部分 溶解的組織塊及溶解出的組織細(xì)胞置于前述多孔隙載體的空腔中；及將前 述包含有組織塊及組織細(xì)胞的多孔隙載體置于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)?？朔M 織在體外兩度空間平面培養(yǎng)時(shí)發(fā)生去分化現(xiàn)象，或基材內(nèi)外組織細(xì)胞生長 不均等缺點(diǎn)，達(dá)到有效地培養(yǎng)體外組織的目的。
本發(fā)明的另一目的是提供一種體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載 體，研制出一種多孔隙載體，其主要包含主體、至少一個(gè)位于主體內(nèi)部且 具有一開口的中空空腔及覆蓋中空空腔開口的上蓋，上蓋是由與主體相同
的多孔隙材料制成，組織塊的粒徑是大于載體空腔外圍基材的孔徑，達(dá)到 避免組織塊溢流出去的目的。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種體外組織的培養(yǎng)方法，其特征是 它至少包含下列步驟
(1) 提供一具有空腔的多孔隙載體；
(2) 將組織塊經(jīng)酶部分溶解；
(3) 將經(jīng)酶部分溶解的組織塊及溶解出的組織細(xì)胞置于該多孔隙載體 的空腔中；
(4) 將該包含有組織塊及組織細(xì)胞的多孔隙載體置于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。 該多孔隙載體中具有至少一個(gè)放置組織塊的中空空腔。該組織塊的粒
5徑是大于該載體空腔外圍基材的孔徑。該組織塊的粒徑為500至1000pm。 該多孔隙載體的形狀為圓柱形、立方體型或所需的任意形狀。該多孔隙載 體的孔徑范圍為50至500,。該多孔隙載體為生物可吸收性的高分子材料， 該高分子材料選自下列的至少一種聚交酯酸、聚乳酸交酯酸、聚乳酸甘 醇酸、聚酐、聚己內(nèi)酯、聚二酮酯或聚正酯。該多孔隙載體為聚乳酸甘醇 酸。該組織塊為動(dòng)物組織。該動(dòng)物組織為軟骨組織。該酶為溶解蛋白酶或 將組織塊細(xì)胞溶解出來的酶。該培養(yǎng)液為含胎牛血清的培養(yǎng)液。
本發(fā)明還提供一種體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征 是它包含一主體、至少一個(gè)以上的位于該主體內(nèi)部且具有一開口的中空 空腔及覆蓋該中空空腔開口的上蓋。
該主體為圓柱形、立方體型或所需的任意形狀。該多孔隙載體的孔徑 范圍是為50至500,。該上蓋是由與主體相同的多孔隙材料。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)是可以最少體積的組織量，于最短的時(shí)間內(nèi)于體 外培養(yǎng)所需的組織。
下面結(jié)合較佳實(shí)施例和附圖進(jìn)一步說明。


圖1是本發(fā)明的體外組織的培養(yǎng)方法的流程方塊示意圖。
圖2是本發(fā)明的具有中空空腔的多孔隙載體的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3是本發(fā)明的組織于具有中空空腔的多孔隙載體中的成長狀態(tài)示意圖。
圖4是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組的體外組織的培養(yǎng)方法的流程示意圖。
圖5是本發(fā)明的對(duì)照組的體外組織的培養(yǎng)方法的流程示意圖。
圖6是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組的軟骨組織培養(yǎng)兩星期時(shí)，中空空腔載體填塞
軟骨組織周圍的組織及細(xì)胞生長情形的照片。
圖7是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)組的軟骨組織培養(yǎng)兩星期時(shí)，載體空腔外圍多孔隙
基材的組織及細(xì)胞生長情形的照片。圖8是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組的軟骨組織培養(yǎng)四星期時(shí)，中空空腔載體填塞 軟骨組織周圍及載體空腔外圍多孔隙基材的組織及細(xì)胞生長情形的照片
(放大40倍)。
圖9是本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組的軟骨組織培養(yǎng)四星期時(shí)，中空空腔載體填塞 軟骨組織周圍及載體空腔外圍多孔隙基材的組織及細(xì)胞生長情形的照片 (放大200倍)。
圖IO是本發(fā)明實(shí)施例的對(duì)照組的軟骨組織培養(yǎng)四星期時(shí)，載體空腔外 圍多孔隙基材的組織及細(xì)胞生長情形的照片(放大40倍)。
圖11是本發(fā)明實(shí)施例的對(duì)照組的軟骨組織培養(yǎng)四星期時(shí)，載體空腔外 圍多孔隙基材的組織及細(xì)胞生長情形的照片(放大200倍)。
圖12是比較本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的軟骨組織長入PLGA多孔隙載 體中的橫截面面積量化結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式
參閱圖1所示，本發(fā)明的體外組織的培養(yǎng)方法，主要包含下列步驟 提供一具有空腔的多孔隙載體；將組織塊經(jīng)酶部分溶解；將經(jīng)酶部分溶解 的組織塊及溶解出的組織細(xì)胞置于前述多孔隙載體的空腔中；及將前述包 含有組織塊及組織細(xì)胞的多孔隙載體置于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
參閱圖2所示，是顯示本發(fā)明多孔隙載體10,其主要包含 一主體l;
至少一個(gè)以上的中空空腔2，其是位于前述主體l內(nèi)部且具有一開口5;及
一上蓋6，是作為覆蓋上述中空空腔2開口 5之用。
本發(fā)明的方法是直接擷取組織，并剪碎及酶溶解表面細(xì)胞后，并不另 外在體外先行放大培養(yǎng)，而是將組織塊置入一多孔隙載體10的中空空腔中 2，外圍則是多孔隙的基材，之后，再將前述上蓋6覆蓋中空空腔2的開孔 5，避免組織塊流出。前述剪碎的組織碎片，經(jīng)由過篩方式可控制其粒徑大 小，使其大于多孔隙載體10的中空空腔2外圍基材的孔徑。當(dāng)組織塊被填入多孔隙載體10的中空空腔2時(shí)，因外圍基材的孔徑小于組織塊，因此，
組織塊將被限制于載體io內(nèi)部而不會(huì)溢流出去。
參閱圖3所示，多孔隙載體10內(nèi)部(即中空空腔2)將含有經(jīng)酶溶解 的高濃度細(xì)胞群及組織塊4，由于多孔隙載體10內(nèi)部的細(xì)胞濃度相當(dāng)高， 在培養(yǎng)過程中，組織細(xì)胞將由內(nèi)向密度較低的外圍多孔隙基材攀爬擴(kuò)散生 長，由內(nèi)而外沿著其原本的組織塊結(jié)構(gòu)，以三度空間方式向外圍多孔隙基 材的孔洞3生長出新增的組織4'。此培養(yǎng)方法如同體外的組織培養(yǎng)，且是 直接以組織形態(tài)來培養(yǎng)新的組織，相較于傳統(tǒng)體外組織培養(yǎng)的方法，能解 決在兩度空間培養(yǎng)造成的去分化現(xiàn)象，亦可以最少的組織量于短時(shí)間內(nèi)于 體外進(jìn)行組織培養(yǎng)。
前述組織塊4可為任何動(dòng)物組織，例如軟骨組織或硬骨組織。
前述組織塊4的粒徑是為500至1000|im。
前述的多孔隙載體10的形狀可依實(shí)際需要任意變化，例如圓柱形、
立方體型或任意形狀。
前述的多孔隙載體io是為可吸收性的高分子材料，此材料是選自下列
群組聚交酯酸(polyglycolic acid;PGA)、聚乳酸交酯酸(polylactic acid;PLA)、聚乳酸甘醇酸(poly(glycolic-co-Lactic)acid;PLGA )、聚酐
(polyanhydrides)、聚己內(nèi)酯(polycapralactone)、聚二酮酯(polydioxanone) 及聚正酯(polyorthoester);其中較佳的多孔隙載體材料為聚乳酸甘醇酸
(PLGA)。
前述的上蓋6是由與主體相同的多孔隙材料制成。 前述的多孔隙載體10的孔徑范圍是為50至500,。 下面通過體外軟骨組織的培養(yǎng)的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法作更詳細(xì)的說明。 實(shí)施例
一種體外軟骨組織的培養(yǎng)方法-(1)制備具有中空空腔2的生物可吸收性多孔隙載體10:
8本實(shí)施例中所選用的可分解性高分子材料是以開環(huán)聚合方式制備得到
的PLGA高分子(分子量約為200,000)。將塊狀的PLGA高分子材料于粉 碎機(jī)中粉碎，粉碎的顆粒通過60-80孔目的篩網(wǎng)過篩后可得到粒徑在 177-250pm的高分子顆粒；選用的添加入基材中創(chuàng)造孔洞結(jié)構(gòu)的水溶性材 料是粒徑250pm左右的氯化鈉顆粒；選用的溶解高分子顆粒的有機(jī)溶劑是 為丙酮。
PLGA高分子顆粒與氯化鈉顆粒依10/90的重量比，以攪拌的方式均勻 混合；混合后的PLGA高分子顆粒與氯化鈉顆粒倒入一下端接有抽氣裝置、 直徑為7mm圓形的過濾器中并壓實(shí)，此時(shí)將有機(jī)溶劑丙酮倒入混合顆粒中 并浸潤，其后打開抽氣閥產(chǎn)生一負(fù)壓向下抽去多余的溶劑，并使表面已溶 化的高分子顆粒相互粘結(jié)。高分子顆粒相互粘結(jié)后，于過濾器上方倒入大 量的去離子水，同時(shí)并打開抽氣閥抽氣，將大量的水通過材料中，析出并 固化高分子顆粒，同時(shí)將其內(nèi)部的氯化鈉顆粒水洗出來。固化后的高分子 從過濾器中取出，置于裝有去離子水的大燒杯中，于室溫下每6小時(shí)換水 一次，以攪拌的方式浸泡水洗24小時(shí)，將內(nèi)部殘留的溶劑及鹽粒洗出，再 置于5(TC的真空烘箱加熱乾燥24小時(shí)，即可得到一孔徑分布在150至 35(^m之間，孔隙率約90 vo1。/。，孔洞為相互連通的多孔隙基材。
本實(shí)施例所制備的具有中空空腔2的多孔隙載體10，是以手術(shù)刀裁切 直徑為7mm，高度為9mm的圓柱體，于基材內(nèi)部挖一直徑為3mm深度為 6mm的中空?qǐng)A腔，再裁切一直徑為3mm，高度為3mm的圓柱體塞子(即 圖2所示的上蓋6),可在組織塊填入時(shí)，以封住內(nèi)部的中空空腔2。中空 的多孔隙載體10制備完成后，以75%的酒精浸泡消毒6小時(shí)，并以大量無 菌的磷酸緩沖鹽(phosphate buffered saline, PBS)溶液置換內(nèi)含消毒的酒精。 (2)實(shí)驗(yàn)組的處理
如圖4所示的流程圖，首先，軟骨組織是以顯微器械取出新生約2至4 天的大白鼠11的大腿骨12，去除表面的肌肉及骨膜，浸于沒有加胎牛血清(fetal calf serum, FCS)的DMEM中，于細(xì)胞培養(yǎng)的操作臺(tái)(laminar flow) 中將大腿骨12取出，置于15ml的離心管13中，加入10ml的磷酸緩沖鹽 溶液予以清洗，重復(fù)兩次。將大腿骨12清洗后，倒于10cm的培養(yǎng)皿中， 以滅過菌的組織剪將關(guān)節(jié)軟骨分離并剪碎，組織塊4碎片大小以20-40孔目 的篩網(wǎng)控制在400-800jim之間。剪碎的碎片收集于15ml的離心管中，再倒 入10ml的磷酸緩沖鹽溶液沖洗，重復(fù)三次。沖洗后的軟骨組織塊4碎片， 將磷酸緩沖鹽溶液清除，再加入溶解蛋白酶(collagenase) 5ml (lmg/ml磷 酸緩沖鹽溶液)，置于37t:的培養(yǎng)箱中，靜置2小時(shí)，將表面的軟骨細(xì)胞予 以游離出來。之后，以溶解蛋白酶分離溶解過后的軟骨骨塊，置于離心機(jī) 中，以轉(zhuǎn)速1500r.p.m.離心5分鐘，將溶解蛋白酶與軟骨塊加以分離。離心 后，吸取澄清的溶解蛋白酶上清液，余留的碎片及細(xì)胞組織以磷酸緩沖鹽 沖洗兩次，離心兩次，以除去殘留的溶解蛋白酶。洗凈后的軟骨塊及組織 細(xì)胞，將其填入體積0.02ml的多孔隙載體10的中空空腔2中，并蓋上多孔 隙載體的上蓋6，以防止軟骨塊流失。 (3)對(duì)照組的處理 如圖5所示的流程圖，首先，對(duì)照組是釆用相同的培養(yǎng)方式，同樣取 自上述大腿骨12的軟骨，并以同樣的方法將軟骨剝離及剪碎，軟骨經(jīng)剪碎 后置于培養(yǎng)皿8，且浸泡于溶解蛋白酶5ml (lmg/ml磷酸緩沖鹽溶液)及 透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase)中，于37'C的培養(yǎng)箱(圖未顯示)中靜置24 小時(shí)，將所有的軟骨細(xì)胞予以游離出來。通常lml體積的軟骨約有1.5x107 個(gè)軟骨細(xì)胞，相對(duì)于多孔隙載體10中空空腔2體積0.02ml，對(duì)照組所要加 入的軟骨細(xì)胞量為3)(105個(gè)軟骨細(xì)胞。要加入的細(xì)胞經(jīng)離心機(jī)離心后，以細(xì) 胞計(jì)數(shù)盤予以計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)后的細(xì)胞由上端加入多孔隙載體10中空空腔2中
(所加入的細(xì)胞溶液體積為20(^1)，為防止細(xì)胞流出，再蓋上上蓋6并置 于培養(yǎng)皿中8，于含飽和水氣的37'C培養(yǎng)箱中靜置6小時(shí)使加入的細(xì)胞貼 附。
10(4) 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的共同處理 實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的組織細(xì)胞添加入多孔隙載體10后，將含有組織細(xì)胞
的載體10放入含有細(xì)胞培養(yǎng)液的旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)器(spinner flask) 7中，如圖 4及圖5所示的最后一個(gè)步驟。細(xì)胞培養(yǎng)液為含10。/。wt胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液，每個(gè)載體的養(yǎng)分為3ml/天，依照培養(yǎng)的時(shí)間定期置換新鮮的培養(yǎng) 液，培養(yǎng)環(huán)境為含5。/。二氧化碳37"C的培養(yǎng)箱。培養(yǎng)后于不同的培養(yǎng)時(shí)間將 多孔隙載體10從反應(yīng)器中取出，先以磷酸緩沖鹽溶液予以沖洗的，然后浸 于含4%福爾馬林的磷酸緩沖鹽溶液中將試片加以固定，以石蠟組織包埋的 方式切片，再以蘇木紫-伊紅的方法染色，并觀察其軟骨組織成長的結(jié)果。
(5) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
以實(shí)驗(yàn)組的方法培養(yǎng)兩星期的結(jié)果如圖6、圖7所示，可看出在載體中 空空腔周圍孔洞有新生的軟骨組織9，直接以組織的型態(tài)從植入的軟骨塊周 圍向外圍孔洞生長，如圖6所示，載體其他部位的孔洞亦可觀察到由中心 向外擴(kuò)散長滿了細(xì)胞，如圖7所示。
圖8、圖9為培養(yǎng)四星期后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)載體中除了中空空腔 外圍的孔洞外，其他部位的孔洞亦長出許多新生軟骨組織9，如圖8所示， 以較高的倍率可觀察到軟骨組織中有許多軟骨細(xì)胞腔隙(lacunae),如圖9 所示，其腔隙中的軟骨細(xì)胞已幵始分裂成長形成同源細(xì)胞群，顯示所形成 的軟骨為一相當(dāng)活躍的新生軟骨組織，而在軟骨組織周圍亦環(huán)繞著許多扁 平的成軟骨細(xì)胞(choridrobkst)，此軟骨組織將可持續(xù)擴(kuò)大成長。
圖10及圖11是顯示以對(duì)照組方法所培養(yǎng)的結(jié)果，于培養(yǎng)四星期時(shí)， PLGA中空空腔載體的多孔隙孔洞中已長滿了細(xì)胞，如圖10所示，以更高 的倍率觀察可發(fā)現(xiàn)，新生的細(xì)胞型態(tài)還是紡錘狀的纖維軟骨細(xì)胞，并沒有 形成軟骨組織如圖ll所示。
圖12是以顯微組織影像軟體分析計(jì)算實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組中，多孔隙載體 外圍孔洞中所形成的軟骨組織所占的面積。由圖12的結(jié)果可得知以本發(fā)明的方法所培養(yǎng)的軟骨組織于四星期時(shí)可填充約26%的孔洞面
積，相較于對(duì)照組的結(jié)果有明顯的差異，顯示以本發(fā)明的培養(yǎng)方法可以在 短時(shí)間內(nèi)于體外長出多量的新生軟骨。
本發(fā)明的功效
本發(fā)明的體外組織的培養(yǎng)方法，主要是將組織塊置入一具有中空空腔 的多孔隙載體的空腔中，使組織以三度空間方式由內(nèi)向外圍的多孔隙載體 的孔洞生長，直接以組織的形態(tài)增生出新的組織。此方法可以最少體積的 組織量，于最短的時(shí)間內(nèi)于體外接培養(yǎng)所需的組織。此技術(shù)的突破將使體 外組織培養(yǎng)由過去利用培養(yǎng)細(xì)胞來形成組織，再轉(zhuǎn)進(jìn)到直接以組織來培養(yǎng) 組織，對(duì)未來將形成的組織工程產(chǎn)業(yè)提供一更快速和有效的培養(yǎng)技術(shù)。
權(quán)利要求
1、一種體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征是它包含一主體、至少一個(gè)以上的位于該主體內(nèi)部且具有一開口的中空空腔及覆蓋該中空空腔開口的上蓋。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體， 其特征是該主體為圓柱形、立方體型或所需的任意形狀。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征是該多孔隙載體的孔徑范圍為50至500pm。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征是該多孔隙載體是生物可吸收性的高分子材料，該高分子材料選 自下列的至少一種聚交酯酸、聚乳酸交酯酸、聚乳酸甘醇酸、聚酐、聚 己內(nèi)酯、聚二酮酯或聚正酯。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征是該多孔隙載體是聚乳酸甘醇酸。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的體外組織的培養(yǎng)方法所使用的多孔隙載體，其特征是該上蓋是與主體相同的多孔隙材料。
全文摘要
一種體外組織的培養(yǎng)方法及其多孔隙載體，主要是將組織塊經(jīng)酶部分溶解后，置入一具有中空空腔的多孔隙載體的空腔中，使組織以三度空間方式由內(nèi)向外圍的多孔隙載體的孔洞生長，直接以組織的形態(tài)增生出新的組織。具有以最少體積的組織量，于最短的時(shí)間內(nèi)在體外培養(yǎng)所需的組織的功效。
文檔編號(hào)C12M3/00GK101491703SQ20091011809
公開日2009年7月29日 申請(qǐng)日期2001年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月24日
發(fā)明者廖俊仁, 張根源, 林玉如, 江淑芳, 陳進(jìn)富 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人工業(yè)技術(shù)研究院