專利名稱：：花生抗黃曲霉侵染田間鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種花生抗黃曲霉侵染的田間鑒定方法。
背景技術(shù)：
：花生是我國(guó)主要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物，我國(guó)花生單產(chǎn)、總產(chǎn)和出口量均居首位，花生種植面積占世界種植總面積的19%,居世界第二位，出口貿(mào)易占世界50%，居世界主要花生出口國(guó)之首，年均總產(chǎn)占世界總產(chǎn)的41%,我國(guó)是世界生產(chǎn)、出口花生最多的國(guó)家。近年來(lái)黃曲霉毒素污染嚴(yán)重制約了我國(guó)花生產(chǎn)業(yè)良性可持續(xù)發(fā)展，已成為嚴(yán)重影響花生生產(chǎn)、加工、貿(mào)易和食品安全的世界性問(wèn)題。黃淮海地區(qū)是我國(guó)花生主產(chǎn)區(qū)，總產(chǎn)量占全國(guó)的50°/。以上，出口量?jī)H山東就占70%左右。但近年來(lái)，由于缺乏抗黃曲霉品種以及收獲、加工等因素的影響，致使黃淮?；ㄉ鳟a(chǎn)區(qū)黃曲霉毒素污染呈逐年加重趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了我國(guó)花生出口貿(mào)易及地方經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。正是由于黃曲霉毒素污染問(wèn)題，我國(guó)花生最大的貿(mào)易伙伴歐盟2009年基本關(guān)閉了進(jìn)口中國(guó)花生的大門，這是近期造成國(guó)內(nèi)花生原料及制品價(jià)格大幅跳水的根本原因之一。因此，解決黃曲霉污染問(wèn)題，確保花生食品安全，增強(qiáng)我國(guó)花生國(guó)際市場(chǎng)竟?fàn)幜Γ罐r(nóng)民增收、企業(yè)增效，推動(dòng)我國(guó)花生生產(chǎn)更上一個(gè)新臺(tái)階已顯得尤為迫切。花生黃曲霉毒素污染是比較復(fù)雜的問(wèn)題，其中收獲前干旱或連續(xù)陰雨、收獲后干燥時(shí)間長(zhǎng)和脫殼損傷等是造成近年來(lái)黃淮海產(chǎn)區(qū)花生黃曲霉毒素污染的主要原因，但最關(guān)鍵的原因是缺乏高抗乃至免疫黃曲霉侵染和產(chǎn)毒的霉品種，^L^企測(cè)這些品種的抗黃曲霉能力多以室內(nèi)檢測(cè)為主，主要原因是室內(nèi)檢測(cè)成本低、時(shí)間相對(duì)短，但室內(nèi)檢測(cè)明顯的缺點(diǎn)是不能完全代表田間環(huán)境，抗性不穩(wěn)定。本專利公布的花生品種田間抗黃曲霉性能鑒定技術(shù)則可以有效解決上述問(wèn)題，提高抗性鑒定效率，可顯著加快育種進(jìn)程。
發(fā)明內(nèi)容(發(fā)明目的)本發(fā)明的目的是解決花生品種田間抗黃曲霉侵染鑒定難度大、抗性檢測(cè)不穩(wěn)定等問(wèn)題。(技術(shù)方案)本方法提供一種簡(jiǎn)便、廉價(jià)、高效檢測(cè)田間花生品種抗黃曲霉侵染的鑒定方法，其包括如下步驟玉米4分碎至直徑3-5mm,室內(nèi)按照50g-75g玉米/1112花生接種黃曲霉菌，產(chǎn)生黃曲霉菌孢子；花生收獲前5-6周停止?jié)菜?。接種前于花生行間劃溝，深度約2-3cm,優(yōu)選2.5cm,花生收獲前分三次將黃曲霉孢子撒施于行間溝內(nèi)，用土覆蓋2-3mm;用噴水壺按照100g-150g/m2均勻噴灑水于接種后的近地表面，創(chuàng)造黃曲霉菌適于繁殖溫濕度環(huán)境。其中，作為黃曲霉侵染介質(zhì)的玉米籽粒如果過(guò)大則攜帶的黃曲霉孢子量偏少，侵染也不充分，如果破碎的籽粒過(guò)小則用黃曲霉菌侵染時(shí)操作不方便，因此石皮碎的玉米4分粒直徑控制在3-5mm為宜，優(yōu)選4-5mm。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，所述黃曲霉菌的接種量?jī)?yōu)選為55-70g玉米/m2花生，更優(yōu)選為60-65g玉米/m2花生。才艮據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，在花生收獲前的第35天、25天、15天將黃曲霉孢子于行間溝內(nèi)，用土覆蓋2.5mm。才艮據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，優(yōu)選地按照120g-140g/ri^均勻噴灑水于接種后的近地表面，更優(yōu)選地按照125g-135g/n^均勻噴灑水于接種后的近地表面。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，所述黃曲霉菌株在察氏培養(yǎng)基3(TC培養(yǎng)7天后，用無(wú)菌水配成濃度為lxl08/mL的孢子懸浮液，接種進(jìn)玉米粕后備用。本發(fā)明所述花生黃曲霉生長(zhǎng)所適宜的溫度為28-38°C，相對(duì)濕度為85%。(發(fā)明效果)國(guó)內(nèi)現(xiàn)有花生品種抗黃曲霉侵染方法基本以室內(nèi)鑒定為主，顯著的缺點(diǎn)是抗性鑒定不能代表田間環(huán)境、適用性差。國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有的花生抗黃曲霉田間鑒定則主要選擇易產(chǎn)生黃曲霉毒素污染花生產(chǎn)地環(huán)境，將待試的話說(shuō)品種種植于上述區(qū)域，依賴自然環(huán)境開(kāi)展黃曲霉抗性鑒定，但該鑒定方法存在受自然環(huán)境影響重，鑒定結(jié)果穩(wěn)定性差、成本高、效率低等缺陷，本發(fā)明則彌補(bǔ)了上述缺點(diǎn)，具有成本低、高效率、穩(wěn)定性強(qiáng)以及適于批量鑒定等優(yōu)點(diǎn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明最接近于田間花生生長(zhǎng)環(huán)境，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性高；所用設(shè)備一次投資可多年使用，對(duì)環(huán)境污染、人體健康無(wú)不良影響。具體實(shí)施例方式將待鑒定的花生品種種植于帶有棚蓋的水泥池內(nèi)，水泥池四周及底部全部用水泥封嚴(yán)，填充中壤土，種植抗黃曲霉侵染引自印度的花生栽培品種Jll和對(duì)黃曲霉侵染感病的花生栽培品種金花1012(^racMs/y^ogaea丄.)；玉米人工或機(jī)器粉碎，直徑3-5mm,室內(nèi)按照50g-75g玉米/1112花生接種黃曲霉菌(A/7^g///^F/mw),產(chǎn)生黃曲霉菌孢子；花生收獲前6周停止?jié)菜?，人工控制雨水。接種前于花生行間劃溝，深度約2-3cm，花生收獲前35天、25天、15天將黃曲霉孢子撒施于行間溝內(nèi)，用土覆蓋2-3mm;用噴水壺按照100g-150g/m2均勻噴灑水于接種后的近地表面，創(chuàng)造黃曲霉菌適于繁殖溫濕度環(huán)境。收獲時(shí)根據(jù)花生品種感染黃曲霉菌情況對(duì)抗性進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)時(shí)間2005-2007年，每品種設(shè)對(duì)照、干旱+黃曲霉菌侵染2個(gè)處理，三次重復(fù)，取平均值?；ㄉ贩N所用花生Urac/2/s/iypogaeaL.)品種為金花1012、Jll。供試菌株及培養(yǎng):—黃曲霉菌抹(^pwg/〃wF/avas)(實(shí)驗(yàn)室保存，可從生物公司購(gòu)得)。菌抹在察氏培養(yǎng)基30。C培養(yǎng)7天后，用無(wú)菌水配成濃度為1x10"mL的孢子懸浮液，4妄種進(jìn)玉米粕后備用。處玉里方法金花1012、Jll于收獲前接種有黃曲霉孢子的玉米，分別于收獲前0天、7天、9天、ll天、13天、15天取樣。黃曲霉菌的培養(yǎng)、田間接種及取樣黃曲霉菌抹在察氏培養(yǎng)基30。C培養(yǎng)7天后，用無(wú)菌水配成濃度為lxl09mL的孢子懸浮液，接種進(jìn)玉米粕后備用。實(shí)驗(yàn)地內(nèi)花生品種金花1012、Jll于收獲前30天將接種黃曲霉的玉米粕接種于花生根部，每10天接種一次，共接種3次。表12005年普通型花生品種Jll資源鑒定結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從上表看出，發(fā)明技術(shù)比常規(guī)技術(shù)鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確，穩(wěn)定性更強(qiáng)。表22006年花生品種金花1012資源鑒定結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表32007年花生品種Jll、金花1012品種鑒定結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從上表看出，發(fā)明技術(shù)比常規(guī)技術(shù)在珍珠豆型花生品種資源抗黃曲霉侵染鑒定結(jié)果更準(zhǔn)確，穩(wěn)定性更強(qiáng)。權(quán)利要求1.一種花生抗黃曲霉侵染田間鑒定方法，其包括如下步驟1)玉米粉碎至直徑3-5mm，室內(nèi)按照50g-75g玉米/m2花生接種黃曲霉菌，產(chǎn)生黃曲霉菌孢子；2)花生收獲前5-6周停止?jié)菜＝臃N前于花生行間劃溝，深度約2-3cm，花生收獲前分三次將黃曲霉孢子撒施于行間溝內(nèi)，用土覆蓋2-3mm；3)用噴水壺按照100g-150g/m2均勻噴灑水于接種后的近地表面，創(chuàng)造黃曲霉菌適于繁殖的溫濕度環(huán)境。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述玉米經(jīng)機(jī)械或人工4分碎至4-5mm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述黃曲霉菌的接種量為55g-70g玉米/n^花生。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述黃曲霉菌的接種量為60g-65g玉米/1112花生。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，在花生收獲前的第35天、25天、15天將黃曲霉孢子^于行間溝內(nèi)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，按照120g-140g/m2均勻噴灑水于接種后的近地表面。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的鑒定方法，其特征在于，按照125g-135g/m2均勻噴灑水于接種后的近地表面。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，'所述黃曲霉菌林在察氏培養(yǎng)基30。C培養(yǎng)7天后，用無(wú)菌水配成濃度為lxl08/mL的孢子懸浮液，接種進(jìn)玉米粕后備用。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述花生黃曲霉生長(zhǎng)所適宜的溫度為28-38°C,相對(duì)濕度為85%。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述花生品種為金花1012、Jll。全文摘要本發(fā)明提供一種花生抗黃曲霉侵染田間鑒定方法，其包括如下步驟1)玉米粉碎至直徑3-5mm，室內(nèi)按照50g-75g玉米/m²花生接種黃曲霉菌，產(chǎn)生黃曲霉菌孢子；2)花生收獲前5-6周停止?jié)菜＝臃N前于花生行間劃溝，深度約2-3cm，花生收獲前分三次將黃曲霉孢子撒施于行間溝內(nèi)，用土覆蓋2-3mm；3)用噴水壺按照100g-150g/m²均勻噴灑水于接種后的近地表面，創(chuàng)造黃曲霉菌適于繁殖溫濕度環(huán)境。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明最接近于田間花生生長(zhǎng)環(huán)境，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性高；所用設(shè)備一次投資可多年使用，對(duì)環(huán)境污染、人體健康無(wú)不良影響。文檔編號(hào)C12R1/67GK101603073SQ20091015934公開(kāi)日2009年12月16日申請(qǐng)日期2009年7月10日優(yōu)先權(quán)日2009年7月10日發(fā)明者單世華,兵孫,張廷婷,李春娟,閆彩霞,高陳申請(qǐng)人:山東省花生研究所