專利名稱：一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于發(fā)酵床養(yǎng)豬的高效復(fù)合菌劑，還涉及這種復(fù)合菌劑的制備方 法、用途，屬于飼料添加劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著我國(guó)規(guī)?；?、集約化養(yǎng)豬業(yè)的迅猛發(fā)展，生產(chǎn)效率得到了極大提高， 而傳統(tǒng)水泥地面飼養(yǎng)模式也產(chǎn)生了一些弊端，一是豬糞集中排放，需要大面積的糞場(chǎng)和沖 刷用水，浪費(fèi)資源和勞力，并造成養(yǎng)殖環(huán)境和周邊環(huán)境的嚴(yán)重污染，我國(guó)每年畜禽糞便產(chǎn)生 量已達(dá)19億噸，超過(guò)了工業(yè)固體廢棄物排放量的2倍多。二是抗生素濫用造成的毒副作 用、藥殘和細(xì)菌抗藥性以及畜產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題；因此，養(yǎng)豬生產(chǎn)必須尋求能達(dá)到降低環(huán)境 污染.提高豬肉食品安全等要求的全新生豬養(yǎng)殖生產(chǎn)方式。發(fā)酵床式生態(tài)養(yǎng)豬模式在某種 程度上滿足了這些要求。發(fā)酵床式生態(tài)養(yǎng)豬模式是利用全新的自然農(nóng)業(yè)理念，結(jié)合現(xiàn)代微生物發(fā)酵處理技 術(shù)提出的一種環(huán)保、安全、有效的生態(tài)養(yǎng)豬法。發(fā)酵床式生態(tài)養(yǎng)殖模式的原理是利用發(fā)酵床菌種，按一定比例混合秸稈、鋸末屑、 稻殼粉等墊料進(jìn)行微生物發(fā)酵繁殖形成一個(gè)微生態(tài)發(fā)酵床，再利用生豬的拱翻習(xí)性，使豬 糞、尿和墊料充分混合，微生物以尚未消化的豬糞為營(yíng)養(yǎng)繁殖，使豬糞、尿中的有機(jī)物質(zhì)得 到充分的分解和轉(zhuǎn)化，臭味消失。而同時(shí)繁殖生長(zhǎng)的大量微生物又提供了營(yíng)養(yǎng)和菌體蛋白 質(zhì)為豬食用，從而使發(fā)酵床成微生態(tài)環(huán)境，因此說(shuō)，發(fā)酵床養(yǎng)豬是一種無(wú)污染、無(wú)排放的、無(wú) 臭氣的新型環(huán)保生態(tài)養(yǎng)豬技術(shù)。目前，我國(guó)處于發(fā)酵床推廣應(yīng)用興起階段，相對(duì)養(yǎng)殖市場(chǎng)的大量需求，專業(yè)高效的 發(fā)酵床用產(chǎn)品、技術(shù)顯得很匱乏，為追求利潤(rùn)，市場(chǎng)上很多發(fā)酵床產(chǎn)品、技術(shù)良莠不齊，部分 廠家直接采集土著菌，經(jīng)簡(jiǎn)單處理后包裝銷售，產(chǎn)品質(zhì)量和效果無(wú)法保證。有個(gè)別單位推出 發(fā)酵床養(yǎng)豬用復(fù)合微生態(tài)制劑，但存在的問(wèn)題是生產(chǎn)工藝過(guò)于簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量、效果一般， 制備發(fā)酵床墊料方法，仍需要進(jìn)行墊料提前發(fā)酵，墊料厚度須為80-100cm，操作過(guò)程復(fù)雜， 浪費(fèi)人力、物力。這些都限制了發(fā)酵床的廣泛推廣與應(yīng)用。針對(duì)上述存在的問(wèn)題，本發(fā)明提出的解決方案是首先根據(jù)豬糞分解原理、微生態(tài) 平衡原理選擇性能優(yōu)良的有益菌種，即能高產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、抗菌素、菌體蛋白 的菌種組合，并且菌種之間互生互利，互不拮抗；然后采用深層液體混合發(fā)酵工藝制成高生 物活性的復(fù)合菌劑；利用本發(fā)明的復(fù)合菌劑制備發(fā)酵床，墊料不用提前發(fā)酵，墊料厚度可 以降低至50cm。因此本發(fā)明解決了分解糞便效率低；制備發(fā)酵床墊料需求量大，厚度須為 SO-IOOcm;且墊料需要提前發(fā)酵、制備過(guò)程復(fù)雜且勞動(dòng)量大的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、康寧木霉、熱帶假絲酵 母共5株益生菌及其代謝產(chǎn)物組成的高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑，其特征在于，枯草芽孢桿菌CGMCC1. 210產(chǎn)α -淀粉酶活力很強(qiáng)，枯草芽孢桿菌CGMCC1. 769產(chǎn)蛋白酶活力很高，產(chǎn)蛋白 酶1200U/mL，康寧木霉CGMCC3. 4290產(chǎn)纖維素酶活力很高，植物乳桿菌CICC6073產(chǎn)乳酸、抗 菌素高，熱帶假絲酵母CGMCC2. 587是良好的菌體蛋白，菌體蛋白質(zhì)含量高達(dá)55%。本發(fā)明的另一目的是提供了一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑的制備方法，為利用5株菌 種之間互生互利，互不拮抗的原理采用深層液體混合發(fā)酵工藝制成高活性復(fù)合菌劑。首先 接種植物乳桿菌30-37°C液體深層發(fā)酵12-20h，再分別接種熱帶假絲酵母菌和康寧木霉 25-30°C混合發(fā)酵12h-24h后，再接種枯草芽孢桿菌35-37°C液體深層混合發(fā)酵12_20h，使 發(fā)酵液活菌數(shù)分別達(dá)到1-2X 109cfu/ml、5-8X 108cfu/ml、3-5X 108cfu/ml、3-5X IO9Cfu/ ml 2-5X109cfu/ml，終止發(fā)酵，分裝密封即可得到高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑。本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供了一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑的用途，即制備發(fā)酵床墊 料的方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的1、優(yōu)良菌種的選擇豬糞(干物質(zhì)含量)中有機(jī)物80. 1%，易分解性有機(jī)碳27.3%，相脂肪15.7%，半 纖維素3.5%，纖維素9. 0 %，半固體部分30. 8 %，木質(zhì)素17.6%，含氮量3.61%。因此應(yīng)選 擇能分泌淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶且活力高的能夠有效分解糞便中有機(jī)物的有益菌種；其 次選擇具有抑菌功能的益生菌，能夠有效抑制糞便、墊料中的致病菌。因此本發(fā)明選擇的優(yōu)良菌種具體如下枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)CGMCC1. 769 中國(guó)普通微生物菌種保藏管理 中心。單個(gè)細(xì)胞0.7 0.8X2 3微米，無(wú)莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽(yáng)性菌，芽孢 0. 6 0. 9X 1. 0 1. 5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，常形成皺醭。需氧菌。可 利用蛋白質(zhì)、多種糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。特別指出的是本發(fā)明的選擇的枯草芽孢 桿菌蛋白酶活性很高，產(chǎn)蛋白酶1200U/mL?？莶菅挎邨U菌(Bacillus Subtilis)CGMCC1. 210 中國(guó)普通微生物菌種保藏管理 中心。產(chǎn)α-淀粉酶活力很強(qiáng)。康寧木霉(Trichoderma koningii)CGMCC3. 4290 中國(guó)普通微生物菌種保藏管理 中心。菌絲有隔膜，蔓延生長(zhǎng)，廣鋪于固體培養(yǎng)基上，菌外觀為淺綠，黃綠或綠色，反面無(wú)色， 分生孢子。梗為菌絲的短側(cè)枝，其上對(duì)生或互生分枝，分枝上又可繼續(xù)分枝，形成2級(jí)、3級(jí) 分枝，分枝末端即為瓶狀梗。分生孢子由小梗相繼生出，靠黏液把它們聚成球形或近球形的 孢子頭，分生孢子卵形成橢圓形，壁光滑。單個(gè)孢子近無(wú)色，形成堆狀為綠色。此菌有很強(qiáng) 的纖維素酶及淀粉酶等，特別指出的是本發(fā)明選擇的康寧木霉產(chǎn)纖維素酶活性很高。熱帶假絲酵母(Candida tropicalis) CGMCC2. 587 中國(guó)普通微生物菌種保藏管理 中心。熱帶假絲酵母是最常見(jiàn)的假絲酵母。細(xì)胞呈球形或卵球。在麥芽汁瓊脂上菌落為白 色到奶油色，無(wú)光澤或稍有光澤。軟而平滑或部分有皺紋。培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)，菌落變硬。用農(nóng) 副產(chǎn)品和工業(yè)廢棄物也可培養(yǎng)熱帶假絲酵母，既擴(kuò)大了飼料來(lái)源，又減少了環(huán)境污染。特別 指出，本發(fā)明的熱帶假絲酵母含蛋白質(zhì)55 %，是優(yōu)質(zhì)飼料菌體蛋白。植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)CICC6073 中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中 心。外觀為桿狀直線型，兩端以圓弧形收尾。通常寬為0. 9 1. 2mm ；長(zhǎng)為3. 0 8. Omm ；以單個(gè)，兩兩成對(duì)或短鏈形式排列存在；兼性厭氧菌，產(chǎn)乳酸，產(chǎn)抗菌素，能夠有效抑制大腸桿 菌、沙門(mén)氏菌等致病菌。2、高效復(fù)合菌劑的制備2.1、斜面菌種活化取安瓿管菌種，分別無(wú)菌操作接種于相應(yīng)的試管斜面培養(yǎng)基中，植物乳桿菌 30-37°C恒溫培養(yǎng)48-72h ；康寧木霉、熱帶假絲酵母菌25_3(TC恒溫培養(yǎng)48_72h ；芽孢桿菌 35-37°C恒溫培養(yǎng)24-36h ；制成試管斜面菌種，4°C冰箱保藏備用。2. 2、種子液的制備(1)植物乳桿菌種子液的制備取冰箱保減斜面菌種，無(wú)菌操作接種于裝有 150-200ml的MRS培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速100_150rpm，30_37°C恒溫培養(yǎng)20_30h。(2)熱帶假絲酵母、康寧木霉菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操 作接種于裝有100-200ml的麥芽汁培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速100_150rpm，25_30°C恒 溫培養(yǎng)24-36h。(3)枯草芽孢桿菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操作接種于裝 有30-50ml的LB培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速200_240rpm，35_37°C恒溫培養(yǎng)8_16h。本發(fā)明步驟2. 1和2. 2中所述的培養(yǎng)基配方分別如下植物乳桿菌用培養(yǎng)基(g/L) :MRS培養(yǎng)基蛋白陳10.0g，牛肉粉5.0g，酵母粉 4. 0g，葡萄糖20. 0g，吐溫80 :1.0mL，磷酸氫二鉀2. 0g，乙酸鈉5. 0g，檸檬酸三銨2. Og, 硫酸鎂0. 2g，硫酸錳0. 05g，蒸餾水1000mL，如制成試管斜面培養(yǎng)基再加15-20. Og瓊脂， 121 °C 滅菌 20min。熱帶假絲酵母、康寧木霉用培養(yǎng)基(g/L) :5Brix麥芽汁培養(yǎng)基，如制成試管斜面 培養(yǎng)基再加15-20. Og瓊脂，121°C滅菌20min?？莶菅挎邨U菌用培養(yǎng)基(g/L) =LB培養(yǎng)基胰蛋白胨10. 0g，酵母提取物5. Og, 氯化鈉10. 0g，蒸餾水1000ml，如制成試管斜面培養(yǎng)基再加15. 0-20. Og瓊脂，121°C滅菌 20mino2. 3、高效復(fù)合菌劑的制備將植物乳桿菌種子液按照3-10%的接種量，接種于裝有30-35L發(fā)酵培養(yǎng)基 的50L發(fā)酵罐中，控制初始pH值為6. 5-7.0，攪拌轉(zhuǎn)速100_150rpm，通氣量0. 15-0. 3V/ V · min，30-37°C培養(yǎng)12_20h ；再將熱帶假絲酵母菌、康寧木霉種子液按照3-10%的接種 量分別同時(shí)接種，攪拌轉(zhuǎn)速100-150rpm，通氣量0. 15-0. 3V/V · min，25_30°C培養(yǎng)12_24h ； 再按照3-10%的接種量分別同時(shí)接種枯草芽孢桿菌，攪拌轉(zhuǎn)速160-200rpm，通氣量 0. 3-0. 8V/V .min，35-37°C培養(yǎng) 12_20h ；活菌數(shù)分別達(dá)到 1-2X 109cfu/ml、5_8X 108cfu/ml、 3-5X 108cfu/ml、3-5X 109cfu/ml 2_5X 109cfu/ml，終止發(fā)酵，分裝密封，即得高效復(fù)合菌 劑。本發(fā)明的步驟2. 3中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方(g/L):葡萄糖40，酵母膏5，大豆蛋 白胨18，氯化鈉5，121°C滅菌20min。3、高效復(fù)合菌劑的使用方法——發(fā)酵床墊料的制備利用本發(fā)明的高效復(fù)合菌劑制備發(fā)酵床墊料，不用提前進(jìn)行墊料發(fā)酵，隨鋪即用， 這是由于復(fù)合菌劑中含有抗菌物質(zhì)，能夠有效抑制墊料中病原菌的生長(zhǎng)繁殖，另外在發(fā)酵床啟動(dòng)后墊料中部的高溫發(fā)酵也會(huì)殺死多數(shù)的病原菌。本發(fā)明的復(fù)合菌劑是按下述步驟制 備發(fā)酵床墊料的1)鋪IOcm左右木屑，灑水達(dá)到30-40%濕度；2)復(fù)合菌劑的使用量為lL/m3，將復(fù)合菌劑適當(dāng)稀釋，均勻潑灑在木屑表面；3)鋪IOcm左右稻殼，灑水至30-40%濕度；重復(fù)以上步驟2-4次，最后一層表面鋪木屑IOcm左右，將發(fā)酵池填滿，噴水到濕度 30-40%，墊料的鋪設(shè)即完成。特別指出，本發(fā)明步驟3中所述的墊料厚度可以是50-100cm ；墊料原料還可以是 鋸末、稻殼、秸稈、花生殼等常見(jiàn)的農(nóng)作物下腳料的組合。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果是本發(fā)明的復(fù)合菌劑，不僅含有高效分泌纖維素酶、淀粉酶、蛋白酶的有益菌種，保 證了糞便的高效分解，可以降低墊料厚度至50cm，提高了相對(duì)飼養(yǎng)密度；還含有產(chǎn)生抗菌 物質(zhì)的乳酸菌，又保證了墊料可以不用提前發(fā)酵，從而節(jié)省了許多人力、墊料、水、時(shí)間成 本，方便用戶使用；含有活性高的酵母菌，提供了大量的菌體蛋白，節(jié)省了飼料；因此本發(fā) 明的復(fù)合菌劑，可以顯著減輕環(huán)境污染，提高豬肉品質(zhì)，提高飼料利用率，節(jié)工省本，提高經(jīng) 濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式通過(guò)下列實(shí)施例將更具體的說(shuō)明本發(fā)明，但是應(yīng)理解所述實(shí)施例僅是為了說(shuō)明本 發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 斜面菌種活化(1)植物乳桿菌斜面菌種活化取安瓿管菌種，無(wú)菌操作接種于試管斜面培養(yǎng)基 中，37°C恒溫培養(yǎng)72h，制成試管斜面菌種，4°C冰箱保藏備用。斜面培養(yǎng)基(g/L) :MRS培養(yǎng) 基蛋白陳10. 0g，牛肉粉5. 0g，酵母粉4. 0g，葡萄糖20. 0g，吐溫80 :1.0mL，磷酸氫二 鉀2. Og,乙酸鈉5. 0g，檸檬酸三銨2. 0g，硫酸鎂0. 2g，硫酸錳0. 05g，蒸餾水=IOOOmL, 瓊脂 15g, 121°C滅菌 20min。(2)熱帶假絲酵母菌、康寧木霉斜面菌種活化取安瓿管菌種，分別無(wú)菌操作接種 于試管斜面培養(yǎng)基中，30°C恒溫培養(yǎng)48h，制成試管斜面菌種，4°C冰箱保藏備用。斜面培養(yǎng) 基(g/L) :5Brix麥芽汁培養(yǎng)基，20g瓊脂，121°C滅菌20min。(3)枯草芽孢桿菌斜面菌種活化取安瓿管菌種，無(wú)菌操作接種于試管斜面培養(yǎng) 基中，37°C恒溫培養(yǎng)24h，制成試管斜面菌種，4°C冰箱保藏備用。斜面培養(yǎng)基(g/L) :LB培養(yǎng) 基胰蛋白胨10. 0g，酵母提取物5. 0g，氯化鈉10. 0g，蒸餾水1000ml，瓊脂20. 0g, 121°C 滅菌20min。實(shí)施例2 種子液的制備(1)植物乳桿菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，無(wú)菌操作接種于裝有200ml 的MRS培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，37°C恒溫150rpm培養(yǎng)20h。種子培養(yǎng)基本發(fā)明實(shí)施例 1(1)中的斜面培養(yǎng)基不加瓊脂。(2)熱帶假絲酵母菌、康寧木霉種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操 作接種于裝有100ml的麥芽汁培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，30°C恒溫IOOrpm培養(yǎng)24h。種子培養(yǎng)基本發(fā)明實(shí)施例1(2)中的斜面培養(yǎng)基不加瓊脂。(3)枯草芽孢桿菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操作接種于裝 有30ml的LB培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，35°C恒溫200rpm培養(yǎng)16h。種子培養(yǎng)基本發(fā)明 實(shí)施例1(3)中的斜面培養(yǎng)基不加瓊脂。實(shí)施例3 高效復(fù)合菌劑的制備將植物乳桿菌按照10%的接種量分別同時(shí)接種于裝有30L發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā) 酵罐中，控制初始pH值為6. 5 ；攪拌轉(zhuǎn)速lOOrpm，通氣量0. 15V/V · min，3(TC培養(yǎng)20h ；再 分別同時(shí)將熱帶假絲酵母菌、康寧木霉種子液按照5%的接種量接種，攪拌轉(zhuǎn)速I(mǎi)OOrpm，通 氣量0. 3V/V ·π η，25 培養(yǎng)12h ；再分別同時(shí)接種枯草芽孢桿菌，攪拌轉(zhuǎn)速200rpm，通氣量 0. 8V/V · min，37°C培養(yǎng) 20h ；活菌數(shù)分別達(dá)到 1 X 109cfu/ml、8X 108cfu/ml、5X 108cfu/ml、 1 X 109cfu/ml、3 X 109cfu/ml，終止發(fā)酵，分裝、密封，即得復(fù)合菌劑。實(shí)施例4 復(fù)合菌劑的用途——發(fā)酵床墊料的制備(1)鋪IOcm木屑，灑水達(dá)到40%濕度；(2)復(fù)合菌劑的使用量為lL/m3，取5L復(fù)合菌劑并稀釋至20L，均勻潑灑在木屑表(3)鋪IOcm稻殼，灑水至40%濕度；重復(fù)以上步驟2次，最后一層表面鋪木屑10cm，將發(fā)酵池填滿至50cm，噴水到濕度 40%，墊料的鋪設(shè)即完成。發(fā)酵墊料含水量的控制40%較合適，鑒別方法手抓可成團(tuán)，松手即散，指縫無(wú) 水滲出。實(shí)施例5、利用本發(fā)明的復(fù)合菌劑制備發(fā)酵床的養(yǎng)豬功效選擇同批的杜X長(zhǎng)X大三元健康活潑體重約IOkg的斷奶仔豬96頭，根據(jù)體重 及性別比例相近的原則，試驗(yàn)分四組，對(duì)照組、試驗(yàn)組I、試驗(yàn)組II、試驗(yàn)組III，每組有三個(gè) 重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8頭斷奶仔豬。其中對(duì)照組，水泥地板飼喂，試驗(yàn)組I為用本發(fā)明的復(fù)合菌 劑制成50cm的發(fā)酵床墊料飼喂，試驗(yàn)組II為用本發(fā)明的復(fù)合菌劑制成IOOcm的發(fā)酵床墊 料飼喂，試驗(yàn)組III為用發(fā)明的復(fù)合菌劑按照常規(guī)方法進(jìn)行墊料提前發(fā)酵制作發(fā)酵床，飼 喂70天。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下發(fā)酵床與水泥地面圈舍環(huán)境及體表觀察結(jié)果
―麗豇竊麗廠麗麗—試驗(yàn)組I 無(wú)明顯臭味，無(wú)蚊蠅滋生毛色光亮，清潔干凈 試驗(yàn)組II無(wú)明顯臭味，無(wú)蚊蠅滋生毛色光亮，清潔干凈發(fā)酵床與水泥地面養(yǎng)豬的生產(chǎn)性能結(jié)果組別初重量末重量日增重日耗料料肉比腹瀉率對(duì)照組10.,56±5.,2648.,95±5. 210. 55±0. 031.63±0. 242. 9730%試驗(yàn)組I9.89±4.8651.39 土 4. 310. 59±0. 051. 63±0. 322. 765%試驗(yàn)組II10.34±5.2452.14±2· 650. 60±0. 031. 66±0. 252. 775%試驗(yàn)組III10.69±4.6251.29±5. 210. 58±0. 041. 59±0. 352. 744% 由上表看出，試驗(yàn)組I、II、III的圈舍環(huán)境明顯比對(duì)照組好，沒(méi)有明顯臭味，無(wú)蚊 蠅滋生；豬的外表也顯著良好，毛色光亮，清潔干凈；試驗(yàn)組I、II、III的日增重顯著高于對(duì) 照組(P < 0. 01)，料肉比顯著低于對(duì)照組(P < 0. 01)，腹瀉率顯著低于對(duì)照組(P < 0. 01)。 實(shí)驗(yàn)組I、II、III之間差異不顯著。由此得出結(jié)論，本發(fā)明的復(fù)合菌劑，可以減輕環(huán)境污染， 提高豬肉品質(zhì)，提高飼料利用率，降低腹瀉率，節(jié)工省本，提高效益。
權(quán)利要求
一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑及其制備方法和用途，其特征在于不僅包括植物乳桿菌CICC6073、熱帶假絲酵母CGMCC2.587、康寧木霉CGMCC3.4290、枯草芽孢桿菌CGMCC1.769、CGMCC1.210高活性益生菌，活菌數(shù)分別為1 2×109cfu/ml、5 8×108cfu/ml、3 5×108cfu/ml、3 5×109cfu/ml、2 5×109cfu/ml，還包括其代謝產(chǎn)物淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、有機(jī)酸及抗菌素。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑，其特征在于，是由下列步驟制成的1)、斜面菌種活化取安瓿管菌種，分別無(wú)菌操作接種于相應(yīng)的試管斜面培養(yǎng)基中，植物乳桿菌30-37°C 恒溫培養(yǎng)48-72h ；康寧木霉、熱帶假絲酵母菌25-30°C恒溫培養(yǎng)48_72h ；枯草芽孢桿菌 35-37°C恒溫培養(yǎng)24-36h ；制成試管斜面菌種，4°C冰箱保藏備用。2)、種子液的制備A、植物乳桿菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，無(wú)菌操作接種于裝有150-200ml 的MRS培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速100_150rpm，30_37°C恒溫培養(yǎng)20_30h。B、熱帶假絲酵母、康寧木霉菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操作接種 于裝有100-200ml的麥芽汁培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速100_150rpm，25_30°C恒溫培養(yǎng) 24-36h。C、枯草芽孢桿菌種子液的制備取冰箱保藏斜面菌種，分別無(wú)菌操作接種于裝有 30-50ml的LB培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，轉(zhuǎn)速200_240rpm，35_37°C恒溫培養(yǎng)8_16h。3)、高效復(fù)合菌劑的制備將植物乳桿菌種子液按照3-10 %的接種量，接種于裝有30-35L發(fā)酵培養(yǎng)基的50L發(fā)酵 罐中，控制初始PH值為6. 5-7. 0，攪拌轉(zhuǎn)速100-150rpm，通氣量0. 15-0. 3V/V ·π η，30-37 培養(yǎng)12-20h ；再將熱帶假絲酵母菌、康寧木霉種子液按照3-10%的接種量分別同時(shí)接種， 攪拌轉(zhuǎn)速 100-150rpm,通氣量 0. 15-0. 3V/V · min，25_30°C 培養(yǎng) 12_24h ；再按照 3-10 % 的接種量分別同時(shí)接種枯草芽孢桿菌，攪拌轉(zhuǎn)速160-200rpm，通氣量0. 3-0. 8V/V · min, 35-37°C培養(yǎng) 12-20h ；活菌數(shù)分別達(dá)到 1-2X 109cfu/ml、5_8X 108cfu/ml、3_5X 108cfu/ml、 3-5X109cfu/ml 2_5X 109cfu/ml，終止發(fā)酵，分裝密封，即得高效復(fù)合菌劑。權(quán)利要求2步驟3)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(g/L):葡萄糖40，酵母膏5，大豆蛋白 胨18，氯化鈉5，121°C滅菌20min。
3.如權(quán)利要求1、2所述的高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑，其特征在于，是按照下列步驟制備發(fā) 酵床墊料的1)鋪IOcm木屑，灑水達(dá)到30-40%濕度；2)復(fù)合菌劑的使用量為lL/m3，將復(fù)合菌劑適當(dāng)稀釋，均勻潑灑在木屑表面；3)鋪IOcm稻殼，灑水至30-40%濕度；重復(fù)以上步驟2-4次，最后一層表面鋪木屑10cm，將發(fā)酵池填滿至50cm-100cm，噴水到 濕度30-40%，發(fā)酵床墊料的鋪設(shè)即完成。墊料原料還可以是鋸末、稻殼、秸稈、花生殼常見(jiàn) 的農(nóng)作物下腳料的組合。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑，具體地說(shuō)是涉及一種由枯草芽孢桿菌CGMCC1.769、CGMCC1.210、植物乳桿菌CICC6073、熱帶假絲酵母CGMCC2.587、康寧木霉CGMCC3.4290共5株有益菌和其代謝產(chǎn)物(淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶、有機(jī)酸、抗菌素等)組成的發(fā)酵床用復(fù)合菌劑，及其制備方法和用途。本發(fā)明提供的復(fù)合菌劑采用深層液體混合發(fā)酵工藝制成，首先將植物乳桿菌35℃液體深層發(fā)酵12h，再分別接種熱帶假絲酵母菌和康寧木霉30℃混合發(fā)酵12h后，再接種枯草芽孢桿菌液體深層混合發(fā)酵24h，使發(fā)酵活菌數(shù)分別控制為1-2×109cfu/ml、5-8×108cfu/ml、3-5×108cfu/ml、3-5×109cfu/ml2-5×109cfu/ml，終止發(fā)酵，分裝密封即可得到高效發(fā)酵床復(fù)合菌劑。同時(shí)本發(fā)明也提供了高效復(fù)合菌劑用途——制備發(fā)酵床墊料的方法。本發(fā)明的復(fù)合菌劑，活菌含量高，生物活性高，雜菌污染少，不僅可顯著降低豬圈舍的臭味，減少蚊蠅滋生機(jī)會(huì)，達(dá)到無(wú)污染、零排放的生態(tài)養(yǎng)殖目的，而且制作發(fā)酵床過(guò)程簡(jiǎn)單、節(jié)省了墊料及人力等。
文檔編號(hào)C12R1/885GK101948763SQ20091018028
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2009年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月13日
發(fā)明者孫占敏, 張廣民, 李紅霞, 王旭莉, 王金全, 胡麗博, 陳鮮鑫 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所