專利名稱：一種靈芝多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及真菌發(fā)酵領(lǐng)域。由于食用菌等微生物是在液體培養(yǎng)液里生長發(fā)育 的，因此深層培養(yǎng)又名沉沒培養(yǎng)或液體發(fā)酵。與傳統(tǒng)的農(nóng)業(yè)法栽培真菌實(shí)體的方法不 同，發(fā)酵法生產(chǎn)是在大型發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行，可通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度和時(shí)間等， 在短時(shí)間內(nèi)得到大量的真菌菌絲體。
背景技術(shù)：
食用真菌的深層發(fā)酵是在抗生素發(fā)酵技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。1948年，美國的 漢姆非特首先提出了用深層法來培養(yǎng)蘑菇菌絲體。1948-1卯4年漢姆非特和他的同事們 選出了三株適合深層培養(yǎng)的蘑菇菌株。1953年，美國的布洛克博士用廢柑汁深層培養(yǎng)了 野生蘑菇。1958年，沙克斯第一個(gè)在發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)出了羊肚菌菌絲球，并作了 25000加 侖規(guī)模的生產(chǎn)試驗(yàn)。從此食用菌的培植開始從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)跨進(jìn)了工業(yè)生產(chǎn)的領(lǐng)域。我國從 60年代末開始大規(guī)模采用深層發(fā)酵法生產(chǎn)食用或藥用菌，主要用在醫(yī)藥工業(yè)上。近20年 來，隨著這方面技術(shù)的日益成熟，已逐漸開始用來生產(chǎn)功能性食品。
目前，國內(nèi)外對液態(tài)培養(yǎng)靈芝菌絲體都有文獻(xiàn)報(bào)道。Tang Yajie[3]等人對碳源 影響靈芝菌絲體發(fā)酵產(chǎn)量進(jìn)行了研究，他們研究發(fā)現(xiàn)通過分批補(bǔ)料培養(yǎng)可以獲得高產(chǎn)量 的多糖和靈芝酸，他們的研究證明了碳源和糖的初始濃度對靈芝酸和多糖產(chǎn)量的影響較 大，另外蔗糖可以作為碳源用于胞外多糖的生產(chǎn)，但是蔗糖對靈芝菌絲體的生長不利， 乳糖也可以作為碳源用于靈芝菌絲體生長，而且乳糖對靈芝菌絲體的生長沒有影響，靈 芝酸和胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量也較高；當(dāng)乳糖的初始濃度超過35g/L時(shí)，靈芝酸的產(chǎn)量就會(huì)下 降，但當(dāng)乳糖的殘存量在10-5g/L時(shí)，進(jìn)行脈沖補(bǔ)給乳糖可以顯著提高靈芝酸的產(chǎn)量； 在發(fā)酵過程中，將溶解氧控制在20-35%之間，可以得到最高的靈芝菌絲體產(chǎn)量；攪拌 培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)得到的靈芝菌絲體、胞內(nèi)外多糖以及靈芝酸的量是不一樣的。
隨著靈芝液體深層發(fā)酵技術(shù)的發(fā)展，用大型發(fā)酵罐和廉價(jià)的培養(yǎng)基進(jìn)行靈芝菌 絲體的發(fā)酵法生產(chǎn)可大大降低靈芝的生產(chǎn)成本，用發(fā)酵法培養(yǎng)獲得的產(chǎn)品生產(chǎn)多種靈芝 保健食品和藥品，有望使靈芝成為大眾的日常保健品。發(fā)明內(nèi)容
本專利將靈芝菌種進(jìn)行種子培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)及發(fā)酵罐培養(yǎng)后，取發(fā)酵液在高速 離心，發(fā)酵液離心后所得濾液進(jìn)濾膜過濾，濃縮后，加入無水乙醇，4°C過夜沉淀，高速 離心醇沉液，收集沉淀即為靈芝多糖。
具體實(shí)施方式
1、種子培養(yǎng)
液體種子培養(yǎng)方法將斜面菌種分割成蠶豆粒大小的小塊接種2-3塊到液體種 子培養(yǎng)基中，250mL三角瓶裝液量50mL，置于旋轉(zhuǎn)式搖床上，160r/min、30°C培養(yǎng)3_4d3
2、搖瓶培養(yǎng)
培養(yǎng)好的種子液以接種量10^-15% (ν/ν)接種于500mL搖瓶，裝液量150mL， 160r/min,發(fā)酵時(shí)間5d、溫度30°C及初始pH6.0。通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，最大多糖含量培養(yǎng)基 組成為葡萄糖 47.4g/L，KH2P043.76g/L,蛋白胨 4.39g/L。
3、5L發(fā)酵罐培養(yǎng)
裝料系數(shù)為0.7，接種量為10%，發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度30°C和初始pH6.0，通氣量和 攪拌轉(zhuǎn)速根據(jù)需要確定。
4、獲取靈芝多糖
取發(fā)酵液在4 °C以lOOOOr/min高速離心lOmin，發(fā)酵液離心后所得濾液進(jìn) 0.45 μ m濾膜過濾，濃縮后，加入3倍體積無水乙醇，劇烈攪拌，4°C過夜沉淀，高速離 心醇沉液，收集沉淀，即為靈芝多糖。
權(quán)利要求
1.液體種子培養(yǎng)方法將斜面菌種分割成蠶豆粒大小的小塊接種2-3塊到液體種子 培養(yǎng)基中，250mL三角瓶裝液量50mL，置于旋轉(zhuǎn)式搖床上，160r/min、30°C培養(yǎng)3_4d備用。
2.搖瓶培養(yǎng)方法培養(yǎng)好的種子液以接種量10%-15% (ν/ν)接種于500mL搖瓶， 裝液量150mL，160r/min。發(fā)酵時(shí)間5d、溫度30°C及初始pH6.0。通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，最大 多糖含量培養(yǎng)基組成為葡萄糖47.4g/L，KH2P043.76g/L,蛋白胨4.39g/L。
3.獲取靈芝多糖取發(fā)酵液在4°C以lOOOOr/min高速離心lOmin，發(fā)酵液離心后所得 濾液進(jìn)0.45 μ m濾膜過濾，濃縮后，加入3倍體積無水乙醇，劇烈攪拌，4°C過夜沉淀， 高速離心醇沉液，收集沉淀，即為靈芝多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及真菌發(fā)酵領(lǐng)域。由于食用菌等微生物是在液體培養(yǎng)液里生長發(fā)育的，因此深層培養(yǎng)又名沉沒培養(yǎng)或液體發(fā)酵。發(fā)酵法生產(chǎn)是在大型發(fā)酵罐內(nèi)進(jìn)行，可通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度和時(shí)間等，在短時(shí)間內(nèi)得到大量的真菌菌絲體。本發(fā)明將靈芝菌種進(jìn)行種子培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)及發(fā)酵罐培養(yǎng)后，取發(fā)酵液在高速離心，發(fā)酵液離心后所得濾液進(jìn)濾膜過濾，濃縮后，加入無水乙醇，4℃過夜沉淀，高速離心醇沉液，收集沉淀即為靈芝多糖。
文檔編號C12R1/645GK102021212SQ20091017688
公開日2011年4月20日 申請日期2009年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月23日
發(fā)明者姬中偉, 毛健 申請人:江南大學(xué)