專利名稱：預(yù)防妊娠高血壓綜合征的檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種預(yù)防妊娠高血壓 的檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
圍產(chǎn)期保健對降低孕產(chǎn)婦死亡、圍產(chǎn)兒死亡以及病殘兒的發(fā)生、保障母嬰安全健 康具有重要意義。在圍產(chǎn)期期間，孕婦容易發(fā)生妊娠高血壓綜合征。妊娠高血壓綜合征(簡 稱妊高征)，是孕產(chǎn)婦特有的一種全身性疾病，在我國的發(fā)病率為10. 32%，多發(fā)生在妊娠 20周以后至產(chǎn)后2周，臨床上主要表現(xiàn)為水腫、高血壓、蛋白尿三大癥候群，重度患者伴有 頭痛、眼花、甚至抽搐、昏迷。本病嚴重威脅母胎健康，是引起孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒死亡的主要原 因。眾多研究發(fā)現(xiàn)，該疾病具有較高的遺傳傾向。妊娠高血壓綜合征的遺傳易感基因 主要為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因(ACE)和5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因與圍產(chǎn)期妊高征密切相關(guān)。ACE基因編碼血管緊張 素轉(zhuǎn)化酶，在人體內(nèi)具有多種功能。ACE基因多態(tài)性是冠心病、心肌病、高血壓等多種圍產(chǎn)期 疾病發(fā)病的獨立危險因素。Bedir A在土耳其人群中的研究發(fā)現(xiàn)ACE的I/D基因型影響著 ACE的活性，其中DD基因型的活性較高而II基因型的活性較低。而在高血壓中ACE的血清 水平明顯比非高血壓個體的水平為高，因此認為ACE的DD基因型與高血壓相關(guān)，并可能是 嚴重高血壓的重要標記和高血壓的獨立危險因子。2006年，陳柏坤等人對92例妊娠高血壓 綜合征患者及85名正常妊娠者的ACE基因多態(tài)性進行研究。結(jié)果顯示，妊娠高血壓綜合征 組ACE基因3種基因型頻率分別為DD型44. 6%、ID型33. 7%、II型21. 7% ；對照組ACE 基因3種基因型頻率分別為DD型18. 8%、ID型40. 0%、II型41.2%。兩組的DD基因型 及D等位基因頻率比較差異有顯著性(P < 0. 05)。結(jié)果顯示ACE基因的缺失多態(tài)性(DD) 可能為妊高征發(fā)病的重要遺傳因素之一。5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因與妊娠期高血壓綜合征密切相關(guān)。 MTiFR為亞甲基四氫葉酸還原酶蛋白編碼基因，主要作用是在葉酸代謝通路中將5，10-亞 甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為具有生物學(xué)功能的5-甲基四氫葉酸鹽。MTHFR基因的缺陷可以導(dǎo)致機 體多個必需生化途徑的紊亂，包括細胞周期調(diào)控、DNA合成和甲基化修飾等，并進而引發(fā)各 類心腦血管疾病、癌癥和神經(jīng)管缺陷等多種疾病。2006年，王素敏等人對同型半胱氨酸代謝 酶-甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性在妊高征發(fā)病中的作用地位進行研究。結(jié)果 顯示，病例組MTHFR C677T C/T基因型頻率顯著高于正常對照組，T等位基因頻率顯著高于 對照組(P <0.05)。MTHFR C677T基因突變是妊高征發(fā)生的遺傳風險因素，可作為妊高征 預(yù)后的檢測指標。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種預(yù)防妊娠高血壓綜合征的檢測試劑盒。
該試劑盒包括檢測ACE基因上rs4646994號I/D多態(tài)性基因型的電泳檢測引物 對、檢測MTHFR基因上rsl801133號SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針 對、Taq酶、dNTP混合液、MaCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、去離子水。本試劑盒中所述的特異性引物和熒光探針對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說是能 夠輕易完成設(shè)計的，特異性引物和熒光探針對可用常規(guī)的DNA合成技術(shù)進行合成。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。下列實施例中未注明具體條件的實驗 方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。實施例檢測試劑盒的使用步驟1:DNA模板的抽取用硅膠吸附法抽提口腔上皮細胞的基因組DNA。步驟2 熒光定量PCR反應(yīng)使用檢測試劑盒中的熒光定量PCR套裝，進行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)的體系為總 體積10 μ 1，包含濃度為20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有義引物和反義引物各0. 225 μ 1、10 μ M的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針 各0. 25μ 1，去離子水5. 325 μ 1。在PCR擴增儀上進行反應(yīng)，反應(yīng)條件為50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，進行60個循環(huán) 的95°C、30秒，60°C、1分鐘。反應(yīng)結(jié)束后在熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟4:基因型分析根據(jù)試劑盒使用說明書標示的基因分型圖示對SNP位點進行基因型分析。熟悉熒光定量PCR技術(shù)的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過辨識熒光定量PCR儀上顯示 的最終樣品熒光量，根據(jù)不同序列探針熒光信號的強弱即可確定所檢測的SNP位點的基因 型。
權(quán)利要求
1. 一種預(yù)防妊娠高血壓綜合征的檢測試劑盒，包括電泳檢測引物對、特異性引物對及 特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、去離子水， 其特征在于電泳檢測引物對是針對ACE基因上rs4646994號I/D多態(tài)性基因型設(shè)計的，特 異性引物對及特異性熒光探針對是針對MTHFR基因上rsl801133號SNP多態(tài)性基因型設(shè)計 的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種預(yù)防妊娠高血壓綜合征的檢測試劑盒，包括檢測ACE基因上rs4646994號I/D多態(tài)性基因型的電泳檢測引物對、檢測MTHFR基因上rs1801133號SNP多態(tài)性基因型的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、去離子水。
文檔編號C12Q1/68GK102108384SQ200910200488
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者馮哲民, 賀憲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司