專利名稱：家族性乳腺癌遺傳風險檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及分子生物學和醫(yī)學領域，更具體的，本發(fā)明涉及一種家族性乳腺癌遺 傳風險檢測試劑盒。
背景技術：
乳腺癌是乳腺導管上皮細胞在各種內(nèi)外致癌因素的作用下，細胞失去正常特性而 異常增生，以致超過自我修復的限度而發(fā)生癌變的疾病，臨床以乳腺腫塊為主要表現(xiàn)。乳腺 癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，有發(fā)病率高、具侵襲性、但病程進展緩慢、自然生存期長 等特點。乳腺癌是主要危害婦女身體健康的疾病，男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的 機會比女性要少100倍。乳腺癌的好發(fā)部位以乳房外上占多數(shù)。早期乳腺癌可無任何自覺 癥狀，病變晚期可出現(xiàn)乳腺腫塊，質(zhì)地硬韌，邊界不甚清晰，無包膜感，推之移動性小，多數(shù) 無明顯疼痛，乳頭出現(xiàn)回縮、偏位，乳頭溢流黃水或血水，癌性濕疹樣改變。乳腺癌不但有損婦女體態(tài)，而且嚴重影響生活質(zhì)量，甚至導致死亡。近年來隨著乳 腺癌發(fā)病率的增高，乳房保護運動(粉紅絲帶運動)在各地興起，人們對乳腺癌的關注越來 越多，迫切需要更加靈敏、有效的乳腺癌風險檢測和治療指導手段。乳腺癌分為家族性乳腺癌和散發(fā)性乳腺癌，家族性乳腺癌具有很強的遺傳性，可 通過遺傳基因進行傳布。主要的遺傳基因有CYPlAl基因和CYPlBl基因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種家族性乳腺癌遺傳風險檢測試劑盒。該試劑盒包括檢測CYPlAl基因上rs4646903位點、CYPlBl基因上Leu432Val位 點多態(tài)性的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應緩沖 液、去離子水。本試劑盒中所述的特異性熒光探針對對于本領域普通技術人員來說是能夠輕易 完成設計的，特異性熒光探針對可用常規(guī)的探針合成技術進行合成。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。下列實施例中未注明具體條件的實驗 方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。實施例步驟1:DNA模板的抽取用硅膠吸附法抽提口腔上皮細胞的基因組DNA。步驟2 熒光定量PCR反應使用檢測試劑盒中的熒光定量PCR套裝，進行熒光定量PCR反應，反應的體系為總 體積10 μ 1，包含濃度為20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX熒光定量PCR反應緩沖液、0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6μ 125mMMgCl2 溶液、0. 025 μ l(5units/y l)Taq DNA聚合酶、 20 μ M的有義引物和反義引物各0. 225 μ 1、10 μ M的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針各 0. 25 μ 1，去離子水 5. 325 μ 1。在PCR擴增儀上進行反應，反應條件為50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，進行60個循環(huán) 的95°C、30秒，60°C、1分鐘。反應結(jié)束后在熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟4:基因型分析根據(jù)試劑盒使用說明書標示的基因分型圖示對SNP位點進行基因型分析。熟悉熒光定量PCR技術的本領域技術人員能夠通過辨識熒光定量PCR儀上顯示 的最終樣品熒光量，根據(jù)不同序列探針熒光信號的強弱即可確定所檢測的SNP位點的基因 型。
權利要求
1. 一種家族性乳腺癌遺傳風險檢測試劑盒，，包括特異性引物對及特異性熒光探針對， Taq酶，dNTP混合液，MgC12溶液，熒光定量PCR反應緩沖液和去離子水，其特征在于所述 的特異性引物對及特異性熒光探針對是針對檢測CYPlAl基因上rs4646903位點、CYPlBl基 因上Leu432Val位點多態(tài)性設計的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種家族性乳腺癌遺傳風險檢測試劑盒，包括檢測CYP1A1基因上rs4646903位點、CYP1B1基因上Leu432Val位點多態(tài)性的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應緩沖液、去離子水。
文檔編號C12Q1/68GK102108380SQ20091020048
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月23日 優(yōu)先權日2009年12月23日
發(fā)明者馮哲民, 賀憲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司