專利名稱：鐵脂質體的藥物應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及鐵脂質體的藥物應用，特別是其用于制備治療貧血藥物中的應用。
背景技術：
機體對鐵的吸收主要包括小腸吸收細胞對食物中無機鐵和血紅素鐵等有機鐵 的吸收，近年來對無機鐵在小腸的吸收機制有了較清楚的認識，對血紅素鐵的吸收過程 也有了初步了解。小腸對無機鐵的吸收機理如下食物中的鐵首先被十二指腸細胞色 素b (duodenal cytochrome b， Dcytb)還原為二價鐵，在二價金屬離子轉運體(divalent metal transporter, DMT1)的作用下，小腸粘膜吸收細胞將鐵攝入到細胞內， 一部分鐵可 與鐵蛋白(ferritin)相結合儲存在細胞內， 一部分鐵在膜鐵轉運蛋白1 (ferroportinl， FPN1)轉運下將鐵轉運出小腸細胞，在膜鐵轉運輔助蛋白(h印haestin， HP)的作用下氧化 為三價，進而與轉鐵蛋白(transferrin, Tf)結合后在血液中運輸，供應機體對鐵的需求。 由此可知，如果上述幾種轉運鐵的分子功能障礙，就會造成小腸對鐵的吸收不足，長期以往 出現(xiàn)缺鐵性貧血癥狀，但這種缺鐵性貧血并不是由于食物中缺鐵，而是由于小腸對鐵吸收 障礙造成的。因此常規(guī)補鐵藥品(尤其是無機鐵類)對于上述類型的貧血病人沒有理想的 治療效果。近年來對于血紅素等有機鐵的轉運有了一些初步認識，但仍沒有完全清楚。目 前認為血紅素鐵可能首先在血紅素轉運蛋白(heme carrier protein 1， HCP1)的作用下 被小腸細胞所吸收，吸收后的血紅素鐵如何運出細胞進入血液與轉鐵蛋白結合或以何種形 式在血液中運輸仍不清楚。但推測可能進入小腸細胞的血紅素鐵一部分被分解，在FPN1和 HP的作用下運出細胞，然后與Tf相結合并在血液中運輸。 一部分可能直接以血紅素鐵的 形式釋放到血液。因此，F(xiàn)PN1、HP和HCP1等鐵吸收蛋白分子的機能障礙也會引起鐵吸收不 足，引起貧血的發(fā)生，因此即使補充血紅素鐵等有機鐵也不能很好的緩解貧血癥狀。綜上所 述，目前缺乏針對小腸粘膜細胞鐵轉運蛋白分子功能紊亂所致的缺鐵性貧血的有效治療藥 物，對于不明原因的頑固性缺鐵性貧血的治療也沒有理性的治療藥物。如何開發(fā)一種新的 補鐵制劑，使之不主要依賴小腸鐵轉運蛋白分子便能夠被吸收的藥物，是有效治療該類疾 病的關鍵。慢性病引起的貧血是僅次于缺鐵性貧血的第二大多發(fā)性貧血，多發(fā)生在有嚴重 或慢性免疫系統(tǒng)疾病的患者中，又稱之為炎癥性貧血。根據(jù)最新對該病發(fā)病機理的認識，認 為它是造成小腸鐵轉運蛋白分子功能紊亂，機體鐵吸收障礙導致貧血的典型案例。其致病 機理是炎癥引起肝臟鐵調素(h印cidin)表達增高，進而鐵調素與小腸粘膜細胞上的受體 FPNl相結合，引起其內吞降解，使之分布減少，造成小腸細胞內的鐵不能釋放到血液中，引 起鐵缺乏和貧血。慢性病貧血已經成為現(xiàn)代醫(yī)學治療的難題，目前常用的治療方法有輸血、 EP0治療及服用補鐵劑，前兩種方法有很大的適用局限性和危險性，而使用常規(guī)的補鐵試劑 吸收率很低根本無法達到理想的治療效果。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種鐵脂質體用于制備治療貧血藥物中的應用。
2008年2月，本申請人申請了發(fā)明專利"補鐵劑脂質體鐵及其制備方法"，申請 號200810054581. 1，申請日2008年2月29日；和"補鐵劑鐵脂質體及其制備方法"，申 請?zhí)?00810054580. 7，申請日2008年2月29日。公開了兩種用于制備鐵脂質體的方
法，鐵脂質體的組成為血紅素鐵和/或無機鐵膽固醇卵磷脂=(o. i 200) : (i io) : (io ioo)。在上述發(fā)明的基礎上，本申請進一步研究了鐵脂質體用于制備治療貧 血藥物中的應用。 本發(fā)明以炎癥性貧血為模型，針對目前常規(guī)補鐵藥物沒有理想補鐵效果的現(xiàn)象，
針對由于炎癥性、癌癥等已知原因和未知原因造成小腸鐵轉運蛋白分子功能障礙引起的貧 血治療，將鐵脂質體用于口服的各種片劑、膠囊、滴丸、口服液、添加食品等作為治療貧血的 藥物。 本發(fā)明的鐵脂質體用于制備治療貧血藥物中的應用通過以下實驗所證實。實驗方 法如下 1、快速建立大鼠炎癥性貧血模型 取12只SD大鼠，正常光照，自然飲水和飲食。48h后，尾尖取血法測血紅蛋白水 平，之后采用眼眶后靜脈叢取血法放血lml/只，放血后腹腔注射250 ii g/kg/只的LPS生理 鹽水溶液。24h后，尾尖取血法測血紅蛋白水平，檢測其是否貧血。測定貧血后將大鼠隨機 分為2組，分別為生理鹽水組和LPS組，LPS組每天腹腔注射250 ii g/kg LPS的生理鹽水溶 液，持續(xù)注射14天；對照組每天腹腔注射等量的生理鹽水。14天后尾尖取血法檢測各組血 紅蛋白水平。放血前后大鼠HGB指標下降了 25%，平均在118g/L。這說明通過內眥放血可 以快速的造成大鼠缺鐵性貧血(見附圖l)。之后經過14天的連續(xù)注射，LPS組的HGB水平 并沒有明顯的提高，而生理鹽水組的HGB水平基本已經回復到放血前水平(見附圖2)。這 說明炎癥影響了小腸內鐵的吸收和機體內鐵釋放，進而導致機體可利用的鐵缺乏，因此維 持了大鼠的貧血狀態(tài)。通過對貧血模型建立后血清鐵、總鐵結合力、轉鐵蛋白飽和度、肝臟 組織鐵的檢測(見附圖3)，結果說明本模型可以成功快速的模擬炎癥性貧血。
2、鐵脂質體補鐵效果實驗 另建立貧血模型的大鼠分為6組，每組6只，分別用磷酸緩沖液(PBS)，空脂質體 (LIP)、血紅素鐵PBS溶液(HEME-PBS)，血紅素鐵脂質體(HEME-LIP)，檸檬酸鐵PBS溶液 (FAC-PBS)，檸檬酸鐵脂質體(FAC-LIP)進行灌胃。
(1)大鼠血常規(guī)指標的檢驗結果 經過14天的灌胃處理，我們發(fā)現(xiàn)FAC-LIP組、HEME-LIP組的HGB及HCT水平相對 于對照組及未經脂質體包封的HEME-PBS及檸檬酸鐵組FAC-PBS均有顯著的提高(見附圖 4、附圖5)，這說明鐵質脂體能夠有效的提高炎癥性貧血情況下的血紅蛋白及血細胞壓積的 水平。 (2)血清鐵、轉鐵蛋白、總鐵結合能力的檢驗結果 血清鐵反應機體中可利用的鐵量，血清鐵含量越高，則機體中可利用的鐵越多。而 總鐵結合力反應機體中轉鐵蛋白水平的高低。兩者之比為轉鐵蛋白飽和度，在總鐵結合力 一定的情況下，轉鐵蛋白飽和度隨血清鐵變化而變化。經過14天的灌胃處理，我們發(fā)現(xiàn) FAC-LIP組、HEME-LIP組的血清鐵水平及轉鐵蛋白飽和度水平相對于對照組及未經脂質體 包封的血紅素鐵及檸檬酸鐵組均有顯著的提高(見附圖6、附圖8)，而總鐵結合力水平卻無明顯變化(見附圖7)。這說明鐵質脂體能夠有效的提高炎癥性貧血模型中血清中的可利用
鐵量，而對轉鐵蛋白的量并無明顯的影響。
(3)肝臟組織鐵水平的檢驗 組織鐵可以直接的表示所測組織的鐵含量。肝臟是主要的儲鐵器官之一。機體缺 鐵而肝臟的儲存鐵卻增加是一種不好的現(xiàn)象。經過14天的灌胃處理，我們發(fā)現(xiàn)除FAC-PBS 組外其余各組的組織鐵水平與對照組相比均無顯著的差異(見附圖9)。炎癥狀態(tài)下機體雖 然無法大量的攝取外源鐵，但并不是完全抑制，仍有部分鐵能夠被攝取進機體內，結合上面 所測血清鐵，轉鐵蛋白飽和度的結果，我們可以看出雖然未經脂質體包封的檸檬酸鐵(FAC) 也有部分能夠進入機體中，但是并不能進入循環(huán)系統(tǒng)成為可利用的鐵，而是大量的沉積到 肝臟，進一步加重了肝臟的鐵沉積。而經脂質體包封的檸檬酸鐵和血紅素鐵則大部分進入 到循環(huán)系統(tǒng)中，參與血紅蛋白的合成，而不會加劇肝臟的鐵沉積。這些都可以說明鐵質脂體 能夠更好的補充機體中可利用的鐵。
(4)鐵脂質體毒性的初步檢驗 SOD是機體防御系統(tǒng)的酶促系統(tǒng)的重要組成部分，它不僅指示了機體脂質過氧化 反應的強弱，同時也反映機體抗氧化能力的強弱以及健康程度。是藥物毒性試驗的重要指 標。經過4周的HEME-LIP和FAC-LIP灌胃處理，測定其S0D水平，發(fā)現(xiàn)S0D水平無明顯變 化(見附圖10)。我們可以初步斷定鐵脂質體在連續(xù)服用4周的情況下對機體并無損害作 用。 本發(fā)明取得的積極效果是本發(fā)明使用鐵脂質體治療炎癥性貧血的效果比以往的 鐵制劑有著明顯的提高，經過14天的灌胃處理，在反應貧血的重要指標HGB及HCT水平上， FAC-LIP組、HEME-LIP組的治療效果明顯優(yōu)于對照組及未經脂質體包封的血紅素鐵及檸檬 酸鐵組。這說明鐵質脂體能夠有效的提高炎癥性貧血模型中血清中的可利用鐵量，血清鐵 含量明顯提高，促進血紅蛋白合成迅速改善動物的貧血癥狀也有顯著提高。同時，鐵脂質體 處理后不會加劇肝臟內的鐵沉積，對機體無損害作用，能夠有效地補充機體可利用鐵。


各圖分別給出的是
圖1 :放血前后大鼠HGB水平的變化。圖2:貧血模型穩(wěn)定性的檢驗。圖3:快速炎癥性貧血模型的檢驗，其中圖3A:建立貧血模型后血清鐵的變化；圖3B:建立貧血模型后轉鐵蛋白飽和度的變化圖3C:建立貧血模型后總鐵結合力的變化；圖3D:建立貧血模型后肝臟組織鐵的變化。圖4:灌胃后大鼠HGB水平的變化。圖5:灌胃后大鼠HCT水平的變化。圖6 :灌胃后大鼠血清鐵水平的變化。圖7:灌胃后總鐵結合力水平的變化。圖8 :灌胃后轉鐵蛋白飽和度的變化。
圖9 :灌胃后肝臟組織鐵的變化。
圖10 :灌胃后SOD水平的影響。
具體實施例方式
本實驗利用鐵脂質體口服液對慢性炎癥大鼠的貧血進行治療，作為實施例說明本
發(fā)明。包括使用方法和取得的效果。 — 、大鼠炎癥性貧血模型的快速建立及檢驗 12只SD大鼠，正常光照，自然飲水和飲食。48h后，尾尖取血法測血紅蛋白水平， 之后采用眼眶后靜脈叢取血法放血1ml/只，放血后腹腔注射250 ii g/kg/只的LPS生理鹽 水溶液。24h后，尾尖取血法測血紅蛋白水平，檢測其是否貧血。測定貧血后將大鼠隨機分 為2組，每組6只，分別為生理鹽水組和LPS組，LPS組每天腹腔注射250 y g/kg LPS的生 理鹽水溶液，持續(xù)注射14天；對照組每天腹腔注射等量的生理鹽水。14天后尾尖取血法檢 測各組血紅蛋白水平。 二、鐵脂質體補鐵效果和毒性的檢驗 36只SD大鼠，正常光照，自然飲水和飲食。48h后，建立炎癥性貧血模型，待模型 建成后，將其隨機分為6組，每組6只。所有組別在灌胃期間每天腹腔注射LPS(250y g/ kg/只)。6組分別采用口服液形式進行灌胃，成分分別為PBS緩沖液對照組(PBS組)、 空白脂質體+PBS對照組(LIP組)、檸檬酸鐵PBS溶液(FAC-PBS組)、檸檬酸鐵脂質體 +PBS (FAC-LIP組)、血紅素鐵PBS溶液(HEME-PBS組)、血紅素鐵脂質體+PBS (HEME-LIP 組)。其中FAC-PBS組、FAC-LIP組、HEME-PBS組、HEME-LIP組每天口服灌胃相應的鐵劑， 灌胃劑量為10mg/100g/只。連續(xù)灌胃14天后取材，分別檢測大鼠的血紅蛋白數(shù)、血細胞壓 積、血清鐵、總鐵結合力、轉鐵蛋白飽和度、肝臟組織鐵水平，SOD水平變化。
因動物服用鐵脂質體僅能局限于液體，因此，在人類進行口服時，鐵脂質體可設計 成片劑、膠囊、滴丸和食品添加劑等多種形式。其中每日服用量相當于鐵10-200mg，除鐵脂 質體為其主要成分外，其他成分和具體制備工藝同常規(guī)制劑的制備。
權利要求
鐵脂質體的藥物應用，其特征是鐵脂質體用于制備治療貧血藥物中的應用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的鐵脂質體的藥物應用，其特征是用于制備口服治療或預防已知機理如炎癥、慢性炎癥、癌癥等和未知機理導致貧血的藥物。
3. 根據(jù)權利要求1所述的鐵脂質體的藥物應用，其特征是制備成含有鐵脂質體的片劑、膠囊、滴丸、口服液、添加食品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鐵脂質體的藥物應用。以慢性炎癥動物為模型，提出一種治療因小腸鐵吸收相關蛋白分子機能障礙造成貧血的以鐵脂質體為有效成份的全新藥物。本發(fā)明以炎癥性貧血大鼠為模型，采用口服灌胃方法，比較了鐵質脂體，與未經脂質體包封的鐵劑對該類貧血的治療效果，鐵脂質體在短時間內能使機體血紅蛋白、血細胞壓積、血清鐵、轉鐵蛋白飽和度水平顯著的提高，對于炎癥性貧血能夠起到很好的治療效果并不會對機體健康造成損害。明顯優(yōu)于現(xiàn)有的補鐵制劑。本發(fā)明可用于多種已知或未知原因造成小腸鐵吸收蛋白分子機能障礙所造成的貧血的治療。制備成口服含有鐵脂質體的各種片劑、膠囊、滴丸、口服液、添加食品。
文檔編號A23L1/30GK101708184SQ20091017530
公開日2010年5月19日 申請日期2009年12月11日 優(yōu)先權日2009年12月11日
發(fā)明者常彥忠, 段相林, 王惠杰, 葛蘭 申請人:河北師范大學