專利名稱:一種快速檢測新型隱球菌的染色液和方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明屬于一種新型隱球菌的檢測領(lǐng)域,尤其是一種快速檢測新型隱球菌的染色
液和方法。
背景技術(shù):
對于新型隱球菌的診斷目前主要依賴于墨汁涂片和真菌培養(yǎng),以病原體的檢出為確診依據(jù)。在快速診斷方面,直接涂片墨汁染色雖然簡便,但鏡下觀察相對困難,因而陽性檢出率低,國外文獻報道即使在連續(xù)多次檢查情況下,陽性率也只有53% 56%,同時存在一定假陽性,且難以進行隱球菌計數(shù)。傳統(tǒng)真菌培養(yǎng)一般需要數(shù)天,培養(yǎng)陽性率雖可達90%以上,但因周期長而延誤診斷。動物接種可檢出部分臨床高度懷疑而涂片、培養(yǎng)均陰性的患者,此法耗時更長,對于快速診斷意義甚微,臨床很少用。近年來,隨著分子生物學技術(shù)和免疫學技術(shù)的迅猛發(fā)展為新型隱球菌的診斷開辟了新的途徑,國內(nèi)外報道均證實利用免疫學技術(shù)和PCR技術(shù)在快速診斷方面具有較高的準確性及敏感性,但由于采用的試劑盒不同,結(jié)果常有差異,有一定假陽性及假陰性率,且由于免疫學技術(shù)和PCR技術(shù)檢測新型隱球菌成本高,操作比染色鏡檢復雜,又不屬于診斷新型隱球菌的金標準,也不利于在鄉(xiāng)鎮(zhèn)及基層醫(yī)院開展,因而在檢驗科的臨床診斷工作中并未得到廣泛應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點,提供一種快速準確、高特異性的快速檢測新型隱球菌的染色液和方法。 本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的技術(shù)方案 這種快速檢測新型隱球菌的染色液,包括,0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水。 這種快速檢測新型隱球菌的方法,包括以下步驟, 1)制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90_110克蒸餾水制成染色液; 2)混合將待檢標本制備成菌懸液后與上述染色液混勻; 3)檢測將上述混勻液進行鏡檢。 所述待檢標本可以是組織勻漿或菌落。 另一種快速檢測新型隱球菌的方法,包括以下步驟, 1)制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水制成染色液; 2)混合將待檢標本離心后與上述染色液混勻;
3)計數(shù)將上述混勻液加入計數(shù)板精確計數(shù)。
所述待檢標本可以是腦脊液或胸腹水。
另一種快速檢測新型隱球菌的方法,包括以下步驟,
1)制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水制成染色液; 2)混合將待檢標本處理與上述染色液混勻;
3)檢測將上述混勻液進行鏡檢。
4)計數(shù)如檢測到有新型隱球菌的存在,可再將上述混合液加入計數(shù)板精確計數(shù)。 本發(fā)明有益的效果是一、檢測簡便快速、靈敏準確、具有高特異性;二、染色液易保存;三、染色時間短,染色效果優(yōu)。
圖1是新型隱球菌的快速染色液染色效果圖(10X 100); 圖2是新型隱球菌、白色念珠菌、白細胞同在計數(shù)池中的快速染色液染色效果圖(10X40); 圖3是新型隱球菌的墨汁染色效果圖(10 X 100); 圖4是新型隱球菌用配置好一年的快速染色液染色效果圖(10X40); 圖5是新型隱球菌用配置好一個月的快速染色液染色效果圖(10X40); 圖6是新型隱球菌用新鮮配置的快速染色液染色效果圖(10X40); 圖7是新型隱球菌的快速染色液lmin染色效果圖(10X40); 圖8是新型隱球菌的快速染色液5min染色效果圖(10X40); 圖9是新型隱球菌的快速染色液30min染色效果圖(10X40);
具體實施例方式
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步說明一種快速檢測新型隱球菌的染色液,
實施例1 :由下述重量配比的原料配制,依文思藍1克,冰醋酸2克,蒸餾水97克。實施例2 :由下述重量配比的原料配制,依文思藍2克,冰醋酸5克,蒸餾水93克。實施例3 :由下述重量配比的原料配制,依文思藍0. 5克,冰醋酸1克,蒸餾水99
克。
克。狀。
實施例4 :由下述重量配比的原料配制,依文思藍2. 5克,冰醋酸10克,蒸餾水110一種快速檢測新型隱球菌的染色方法,
實施例l:其步驟為,
1) 制作染色液利用上述染色液實施例任意一種配比制成染色液;
2) 混合將組織勻漿或菌落等標本制備成菌懸液后與上述染色液混勻;
3) 檢測將上述混勻液進行鏡檢,以確定新型隱球菌的存在。
如圖l,可見新型隱球菌被染成藍色或深藍色,其外部的莢膜不染色,成光亮的環(huán)實施例2:其步驟為,
1)制作染色液利用上述任意一種實施例的配比制成染色液;
4
2)混合將腦脊液、胸腹水等標本離心后與上述染色液混勻; 3)計數(shù)將上述混勻液加入計數(shù)板精確計數(shù),以確定新型隱球菌的數(shù)量。
如圖2,可見在計數(shù)板中白色念珠菌呈白色,白細胞體大色淺,白細胞及其他常見
真菌不染色,易于將新型隱球菌與白細胞及其他常見真菌區(qū)分。 實施例3:其步驟為, 1)制作染色液利用上述任意一種實施例的配比制成染色液;
2)混合將腦脊液、胸腹水等標本離心后與上述染色液混勻;
3)檢測將上述混勻液加入混勻液進行鏡檢。 4)計數(shù)如通過上述檢測檢測到有新型隱球菌,可再將上述混勻液加入計數(shù)板精 確計數(shù)。
本發(fā)明染色液與其他染色劑的染色效果對比 如圖3,新型隱球菌在墨汁的染色下,莢膜透亮,但不如用本發(fā)明染色的包膜深,內(nèi)
部結(jié)構(gòu)也不如本發(fā)明染色的清晰。 本發(fā)明的染色液穩(wěn)定性評估 如圖4-6,可見配置一年、配置一個月、新鮮配制的染色液對新型隱球菌均有良好
的染色效果和特異性。 本發(fā)明的染色效果穩(wěn)定性評估 如圖7-9,可見標本染色30min內(nèi)有很好的穩(wěn)定性,隨著染色時間延長,新型隱球 菌著色會逐漸加深,有良好的染色效果和特異性。 除上述實施例外,本發(fā)明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形 成的技術(shù)方案,均落在本發(fā)明要求的保護范圍。
權(quán)利要求
一種快速檢測新型隱球菌的染色液,其特征是所述染色液包括0.5-3.0克依文思藍、1.0-10.0克冰醋酸、90-110克蒸餾水。
2. —種快速檢測新型隱球菌的方法,其特征是所述方法包括以下步驟,1) 制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水制成 染色液;2) 混合將待檢標本制備成菌懸液后與上述染色液混勻;3) 檢測將上述混勻液進行鏡檢。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測新型隱球菌的方法,其特征是所述待檢標本為組 織勻漿或菌落。
4. 一種快速檢測新型隱球菌的方法,其特征是所述方法包括以下步驟,1) 制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水制成 染色液;2) 混合將待檢標本離心后與上述染色液混勻;3) 計數(shù)將上述混勻液加入計數(shù)板精確計數(shù)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測新型隱球菌的方法,其特征是所述待檢標本為腦 脊液或胸腹水。
6. —種快速檢測新型隱球菌的方法,其特征是所述方法包括以下步驟,1) 制作染色液利用0. 5-3. 0克依文思藍、1. 0-10. 0克冰醋酸、90-110克蒸餾水制成 染色液;2) 混合將待檢標本處理與上述染色液混勻;3) 檢測將上述混勻液進行鏡檢;4) 計數(shù)如檢測到有新型隱球菌的存在,再將上述混合液加入計數(shù)板精確計數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種快速檢測新型隱球菌的染色液和方法,這種染色液包括0.5-3.0克依文思藍、1.0-10.0克冰醋酸、90-110克蒸餾水;這種快速檢測新型隱球菌的方法包括制作染色液、混合、檢測、計數(shù)等步驟。本發(fā)明有益的效果是一、檢測簡便快速、靈敏準確、具有高特異性;二、染色液易保存;三、染色時間短,染色效果優(yōu)。
文檔編號C12Q1/04GK101724682SQ20091015452
公開日2010年6月9日 申請日期2009年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月10日
發(fā)明者萬汝根, 王茂峰 申請人:東陽市人民醫(yī)院