專利名稱：一種結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基及其標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及結(jié)核菌培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種結(jié)核菌快速 生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基及其標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)期以來(lái)，結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴細(xì)菌學(xué)涂片和培養(yǎng)檢查。由于方法所限，嚴(yán)重 影響了結(jié)核病的及時(shí)診斷。因此，多年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直在尋找快速、敏感、特異、簡(jiǎn)便的 實(shí)驗(yàn)室診斷方法。
一、 涂片和培養(yǎng)
涂片和培養(yǎng)是結(jié)核病最基本的細(xì)菌學(xué)檢查方法。培養(yǎng)的靈敏度略高于涂片法，并是鑒定 活菌的可靠方法，還可進(jìn)一步進(jìn)行菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，被譽(yù)為診斷結(jié)核病的"黃金標(biāo)準(zhǔn)"。 但常規(guī)羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，需4一8周才能出結(jié)果，而且陽(yáng)性率也只有30-40%;同時(shí)各 種分支桿菌均可生長(zhǎng)，需結(jié)合菌種鑒定才可確定是否為結(jié)核分支桿菌。由于涂片和培養(yǎng)的陽(yáng) 性檢出率偏低，致使大量結(jié)核病人漏診或誤診，嚴(yán)重影響了臨床診治的需要。另外，現(xiàn)在常 用的固體培養(yǎng)基多以雞蛋為基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)源，由于雞蛋來(lái)源不同導(dǎo)致成分不確定，不宜產(chǎn)業(yè)化， 難以標(biāo)準(zhǔn)化。
二、 快速培養(yǎng)、藥銅:檢測(cè)技術(shù)
20世紀(jì)70年代誕生的分枝桿菌快速培養(yǎng)、藥敏檢測(cè)技術(shù)是一種新的結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查 方法。以BactecTB460為代表的第一代分枝桿菌快速培養(yǎng)、藥敏檢測(cè)系統(tǒng)，對(duì)結(jié)核病的快速 診斷起到了重要作用。眾多的應(yīng)用結(jié)果表明Bactec TB 460可顯箸縮短培養(yǎng)時(shí)間(涂陽(yáng)病例平 均陽(yáng)性天數(shù)9—14天)，藥敏試驗(yàn)只需5-7天，同時(shí)陽(yáng)性檢出率約提高10 % ,且操作簡(jiǎn)便、自 動(dòng)化強(qiáng)，還可進(jìn)行快速菌型鑒定。但存在的主要問(wèn)題是液體培養(yǎng)基中無(wú)法觀察菌落形態(tài)，且 .污染率高于羅氏培養(yǎng)，并且儀器與試劑價(jià)格較貴、有放射性污染，故難以全面推廣應(yīng)用。
以Bactec MGIT 960為代表的第二代分枝桿菌快速培養(yǎng)、藥敏檢測(cè)系統(tǒng)，解決了 Bactec TB 460存在的放射性污染問(wèn)題，并保留了其快速的優(yōu)點(diǎn)，使結(jié)核病細(xì)菌學(xué)檢查方法又有了進(jìn)一 步發(fā)展。該培養(yǎng)儀可用于痰、支氣管盥洗液、胸水、腹水、腦脊液、尿液、膿液、關(guān)節(jié)液、 病灶組織或干酪塊各種臨床標(biāo)本的分枝桿菌培養(yǎng)、初步菌種鑒定和藥物敏感試驗(yàn)。國(guó)外應(yīng)用結(jié)果表明，Bactec MGIT 960的培養(yǎng)陽(yáng)性率、陽(yáng)性時(shí)間、污染率均與Bactec TB 460相近似。 但Bactec MGIT 960的自動(dòng)化程度更高、操作更為簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是價(jià)格更高。
結(jié)核菌的生長(zhǎng)繁殖所需要條件較高，其培養(yǎng)基中需有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，現(xiàn)有的固體結(jié)核菌 培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類少，這樣使得結(jié)核菌在現(xiàn)有的固體結(jié)核菌培養(yǎng)基中不能進(jìn)行很好地 生長(zhǎng)繁殖，生產(chǎn)速度慢，分裂周期長(zhǎng)達(dá)12-16小時(shí)，要4-6周方能看到菌落，因此，使用現(xiàn) 有的固體結(jié)核菌培養(yǎng)基來(lái)對(duì)結(jié)核菌進(jìn)行體外人工分離培養(yǎng)時(shí)，其;f全測(cè)速度相當(dāng)慢，卩曰性檢出 率低，不利于結(jié)核菌的早期診斷和治療。另外，傳統(tǒng)的結(jié)核藥敏試驗(yàn)是將抗結(jié)核藥物按一定 的稀釋度加入到羅氏固體培養(yǎng)基中，然后將分離培養(yǎng)出的結(jié)核桿菌接種于含有藥物的培養(yǎng)基 中，觀察結(jié)核桿菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況進(jìn)行判斷。由于結(jié)核桿菌生長(zhǎng)緩慢，這種傳統(tǒng)的方 法通常需要4-6周的時(shí)間才能報(bào)告藥敏試驗(yàn)結(jié)果，所以無(wú)法及時(shí)為臨床合理用藥提供指導(dǎo)。 因此縮短結(jié)核桿菌藥敏試驗(yàn)的時(shí)間已成為一個(gè)迫切需要解決的問(wèn)題，而快速、靈敏的結(jié)核藥 敏試驗(yàn)則是控制結(jié)核病的首要條件。
由于存在上述缺陷，因此，需要一種采用新的方法培養(yǎng)結(jié)核菌，使得結(jié)核菌生長(zhǎng)快速，， 從而使得藥敏試驗(yàn)快速、準(zhǔn)確，有利于結(jié)核菌的早期診斷和治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服了上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺點(diǎn)，提供一種結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基及 其標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法，該結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基設(shè)計(jì)巧妙、配制簡(jiǎn)便、成本低、質(zhì)量穩(wěn)定 可靠、易于標(biāo)準(zhǔn)化大規(guī)模生產(chǎn)，在其上培養(yǎng)的結(jié)核菌生長(zhǎng)快速，從而使得藥敏試驗(yàn)快速、準(zhǔn) 確，有利于結(jié)核菌的早期診斷和治療。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特點(diǎn) 是，包括
A液1.0-2.0g磷酸二氫鉀(KH2P04 )、 0.3-0.5g硫酸鎂(MgS04 )、 0.5-0.8g檸檬酸鎂、2.0-3.0g 天冬酰胺和15-20g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液:3.0-4.0g牛血清白蛋白(bovine albumin) 、 4-5g葡萄糖(dextrose) 、 1.2-1.8g過(guò)氧 化氫酶(catalase ) 、 5-1 Og油酸(oleic acid) 、 0.01-0.10g三磷酸腺苷(ATP ) 、 0.3-0.8g輔酶A、 0.03-0.09g細(xì)胞色素C、 0.06-0.10ga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60(ag兩性霉素B、 240嗎萘啶酸、 601^g曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。
較佳地，在所述A液中，所述磷酸二氫鉀為1.5g,所述硫酸鎂為0.307g,所述檸檬酸鎂 為0.584g，所述天冬酰胺為2.4g,所述瓊脂粉為15g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為3.5g,所述葡萄糖為5g,所述過(guò)氧化氫酶為1.5g，所述油酸為10g，所述三磷酸腺苷為0.06g,所述輔酶A為0.5g，所述細(xì)胞色素C為0.05g，所述a-萘乙酸為0.08g。
較佳地，在所述A液中，所述磷酸二氬鉀為2g,所述硫酸鎂為0.5g,所述檸檬酸鎂為0.5g,所述天冬酰胺為3g，所述瓊脂粉為20g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為4g,所述葡萄糖為4.5g,所述過(guò)氧化氫酶為1.2g，所述油酸為5g,所述三磷酸腺苷為O.lOg,所述輔酶A為0.3g,所述細(xì)胞色素C為0.03g，所述a-萘乙酸為0.10g。
較佳地，在所述A液中，所述磷酸二氫鉀為lg，所述硫酸鎂為0.3g,所述檸檬酸鎂為0.8g,所述天冬酰胺為2g，所述瓊脂粉為18g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為3g,所述葡萄糖為4g,所述過(guò)氧化氫酶為1.8g,所述油酸為8g,所述三磷酸腺苷為O.Olg,所述輔酶A為0.8g,所述細(xì)胞色素C為0.09g,所述a-萘乙酸為0.06g。
較佳地，所述A液還包括0.02-0.03g檸檬酸鐵銨。
較佳地，所述天冬酰胺用食用味精替代，用量加倍。
較佳地，所述牛血清白蛋白用人或動(dòng)物血清替代。
較佳地，所述多粘菌素B、所述兩性霉素B、所述萘啶酸、所述甲氧卞胺嘧啶和所述阿洛西林中至少一種用與其抗菌譜類似的藥物取^代。
在本發(fā)明的第二方面，提供了 一種上述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)是，所述A液中所述磷酸二氫鉀、所述硫酸鎂、所述檸檬酸鎂和所述天冬酰胺完全溶解后加入所述瓊脂混勻后滅菌，自然降溫至45-50°C;所述B液完全溶解后過(guò)濾除菌，溫育至40-50。C后迅速加入所述A液中混勻。 一般盡快分裝，制成斜面。
較佳地，所述滅菌的條件為110。C高壓20分鐘，所述過(guò)濾除菌采用0.22nm過(guò)濾除菌。
本發(fā)明的有益效果具體如下
1. 本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基以瓊脂作為支撐材料，加入刺激結(jié)核分枝桿菌快速生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括能加快結(jié)核菌新陳代謝活動(dòng)以提高結(jié)核菌生長(zhǎng)繁殖速度的能量物質(zhì)如ATP和生長(zhǎng)刺激物質(zhì)如過(guò)氧化物酶等，大大加快了結(jié)核菌的生長(zhǎng)速度，設(shè)計(jì)巧妙、配制簡(jiǎn)便、成本低、質(zhì)量穩(wěn)定可靠(保存期可達(dá)一年以上)、易于標(biāo)準(zhǔn)化大規(guī)模生產(chǎn)；
2. 本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基中含有基礎(chǔ)物質(zhì)，基礎(chǔ)物質(zhì)中包含現(xiàn)有固體結(jié)核菌培養(yǎng)基中所有的組分，它們?yōu)榱姿岫溻?、硫酸鎂(MgS04 . 7H20)、枸櫞鎂、天門(mén)冬酰胺、水，各組分所起的作用分別為有緩沖作用的枸櫞酸鎂、硫酸鎂等鹽類供給鎂、鉀等元素，有調(diào)節(jié)滲透壓的作用，使結(jié)核菌的細(xì)胞膜有良好的通透
6性，天門(mén)冬酰胺為氮源，可促進(jìn)結(jié)核菌的生長(zhǎng)和繁殖，磷酸二氫鉀為緩沖劑，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值，多種抗生素可抑制標(biāo)本中部分雜菌的生長(zhǎng)，另外，基礎(chǔ)物質(zhì)中還有檸檬酸鐵銨和牛血清白蛋白等，檸檬酸鐵銨可提供一定的鐵質(zhì)以滿足結(jié)核菌生長(zhǎng)繁殖所需，可作結(jié)核菌增菌培養(yǎng)用，因此，本發(fā)明所述的結(jié)核菌快速培養(yǎng)基與現(xiàn)有的固體結(jié)核菌培養(yǎng)基相比，其內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類多，它可為結(jié)核菌的生長(zhǎng)繁殖提供充足
的營(yíng)養(yǎng)物；
3.本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基還含有能量物質(zhì)和生長(zhǎng)刺激物質(zhì)，能量物質(zhì)可加速結(jié)核菌的新陳代謝活動(dòng)，能提高結(jié)核菌的生長(zhǎng)繁殖速度，生長(zhǎng)刺激物質(zhì)能促進(jìn)結(jié)核桿菌的生長(zhǎng)。
具體實(shí)施例方式
為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，特舉以下實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1
A液1.5g磷酸二氫鉀、0.307g硫酸鎂、0.584g檸檬酸鎂、2.4g天冬酰胺和15g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液3.5g牛血清白蛋白、5g葡萄糖、L5g過(guò)氧化氫酶、10g油酸、0.06g三磷酸腺苷、0.5g輔酶A、 0.05g細(xì)胞色素C、 0.08ga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60(ag兩性霉素B、 240ng萘咬酸、60嗎曱氧卞胺嘧。定和60ng阿洛西林，去離子水200ml。
配制方法所述A液中所述磷酸二氫鉀、所述硫酸鎂、所述檸檬酸鎂和所述天冬酰胺完全溶解后加入所述瓊脂混勻后110。C高壓20分鐘滅菌，自然降溫至45-5(TC;所述B液完全溶解后0.22nm過(guò)濾除菌，溫育至40-50。C后迅速加入所述A液中混勻。盡快分裝至多個(gè)試管內(nèi)，制成斜面固體培養(yǎng)基。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)林H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的結(jié)核臨床菌抹(12林)、耐藥型結(jié)核臨床菌株(12林)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌林生產(chǎn)迅速，相比較傳統(tǒng)的L-J結(jié)核培養(yǎng)基，菌落初形成和適宜判斷時(shí)間大為提前，初形成7-9天，平均8.3天，提前約3-4天，同樣菌落形態(tài)適宜結(jié)果判斷時(shí)間平均15.4天，提前約10天(L-J培養(yǎng)基一般四周左右)。
實(shí)施例2
A液2g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂、0.5g檸檬酸鎂、3g天冬酰胺和20g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液4g牛血清白蛋白、4.5g葡萄糖、L2g過(guò)氧化氫酶、5g油酸、O.lOg三磷酸腺苷、0.3g
7輔酶A、 0.03g細(xì)胞色素C、 O.lOga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60lig兩性霉素B、 240pg萘啶酸、60嗎曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。配制方法同實(shí)施例l。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的臨床菌林(12抹)、耐藥型結(jié)核臨床菌株(12抹)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌抹生產(chǎn)迅速，分別生長(zhǎng)15、 16、 18天，大小同實(shí)施例l。
實(shí)施例3
A液lg磷酸二氫鉀、0.3g硫酸鎂、0.8g檸檬酸鎂、2g天冬酰胺和18g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液3g牛血清白蛋白、4g葡萄糖、1.8g過(guò)氧化氫酶、10g油酸、O.Olg三磷酸腺芬、0.8g輔酶A、 0.09g細(xì)胞色素C、 0.06ga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60(ig兩性霉素B、 240^g萘啶酸、60嗎曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。
配制方法同實(shí)施例l。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)抹H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌林(12抹)、耐藥型結(jié)核菌(12林)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌林生產(chǎn)迅速，分別生15、 16、 18天，大小同實(shí)施例l。
實(shí)施例4
A液lg磷酸二氫鉀、0.3g硫酸鎂、0.8g檸檬酸鎂、2g天冬酰胺、0.02g檸檬酸鐵銨和18g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液3g牛血清白蛋白、4g葡萄糖、1.8g過(guò)氧化氫酶、8g油酸、O.Olg三磷酸腺苷、0.8g輔酶A、 0.09g細(xì)胞色素C、 0.06ga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 6(Vg兩性霉素B、 240ng萘啶酸、60pg曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。
配制方法所述A液中所述磷酸二氫鉀、所述石克酸4美、所述檸檬酸鎂、所述天冬酰胺和所述種檬酸鐵銨完全溶解后加入所述瓊脂混勻后1 l(TC高壓20分鐘滅菌，自然降溫至45-50。C;所述B液完全溶解后0.22nm過(guò)濾除菌，溫育至40-50。C后迅速加入所述A液中混勻。盡快分裝至多個(gè)試管內(nèi)，制成斜面固體培養(yǎng)基。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)林H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌抹(12抹)、耐藥型結(jié)核菌U2抹)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌抹生產(chǎn)迅速，分別生長(zhǎng)15、 16、 18天，大小同實(shí)施例1。實(shí)施例5
A液lg磷酸二氫鉀、0.3g疏酸鎂、0.8g檸檬酸鎂、2g天冬酰胺、0.03g檸檬酸鐵銨和18g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液3g牛血清白蛋白、4g葡萄糖、1.8g過(guò)氧化氫酶、10g油酸、O.Olg三磷酸腺苷、0.8g輔酶A、 0.09g細(xì)胞色素C、 0.06ga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60(ig兩性霉素B、 240嗎萘啶酸、60嗎曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。
配制方法同實(shí)施例4。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)抹H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌林(12抹)、耐藥型結(jié)核菌(12抹)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌株生產(chǎn)迅速，分別生長(zhǎng)15、 16、 18天，大小同實(shí)施例1 。
實(shí)施例6
A液2g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂、0.5g檸檬酸鎂、6g食用味精和20g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液4g牛血清白蛋白、4.5g葡萄糖、L2g過(guò)氧化氫酶、5g油酸、O.lOg三磷酸腺苷、0.3g輔酶A、 0.03g細(xì)胞色素C、 O.lOga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60pg兩性霉素B、 240(ig萘啶酸、60叫曱氧卞胺嘧啶和6(Vg阿洛西林，去離子水200ml。
配制方法所述A液中所述磷酸二氬鉀、所述硫酸鎂、所述檸檬酸鎂、所述食用味精和所述檸檬酸鐵銨完全溶解后加入所述瓊脂混勻后11(TC高壓20分鐘滅菌，自然降溫至45-50。C;所述B液完全溶解后0.22nm過(guò)濾除菌，溫育至40-50。C后迅速加入所迷A液中混勻。盡快分裝至多個(gè)試管內(nèi)，制成斜面固體培養(yǎng)基。。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)抹H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌抹(12林)、耐藥型結(jié)核菌(12抹)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌抹生產(chǎn)迅速，分別生長(zhǎng)15、 16、 18天，大小同實(shí)施例1。
實(shí)施例7
A液2g磷酸二氫鉀、0.5g硫酸鎂、0.5g檸檬酸鎂、3g天冬酰胺和20g瓊脂粉，800ml去離子水；
B液4g人血清白蛋白、4.5g葡萄糖、1.2g過(guò)氧化氫酶、5g油酸、O.lOg三磷酸腺苷、0.3g輔酶A、 0.03g細(xì)胞色素C、 O.lOga-萘乙酸、600u多粘菌素B、 60pg兩性霉素B、 240pg萘啶酸、60嗎曱氧卞胺嘧啶和60嗎阿洛西林，去離子水200ml。配制方法同實(shí)施例l。
在不同的試管內(nèi)分別接種標(biāo)準(zhǔn)抹H37Rv、對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌林(12林)、耐藥型結(jié)核菌(12株)進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)全部菌林生產(chǎn)迅速，分別生長(zhǎng)15、 16、 18天，大小同實(shí)施例1 。
結(jié)核菌為專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求較高，生長(zhǎng)緩慢，它是胞內(nèi)兼性寄生菌，是一種單細(xì)胞生物，由于具有疏水性外層，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不易吸收，所以生長(zhǎng)緩慢，改良羅氏培養(yǎng)基已經(jīng)廣泛應(yīng)用，但培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)，不能滿足臨床快速診斷和治療的需要。通過(guò)上述實(shí)施例發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌在本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基上比在改良羅氏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)所需時(shí)間明顯縮短可提前近l周以上，不同耐藥型結(jié)核菌的生長(zhǎng)所需時(shí)間也不同，比標(biāo)準(zhǔn)才朱H37Rv和對(duì)抗結(jié)核藥物全敏感的菌抹生長(zhǎng)所需時(shí)間要長(zhǎng)一些，在改良羅氏培養(yǎng)基上結(jié)核菌生長(zhǎng)不良或一般，而在新型快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)都很好。因此，本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基不僅能縮短結(jié)核菌生長(zhǎng)所需時(shí)間，而且使結(jié)核菌能優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，提高陽(yáng)性分離率，幫助臨床準(zhǔn)確作出診斷。因此，本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基可作為羅氏培養(yǎng)基的改良新方法在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。
綜上，本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基設(shè)計(jì)巧妙、配制簡(jiǎn)便、成本低、質(zhì)量穩(wěn)定可靠、易于標(biāo)準(zhǔn)化大規(guī)模生產(chǎn)，在其上培養(yǎng)的結(jié)核菌生長(zhǎng)快速，從而使得藥敏試驗(yàn)快速、準(zhǔn)確，有利于結(jié)核菌的早期診斷和治療。
在此說(shuō)明書(shū)中，本發(fā)明已參照其特定的實(shí)施例作了描述。但是，很顯然仍可以作出各種修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，說(shuō)明書(shū)和附圖
應(yīng)被認(rèn)為是說(shuō)明性的而非限制性的。
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權(quán)利要求
1.一種結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，包括A液1.0-2.0g磷酸二氫鉀、0.3-0.5g硫酸鎂、0.5-0.8g檸檬酸鎂、2.0-3.0g天冬酰胺和15-20g瓊脂粉，800ml去離子水；B液3.0-4.0g牛血清白蛋白、4-5g葡萄糖、1.2-1.8g過(guò)氧化氫酶、5-10g油酸、0.01-0.10g三磷酸腺苷、0.3-0.8g輔酶A、0.03-0.09g細(xì)胞色素C、0.06-0.10gα-萘乙酸、600u多粘菌素B、60μg兩性霉素B、240μg萘啶酸、60μg甲氧卞胺嘧啶和60μg阿洛西林，去離子水200ml。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，在所述A液中，所述磷 酸二氫鉀為1.5g,所述硫酸鎂為0.307g，所述檸檬酸鎂為0.584g,所述天冬酰胺為2.4g,所 述瓊脂粉為15g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為3.5g，所述葡萄糖為5g，所述過(guò)氧化 氫酶為1.5g,所述油酸為10g,所述三磷酸腺苷為0.06g,所述輔酶A為0.5g,所述細(xì)胞色素 C為0.05g,所述a-萘乙酸為0.08g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，在所述A液中，所述磷 酸二氫鉀為2g,所述硫酸鎂為0.5g,所述檸檬酸鎂為0.5g,所述天冬酰胺為3g，所述瓊脂 粉為20g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為4g,所述葡萄糖為4.5g,所述過(guò)氧化氫酶為 1.2g,所迷油酸為5g,所述三磷酸腺苷為0.10g,所述輔酶A為0.3g，所述細(xì)胞色素C為0.03g, 所述a-萘乙酸為0.10g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，在所述A液中，所述磷 酸二氫鉀為lg,所述硫酸鎂為0.3g,所述檸檬酸鎂為0.8g,所述天冬酰胺為2g,所述瓊脂 粉為18g;在所述B液中，所述牛血清白蛋白為3g，所述葡萄糖為4g,所述過(guò)氧化氫酶為 1.8g，所述油酸為8g，所述三磷酸腺苷為0.01g，所迷輔酶A為0.8g，所述細(xì)胞色素C為0.09g, 所述a-萘乙酸為0.06g。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，所述A液還包括0.02-0.03g檸檬酸鐵銨。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，所述天冬酰胺用食用味 精替代，用量加倍。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，所述牛血清白蛋白用人 或動(dòng)物血清替代。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，其特征在于，所述多粘菌素B、所述 兩性霉素B、所述萘啶酸、所述曱氧卞胺嘧啶和所述阿洛西林中至少一種用與其抗菌譜類似的藥物取^代。
9. 一種根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法，其特征在于， 所述A液中所述磷酸二氫鉀、所述硫酸鎂、所述檸檬酸鎂和所述天冬酰胺完全溶解后加入 所述瓊脂混勻后滅菌，自然降溫至45-50。C;所述B液完全溶解后過(guò)濾除菌，溫育至40-50 °C后迅速加入所述A液中混勻。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法，其特征在于，所述滅菌的條件為110。C高壓20分鐘， 所述過(guò)濾除菌采用0.22nm過(guò)濾除菌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基，包括A液1.0-2.0g磷酸二氫鉀、0.3-0.5g硫酸鎂、0.5-0.8g檸檬酸鎂、2.0-3.0g天冬酰胺和15-20g瓊脂粉，800ml去離子水；B液3.0-4.0g牛血清白蛋白、4-5g葡萄糖、1.2-1.8g過(guò)氧化氫酶、5-10g油酸、0.01-0.10g三磷酸腺苷、0.3-0.8g輔酶A、0.03-0.09g細(xì)胞色素C、0.06-0.10gα-萘乙酸、600u多粘菌素B、60μg兩性霉素B、240μg萘啶酸、60μg甲氧卞胺嘧啶和60μg阿洛西林，去離子水200ml，較佳地，A液還包括0.02-0.03g檸檬酸鐵銨，天冬酰胺用食用味精替代，牛血清白蛋白用人或動(dòng)物血清替代，還提供了標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)方法，本發(fā)明的結(jié)核菌快速生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基設(shè)計(jì)巧妙、配制簡(jiǎn)便、成本低、質(zhì)量穩(wěn)定可靠、易于標(biāo)準(zhǔn)化大規(guī)模生產(chǎn)，在其上培養(yǎng)的結(jié)核菌生長(zhǎng)快速，從而使得藥敏試驗(yàn)快速、準(zhǔn)確，有利于結(jié)核菌的早期診斷和治療。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101633899SQ20091019490
公開(kāi)日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2009年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月1日
發(fā)明者孫戰(zhàn)強(qiáng), 張舒林, 震 雷 申請(qǐng)人:無(wú)錫博慧斯生物醫(yī)藥科技有限公司