專利名稱：一種高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程中微生物育種的方法，特別涉及一種高木質(zhì)素降解力多功能
菌株的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
木質(zhì)素是植物細(xì)胞壁主要成分，畜禽消化道內(nèi)幾乎沒有降解木質(zhì)素的酶，食草動(dòng) 物靠消化道寄生的微生物能夠部分降解木質(zhì)素，但單胃動(dòng)物不具有這種能力。木質(zhì)素是動(dòng) 物消化植物性飼料的最大障礙，微生物發(fā)酵是克服這一難題的最理想方法。選育木質(zhì)素降 解率高，且在飼料上易于發(fā)酵的微生物菌株，是養(yǎng)殖業(yè)實(shí)現(xiàn)〃 節(jié)糧〃 的關(guān)鍵技術(shù)。白腐真菌 是降解木質(zhì)素最有效的微生物，也是經(jīng)常用于木質(zhì)素降解研究的模式菌株。但在自然狀態(tài) 下，由于白腐真菌的定植緩慢，很難形成優(yōu)勢(shì)種群，其要求的發(fā)酵條件較嚴(yán)格，為了選育出 更高木質(zhì)素降解力的變異菌株，加強(qiáng)木質(zhì)素的降解，提高其發(fā)酵性能，本項(xiàng)技術(shù)利用原生質(zhì) 體化學(xué)融合技術(shù)構(gòu)建具有白腐真菌高木質(zhì)素降解力且兼具酵母菌的發(fā)酵性能好、產(chǎn)酸能力 強(qiáng)、菌體蛋白質(zhì)含量高等特征的多功能新菌株。為顯著提高飼料的可消化性和利用率，減少 人畜爭糧的矛盾提供一種有效的技術(shù)支持。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建 方法，(也稱白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體化學(xué)融合方法)，使其原生質(zhì)體的融合率達(dá)到 5X10—6，構(gòu)建出兼具白腐真菌高木質(zhì)素降解力和酵母菌的發(fā)酵性能好、產(chǎn)酸能力強(qiáng)、菌體蛋 白質(zhì)含量高等特征的多功能新菌株。
本發(fā)明的技術(shù)方案是 —種高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法是分別取標(biāo)記后、濃度調(diào)至106個(gè)/ mL的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體各0. 5mL，以1 : 1混合，以p朋-9的25-40%的PEG6000 與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，26-32 °C融合10-40min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到 2-5X10—6。 所述的高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法，也稱之為白腐真菌和酵母菌的原 生質(zhì)體化學(xué)融合的方法，最佳工藝參數(shù)是 分別取濃度調(diào)至106個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0. 5mL，
1 : l混合，以pH8的30X的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，30。C融合
30min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到5X 10一6。 本發(fā)明效果是 1.融合方法簡單，易操作。 2.原生質(zhì)體的融合率達(dá)到10一6。 3.融合后的新菌種兼具白腐真菌高木質(zhì)素降解力和酵母菌的發(fā)酵性能好、產(chǎn)酸能 力強(qiáng)、菌體蛋白質(zhì)含量高等多功能特征。
具體實(shí)施例方式
白腐真菌與酵母菌的原生質(zhì)體化學(xué)融合方法提供了一種適合構(gòu)建出兼具白腐真 菌高木質(zhì)素降解力和酵母菌的發(fā)酵性能好、產(chǎn)酸能力強(qiáng)、菌體蛋白質(zhì)含量高等特征的多功 能新菌株的方法。
實(shí)例一 分別取濃度調(diào)至10s個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL， 1 : l混合，以pH6的25X的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，26。C融合 20min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到2X 10一6。
實(shí)例二 分別取濃度調(diào)至10s個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL， 1 : l混合，以pH9的30X的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，32。C融合 40min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到2. 7X 10—6。
實(shí)例三 分別取濃度調(diào)至10s個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL， 1 : l混合，以pH8的30X的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，30。C融合 30min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到5X 10一6。 本白腐真菌和酵母菌的原生質(zhì)體化學(xué)融合方法，操作簡單，融合率較高，可達(dá)10—6。
權(quán)利要求
一種高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法，其特征在于分別取濃度調(diào)至106個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL，以1∶1混合，以pH6-9的25-40％的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，26-32℃融合10-40min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到2-5×10-6。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法，其特征在于其白腐真菌和酵母菌的原生質(zhì)體化學(xué)融合的方法是分別取濃度調(diào)至10s個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL，1 : l混合，以pH8的30%的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，30。C融合30min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到5X10—6。
全文摘要
一種高木質(zhì)素降解力多功能菌株的構(gòu)建方法是分別取濃度調(diào)至106個(gè)/mL、標(biāo)記后的白腐真菌與酵母菌原生質(zhì)體液各0.5mL，以1∶1混合，以pH6-9的25-40％的PEG6000與20mmol/L CaCl2的混合溶液進(jìn)行助融，26-32℃融合10-40min，原生質(zhì)體融合率達(dá)到2-5×10-6。本發(fā)明效果是融合方法簡單，易操作。原生質(zhì)體的融合率達(dá)到10-6。融合后的新菌種兼具白腐真菌高木質(zhì)素降解力和酵母菌的發(fā)酵性能好、產(chǎn)酸能力強(qiáng)、菌體蛋白質(zhì)含量高等多功能特征。
文檔編號(hào)C12N15/04GK101712952SQ20091022848
公開日2010年5月26日 申請(qǐng)日期2009年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月18日
發(fā)明者廖偉, 范寰 申請(qǐng)人:天津市畜牧獸醫(yī)研究所