專利名稱：：生物活性單一飼料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物用單一飼料，特別是涉及一種以枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097為原料制備而成的生物活性單一飼料。二
背景技術(shù)：
：喂飼經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的飼料，一般其組成成份的原料本身營養(yǎng)價(jià)值多有很大的改善空間。尤其在禁用抗生素飼養(yǎng)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物時(shí)，尤其必須要注意飼料整體營養(yǎng)是否能滿足生理、生長、提升免疫力的需要，否則動(dòng)物很容易因生長遲緩、疾病造成嚴(yán)重?fù)p失。為了滿足需求，可以將飼料原料進(jìn)行特殊加工，尤其運(yùn)用現(xiàn)代生物科技選殖益生菌群，藉由發(fā)酵工程充分轉(zhuǎn)化飼料原料的營養(yǎng)大分子為細(xì)小分子，同時(shí)將益生菌群發(fā)酵代謝產(chǎn)物，包括勝肽、胺基酸、維生素、核苷酸、微量礦物元素以及乳酸、醋酸等酸化劑同時(shí)補(bǔ)充于飼料中，所選殖的益生菌群最為可貴的是耐熱、耐強(qiáng)酸、耐強(qiáng)堿的特性，動(dòng)物因吃下去的發(fā)酵原料也同時(shí)吃進(jìn)有整腸、提升免疫力功能的有益菌群。在發(fā)酵飼料原料后的烘焙工藝仍可以保留許多的有益菌數(shù)量。本發(fā)明就是基于目前喂飼經(jīng)濟(jì)動(dòng)物所需單一飼料的整體要求，而發(fā)明的一種有益于動(dòng)物健康的微生物群發(fā)酵轉(zhuǎn)化多元化的、更具營養(yǎng)價(jià)值的生物活性單一飼料。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種生物活性單一詞料。利用本發(fā)明技術(shù)方案制備的生物活性單一飼料能夠大幅度提升飼料營養(yǎng)轉(zhuǎn)化效率、提升免疫力、降低使用動(dòng)物性蛋白質(zhì)原料所相對感染病原菌的風(fēng)險(xiǎn)、增進(jìn)養(yǎng)殖農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收益。本發(fā)明的技術(shù)方案是本發(fā)明提供一種生物活性單一飼料的制備方法，所述制備方法包括以下詳細(xì)步驟a、四種液態(tài)生物活性物質(zhì)的制備以枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097為原料，將其四種原料經(jīng)常規(guī)方法分別進(jìn)行初期培養(yǎng)，得到四種初期培養(yǎng)的菌液，然后利用四種初期培養(yǎng)的菌液分別進(jìn)行常規(guī)的液態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后得到四種原料的液態(tài)生物活性物質(zhì)；b、固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)的制備將步驟a制備的枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)和嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性6物質(zhì)混合均勾，混合時(shí)三種液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量分別為1020%、1030%和50~80%，然后將調(diào)質(zhì)處理后的固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵，其中混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物總量的重量百分比為2398%，混合發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為375(TC，發(fā)酵時(shí)間為1248小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后將其物料進(jìn)行干燥、粉碎，得到固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)；c、生物活性物質(zhì)單一飼料的制備將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ysl4079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)按照常規(guī)方法分別濃縮成干物量為25~45%的液態(tài)生物活性物質(zhì)，將二種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，混合時(shí)其中干物量為2545%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為4050%，混合后將其噴灑在步驟b制備的固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)上，所述兩種干物量為2545%的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合液噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的0.51.5%，噴灑后即得產(chǎn)品生物活性單一飼料。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，步驟a中所述枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法為先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為17brix，在IO(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌Xa4517菌液500L倒入發(fā)酵罐，然后再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或5~8%的黃豆粉營養(yǎng)源水溶液，以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后，取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.31.6%，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為58%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，在發(fā)酵罐中發(fā)酵溫度為3255'C,發(fā)酵時(shí)間為848小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C，得到枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，步驟a中所述凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法為先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為17brix，在IOO'C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或58%的黃豆粉營養(yǎng)源水溶液，以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.31.6%，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為58%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為3743°C，發(fā)酵時(shí)間為1248小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)加入分解酶，其加入量占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.0010.05%，加入分解酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410°C，得到凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，所述分解酶為酸性蛋白分解酶、菠蘿酶、a-淀粉分解酶、纖維分解酶、半纖維分解酶、a-半乳糖苷酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶中的至少一種。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，步驟a中所述嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為210brix，在IOO"C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為810%的脫脂奶粉或812%的黃豆粉和1.2%的無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度812%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，將營養(yǎng)源水溶液以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，所述脫脂奶粉或黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.52.0%或0.52.4%和0.070.24%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為374(TC，發(fā)酵時(shí)間為1872小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)加入菠蘿酶和ct-半乳糖苷酶，所述菠蘿酶的加入量占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.0005~0.01%，所述a-半乳糖苷酶的加入量占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.0050.05%，加入酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C，得到嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)。根據(jù)上述生物活性單一詞料的制備方法，步驟a中所述啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至度為212brix，在10(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的啤酒酵母菌Holy097菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或35。/。的黃豆粉和0.004。/c維生素Bi、0.42°/。維生素B2、0.15%磷酸氫二鉀、0.01%7倍水合硫酸鎂、0.02%硫酸銅營養(yǎng)源水溶液，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為3~5%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，將營養(yǎng)源水溶液以10(TC、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉和維生素B"維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.181.0。/。和0.000240.0008%、0.0250.084%、0.0090.03%、0.00060.002%、0.00120.004%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為30~37°C，發(fā)酵時(shí)間為18~48小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至41(TC，即可得到啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，步驟a中所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌Xa4517菌液中菌數(shù)為^1.0xl()SCFU/ml，酸堿值pH為5.2~6.5，發(fā)酵后所述枯草芽孢桿菌乂&4517菌液中菌數(shù)為^1》107。1;/1111，酸堿值pH為5.66.5;所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液中菌數(shù)為^1.0xl0SCFU/ml，酸堿值pH為4.66.0，發(fā)酵后凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液中菌數(shù)為^1.2xl(^CFU/m1,酸堿值pH為4.35.8;所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液中菌數(shù)為^1.0xl()SCFU/ml，酸堿值pH為4.25.2，發(fā)酵后嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液中菌數(shù)為^L2xl(^CFU/ml，酸堿值pH為4.25.0;所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的啤酒酵母菌Holy097菌液中菌數(shù)為^1.0xl(^CFU/ml，酸堿值pH為4.56.0，發(fā)酵后啤酒酵母菌Holy097菌液中菌數(shù)為2l.0xl07CFU/ml，酸堿值pH為4.5~5.5。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，步驟b中所述固態(tài)底物為去皮黃豆粕、黃豆粉、黃豆渣、去脂米糠、蠶豆粕、豌豆粕、棉籽粕、菜籽粕、小麥麩、大麥麩、啤酒糟、玉米酒糟、大米酒糟和玉米粉中的至少一種；所述固態(tài)底物的調(diào)質(zhì)處理方法為以蒸氣調(diào)質(zhì)510分鐘，然后降溫至3745'C;所述步驟b中混合發(fā)酵期間每l3小時(shí)攪拌1015分鐘，發(fā)酵結(jié)束后將其物料在5511(TC的溫度下干燥，干燥至發(fā)酵底物水分含量^8%;所述物料干燥粉碎后過2040目篩。根據(jù)上述生物活性單一詞料的制備方法，所述黃豆粉的粒度為全部通過6080目篩分析篩。根據(jù)上述生物活性單一飼料的制備方法，所述生物活性單一飼料中枯草芽孢桿菌Xa4517的含量為1.0xl(^5.0xlO"CFU/kg，所述凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的含量為1.0x1075.0xl01GCFU/kg，所述嗜酸性乳酸桿菌Ys14079的含量為1.0xl051.0xl07CFU/kg,所述啤酒酵母菌Holy097的含量為1.0xl091.0xl012CFU/kg。本發(fā)明的積極有益效果1、本發(fā)明產(chǎn)品生物活性單一飼料是以對動(dòng)物有益的菌種來發(fā)酵天然谷物，是純天然的綠色飼料。在本發(fā)明產(chǎn)品的制備過程中有益菌種在發(fā)酵中產(chǎn)生的一次性代謝產(chǎn)物是無毒的，其中有許多產(chǎn)物可以減少動(dòng)物飼料中抗生素的使用強(qiáng)度與頻度；本發(fā)明產(chǎn)品生物活性單一飼料可以以210%的比例常態(tài)添加于各種動(dòng)物飼料，由此可以顯著提升飼料中蛋白質(zhì)與胺基酸的可消化率、提升詞料可利用能量，并且減少下痢發(fā)生而促使糞便干且松、減少氨與硫化氫臭味、促進(jìn)動(dòng)物生長、提高飼料轉(zhuǎn)化率、增強(qiáng)免疫應(yīng)激能力。2、本發(fā)明采用的枯草芽孢桿菌Xa4517具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)、能夠產(chǎn)生內(nèi)生性孢子，耐高溫、胃酸、膽鹽；(2)、因?yàn)榉敝呈来焖?，可以有效抑制病原菌的生長；(3)、分泌抗菌物質(zhì)能力強(qiáng)，能夠抑制大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等病原菌；(4)、分泌酶能力強(qiáng)，包括(x-淀粉酶、纖維酶與蛋白酶；(5)、降低腐敗菌在大腸內(nèi)過度發(fā)酵產(chǎn)生毒素所造成的危害(6)、能夠利用飼料內(nèi)的碳水化合物轉(zhuǎn)化成有機(jī)酸，有效促進(jìn)腸蠕動(dòng)，預(yù)防便秘。3、本發(fā)明采用的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)、與枯草芽孢桿菌Xa4517協(xié)同制造腸道有益菌占優(yōu)勢的平衡效果相當(dāng)強(qiáng)烈，即充分利用枯草芽孢桿菌Xa4517分解碳水化合物而產(chǎn)生的寡醣，產(chǎn)生乙酸、乳酸除了制造病原菌不利生長的酸性環(huán)境外，還能夠提供其它乳酸菌良好的生長因子；(2)、增強(qiáng)免疫力；(3)、在腸道能夠制造酸性環(huán)境，使銅、鐵、鋅、鎂、鈣、磷的生物利用率提高。4、本發(fā)明采用的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)、與枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416協(xié)同平衡腸道有益菌群；(2)、產(chǎn)生乙酸、乳酸，制造病原菌不利生長的酸性環(huán)境；(3)、增強(qiáng)免疫力；(4)、在腸道能夠制造酸性環(huán)境，使礦物質(zhì)的生物利用率提高；(5)、在腸道形成的乳酸鹽是優(yōu)良的油脂乳化劑，促進(jìn)動(dòng)物對油脂的吸收。5、本發(fā)明采用的啤酒酵母菌Holy097的代謝產(chǎn)物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)、提供豐富的維生素B群，增添許多飼料配方額外的營養(yǎng)源；(2)、幫助平衡腸道有益菌群，使更有效產(chǎn)生乙酸、乳酸，制造病原菌不利生長的酸性環(huán)境；(3)、提高發(fā)酵原料的嗜口性。6、本發(fā)明產(chǎn)品生物活性單一飼料的發(fā)酵工藝具有獨(dú)特性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，能夠帶動(dòng)畜牧養(yǎng)殖業(yè)邁向綠色、環(huán)保、有機(jī)，具有深遠(yuǎn)的開創(chuàng)價(jià)值和啟發(fā)意義。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋說明，并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。首先說明一下枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097這四株菌種的獲取和有關(guān)性能以及四種菌液的常規(guī)初期培養(yǎng)方法的具體過程。一、枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097這四株菌種的獲取10(一)、枯草芽孢桿菌Xa4517的獲取1、枯草芽孢桿菌Xa4517的獲取方法(1)、自臺(tái)灣省云林縣一芝麻油制造工廠取一克廢棄物，加入10mlTrypticaseSoyBroth(胰酶大豆培養(yǎng)液，Difco，Sparks，U.S.A.:每升含胰蛋白胨20.0g，右旋糖l.Og，磷酸氫二鈉2.0g，硝酸鉀1.0g，將pH值調(diào)至7.0，固態(tài)培養(yǎng)基加入1.5%瓊脂)中震蕩混合均勻后，以常規(guī)巴氏德消毒法消毒；(2)、將TSB培養(yǎng)液進(jìn)行10倍梯度稀釋至IO"4，每個(gè)梯度稀釋液于37'C溫度培養(yǎng)24小時(shí)，進(jìn)行芽孢化菌株的初步增菌篩選；(3)、再自各稀釋管取100至TrypticaseSoyBroth(胰酶大豆培養(yǎng)液,Difco,Sparks,U.S.A)平板上，并以L型玻棒涂抹均勻，同樣37'C培養(yǎng)24小時(shí)，再以隨機(jī)選取方式挑取單一菌落至一個(gè)新的TrypticaseSoyAgar平板上，并以三步法劃開，重復(fù)純化繼代三次以后，得到一株具有芽孢化特性的菌株，將其命名為Xa4517。2、枯草芽孢桿菌Xa4517菌種的特性(1)、形態(tài)特征菌落表面粗糙不透明，有皺折而表面黯淡，為淡黃色或淡褐色，外觀型態(tài)呈圓形或不規(guī)則狀；在液體培養(yǎng)基中生長時(shí)，常形成皺醭。細(xì)胞大小約(0.60.8拜)x(1.53阿)，革蘭氏染色陽性，著色均勻，無莢膜；內(nèi)生型孢子大小約(0.30.9pm)x(1.11.6jun)，孢子呈橢圓形，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大；通常利用周生鞭毛移動(dòng)。(2)、生理特性化學(xué)異營，有氧代謝；能進(jìn)行良好的糖解作用與TCA循環(huán)，接觸酶(catalase)為陽性；具有水解蛋白質(zhì)、纖維、半纖維與淀粉的能力，能降解糖類產(chǎn)生豐富的酸；在286(TC、酸堿值6.57.0時(shí)生長良好；具有耐壓、耐熱、耐酸、耐堿特性；在缺乏碳、氮或磷的環(huán)境中會(huì)形成內(nèi)生性孢子。(3)、熱穩(wěn)定性枯草芽孢桿菌(￡""7//^7&)Xa4517的熱穩(wěn)定性見表1。表l:枯草芽孢桿菌Xa4517的熱穩(wěn)定性<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注測試樣品的起始芽孢化菌數(shù)為5.0xl()8CFU/ml。(5)、耐酸堿性10ml枯草芽孢桿菌(5"c!7/"sXa4517菌液經(jīng)離心去除上清液，測得的菌數(shù)為4.5xl08CFU/ml，分別在不同pH值的緩沖液中(pH27緩沖液為使用0.2M的磷酸氫二鈉鹽溶液與0.2M的鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)劑，pH810緩沖液為使用0.2M的磷酸氫二鈉鹽溶液與0.2M的氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)劑)靜置3小時(shí)，然后統(tǒng)計(jì)菌數(shù)，結(jié)果見表2。表2、枯草芽孢桿菌Xa4517的耐酸堿性<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注測試樣品的起始菌數(shù)為4.5x108CFU/ml。(6)、最適培養(yǎng)基成份TrypticaseTMSoyBroth胰酶大豆培養(yǎng)液的組成為胰蛋白胨17.0g，植物蛋白胨3.0g，氯化鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.5g，葡萄糖2.5g，加蒸餾水配制成l升，調(diào)整pH值為7.0。(7)、最適培養(yǎng)溫度最適培養(yǎng)溫度為37'C。(二)、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的獲取1、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的獲取方法(1)、自臺(tái)灣臺(tái)南縣一酸奶制造廠取一克樣品，加入lOm!GYEBroth(GYE培養(yǎng)液；含酵母提取物5.0g、葡萄糖2.0g、磷酸一鉀0.58、磷酸二鉀0.58、硫酸鎂(Ug、氯化鈉0.01g、硫酸錳0.01g、硫酸鋅0.0016g、硫酸銅0.0016g、硫酸鈷0.0016g、肉蛋白胨5g，將pH值調(diào)至6.06.2，固態(tài)培養(yǎng)基加入1.5%瓊脂)中震蕩混合均勻后，以70'C恒溫水浴30分鐘后馬上降溫到45'C。(2)、再以GYE培養(yǎng)液進(jìn)行10倍梯度稀釋至1(T6，將每個(gè)梯度稀釋液培養(yǎng)于4(TC溫度培養(yǎng)48小時(shí)，進(jìn)行芽孢化菌株的初步增菌篩選。(3)、自各稀釋管取lOOfil至DifcoLactobacilliMRS平板培養(yǎng)基上，并以L型玻棒涂抹均勻，同樣分別37'C培養(yǎng)24小時(shí)后，再以隨機(jī)方式挑取約2.5mm大小、呈突起、表面平滑光亮的單一菌落至一新的MRS平板培養(yǎng)基上，并以三步法劃開，重復(fù)純化繼代三次以后，得到一株具有產(chǎn)乳酸活性的菌株，將其命名為Yg7416。2、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌種的特性(1)、形態(tài)特征菌落大小約2.02.5mm，呈突起、表面平滑光亮、不產(chǎn)生色素、乳白色至乳黃色。菌種大小為(3.08.0jun)x(1.01.9nm)，纖細(xì)長桿狀偶而稍彎曲、末端稍圓、革蘭氏染色陽性、產(chǎn)內(nèi)生性橢圓形芽孢位在細(xì)胞末端、孢子大小約(1.01.7nm)x(0.91.2nm)，具周生鞭毛、有運(yùn)動(dòng)性。(2)、生理特性化學(xué)異營，好氧至微好氧代謝，酸性環(huán)境生長良好，行同質(zhì)型發(fā)酵并產(chǎn)L(+)型乳酸、能產(chǎn)生抗菌物質(zhì)。會(huì)利用少數(shù)糖類而產(chǎn)酸，包括葡萄糖(Glucose)、半乳糖(Galactose),木糖(Xylose)、阿拉伯糖(Arabinose)、麥芽糖(Maltose)、甘露糖(Mannose)、果糖(Fructose)、蔗糖(Sucrose)與海藻糖(Trehalose)，無法水解淀粉與酪蛋白，接觸酶(Catalase)反應(yīng)為陽性。引朵(Indole)反應(yīng)為陰性、不產(chǎn)生硫化氫。無法降解硝酸鹽成為亞硝酸鹽。在3037°C、酸堿值5.56.5時(shí)是生長良好條件。(3)、熱穩(wěn)定性凝結(jié)芽孢桿菌(5fld//^coflgw/a朋)Yg7416的熱穩(wěn)定性見表3。表3、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的熱穩(wěn)定性溫度rc)反應(yīng)時(shí)間(分鐘)菌數(shù)(CFU/ml)溫度rc)反應(yīng)時(shí)間(分鐘)菌數(shù)(CFU/ml)3.8xi0854.5x10580152.9x108110152.0x105302.1xl08301.3x105602.1x108602.8x10452.1xl081.1xl04100155.0x107121153.9xl03303.2x107301.9x102602.1xl06601.0x10213注測試樣品的起始芽孢化菌數(shù)為3.9xl08CFU/ml。(4)、耐酸堿性分別將凝結(jié)芽孢桿菌(^a7/"scoagw/mw)Yg7416在不同pH值的緩沖液中(pH27緩沖液為使用0.2M的磷酸氫二鈉鹽溶液與0.2M的鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)劑，pH810緩沖液為使用0.2M的磷酸氫二鈉鹽溶液與0.2M的氫氧化鈉溶液進(jìn)行調(diào)劑)靜置3小時(shí)，然后統(tǒng)計(jì)菌數(shù)，結(jié)果見表4。表4、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的耐酸堿性<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注測試樣品的起始菌數(shù)為3.9"08CFU/ml。(5)、最適培養(yǎng)基成份LactobacilliMRS培養(yǎng)基的組成為每升培養(yǎng)基中含有蛋白胨10.0g，牛肉膏提取物lO.Og，酵母提取物5.0g，葡萄糖20.0g，檸檬酸銨2.0g，醋酸鈉5.0g，7倍水合硫酸鎂0.1g，水合硫酸錳0.05g，無水磷酸二鉀2.08,吐溫-801.0g;蒸餾水配制，pH值為6.5。(6)、最適培養(yǎng)溫度最適培養(yǎng)溫度為37'C。(三)、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079的獲取1、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079的獲取方法(1)、自臺(tái)灣屏東科技大學(xué)畜產(chǎn)系牧場一乳牛糞便取一克樣品，加入10mlDifcoLactobacilliMRSBroth(MRS培養(yǎng)液每升培養(yǎng)基中含有蛋白胨lO.Og，牛肉膏提取物lO.Og，酵母提取物5.0g,葡萄糖20.0g,檸檬酸銨2.0g,醋酸鈉5.0g,7倍水合硫酸鎂0.1g，水合硫酸錳0.05g，無水磷酸二鉀2.0g,吐溫-801.0g;將pH值調(diào)至6.06.2,固態(tài)培養(yǎng)基加入1.5%瓊脂)中震蕩混合均勻后，以7(TC恒溫水浴30分鐘后馬上降溫到45'C。(2)、苒以MRS培養(yǎng)液進(jìn)行10倍梯度稀釋至IO"6，將每個(gè)梯度稀釋液培養(yǎng)于40'C溫度培養(yǎng)48小時(shí)，進(jìn)行芽孢化菌株的初步增菌篩選。(3)、自各稀釋管取100jU至MRS平板培養(yǎng)基上，并以L型玻棒涂抹均勻，同樣分別37'C培養(yǎng)24小時(shí)后，再以隨機(jī)方式挑取約2.5mm大小、呈突起、表面平滑光亮的單一菌落至一新的MRS平板培養(yǎng)基上，并以三步法劃開，重復(fù)純化繼代三次以后，得到一株具有產(chǎn)乳酸活性的菌株，將其命名為Ys14079。2、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌種的特性(1)、形態(tài)特征呈鈁錘狀突起，表面平滑光亮、不產(chǎn)生色素，乳白色至乳黃色。菌種呈桿狀，單獨(dú)、成對或呈短鏈狀存在，長度210^m，革蘭氏染色陽性，沒有運(yùn)動(dòng)性。(2)、生理特性在酸堿值pH5.56.0的酸性環(huán)境、兼性厭氧、溫度3538t:時(shí)生長良好，在15。C以下不會(huì)生長，行同質(zhì)型發(fā)酵并產(chǎn)L(+)型乳酸，能產(chǎn)生Acidolin、AcidophilicLactocidin等抗菌物質(zhì)?？纱x葡萄糖(Glucose)、果糖(Fructose)、半乳糖(Galactose)、乳糖(Lactose)、Cellobiose、麥芽糖(Maltose)、蔗糖(Sucrose)與海藻糖(Trehalose);無法利用木糖(Xylose)、阿拉伯糖(Arabinose)、鼠李糖(Rhamnose)、甘露糖(Mannose)、甘油(Glycerol)、甘露醇(Mannitol)及山梨醇(Sorbitol)。在牛乳中代謝乳糖產(chǎn)生0.3~1.9%的乳酸。對膽鹽有很好的耐受性。遺傳物質(zhì)G+C含量約36.7%。(四)、啤酒酵母菌Holy097的獲取1、啤酒酵母菌Holy097的獲取方法(1)、自臺(tái)灣屏東一酒廠取一克廢棄物，加入10mlDifcoYPDBroth(YPD培養(yǎng)液每升培養(yǎng)基中含有蛋白胨20.0g，酵母提取物10.0g，葡萄糖20.0g;蒸餾水配制，將pH值調(diào)至6.36.7，固態(tài)培養(yǎng)基加入1.5%瓊脂)中以75rpm震蕩培養(yǎng)后，以70'C恒溫水浴30分鐘后馬上降溫到45'C。(2)、再以YPD培養(yǎng)液進(jìn)行10倍梯度稀釋至10"6，將每個(gè)梯度稀釋液培養(yǎng)于37'C溫度培養(yǎng)48小時(shí)，進(jìn)行菌株的初步增菌篩選。(3)、自各稀釋管取10(Vl至YPD平板培養(yǎng)基上，并以L型玻棒涂抹均勻，同樣分別37'C培養(yǎng)48小時(shí)后，待其長出圓形的個(gè)別菌體群，再以隨機(jī)方式挑取12株長得較快、菌體群較大、菌體量較多的菌株移至一新的YPD平板培養(yǎng)基上，并以三步法劃開，重復(fù)純化繼代三次以后，得到的菌株將其命名為Holy097。2、啤酒酵母菌Holy097菌種的特性(1)、形態(tài)特征細(xì)胞甚大、呈圓形或卵圓形，單獨(dú)存在，直徑34^im。(2)、生理特性行化學(xué)異營，在好氧環(huán)境行呼吸作用，也可行兼性厭氧代謝，在中性或微酸環(huán)境生長良好，適合生長溫度在3037'C?？砂l(fā)酵葡萄糖(Glucose)、果糖(Fructose)、麥芽糖(Maltose)與蔗糖(Sucrose),但不可發(fā)酵乳糖。可行出芽生殖，亦可形成孢子而抵抗高熱與干燥環(huán)境。二、枯草芽孢桿菌Xa4517菌液的常規(guī)初期培養(yǎng)方法的具體過程第一步以250ml三角錐瓶裝100ml胰酶大豆培養(yǎng)液作為種瓶來培養(yǎng)枯草芽孢桿菌Xa4517,進(jìn)行種菌的準(zhǔn)備，在37'C恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，以130rpm震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，使菌數(shù)達(dá)到1.0x108CFU/ml以上。第二步將種瓶菌液倒入裝有5公升胰酶大豆培養(yǎng)液的攪拌式發(fā)酵槽中，攪拌速度控制在150卬m，通氣量為0.5v/v.min，溫度保持在37'C恒溫，時(shí)間24小時(shí)，使菌數(shù)達(dá)到1.0xl08CFU/ml以上，酸堿值pH為5.26.5。第三步在種子罐中進(jìn)行發(fā)酵將經(jīng)過5公升攪拌式發(fā)酵槽活化后的枯草芽孢桿菌Xa4517的菌液接種到500L的種子罐中進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵條件如下1-1培養(yǎng)基1-1-1、濃度以糖度計(jì)測量為7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%;1-1-2、或濃度以糖度計(jì)測量為2.5brix的糖蜜，黃豆粉1.6%;1-1-3、或濃度以糖度計(jì)測量為4.5brix的豆?jié){。以實(shí)際操作為例，采用2.5brix的糖蜜，黃豆粉1.6%為種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基。1-2、37。C恒溫發(fā)酵24小時(shí)，攪拌速度控制在150rpm，通氣量0.5v/v.min，以0.5M氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值。1-3、發(fā)酵終點(diǎn)的菌數(shù)達(dá)到1.2xl07CFU/ml以上，酸堿值pH為5.66.5。三、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液的常規(guī)初期培養(yǎng)方法的具體過程第一步以250ml三角錐瓶裝175mlMRS培養(yǎng)液作為種瓶來培養(yǎng)凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416，進(jìn)行種菌的準(zhǔn)備,在37'C恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，以100rpm震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，使菌數(shù)達(dá)到1.0><108CFU/ml以上。第二步將種瓶菌液倒入裝有5公升MRS培養(yǎng)液的攪拌式發(fā)酵槽中，攪拌速度控制在100rpm，通氣量O.lv/v.min，溫度保持在37'C恒溫，時(shí)間24小時(shí)，以0.1M氫氧化鈉饋料控制酸堿值，使菌數(shù)達(dá)到1.0x108CFU/ml以上，酸堿值pH為4.85.2。第三步在種子罐中進(jìn)行發(fā)酵將經(jīng)過5公升攪拌式發(fā)酵槽活化后的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的菌液接種到500L的種子罐中進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵條件如下1-1培養(yǎng)基1-1-1、濃度以糖度計(jì)測量為7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%;1-1-2、或濃度以糖度計(jì)測量為2.5brix的糖蜜，黃豆粉1.6%;1-1-3、或濃度以糖度計(jì)測量為4.5brix的豆?jié){。1-1-4、以實(shí)際操作為例，采用2.5brix的糖蜜，黃豆粉1.6%，為種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基。1-2、37'C恒溫發(fā)酵24小時(shí)，攪拌速度控制在100rpm，通氣量O.lWv.min，以0.5M氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值。1-3、發(fā)酵終點(diǎn)的菌數(shù)達(dá)到1.2xl07CFU/ml以上，酸堿值pH為4.35.8。四、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液的常規(guī)初期培養(yǎng)方法的具體過程第一步以250ml三角錐瓶裝175mlMRS培養(yǎng)液作為種瓶來培養(yǎng)嗜酸性乳酸桿菌Ys14079，進(jìn)行種菌的準(zhǔn)備，在37'C恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，以180卬m震蕩培養(yǎng)48小時(shí)，使菌數(shù)達(dá)到1.0xl08CFU/ml以上。第二步將種瓶菌液倒入裝有5公升MRS培養(yǎng)液的攪拌式發(fā)酵槽中，攪拌速度控制在180rpm，溫度保持在37'C恒溫，時(shí)間24小時(shí)，以0.1M氫氧化鈉饋料控制酸堿值，使菌數(shù)達(dá)到1.0x108CFU/ml以上，酸堿值pH為4.25.2。第三步在種子罐中進(jìn)行發(fā)酵將經(jīng)過5公升攪拌式發(fā)酵槽活化后的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079的菌液接種到500L的種子罐中進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵條件如下1-1培養(yǎng)基1-1-1、濃度以糖度計(jì)測量為7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%;1-1-2、或濃度以糖度計(jì)測量為2.5brix的糖蜜，黃豆粉1.6%;1-1-3、或濃度以糖度計(jì)測量為4.5brix的豆?jié){。1-1-4、以實(shí)際操作為例，采用7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%,為種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基。1-2、37'C恒溫發(fā)酵24小時(shí)，攪拌速度控制在150rpm，以0.5M氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值。1-3、發(fā)酵終點(diǎn)的菌數(shù)達(dá)到1.2x107CFU/ml以上，酸堿值pH為4.25.0。五、啤酒酵母菌Holy097菌液的初期常規(guī)培養(yǎng)方法的具體過程第一步以250ml三角錐瓶裝175mlYPD培養(yǎng)液作為種瓶來培養(yǎng)啤酒酵母菌Holy097，進(jìn)行種菌的準(zhǔn)備，在37。C恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，以100rpm震蕩培養(yǎng)48小時(shí)，使菌數(shù)達(dá)到l.(MO8CFU/ml以上。第二步將種瓶菌液倒入裝有5公升YPD培養(yǎng)液的攪拌式發(fā)酵槽中，攪拌速度控制在100rpm，通氣量0.1v/v.min，溫度保持在37"C恒溫，時(shí)間48小時(shí)，以0.1M氫氧化鈉饋料控制酸堿值，使菌數(shù)達(dá)到1.0x107CFU/ml以上，酸堿值pH為4.56.0。第三步在種子罐中進(jìn)行發(fā)酵將經(jīng)過5公升攪拌式發(fā)酵槽活化后的啤酒酵母菌Holy097的菌液接種到500L的種子罐中進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵條件如下1-1培養(yǎng)基1-1-1、濃度以糖度計(jì)測量為7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%;1-1-2、或濃度以糖度計(jì)測量為2.5brix的糖蜜，黃豆粉0.6%;1-1-3、或濃度以糖度計(jì)測量為4.5brix的豆?jié){。1-14、以實(shí)際操作為例，采用7.0brix的糖蜜，脫脂奶粉0.8%，和維生素B！0.0008%、維生素B20.084%、磷酸氫二鉀0.03%、7倍水合硫酸鎂0.002%、硫酸銅0.004%為種子發(fā)酵罐培養(yǎng)基。1-2、37'C恒溫發(fā)酵24小時(shí)，攪拌速度控制在100rpm，以0.5M氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值。1-3、發(fā)酵終點(diǎn)的菌數(shù)達(dá)到1.0xl07CFU/ml以上，酸堿值pH4.55.5。實(shí)施例l:一種生物活性單一飼料的制備方法本發(fā)明生物活性單一詞料的制備方法，其詳細(xì)歩驟如下a、四種原料液態(tài)生物活性物質(zhì)的制備枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至以糖度計(jì)測量濃度為2.5brix，在100。C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取3500L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌Xa4517菌液(該菌液中枯草芽孢桿菌Xa4517菌數(shù)為^1.0xl0SCFU/ml、酸堿值pH為5.26.5)500L倒入發(fā)酵罐，然后再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為10%的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后，取1000L放入發(fā)酵罐，加入后使脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為2.0%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，在發(fā)酵罐中發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)(發(fā)酵過程中攪拌速度控制在150rpm，通氣量為0.5V/V.min，以O(shè).5mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值)，在發(fā)酵終止時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C即可(發(fā)酵后枯草芽孢桿菌Xa4517菌液中菌數(shù)為^1.2xl(fCFU/ml、酸堿值pH為5.66.5);凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至以糖度計(jì)測量濃度為2.5brix，在100'C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取3500L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液(該菌液中凝結(jié)芽孢桿菌Yg741618菌數(shù)為2l.0xl0SCFU/ml、酸堿值pH為4.66.0)500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為10%的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后取IOOOL放入發(fā)酵罐，加入后使脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為2.0%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)(發(fā)酵過程中攪拌速度控制在100rpm，通氣量為0.1v/v.min，以O(shè).5mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值)，發(fā)酵終止時(shí)加入纖維分解酶，加入量占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.001%，加入酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C即可(發(fā)酵后凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液中菌數(shù)為^1.2xl()7CFU/ml、酸堿值pH為4.35.8);嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至以糖度計(jì)測量濃度為5.0brix，在100'C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取3500L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液(該菌液中嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌數(shù)為^1.0xl08CFU/ml、酸堿值pH為4.65.2)500L倒入發(fā)酵罐，再把己在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為10%的脫脂奶粉和1.2%的無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液，以100°C、15~20分鐘滅菌處理后取IOOOL放入發(fā)酵罐，加入后使脫脂奶粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為2.0%和0.24%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為力'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)(發(fā)酵過程中攪拌速度控制在100rpm,以0.5mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值)，發(fā)酵終止時(shí)加入菠蘿酶和a-半乳糖苷酶，加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.01%和0.05%，加入酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至41(TC即可(發(fā)酵后嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液中菌數(shù)為2l.2xl07CFU/ml、酸堿值pH為4,25.0):啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至以糖度計(jì)測i濃度為5brix,在10(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取3500L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的啤酒酵母菌Holy097菌液(該菌液中啤酒酵母菌Holy097菌數(shù)為2l.0xl07CFU/ml、酸堿值pH為4.56.0)500L倒入發(fā)酵罐，再把己在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為10%的脫脂奶粉和0.004。/c維生素Bh0.42。/。維生素B2、0.15%磷酸氫二鉀、0.01%7倍水合硫酸鎂、0.02%硫酸銅營養(yǎng)源水溶液，以100°C、1520分鐘滅菌處理后取1000L放入發(fā)酵罐，加入后使脫脂奶粉和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為2.0°/0和0.0008%、0.084°/。、0.03%、0.002%、0.004%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)(發(fā)酵過程中攪拌速度控制在75rpm,通氣量為0.1v/v.min，以0.5mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)發(fā)酵過程中的酸堿值)，發(fā)酵終止時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至41(TC即可(發(fā)酵后啤酒酵母菌Holy097菌液中菌數(shù)為^1.0xl()7CFU/ml、酸堿值pH為4.55.5);b、固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)的制備先將固態(tài)底物去皮黃豆粕以蒸氣調(diào)質(zhì)510分鐘，降溫至4045'C，然后將步驟a制備的枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)和嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)混合均勻，混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為30%、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為50%,將調(diào)質(zhì)處理后的固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵，混合時(shí)混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為40%,發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，在固態(tài)發(fā)酵期間每1~3小時(shí)攪拌1015分鐘，發(fā)酵結(jié)束后將其物料在55110'C的溫度下烘干，烘干至發(fā)酵底物水分含量^8%，最后粉碎過2040目篩，得到固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)；c、生物活性單一飼料的制備將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)分別濃縮成干物量為45%的液態(tài)生物活性物質(zhì)，將兩種濃縮后的液態(tài)生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，混合時(shí)干物量為45%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占重量百分含量為40%，將混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)噴灑在步驟b制備的固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)上，所述混合后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的1.0%,噴灑后即得生物活性單一飼料。實(shí)施例2:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為7brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取3700L放入發(fā)酵罐，取800L滅菌處理后的8。/c脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為1.2%，發(fā)酵溫度為40'C,發(fā)酵時(shí)間為18小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為7brix,稀釋的糖蜜滅菌處理后取3700L放入發(fā)酵罐，取800L滅菌處理后的8。/。脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為1.3,發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，木聚糖酶的加入量占步驟b中所采用固態(tài)底物總量的0.05%;20嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為10brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的8%脫脂奶粉和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液300L，加入后脫脂奶粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.5%和0.07%，發(fā)酵溫度為4(TC，發(fā)酵時(shí)間為18小時(shí)，菠蘿酶和a-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.005%和0.01%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為12brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的5%脫脂奶粉和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液300L，加入后脫脂奶粉和維生素B^維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.3%和0.00024%、0.025%、0.009%、0.0006%、0.0012%，發(fā)酵溫度為30。C，發(fā)酵時(shí)間為48小時(shí)；步驟b:固態(tài)底物為黃豆粉、黃豆渣和小麥麩的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20。/。、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為60%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為70%,發(fā)酵溫度為4(TC,發(fā)酵時(shí)間為18小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在IOO"C條件下烘干；步驟c:將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)分別濃縮成干物量為35%的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)，兩種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)混合時(shí)，干物量為35%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為45%,混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的1.5%。實(shí)施例3:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為5brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為8%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，黃豆粉的粒度為全部通過60目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以10(TC、1520分鐘滅菌處理后，取500L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為1.6%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為32'C，發(fā)酵時(shí)間為48小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為5brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后4000L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為8%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，黃豆粉的粒度為全部通過60目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取500L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為1.6%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為37°C,發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，半纖維分解酶的加入量占步驟b中所采用固態(tài)底物總量的0.05%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為2brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的8%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過60目篩分析篩)和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液500L，加入后黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.5%和0.1%，發(fā)酵溫度為37"C，發(fā)酵時(shí)間為32小時(shí)，菠蘿酶和a-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.0005%和0.05%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為8brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的3%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過60目篩分析篩)和維生素B^維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液500L，加入后黃豆粉和維生素Bi、維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.21%和0.00032%、0.034%、0.01%、0.0009%、0.0019%，發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；步驟b中固態(tài)底物為黃豆粉和玉米酒糟的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)5分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為10%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為30。/。、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為60%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為50%,發(fā)酵溫度為39匸，發(fā)酵時(shí)間為36小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在70'C條件下烘干；步驟c:將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)分別濃縮成干物量為25%的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)，兩種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)混合時(shí)，干物量為25%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為50%，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的O.50/o。實(shí)施例4:與實(shí)施例3基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為lbrix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為5%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，黃豆粉的粒度為全部通過60目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以10(TC、1520分鐘滅菌處理后，取300L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為0.3%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為45'C，發(fā)酵時(shí)間為14小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為lbrix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為5%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，黃豆粉的粒度為全部通過60目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取300L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為0.3%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為43'C，發(fā)酵時(shí)間為12小時(shí)，加入的分解酶為木聚醣酶，加入量占步驟b所采用的固態(tài)底物總量的0.02%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為8brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取3800L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的12%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液700L，加入后黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為2.4。/。和0.18"/0，發(fā)酵溫度為37'C,發(fā)酵時(shí)間為72小時(shí)，菠蘿酶和oi-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.001%和0.03%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至濃度為2brix，稀釋的糖蜜滅菌處理后取3800L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的5%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液700L，加入后黃豆粉和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.8%和0.0005%、0.052%、0.015%、0.001%、0.0024%，發(fā)酵溫度為35t:，發(fā)酵時(shí)間為30小時(shí)；步驟b:園態(tài)底物為豌豆粕和啤酒糟的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為10%、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為70°/。，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為40%，發(fā)酵溫度為42°C,發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在6(TC條件下烘干；步驟c:將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)分別濃縮成干物量為30%的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)，兩種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)混合時(shí)，干物量為30%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為50%，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的0.8%。實(shí)施例5:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為4brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3500L放入發(fā)酵罐，取1000L滅菌處理后7%的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為0.8%，發(fā)酵溫度為55"C，發(fā)酵時(shí)間為8小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為4brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3500L放入發(fā)酵罐，取1000L滅菌處理后7%的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為0.8%，發(fā)酵溫度為42"C，發(fā)酵時(shí)間為22小時(shí)，加入的分解酶為甘露聚醣酶，其加入量占步驟b中所采用固態(tài)底物總量的0.005%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為6brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3500L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的9%脫脂奶粉和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液1000L，加入后脫脂奶粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為1.6%和0.2%，發(fā)酵溫度為37"C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，菠蘿酶和a-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.0008%和0.04%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為10brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的7%脫脂奶粉和維生素B^維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液300L，加入后脫脂奶粉和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.5%和0.00024%、0.025%、0.009%、0.0006%、0.0012%,發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；步驟b:固態(tài)底物為蠶豆粕和大米酒糟的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為30%、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為50%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為23%,發(fā)酵溫度為42°C，發(fā)酵時(shí)間為36小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在6(TC條件下烘千；步驟c:將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)分別濃縮成干物量為40%的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)，兩種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)混合時(shí)，干物量為40%的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為45%，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的1.2%。實(shí)施例6:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為7brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，300L滅菌處理后5%的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為0.3%，發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為7brix,稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，300L滅菌處理后5°/。的脫脂奶粉營養(yǎng)源水溶液，加入后脫脂奶粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度為0.3%,發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，纖維分解酶的加入量占步驟e中所采用固態(tài)底物總量的0.001%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為4brix,稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3700L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的8%脫脂奶粉和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液800L，加入后脫脂奶粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為1.2%和0.12%，發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，菠蘿酶和a-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.005%和0.03%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為6brix,稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3700L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的9%脫脂奶粉和維生素B^維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液800L,加入后脫脂奶粉和維生素Bi、維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為1.7%和0.0007%、0.072%、0.024%、0.0014%、0.0032%，發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；步驟b:固態(tài)底物為去皮黃豆粕、黃豆粉和小麥麩的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20M、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為60%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為50%，發(fā)酵溫度為4(TC，發(fā)酵時(shí)間為20小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在8(TC條件下烘干；步驟c:與實(shí)施例一相同。實(shí)施例7:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為lbrix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3800L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為6%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取700L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為1.2%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為lbrix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3800L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為6%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過60目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取700L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為1.2%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為37"C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，酸性蛋白分解酶的加入量占步驟b中所采用固態(tài)底物總量的0.01%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為10brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的10%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液500L，加入后黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為1.P/。和0.15W，發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，菠蘿酶和(x-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.008%和0.01%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為12brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3500L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的4%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液IOOOL，加入后黃豆粉和維生素Bh維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.9%和0.00075%、0.08%、0.03%、0.0018%、0.0038%，發(fā)酵溫度為37。C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；步驟b:固態(tài)底物為黃豆粉、去脂米糠和蠶豆粕的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為20%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為30y。、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為50%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為98%，發(fā)酵溫度為40'C，發(fā)酵時(shí)間為20小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在9(TC條件下烘干；步驟c:與實(shí)施例一相同。實(shí)施例8:與實(shí)施例l基本相同，不同之處在于步驟a中枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為2.5brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，再把巳在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為5%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取500L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為0.7%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為37"C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為2.5brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4000L放入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為5%的黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后，取500L放入發(fā)酵罐，使所述黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度為0.7%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度為37"C,發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，a-半乳糖苷酶的加入量占步驟b中所采用固態(tài)底物總量的0.03%;嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為2brix，稀釋的豆?jié){滅菌處理后取4200L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的8%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和1.2%無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液300L，加入后黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.7%和0.09%,發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)，菠蘿酶和a-半乳糖苷酶加入量分別占步驟b中所述固態(tài)底物總量的0.01°/。和0.01%;啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為2brix,稀釋的豆?jié){滅菌處理后取3500L放入發(fā)酵罐，取滅菌處理后的5%黃豆粉(內(nèi)含濃度為0.001%的菠蘿酵素，粒度為全部通過80目篩分析篩)和維生素Bi、維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅營養(yǎng)源水溶液600L，加入后黃豆粉和維生素B卜維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液的濃度分別為0.5%和0.00045%、0.04%、0.012%、0.008%、0.002%，發(fā)酵溫度為37'C，發(fā)酵時(shí)間為24小時(shí)；步驟b:固態(tài)底物為黃豆粉、去脂米糠和蠶豆粕的混合物，將其固態(tài)底物以蒸氣調(diào)質(zhì)10分鐘，三種液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為10%、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為10%、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為80%，固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合時(shí)，混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物重量的百分含量為60%，發(fā)酵溫度為40'C，發(fā)酵時(shí)間為20小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后物料在9CTC條件下烘干；步驟c:與實(shí)施例一相同。權(quán)利要求1、一種生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟a、四種液態(tài)生物活性物質(zhì)的制備以枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097為原料，將其四種原料經(jīng)常規(guī)方法分別進(jìn)行初期培養(yǎng)，得到四種初期培養(yǎng)的菌液，然后利用四種初期培養(yǎng)的菌液分別進(jìn)行常規(guī)的液態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵結(jié)束后得到四種原料的液態(tài)生物活性物質(zhì)；b、固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)的制備將步驟a制備的枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)和嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)混合均勻，混合時(shí)三種液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量分別為10～20％、10～30％和50～80％，然后將調(diào)質(zhì)處理后的固態(tài)底物與混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合發(fā)酵，其中混合后的液態(tài)生物活性物質(zhì)占固態(tài)底物總量的重量百分比為23～98％，混合發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為37～50℃，發(fā)酵時(shí)間為12～48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后將其物料進(jìn)行干燥、粉碎，得到固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)；c、生物活性物質(zhì)單一飼料的制備將步驟a制備的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)按照常規(guī)方法分別濃縮成干物量為25～45％的液態(tài)生物活性物質(zhì)，將二種濃縮后的液態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，混合時(shí)其中干物量為25～45％的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)所占的重量百分含量為40～50％，混合后將其噴灑在步驟b制備的固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)上，所述兩種干物量為25～45％的液態(tài)生物活性物質(zhì)混合液噴灑量占固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)總量的0.5～1.5％，噴灑后即得產(chǎn)品生物活性單一飼料。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于，步驟a中所述枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法為先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為l7brix,在10(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌Xa4517菌液500L倒入發(fā)酵罐，然后再把已在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或58%的黃豆粉營養(yǎng)源水溶液，以IO(TC、1520分鐘滅菌處理后，取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.31.6%，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為58%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，在發(fā)酵罐中發(fā)酵溫度為3255'C，發(fā)酵時(shí)間為848小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C，得到枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于，步驟a中所述凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法為先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為l7brix，在100。C條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或58%的黃豆粉營養(yǎng)源水溶液，以100'C、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.31.6%，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為58%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為3743°C,發(fā)酵時(shí)間為1248小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)加入分解酶，其加入量占步驟1)中所述固態(tài)底物總量的0.0010.05%，加入分解酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C，得到凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于所述分解酶為酸性蛋白分解酶、菠蘿酶、a-淀粉分解酶、纖維分解酶、半纖維分解酶、a-半乳糖苷酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶中的至少一種。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于，步驟a中所述嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜或豆?jié){以無菌水稀釋至濃度為210brix,在10(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把已在滅菌罐內(nèi)以IOOOL無菌水配制的濃度為810%的脫脂奶粉或812%的黃豆粉和1.2%的無水磷酸二鉀營養(yǎng)源水溶液，所述在豕菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度812%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，將營養(yǎng)源水溶液以IOO'C、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，所述脫脂奶粉或黃豆粉和無水磷酸二鉀相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.52.0%或0.52.4°/。和0.070.24%,綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為3740°C，賓酵時(shí)l丐為1872小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)加入菠蘿酶和cx-半乳糖苷酶，所述菠蘿酶的加入量占步彈b.中所述固態(tài)底物總量的0.00050.01%，所述a-半乳糖苷酶的加入量占步驟b中所述固態(tài)底物萄、量的0.0050.05%,加入酶的同時(shí)，發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至410'C，得到嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于，步驟a中所述啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)的具體制備方法先將糖蜜以無菌水稀釋至度為212brix，在10(TC條件下、滅菌處理1520分鐘后，取35004200L放入發(fā)酵罐，再將經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的啤酒酵母菌Holy097菌液500L倒入發(fā)酵罐，再把己在滅菌罐內(nèi)以1000L無菌水配制的濃度為510%的脫脂奶粉或35%的黃豆粉和0.004%維生素B,、0,42%維生素B2、0.15%磷酸氫二鉀、0.01%7倍水合硫酸鎂、0.02%硫酸銅營養(yǎng)源水溶液，所述在滅菌罐內(nèi)以無菌水配制的濃度為35%的黃豆粉水溶液中含有濃度為0.001%的菠蘿酵素，將營養(yǎng)源水溶液以IO(TC、1520分鐘滅菌處理后取3001000L放入發(fā)酵罐，使所述脫脂奶粉或黃豆粉和維生素B^維生素B2、磷酸氫二鉀、7倍水合硫酸鎂、硫酸銅相對于液態(tài)發(fā)酵溶液其濃度分別為0.32.0%或0.181.0%和0.000240.0008o/o、0.025~0.084%、0.0090.03o/o、0.00060.002%、0.00120.004%，綜合以上營養(yǎng)源制備液態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)發(fā)酵溫度為3037°C，發(fā)酵時(shí)間為1848小時(shí)，發(fā)酵終止時(shí)發(fā)酵罐夾套內(nèi)以冰水循環(huán)將發(fā)酵菌液溫度降至4IO'C，即可得到啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于步驟a中所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌Xa4517菌液中菌數(shù)為2l.0xl0SCFU/ml，酸堿值pH為5.26.5，發(fā)酵后所述枯草芽孢桿菌Xa4517菌液中菌數(shù)為^1.2xl(^CFU/ml，酸堿值pH為5.66.5;所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液中菌數(shù)為^1.0xl08CFU/ml，酸堿值pH為4.66.0，發(fā)酵后凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416菌液中菌數(shù)為^1.2xl(^CFU/m1,酸堿值pH為4.35.8;所述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液中菌數(shù)為^1.0xl0SCFU/ml，酸堿值pH*4.25:2，發(fā)酵后嗜酸性乳酸桿菌Ys14079菌液中菌數(shù)為^1.2xl(^CFU/ml，酸堿值pH為4.25.0;^f述經(jīng)常規(guī)方法初期培養(yǎng)的啤酒酵母菌Holy097菌液中菌數(shù)為2l.0xl07CFU/ml，酸堿值pH為4.56.0,發(fā)酵后啤酒酵母菌Holy097菌液中菌數(shù)為2l.0xl07CFU/ml，酸堿值pH為4.55.5。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于步驟b中所述固態(tài)底物為去皮黃豆粕、黃豆粉、黃豆渣、去脂米糠、蠶豆粕、豌豆粕、棉籽粕、菜籽粕、小麥麩、大麥麩、啤酒糟、玉米酒糟、大米酒糟和玉米粉中的至少一種；所述固態(tài)底物的調(diào)質(zhì)處理方法為以蒸氣調(diào)質(zhì)510分鐘，然后降溫至3745'C;所述步驟b中混合發(fā)酵期間每l3小時(shí)攪拌1015分鐘，發(fā)酵結(jié)束后將其物料在5511(TC的溫度下干燥，干燥至發(fā)酵底物水分含量^8%;所述物料干燥粉碎后過2040目篩。9、根據(jù)權(quán)利要求2、3、5和6中任一項(xiàng)所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于所述黃豆粉的粒度為全部通過6080目篩分析篩。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性單一飼料的制備方法，其特征在于所述生物活性單一飼料中枯草穿孢桿菌Xa4517的含量為1.0xl095.0xlOuCFU/kg，所述凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416的含量為1.0xl075.0xl01()CFU/kg，所述嗜酸性乳酸桿菌Ys14079的含量為1.0><1051.0xl07CFU/kg，所述啤酒酵母菌Holy097的含量為1.0xlo91.0xlO^CFU/kg。全文摘要本發(fā)明公開了一種生物活性單一飼料的制備方法，該制備方法是以枯草芽孢桿菌Xa4517、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416、嗜酸性乳酸桿菌Ys14079和啤酒酵母菌Holy097為基本原料，先將四種原料分別制備成液態(tài)生物活性物質(zhì)，然后將制備的枯草芽孢桿菌Xa4517液態(tài)生物活性物質(zhì)、凝結(jié)芽孢桿菌Yg7416液態(tài)生物活性物質(zhì)和嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，混合后與固態(tài)底物進(jìn)行發(fā)酵，制備成固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)，然后將嗜酸性乳酸桿菌Ys14079液態(tài)生物活性物質(zhì)和啤酒酵母菌Holy097液態(tài)生物活性物質(zhì)濃縮后混合，混合后噴灑在制備的固態(tài)發(fā)酵生物活性物質(zhì)上即可得到本發(fā)明產(chǎn)品。本發(fā)明產(chǎn)品能夠大幅度提升飼料營養(yǎng)轉(zhuǎn)化效率、提升免疫力，降低使用動(dòng)物性蛋白質(zhì)原料所相對感染病原菌的風(fēng)險(xiǎn)，增進(jìn)養(yǎng)殖農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收益。文檔編號(hào)C12P1/02GK101669581SQ20091017232公開日2010年3月17日申請日期2009年9月29日優(yōu)先權(quán)日2009年9月29日公開號(hào)200910172324.發(fā)明者曹君平申請人:曹君平;周冬根被以下專利引用(1),