專利名稱：一種酵母菌的原生質(zhì)體制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程中微生物育種的方法，特別涉及一種酵母菌的原生質(zhì)體制備方法。
背景技術(shù)：
木質(zhì)素是植物細(xì)胞壁主要成分，畜禽消化道內(nèi)幾乎沒有降解木質(zhì)素的酶，食草動物靠消化道寄生的微生物能夠部分降解木質(zhì)素，但單胃動物不具有這種能力。木質(zhì)素是動物消化植物性飼料的最大障礙，微生物發(fā)酵是克服這一難題的最理想方法。選育木質(zhì)素降解率高，且在飼料上易于發(fā)酵的微生物菌株，是養(yǎng)殖業(yè)實現(xiàn)〃 節(jié)糧〃 的關(guān)鍵技術(shù)。酵母菌屬于兼性厭氧微生物，在有氧和無氧狀態(tài)下都能生存和繁衍，生長速度快，且菌體營養(yǎng)物質(zhì)含量高，使用安全，是理想的飼料發(fā)酵菌株。酵母菌全身是"寶"，它含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、維生素、微量元素以及各種消化酶。其細(xì)胞壁含有多種生物活性物質(zhì)，可作為營養(yǎng)物質(zhì)被吸收，還可以促進(jìn)免疫反應(yīng)，具有益生菌和益生元的某些作用。從20世紀(jì)40年代開始，酵母菌作為蛋白質(zhì)補充料廣泛應(yīng)用于畜牧生產(chǎn)。但酵母菌不具有木質(zhì)素降解功能，為了構(gòu)建出具有木質(zhì)素降解力的酵母菌變異菌株，使其具有木質(zhì)素的降解能力，需對酵母菌的原生質(zhì)體的制備方法進(jìn)行研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種酵母菌的原生質(zhì)體的制備方法，使其原生質(zhì)體的形成率達(dá)到90-96%。
本發(fā)明的技術(shù)方案是 —種酵母菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)14-18h的酵母菌，用0. 1% -0. 2% P -巰基乙醇預(yù)處理10-20min，用0. 6mol/LKCL做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶；在28-3(TC酶解l-2h ;原生質(zhì)體形成率達(dá)到90% -96%。
所述的白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，最佳工藝參數(shù)是 在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)16h的酵母菌，用0. 2% P -巰基乙醇預(yù)處理20min，用0. 6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶；在3(TC酶解lh ;原生質(zhì)體形成率達(dá)到90-96%。 本發(fā)明效果是 采用本酵母菌的原生質(zhì)體制備方法 1.制備工藝簡單，易操作。 2.原生質(zhì)體的形成率可達(dá)90-96%。
具體實施例方式
—種酵母菌的原生質(zhì)體制備方法提供了適合制備高酵母菌的原生質(zhì)體數(shù)量的方法。
實例一在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)14h的酵母菌，用0. 1 % |3 -巰基乙醇預(yù)處理lOmin，
用0. 6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶，在28。C酶解lh，原生質(zhì)體形成率達(dá)到
90-96%。 實例二 在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)18h的酵母菌，用0. 2% P -巰基乙醇預(yù)處理lOmin，用0. 6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶，在3(TC酶解2h，原生質(zhì)體形成率達(dá)到90-96% 實例三 在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)16h的酵母菌，用0. 2% P -巰基乙醇預(yù)處理20min，用0. 6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶，在3(TC酶解lh，原生質(zhì)體形成率達(dá)到90-96% 本酵母菌的原生質(zhì)體制備方法，操作簡單，形成率高，可達(dá)90-96% 。
權(quán)利要求
一種酵母菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)14-18h的酵母菌，用0.1％-0.2％β-巰基乙醇預(yù)處理10-20min，用0.6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2％蝸牛酶，在28-30℃酶解1-2h，原生質(zhì)體形成率達(dá)到90％-96％。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的白腐真菌的原生質(zhì)體的制備方法，其特征在于在YEPD液體 培養(yǎng)基上培養(yǎng)16h的酵母菌，用0. 2% 13 -巰基乙醇預(yù)處理20min，用0. 6mol/LKCl做滲透 壓穩(wěn)定劑時，采用2%蝸牛酶，在3(TC酶解lh，原生質(zhì)體形成率達(dá)到90-96%。
全文摘要
一種酵母菌的原生質(zhì)體的制備方法，在YEPD液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)14-18h的酵母菌，用0.1％-0.2％β-巰基乙醇預(yù)處理10-20min，用0.6mol/LKCl做滲透壓穩(wěn)定劑時，采用2％蝸牛酶，在28-30℃酶解1-2h，原生質(zhì)體形成率達(dá)到90％-96％。本發(fā)明效果是采用本酵母菌的原生質(zhì)體制備方法制備工藝簡單，易操作。原生質(zhì)體的形成率可達(dá)90-96％。
文檔編號C12N1/16GK101712934SQ20091022848
公開日2010年5月26日 申請日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者廖偉, 范寰 申請人:天津市畜牧獸醫(yī)研究所