專利名稱：：microRNA-328及其反義核苷酸在診斷、防治心臟疾病中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種內(nèi)源性的非編碼小RNAs的新醫(yī)藥用途，尤其涉及microRNA-328及其反義核苦酸在診斷和防治心臟疾病中的用途，屬于心臟病的"^斷、預(yù)防和治療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：心臟疾病是一個(gè)高度流行的疾病與具有較高的發(fā)病率，死亡率，并導(dǎo)致社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重。關(guān)于心臟疾病的預(yù)防、診斷和治療工作，目前尚存在巨大的不足。房顫，缺血再灌注心#:失常以及長QT綜合征是臨床上心臟疾病的主要表現(xiàn)形式，目前治療效果不佳，死亡率高。心肌纖維化作為一個(gè)主要的病理學(xué)原因參與到心衰，心律失常等多種心臟疾病之中。心臟疾病發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，每一種發(fā)病機(jī)制可導(dǎo)致一種或多種疾病的表現(xiàn)形式，而多種疾病的表現(xiàn)形式可能由單一發(fā)病機(jī)制所導(dǎo)致，這給此類疾病的預(yù)防和治療帶來難度。因此目前為止針對單一靶點(diǎn)的藥物治療，尚不能達(dá)到讓人滿意的效果。隨著近來microRNAs研究的熱潮，這種內(nèi)源性的非編碼小RNAs已經(jīng)作為一個(gè)基因表達(dá)調(diào)節(jié)的中心因子顯露，參加許多重要的生理過程。由于單一的microRNA可負(fù)向調(diào)控多個(gè)基因mRNA的表達(dá)，使得針對在以不同疾病中關(guān)鍵microRNA為耙點(diǎn)的藥物可通過調(diào)節(jié)多個(gè)參與心臟疾病發(fā)生的基因的表達(dá)，從而為心臟疾病的防治帶來新的希望，因此發(fā)現(xiàn)不同病理生理情況下起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用的microRNA亞型變化，并闡明其功能，將會對該疾病的治療帶來新的靶標(biāo)和產(chǎn)生新的干預(yù)策略。盡管越來越多的microRNAs作為人類疾病的生物標(biāo)志物、決定因素和治療靶點(diǎn)^皮發(fā)現(xiàn)，但在心房顫動(dòng)，缺血再灌注和心JI幾纖維化心臟疾病中的關(guān)4定microRNA亞型仍沒有確定，其所發(fā)揮的功能仍是對該領(lǐng)域科研人員的挑戰(zhàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，確定或發(fā)現(xiàn)在心房顫動(dòng)，缺血再灌注和心肌纖維化等心臟疾病中起關(guān)鍵作用的microRNA亞型種類。本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)性房顫、缺血再灌注和心月幾纖維化等心臟疾病中microRNA-328表達(dá)異常上調(diào)。本發(fā)明人用腺病毒和轉(zhuǎn)基因方法強(qiáng)迫microRM-328表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，microRM-328過表達(dá)可導(dǎo)致房顫、長QT綜合征和心肌纖維化的發(fā)生，纟會予microRNA-328反義核苷酸AMO-328，可減弱或逆轉(zhuǎn)上述病理過程。另外，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)具有心律失常(房顫、長QT綜合征)和心肌纖維化的動(dòng)物和患者外周血(全血，血漿和血清)中的microRNA-328的表達(dá)水平顯著上升。具體的，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)microRNA-328(5，-CUGGCCCUCUCUGCCCUUCCGU-3，(SEQIDNO:1))在房顫動(dòng)物才莫型中顯著增高，并且過表達(dá)microRNA-328的小鼠伴有房顫的發(fā)生。接著發(fā)現(xiàn)microRNA-328在缺血再灌注動(dòng)模模型中顯著增高，導(dǎo)致再灌注心律失常及QT間期時(shí)間的延長。心衰，心肌纖維化，心房顫動(dòng)的患者和動(dòng)物體外周血液(全血，血漿和血清)中的microRNA-328的水平顯著升，這意味著microRNA-328可作為一種早期診斷和早期預(yù)防心肌纖維化，心律失常的生物標(biāo)志物。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人通過實(shí)-瞼確^正microRM-328的反義核苦酸AM0-328(AM0s:5，-GACCGGGAGAGACGGGAAGGCA-3，(SEQIDN0:2))對心房顫動(dòng)，心月幾纖維化和缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，AMO-328可成為一種治療心律失常，預(yù)防心肌纖維化的藥物。本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)證明microRNA-328在重大心臟疾病(心房顫動(dòng)，缺血再灌注或心肌纖維化)中的改變及其致病作用，以及其反義核苷酸AM0-328對上述心臟疾病起到的防治作用，將其作為一種新型的藥物作用耙點(diǎn)，最終確定檢測外周血液(全血，血漿，血清)microRNA-328可以作為一種新的生物標(biāo)志物在心臟疾病(心房顫動(dòng)、缺血再灌注和心肌纖維化)的診斷和預(yù)防中應(yīng)用。具體的，可以合成反義AM0-328并與適當(dāng)載體(膽固醇，納米顆粒，殼聚糖，脂質(zhì)體等)連接形成藥物，通過口服、靜脈或肌肉注射的方式，對房顫，長QT綜合征，缺血再灌注，心肌纖維化等心臟疾病進(jìn)行治療。還可以通過焚光定量PCR,銀染增強(qiáng)的納米微球技術(shù)檢測病人外周血液(全血，血漿和血清)中miRNA-328的表達(dá)水平，用于對房顫，長QT綜合征，缺血再灌注，心肌纖維化等心臟疾病的"^斷和預(yù)防。圖lAF模型的建立；A犬心電圖；BAF發(fā)生率和持續(xù)時(shí)間。圖2犬A-TP組和Ctl組相比差異表達(dá)的miRNA;ARNA質(zhì)量枱r測；B利用芯片檢測差異表達(dá)的miRNA;C利用qRT-PCR—瞼i正差異表達(dá)的miRNA。圖3腺病毒構(gòu)建的檢測；A穿梭質(zhì)粒與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后GFP的表達(dá)；B病毒液接種HEK-293細(xì)胞后GFP的表達(dá)。圖4利用心電監(jiān)測儀檢測注射腺病毒后犬心電圖的變化以及AF的持續(xù)時(shí)間。圖5利用realtimePCR檢測在體注射&夂病毒表達(dá)載體后犬心房月幾miR-328的表達(dá)水平。圖6TG小鼠miR-328的表達(dá)及心電圖特點(diǎn)；A利用realtimePCR檢測TG小鼠心房肌miR-328的表達(dá)水平；B利用心電監(jiān)測儀檢測TG小鼠心電圖的變化以及AF的發(fā)生率。圖7miR-328對正常大鼠(7A)、心肌缺血再灌注后大鼠心電圖(7B)及心律失常持續(xù)時(shí)間的影響。圖8大鼠心臟腺病毒在體轉(zhuǎn)染(A,B)/脂質(zhì)體在體轉(zhuǎn)染(C,D,E)0h及轉(zhuǎn)染后8h心電圖QT間期及R-R間期變化對比，及miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因鼠(F,G)心電圖QT間期及R-R間期變化。A.轉(zhuǎn)染腺病毒空病毒組(Adv-pDC-316);B.轉(zhuǎn)染腺病毒mir-3286組(Adv-miR-328);C.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染空白對照組(Lipo-NegativeControl);D.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染miR-328組(Lipo-miR-328);E.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染AMO-328組(Lipo-AMO-328);F.B6轉(zhuǎn)基因小鼠野生型(WildType,WT);G.miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因鼠(miR-328Tgmice)。圖9大鼠心臟腺病毒在體感染/脂質(zhì)體在體轉(zhuǎn)染及miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因鼠心電圖QTc比值統(tǒng)計(jì)。A.腺病毒轉(zhuǎn)染空病毒組(Adv-pDC-316)及mir-328組(Adv-miR-328)Oh及轉(zhuǎn)染后8hQTc比值變化對比；B.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染空白對照組(Lipo-NegativeControl)/miR-328組(Lipo-miR-328)./AMO-328組(Lipo-AMO-328)，Oh及轉(zhuǎn)染后8hQTc比值變化對比；C.B6轉(zhuǎn)基因小鼠野生型(WildType,WT)與miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因鼠(miR-328Tgmice)QTc比值。圖10基因芯片篩選及qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證心肌缺血再灌注損傷過程中大鼠心室肌細(xì)胞中變化的microRNAs。圖11Masson染色結(jié)果。圖12HE染色結(jié)果。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)例1房顫(AF)中miRNA表達(dá)的篩查本實(shí)驗(yàn)采用心房快速起搏法建立AF模型，將起搏電極縫植于右心耳進(jìn)行起搏(400次/分)，術(shù)后進(jìn)行動(dòng)態(tài)心電監(jiān)測。27只犬完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)。1只犬因起搏器故障而終止實(shí)驗(yàn)；2只犬因嚢袋血腫于術(shù)后第2周死亡；2只犬術(shù)后感染死亡；1只犬于術(shù)后第5周突然死亡，尸檢發(fā)現(xiàn)左、右心耳有較多新鮮血栓，考慮和血栓檢塞有關(guān)。起搏前所有犬經(jīng)程序刺激均未誘發(fā)出AF。在犬心房植入起搏器，起搏前，所有犬期前程序刺激檢查均未發(fā)生AF。心房快速起搏8周后，A-TP組17只犬中12只出現(xiàn)了自發(fā)性AF,Ctl組沒有犬出現(xiàn)自發(fā)性AF。經(jīng)電刺激誘導(dǎo)AF時(shí)，A-TP組AF的發(fā)生率為100%(*p<0.05vs.對照，圖1),AF持續(xù)時(shí)間為3000±180sec，而A-TP組AF的發(fā)生率只有40%,AF持續(xù)時(shí)間為3.8±3.4sec。心電圖顯示，A-TP組P波消失，RR間隔不等，心律100-190次/分。常規(guī)提取犬心房的總RNA,利用紫外吸收測定法和變性瓊脂糖凝膠電泳對RNA質(zhì)量進(jìn)行檢測。28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型)，上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個(gè)更小稍微擴(kuò)散的帶，它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間一般可以看到一片彌散的EB染色物質(zhì)，可能是由mRM和其它異型RNA組成。miRM表達(dá)譜芯片由康成生物有限公司提供，利用^芯片標(biāo)記試劑盒和RNeasyMini試劑盒進(jìn)行miRNA標(biāo)記及濃縮標(biāo)i己樣品，采用miRCURYW芯片^:點(diǎn)陣試劑盒進(jìn)行miRNA芯片雜交，并在635nm處激發(fā)熒光，利用Genepix4000B進(jìn)行圖像掃描并使用GenepixPro6.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)組標(biāo)準(zhǔn)值與正常組標(biāo)準(zhǔn)值相比高于2倍或低于0.5倍即認(rèn)為存在顯著性上調(diào)或下調(diào)趨勢。通過對miRNA芯片分析，發(fā)現(xiàn)和Ctl組相比，犬A-TP組差異表達(dá)的miRNA共有IO個(gè)，其中上調(diào)4個(gè)，下調(diào)6個(gè)(圖2B)。利用realtimePCR方法對篩選出的差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證，其的結(jié)果與芯片檢測結(jié)果相一致(miR-517沒有檢測到，圖2C),其中，miR-328變化最明顯。實(shí)驗(yàn)例2腺病毒載體的構(gòu)建利用脂質(zhì)體2000將構(gòu)建好的pDC316-EGFP-U6穿梭質(zhì)粒(請給出"pDC316-EGFP-U6穿梭質(zhì)粒"的具體構(gòu)建方法；如果該穿才炎質(zhì)粒的具體構(gòu)建方法在文獻(xiàn)中已公開，誒出該文獻(xiàn)的具體出處即可)與pBHGlox骨架質(zhì)粒(請給出"pBHGlox骨架質(zhì)粒，，的商業(yè)購買來源或具體的構(gòu)建方法)按7-8:1共轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞，6d到細(xì)l包出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變，且有GFP的表達(dá)。更換無血清MEM，收集細(xì)胞，反復(fù)凍融3次裂解細(xì)胞，10000g離心收集上清既為病毒液，用于感染實(shí)驗(yàn)，感染4d后觀察GFP的表達(dá)(圖3)。選用體重20-30kg成年健康雜種犬，分為三組(1)空載體組(Adv-pDC316);(2)腺病毒注射組(Adv-pre-miR-328);(3)Adv-pre-miR-328+AM0-328共注射組(Adv-pre-miR-328+AM0-328)。無9菌條件下正中開胸，切開心包，行心包吊床術(shù)，將上述腺病毒構(gòu)建的miR-328(100M0)和脂質(zhì)體包裹的AMO-328(10nM)用小號注射器注入到左房游離壁(每cm4主射10個(gè)點(diǎn))。將刺激電極固定于注射的部位，12h后記錄心電圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(圖4)注射Adv-pre-miR-328后犬的心電圖發(fā)生了明顯的變化，AF的持續(xù)時(shí)間明顯升高達(dá)到1113±222sec(*p<0.05vsAdv-pDC316),而注射Adv—pDC316后AF的持續(xù)時(shí)間僅僅為20±5sec,同樣顯著的是Adv-pre-miR-328+AM0-328共注射后，AF的維持時(shí)間顯著降低，達(dá)到190±54sec(*p<0.05vsAdv-pre-miR-328)。利用realtimePCR檢測注射Adv-pre-miR-328后miR-328的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(圖5):和Adv-pDC316相比，Adv-pre-miR-328注射到犬左心房游離壁12h后miR-328的表達(dá)量升高4.9倍(*p<0.05vsAdv-pDC316);Adv-pre-miR-328+AMO-328共注射后，與只注射Adv-miR-328組相比，miR-328的表達(dá)量明顯降《氐(+p<0,05vsAdv-pre-miR-328)?？梢?，這種在體轉(zhuǎn)導(dǎo)方法可用于后續(xù)蛋白表達(dá)及心電監(jiān)測的實(shí)驗(yàn)中。實(shí)一驗(yàn)例3miR-328心臟過表達(dá)TG小鼠模型的構(gòu)建利用realtimePCR檢測TG小鼠各臟器中miR-328的表達(dá)量，結(jié)果顯示(圖6A):與非轉(zhuǎn)基因小鼠(WT)相比，TG小鼠左心房miR-328的表達(dá)量升高至少17倍(*p<0.05vs.WT),因此本發(fā)明人應(yīng)用陽性的TG小鼠進(jìn)行心電監(jiān)測的實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用心電監(jiān)測儀記錄了14只陽性TG小鼠和14只WT小鼠的心電變化，結(jié)果顯示(圖6B):所有14只陽性TG小鼠均出現(xiàn)自發(fā)性AF，即P波消失，R-R間期不等。在WT小鼠中沒有^r測到上述的改變。實(shí)驗(yàn)例4microRNA-328及其反義核苦酸AMO-328在缺血再灌注性心律失常作用一、大鼠心肌缺血-再灌注模型記錄心電圖將各組大鼠開胸后結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，分別記錄結(jié)扎前ECG和結(jié)扎lh后再灌注后的心電圖(圖7B)。動(dòng)物冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后逐漸出現(xiàn)ST段抬高，說明大鼠左室前壁有明顯缺血；同時(shí)伴有多種類型的室性心律失常，平均持續(xù)時(shí)間為(953.75±348.71ms)，給予在體轉(zhuǎn)染miR-328后再給予缺血再灌注后，出現(xiàn)劇烈的室性心律失常，其發(fā)生率為100%,持續(xù)時(shí)間為(2477.70±725.68ms)。單獨(dú)給予AMO-328在體轉(zhuǎn)染后，再給予大鼠缺血再灌注，動(dòng)物室性心律失常發(fā)生率明顯降低，持續(xù)時(shí)間為(345.90±208.02ms)。給予正常大鼠在體轉(zhuǎn)染miR-328后，出現(xiàn)多種類型的室性心律失常，持續(xù)時(shí)間為(1375.34土504.41ms)(圖7A),單獨(dú)給予AMO-328后，大鼠只表現(xiàn)明顯的前壁心肌缺血表現(xiàn)，ST段抬高，而幾乎無室性心律失常出現(xiàn)(32.61±49.91ms)。說明miR-328可誘發(fā)大鼠室性心律失常發(fā)生，并可加重心肌缺血再灌注性心律失常的發(fā)生，而AMO-328可以逆轉(zhuǎn)miR-328的致室性心律失常效應(yīng)。二、miR-328在體轉(zhuǎn)染對大鼠QT間期變化的影響分別用腺病毒、脂質(zhì)體給予大鼠心臟在體轉(zhuǎn)染mir-328,AMO-328,記錄轉(zhuǎn)染前及轉(zhuǎn)染后8小時(shí)心電圖中QT間期及R-R間期變化，以及miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠心電圖中QT間期及R-R間期變化，并通過Bazett's公式計(jì)算實(shí)測QT/RR1/2。計(jì)算得到心率校正的QT間期(QTc)。結(jié)果顯示腺病毒在體感染miR-328組，在感染后8h,QTc值(220.14±27.72ms)較未注射前Oh,QTc值(147.66±14.26ms)明顯延長(p<0.01);脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染mir-328組，在轉(zhuǎn)染后8hQTc值(198.76±4.93ms)較未轉(zhuǎn)染前OhQTc值(183.38±22.61ms)明顯延長(p<0.05);miR-328過表達(dá)轉(zhuǎn)基因鼠QTc值(125.73±12.96ms)較野生型B6小鼠QTc值(101.00±14.67ms)明顯延長(p<0.01)。此結(jié)果i兌明，miR-328參與大鼠心電圖QT間期延長的病理過程(圖8、圖9)。三、基因芯片檢查缺血再灌注大鼠心室細(xì)胞肌microRNA的表達(dá)變化及qRT-PCR技術(shù)^r證分別取正常大鼠心室肌組織和缺血再灌注區(qū)域心室肌組織，采用miRCURYArraymicroarraykit,篩查與正常組大鼠相比上調(diào)或下調(diào)2倍以上的microRNA，芯片篩查結(jié)果顯示心月幾缺血再灌注損傷導(dǎo)致33個(gè)microRNA的表達(dá)變化2倍以上，其中20個(gè)上調(diào)，13個(gè)下調(diào)，尤以miR-l、miR-328及miR-499變化顯著(圖10)。實(shí)驗(yàn)例5microRNA-328過表達(dá)TG小鼠心肌纖維化改變1.Masson染色通過對小鼠正常組、轉(zhuǎn)mir-328的2個(gè)月組及3個(gè)月組的左室取材進(jìn)行Masson染色結(jié)果比較，轉(zhuǎn)mir-328的2個(gè)月組與3個(gè)月組均呈現(xiàn)出不同程度的纖維化，并且呈現(xiàn)趨勢為轉(zhuǎn)mir-328的3個(gè)月組纖維化程度高于2個(gè)月組(圖11)。2.HE染色通過對小鼠正常組、轉(zhuǎn)mir-328的2個(gè)月組及3個(gè)月組的左室取材進(jìn)行HE染色結(jié)果比較，轉(zhuǎn)mir-328的2個(gè)月組與3個(gè)月組均呈現(xiàn)出不同程度的纖維化，并且呈現(xiàn)趨勢為轉(zhuǎn)mir-328的3個(gè)月組纖維化程度高于2個(gè)月組(圖12)。實(shí)驗(yàn)例6心房顫動(dòng)，缺血再灌注損傷動(dòng)物模型外周血液，血漿，血清microRNA-328的測定采用定量PCR方法，引物序列如表1所示。相對定量即采用2—mt法，通過模型組與正常組的比值來分析miRNA表達(dá)量的變化；絕對定量是通過標(biāo)準(zhǔn)品得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到每個(gè)檢測樣品的miRNA的實(shí)際表達(dá)量。表1心房顫動(dòng)犬外周血液(血漿)microRNA-328的測定miR-328GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACACGGAAU6CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT表2缺血再灌注損傷大鼠外周血液(血漿)miRNA-328的測定正常組AT值模型組AT值模型組AT值-正模型組相對含量常組AT值平均值(2-AAT)13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表3缺血再灌注損傷大鼠外周血液(血漿)miRNA-328的測定<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>KLPI090530—3序列表<110>哈爾濱醫(yī)科大學(xué)<120>microRNA-328及其反義核苷酸在診斷、防治心臟疾病中的用途<130〉KLPI05689<160>2<170〉Patentlnversion3.1<210〉1<211>22〈212>RNA<213>homosapiens<400>1CUGGCCCUCUCUGCCCUUCCGU22<210〉2<211>22〈212〉RNA<213>homosapiens<400>2GACCGGGAGAGACGGGAAGGCA2權(quán)利要求1、SEQIDNO1所示的核苷酸序列在制備診斷、預(yù)防或治療心臟疾病藥物中的用途。2、按照權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的心臟疾病包括房顫，長QT綜合征，缺血再灌注或心肌纖維化。3、一種預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物，由有效量的權(quán)利要求1所述的核苷酸序列和藥學(xué)上可接受的載體或賦料組成。4、SEQIDNO:2所示的核苷酸序列在制備預(yù)防或治療心臟疾病藥物中的用途。5、按照權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述的心臟疾病包括房顫，長QT綜合征，缺血再灌注或心肌纖維化。6、一種預(yù)防或治療心臟疾病的藥物組合物，由有效量的權(quán)利要求4所述的核苷酸序列和藥學(xué)上可接受的載體或賦料組成。全文摘要本發(fā)明公開了microRNA-328及其反義核苷酸在診斷、防治心臟疾病中的用途。本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)證明microRNA-328在重大心臟疾病(心房顫動(dòng)，缺血再灌注或心肌纖維化)中的改變及其致病作用，以及其反義核苷酸AMO-328對上述心臟疾病起到的防治作用，將其作為一種新型的藥物作用靶點(diǎn)，最終確定檢測外周血液microRNA-328可以作為一種新的生物標(biāo)志物在心臟疾病的診斷和預(yù)防。還可以通過熒光定量PCR，銀染增強(qiáng)的納米微球技術(shù)檢測病人外周血液中miRNA-328的表達(dá)水平，用于對房顫，長QT綜合征，缺血再灌注，心肌纖維化等心臟疾病的診斷和預(yù)防。文檔編號C12Q1/68GK101643791SQ20091017021公開日2010年2月10日申請日期2009年9月4日優(yōu)先權(quán)日2009年9月4日發(fā)明者初文峰,單宏麗,呂延杰,瑩張,楊寶峰,潘振偉,寧王,王志國申請人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)