專利名稱：一種調(diào)控植物發(fā)育的蛋白及其編碼基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種調(diào)控植物發(fā)育的蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
理想的株型是水稻提高產(chǎn)量的決定因素。在水稻的理想株型中，半矮化和葉片直 立是兩個對增產(chǎn)非常有利的性狀(Wang Y and Li J， . 2008， Annu. Rev. PlantBiol. ， 59 : 253-279)。綠色革命就是通過改良水稻株型提高水稻產(chǎn)量的成功例證。近年的一些研究表 明葉片直立也是成就水稻高產(chǎn)株型的目標(biāo)之一。葉片直立可提高冠層光合速率，改善群體 下部光照，增加物質(zhì)生產(chǎn)量；同時增加冠層基部光量，增強根系活力，提高抗倒性；且利于 密植，提高單位土地面積上的凈光合速率。研究表明油菜素內(nèi)酯(BRs)影響著水稻的許多 重要農(nóng)藝性狀，如株高、葉片角度、分蘗角度、種子形態(tài)等(Yamamuro C et al. ，2000 Plant Cell 12 :1591-1605 ;HongZ et al. ，2005， Plant Cell 17 :2243-2254 ;Tanabe S et al.， 2005， Plant Celll7 :776-790)。尤其是最近對BRs突變體的研究表明通過密植具有直立 葉片的水稻品種可以達到增產(chǎn)的目的(Morinaka Y et al. ， 2006， Plant Physiol 141: 924-931 ;Sakamoto T et al.，2006，Nat Biotechnol 24 :105-109)，所以人們推測水稻BRs 信號途徑的關(guān)鍵基因或BRs合成途徑的關(guān)鍵酶是改良水稻株型的潛在分子工具。
—個成功的例子是通過突變0sDWARF4基因，它編碼水稻BRs合成途徑的關(guān)鍵酶， 獲得了葉片直立而育性正常的水稻品種，密植這種水稻品種可以提高水稻產(chǎn)量(Sakamoto et al. ，2006)。這使人們對通過調(diào)控BRs途徑關(guān)鍵基因，改良水稻株型、提高水稻產(chǎn)量的策 略信心倍增。迄今為止，人們分離到的水稻BRs信號途徑的關(guān)鍵基因有0sBRI1， 0sBZRl和 0sBIN2，其中人們對0sBRI 1的突變體在水稻增產(chǎn)方面的應(yīng)用進行了詳細(xì)的研究。研究表明 由于OsBRIl是水稻的BRs受體，它在水稻BRs信號途徑的核心作用使得它突變后很難找到 弱突變體。人們在篩選了 100多個突變體后，找到了0sBRI1的弱突變體d61-7，雖然該突變 體密植可以增加水稻的生物量，但因為d61-7結(jié)小種子所以并沒有帶來產(chǎn)量的增加。
反義RNA技術(shù)是一個已經(jīng)發(fā)展比較成熟的研究基因功能的技術(shù)。它是將基因以反 向的方式插入到特定的啟動子下游，使其表達產(chǎn)物與內(nèi)源的mRNA反向互補，從而可以與內(nèi) 源mRNA相結(jié)合，抑制內(nèi)源基因的翻譯成蛋白質(zhì)。采用反義RNA技術(shù)可以使我們了解在該基 因的表達被抑制的情況下，水稻的生長、發(fā)育和株型建成以及產(chǎn)量等性狀。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種調(diào)控植物發(fā)育的蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。 本發(fā)明提供的蛋白(OsILIl)，來自粳稻日本晴(0ryza sativa L. ssp.
japonicacv. Nipponbare)，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì) (a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)將序列表中序列1所示蛋白質(zhì)經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失 和/或添加且與植物發(fā)育相關(guān)的由其衍生的蛋白質(zhì)；所述植物發(fā)育體現(xiàn)在葉夾角大小和/或種子大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度等性狀上。 為了使(a)中的OsILIl便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成
的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。 表1標(biāo)簽的序列 上述(b)中的OsILIl可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。 上述(b)中的OsILIl的編碼基因可通過將序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一個或 幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5'端和 /或3'端連上表l所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。
所述蛋白的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護范圍。 所述蛋白的編碼基因(OsILIl)可為如下1)或2)或3)或4)的DNA分子
1)其編碼序列是序列表中序列2所示的DNA分子；
2)序列表中序列3所示的DNA分子； 3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA分 子； 4)與1)或2)或3)限定的DNA序列具有90X以上同源性，且編碼相同功能蛋白 質(zhì)的DNA分子。 上述嚴(yán)格條件可為在6 X SSC， 0.5% SDS的溶液中，在65°C下雜交，然后用2 X SSC， 0. 1 % SDS和1 X SSC， 0. 1 % SDS各洗膜一次。 含有所述基因或其反義基因的重組表達載體、表達盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌均 屬于本發(fā)明的保護范圍。 可用現(xiàn)有的植物表達載體構(gòu)建含有OsILIl基因的重組表達載體。
所述植物表達載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。所述植 物表達載體還可包含外源基因的3'端非翻譯區(qū)域，即包含聚腺苷酸信號和任何其它參與 mRNA加工或基因表達的DNA片段。所述聚腺苷酸信號可引導(dǎo)聚腺苷酸加入到mRNA前體的 3'端，如農(nóng)桿菌冠癭瘤誘導(dǎo)(Ti)質(zhì)?；?如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆 貯存蛋白基因)3'端轉(zhuǎn)錄的非翻譯區(qū)均具有類似功能。 使用OsILIl構(gòu)建重組植物表達載體時，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前可加上任何一種
5增強型啟動子或組成型啟動子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動子、玉米的泛素啟動子 (Ubiquitin)，它們可單獨使用或與其它植物啟動子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu) 建植物表達載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉(zhuǎn)錄增強子，這些增強子區(qū)域可以 是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整 個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可 以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。 為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植物進行鑒定及篩選，可對所用植物表達載體進行
加工，如加入可在植物中表達的編碼可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、
螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標(biāo)記物(慶大霉素標(biāo)記物、卡那霉素標(biāo)記物等)或是
抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因(如抗除莠劑基因)等。從轉(zhuǎn)基因植物的安全性考慮，可不加任何選
擇性標(biāo)記基因，直接以逆境篩選轉(zhuǎn)化植株。 所述重組表達載體具體可為如下(I)或(II): (I)將序列表的序列3所示DNA分子插入質(zhì)粒pSN1301的多克隆位點得到的含有 所述基因的重組表達載體； (II)將序列表的序列3所示基因的反義基因插入質(zhì)粒pSN1301的多克隆位點得到 的含有所述基因的反義基因的重組表達載體。 所述質(zhì)粒pSN1301是將質(zhì)粒pCAMBIA1301的EcoRI和HindIII酶切位點間插 入35S-Noster序列得到的；所述35S-Noster序列是用限制性內(nèi)切酶EcoR I部分酶切和 HindIII完全酶切質(zhì)粒pUC19-35S-Noster得到的；所述質(zhì)粒pUC19-35S-Noster是將質(zhì) 粒pUC19-Noster的HindiII和BamHI酶切位點間插入35S啟動子片段得到的；所述35S 啟動子片段是用限制性內(nèi)切酶Hindi 11和BamHI雙酶切質(zhì)粒pBI221得到的；所述質(zhì)粒 pUC19-Noster是將質(zhì)粒pUC19的Sac I和EcoR I酶切位點間插入Noster poly A終止序 列得到的；所述Noster poly A終止序列是用限制性內(nèi)切酶Sac I和EcoR I雙酶切質(zhì)粒 pBI 221得到的。 本發(fā)明還保護一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將所述基因或其反義基因?qū)肽康?植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物為與所述目的植物相比葉夾角大小和/或種子 大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度改變的轉(zhuǎn)基因植物。
利用任何一種可以引導(dǎo)外源基因在植物中表達的載體，將本發(fā)明所提供的OsILIl 基因或其反義基因?qū)胫参锛?xì)胞，可獲得葉夾角改變的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系及轉(zhuǎn)基因植株。攜帶 有OsILIl基因或其反義基因的表達載體可通過使用Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接 DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞或組織，并將轉(zhuǎn)化的 植物組織培育成植株。被轉(zhuǎn)化的植物宿主可為禾本科植物，如水稻(如日本晴水稻)，也可 為擬南芥，如Columbia擬南芥。 本發(fā)明還保護一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將所述基因或其反義基因?qū)肽康?植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物為與目的植物相比種子大小(長度和/或重量) 改變的轉(zhuǎn)基因植物。 本發(fā)明還保護一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將所述基因或其反義基因?qū)肽康?植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物為與目的植物相比細(xì)胞長度改變的轉(zhuǎn)基因植物。
以上任一所述方法中，具體可將含有所述基因的重組表達載體或含有所述基因的反義基因的重組表達載體導(dǎo)入目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物。 當(dāng)培育葉夾角小于目的植物的轉(zhuǎn)基因植物時；所述方法是將(II)所述重組表達 載體導(dǎo)入目的植物中，得到葉夾角變小的轉(zhuǎn)基因植物。當(dāng)培育葉夾角大于目的植物的轉(zhuǎn)基 因植物時；所述方法是將(I)所述重組表達載體導(dǎo)入目的植物中，得到葉夾角變大的轉(zhuǎn)基 因植物。 當(dāng)培育細(xì)胞長度小于目的植物的轉(zhuǎn)基因植物時；所述方法是將(II)所述重組表 達載體導(dǎo)入目的植物中，得到細(xì)胞長度變小的轉(zhuǎn)基因植物。當(dāng)培育細(xì)胞長度大于目的植物 的轉(zhuǎn)基因植物時；所述方法是將(I)所述重組表達載體導(dǎo)入目的植物中，得到細(xì)胞長度變 大的轉(zhuǎn)基因植物。 當(dāng)培育種子長度小于目的植物的轉(zhuǎn)基因植物時；所述方法是將(II)所述重組表 達載體導(dǎo)入目的植物中，得到種子變小的轉(zhuǎn)基因植物。當(dāng)培育種子大于目的植物的轉(zhuǎn)基因 植物時；所述方法是將(I)所述重組表達載體導(dǎo)入目的植物中，得到種子變大的轉(zhuǎn)基因植 物。 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一個新蛋白OsILIl及其編碼基因OsILIl，并獲得了含有該編碼 基因或其反義基因的重組表達載體，用重組載體轉(zhuǎn)化目的植物，可以得到葉夾角大小和/ 或種子大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度改變的轉(zhuǎn)基因植物。因此 OsILIl可以作為一種潛在的分子育種工具，改良植物株型，提高植物產(chǎn)量。


圖1為實施例1中ilil-D突變體植株和日本晴(WT)幼苗期的照片。 圖2為實施例1中ilil-D突變體植株和日本晴(WT)分蘗期的照片。 圖3為實施例1中種植于大田的揚花期的ilil-D和日本晴(WT)的旗葉、旗下第
一葉和旗下第二葉葉夾角測量數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果。 圖4為實施例1中ilil-D突變體植株和日本晴(WT)幼苗葉枕部位近軸面細(xì)胞掃 描電鏡的照片。 圖5為實施例1中ilil-D突變體植株和日本晴(WT)對外源施加表油菜素內(nèi)脂 敏感性的分析；A為ilil-D突變體植株和日本晴(WT)葉枕部位彎曲對表油菜素內(nèi)脂敏感 性的分析，其中橫坐標(biāo)軸表示24-印iBL的濃度(nM)，縱坐標(biāo)為水稻葉枕部位彎曲的角度 (° ) ;B為ilil-D突變體植株和日本晴(WT)胚芽鞘伸長對表油菜素內(nèi)脂敏感性的分析，其 中橫坐標(biāo)軸表示24-印iBL的濃度(nM)，縱坐標(biāo)為水稻胚芽鞘的長度(cm)。
圖6為實施例1中ilil-D突變體植株和日本晴(WT)中BRs的含量，其中實心方 形代表野生型水稻，實心圓形代表的是ilil-D突變體，數(shù)值代表野生型及ilil-D突變體內(nèi) BRs的含量(ng/g鮮重)。 圖7為實施例1中ilil-D突變體、日本晴(WT) 、 ilil-D突變體轉(zhuǎn)化RNAi載體的 轉(zhuǎn)基因陽性植株R2和R5的表型和OsILIl的表達量；A :陽性轉(zhuǎn)基因植株的表型；B :實時定
量PCR檢測OsILIl在轉(zhuǎn)基因植株中的相對表達量。 圖8為實施例1中實時定量PCR的方法檢測OsILIl在植物激素24-印iBL、2，4-D、 KT、 GA3處理3小時后的相對表達量。 圖9為實施例1中實時定量PCR的方法檢測用24-印iBL終濃度為1 y M的水溶液分別處理水稻日本晴幼苗15分鐘，30分鐘，45分鐘，60分鐘，120分鐘，360分鐘后，OsILIl
的相對表達量。 圖10為實施例1中實時定量PCR檢測野生型水稻日本晴的種子、穗、根、莖干、葉 片、葉枕及葉鞘部位中OsILIl的相對表達量。 圖11為實施例2中OsILIl過表達植株(0X-1和0X-2)和日本晴(WT)的表型和 OsILIl的表達量；A :轉(zhuǎn)基因植株的表型；B :實時定量PCR檢測OsILIl的相對表達量。
圖12為實施例3中OsILIl抑制表達植株(AS-5和AS-11)和日本晴(control) 的表型、葉枕部位和OsILIl的表達量；A :轉(zhuǎn)基因植株表型；B :葉夾角部位的放大圖；C :實 時定量PCR檢測OsILIl的相對表達量。 圖13為實施例3中顯微鏡下OsILIl抑制表達植株(AS-5)和日本晴(control) 的葉枕部位的細(xì)胞照片。 圖14為實施例4中OsILIl過表達植株(7#、8#和9#)和擬南芥Columbia (Col) 的表型。 圖15為實施例4中OsILIl過表達植株(7#、9#和11#)和擬南芥Columbia (Col)
種子播種6天后的表型和下胚軸長度統(tǒng)計；A :轉(zhuǎn)基因植株表型；B :下胚軸長度統(tǒng)計。
具體實施例方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購買得到的。 日本晴水稻中國科學(xué)院植物研究所；毛建軍，楊秀芬，曾洪梅，袁京京，邱德 文.水稻品種日本晴粳稻組培培養(yǎng)基的篩選及轉(zhuǎn)稻瘟菌蛋白激發(fā)子基因植株的獲得.《農(nóng) 業(yè)生物技術(shù)學(xué)報》，2008年16巻5期，824-830 ;原始來源不清。 Columbia擬南芥(擬南芥Columbia):中國科學(xué)院植物研究所；劉俊，蔡平鐘，馬 林，張志雄，向躍武，王閔霞，張志勇.冷相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子CBF2基因的克隆及其植物表達載體 的構(gòu)建 《西南農(nóng)業(yè)學(xué)報》，2009年22巻2期，428-432。 農(nóng)桿菌EHA105 :中國科學(xué)院植物研究所；肖媛，李落葉，徐孟亮，崔延春，夏新 界.根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻兩用不育系培矮64S遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.《農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研 究》.2009年30巻3期.364-368。
農(nóng)桿菌GV3101 :中國科學(xué)院植物研究所；鄭銀英，崔百明，常明進，彭明.轉(zhuǎn)擬南芥 ICE1基因增強煙草抗寒性的研究 《西北植物學(xué)報》 2009年29巻1期.75-79。
實施例中所用的培養(yǎng)基如下 NBD2 :N6鹽分和維生素，500mg/L水解酪蛋白，30g/L蔗糖，2mg/L 2，4-D，2.5g/L gelrite， pH 5. 8。NBD2-S1 :NBD2， 25mg/L潮霉素(Hygromycine) ， 600mg/L頭孢霉素，pH 5. 8。
NBD2-S2 :NBD2， 50mg/L潮霉素(Hygromycine) ， 300mg/L頭孢霉素，pH 5. 8。
AAM-AS :AAS鹽分和氨基酸，MS維生素，100mol/L乙酰丁香酮，pH 5. 2。
NBD2C :NBD2， 10g/L葡萄糖，100mol/L乙酰丁香酮，pH 5. 2。 分化培養(yǎng)基MS鹽分和維生素，300mg/L水解酪蛋白，50mg/L潮霉素，3mg/L6-BA，2. 5mg/L KT，O. 2mg/L ZT， pH 5. 8 生根壯苗培養(yǎng)基1/4MS鹽分，MS維生素，lmg/L多效唑，0. 5mg/L NAA，6. 5g/L瓊脂 粉，pH 5.8。 以下實施例中的基因表達量檢測結(jié)果，如無特殊說明，均是以野生型植株的目的
基因表達量為1，其它植株的目的基因表達量與野生型植株的目的基因表達量進行比較。 實施例1、 OsILIl的發(fā)現(xiàn) —、突變體植株ilil-D的獲得和形態(tài)觀察 1 、突變體植株i 1 i l-D的獲得 構(gòu)建日本晴水稻T-DNA插入突變體庫，從中發(fā)現(xiàn)了一個葉夾角明顯增大的突變體 植株ilil-D。 2、突變體植株ilil-D的形態(tài)觀察 對突變體植株ilil-D進行如下形態(tài)觀察。
(1)葉夾角 i 1 i l-D最重要的表型是在其各個生長時期，均表現(xiàn)為葉夾角明顯增大。在幼苗期， 突變體萌發(fā)后生長5天左右，在第二葉發(fā)育完全后就可觀察到第二葉葉夾角彎曲已超過90 度(見圖1)。在分蘗期，突變體的每個新生分蘗都表現(xiàn)為葉夾角明顯增大(見圖2)。
對種植于大田的揚花期的日本晴及ilil-D的旗葉、旗下第一葉和旗下第二葉葉 夾角進行測量，統(tǒng)計結(jié)果表明野生型旗葉、旗下第一葉和旗下第二葉葉夾角大小主要集中 在0-30°之間，而突變體的葉夾角則主要分布于90-150°之間(見圖3)。
(2)種子長度 分別檢測100粒日本晴種子和100粒ilil-D種子的長度。ilil-D種子的平均長 度為5. 3±0. 1，日本晴種子的平均長度為4. 8±0. 2，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明，與 日本晴相比，ilil-D種子變長。
(3)葉枕部位細(xì)胞的伸長 用掃描電鏡的方法對幼苗期的日本晴及ilil-D突變體葉枕部位近軸面的細(xì)胞形 態(tài)進行觀察，見圖4。結(jié)果表明，i 1 i l-D突變體葉枕部位近軸面的細(xì)胞比野生型日本晴相同 部位細(xì)胞的伸長更為明顯。 3、突變體植株ilil-D的子代的形態(tài)觀察 將ilil-D種子繁殖后，后代持續(xù)出現(xiàn)葉夾角增大的表型。這些結(jié)果表明ilil-D
葉夾角增大的表型在各個生長時期中都是穩(wěn)定的，并且表型是可穩(wěn)定遺傳的。
4、突變體植株ilil-D對油菜素內(nèi)脂(BRs)敏感性的分析 選取在黑暗下萌發(fā)一致的野生型及突變體植株ilil-D的種子繼續(xù)在黑暗下培養(yǎng) 8天，然后剪取第二葉夾角上下各一厘米左右的區(qū)段，分別浸泡在含有0、1、10、100、1000、 10000nM 24-印iBL(表油菜素內(nèi)脂，振泰園藝公司)的水溶液中，48小時后對葉夾角彎曲的 度數(shù)進行統(tǒng)計。結(jié)果表明在24-印iBL濃度l-100nM之間，突變體對于BR處理葉夾角增大 的幅度要比野生型強(見圖5A);進一步將野生型和ilil-D突變體的種子滅菌并在24小時 持續(xù)光照下萌發(fā)48小時后，選取萌發(fā)一致的種子分別移入含有0、 1、 10、 100、 1000、 10000nM 24-印iBL的1/2ms培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5天后對胚芽鞘的長度進行統(tǒng)計。結(jié)果表明，突變體在 24-印iBL處理下胚芽鞘的相對伸長程度要比野生型大，尤其在1000-10000nM的高濃度反應(yīng)更為明顯(見圖5B)。以上兩項生理試驗均表明ilil-D突變體對24-印iBL的敏感性增強。 5、 ilil-D突變體中內(nèi)源油菜素甾醇含量的測定 取生長2個月的野生型及突變體植株ilil-D地上部分通過氣相色譜_質(zhì)譜分析法(gas chromatography-mass spectrometry)測量了水稻內(nèi)源BRs各中間產(chǎn)物的含量。結(jié)果顯示雖然晚期C-6氧化途徑中的幾個中間產(chǎn)物如6-DeoxoCT、6-Deoxo3DT、6-DeoxoTY和6-DeoxoCS的含量在突變體中略有上升，但上升的幅度都不大，基本可以認(rèn)為是沒有顯著變化，而且水稻BRs合成途徑的終產(chǎn)物CS的含量并沒有發(fā)生變化(見圖6)，因此從這個結(jié)果可以看出ilil-D突變體的表型并不是由于體內(nèi)內(nèi)源BRs的含量改變而造成的，這個突變體并非是一個BRs合成相關(guān)突變體。
二、0sILIl的發(fā)現(xiàn) 根據(jù)插入的T-DNA載體序列設(shè)計引物，進行Tail-PCR擴增，然后將PCR產(chǎn)物回收，送至公司測序，再將測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLASTn比對。結(jié)果表明T-DNA插入于水稻4號染色體BAC克隆0sJNBa0063C所對應(yīng)的序列上。 用Real-time PCR的方法對T-DNA插入兩側(cè)各10kb的DNA片段在日本晴及ilil-D中的表達進行分析，結(jié)果表明其中一段DNA(序列2所示的DNA)在ilil-D突變體中上調(diào)了近20倍，因此推測可能是由于T-DNA上的35S啟動子插入在序列2所示的DNA附近，造成了序列2所示的DNA的過量表達，從而造成了 ilil-D突變體的表型。 將序列2自5'端第116位至第297位核苷酸構(gòu)建入RNAi載體中，轉(zhuǎn)化ilil-D，以期用RNA干涉的方法降低突變體中序列2所示的DNA的表達量。共獲得了 ll個株系，大部分轉(zhuǎn)基因陽性植株都恢復(fù)了野生型表型。隨機選擇轉(zhuǎn)基因陽性植株中的幾個株系進行進一步的鑒定，兩個株系R2和R5明顯恢復(fù)到了野生型的表型，經(jīng)檢測，序列2所示的DNA的在植株中表達量相對于ilil-D突變體明顯降低(見圖7)。結(jié)果表明，序列2所示的DNA與轉(zhuǎn)基因植株恢復(fù)野生型的程度密切相關(guān)。 以上結(jié)果表明ilil-D突變體的表型是由于T-DNA插入在序列2所示的DNA附近，
T-DNA上的35S啟動子驅(qū)動序列2所示的DNA過量表達造成的。序列表的序列2所示的DNA
編碼序列表的序列1所示的蛋白質(zhì)，根據(jù)表型將序列1所示的蛋白質(zhì)命名為OsILIl(Oraza
sativa increased leaf inclination_l)，將OsIUl的編碼基因命名為OsIUl。 三、0sILI1的功能鑒定 1、植物激素對OsILIl基因表達的調(diào)節(jié) 將水稻野生型日本晴幼苗分別浸泡在含有終濃度為10 ii M的24-印iBL(24-表油菜素內(nèi)脂，BR，購于振泰園藝公司)、10 ii M的2， 4-D、 100 y M的KT及100 y M的GA3水溶液中(水處理作為對照)，處理3小時后，提取RNA反轉(zhuǎn)錄，利用實時定量PCR的方法分析OsILIl的表達情況，結(jié)果表明OsILIl在用2，4-D和GA3處理后表達量都沒有明顯的變化，用KT處理后，表達量略有下調(diào)，而用BR處理后表達量明顯增強，這表明OsILIl基因表達上對BR的反應(yīng)是比較特異的(見圖8)。 進一步用24-印iBL終濃度為1 y M的水溶液分別處理水稻日本晴幼苗15分鐘，30分鐘，45分鐘，60分鐘，120分鐘，360分鐘，提取RNA反轉(zhuǎn)錄，利用實時定量PCR的方法分析OsILIl的表達情況，結(jié)果表明OsILIl在45分鐘至60分鐘表達量到達了一個峰值，在120分鐘后它的表達量逐漸下降，這表明OsILIl在短時間內(nèi)轉(zhuǎn)錄水平受BR誘導(dǎo)(見圖9)。
2、OsILI1基因表達模式的分析 分別取野生型水稻日本晴的種子、穗、根、莖干、葉片、葉枕及葉鞘部位提取RNA反轉(zhuǎn)錄，利用實時定量PCR的方法分析OsILIl的表達情況(以在種子中的表達量為l)，結(jié)果表明OsILIl在水稻根，葉片部位中表達量相對較低，而葉枕及葉鞘的表達量相對較高，其中以葉枕的相對表達量為最高。這表明OsILIl可能主要作用于水稻的葉枕部位，通過調(diào)節(jié)葉枕部位近軸向的細(xì)胞伸長來調(diào)節(jié)水稻的株型(見圖10)。
3、酵母雙雜交技術(shù)篩選與OsILIl相互作用的蛋白 將OsILIl的編碼序列(序列2)從cDNA文庫中擴增后，連入pBD_GAL4載體，然后將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)入酵母AH109,制作成感受態(tài)細(xì)胞后，共轉(zhuǎn)化水稻三葉期酵母雙雜交文庫。篩庫的效率為3X10s克隆/g DNA，總的篩庫量為3乂106克隆，能在-附8/-1卬/-1^11SD培養(yǎng)基上生長的克隆數(shù)為22個，而最后能在-HiS/-Trp/-LeU/-Ade SD培養(yǎng)基上生長的克隆數(shù)為10個。對這10個克隆進行測序分析，發(fā)現(xiàn)其中有5個屬于bHLH轉(zhuǎn)錄因子，其中的克隆16在篩選中出現(xiàn)了 3次，對這個克隆所對應(yīng)的蛋白序列進行保守域分析，發(fā)現(xiàn)它是一個典型的含有basicdomain的bHLH轉(zhuǎn)錄因子，將它命名為IBP1 (Os工LIl-binding hHLHprotein 1)。 實施例2、 OsILIl過表達水稻的獲得
—、重組表達載體的構(gòu)建
1、35S啟動子片段的獲得 用限制性內(nèi)切酶Hindi 11和BamHI對質(zhì)粒載體pBI221 (Clontech)進行雙酶切，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測后回收長度約為0. 8kb的35S啟動子片段。 2、用限制性內(nèi)切酶Sac I和EcoR I將Noster poly A終止序列從質(zhì)粒載體PBI221 (Clontech)上切下，連接到載體pUC19 (TaKaRa公司)的相應(yīng)位點中，得到重組載體，命名為pUC19-Noster。再用限制性內(nèi)切酶HindIII和BamHI雙酶切pUC19-Noster，瓊脂糖凝膠電泳檢測后，回收線性化的載體大片段，并將該回收片段與步驟1獲得的35S啟動子片段相連，得到重組載體。 3、用限制性內(nèi)切酶EcoR I部分酶切和Hindi 11完全酶切從步驟2構(gòu)建的重組載體切下包含35S和Noster的片段，將該片段克隆入質(zhì)粒載體pCAMBIA1301 (Center for theApplication of Molecular Biology to International Agriclture，www. cambia. org)多克隆位點的EcoR I和HindIII位點處，得到重組載體，命名為pSN1301。
4、提取日本晴水稻的gDNA，以gDNA為模板，進行PCR擴增制備OsILIl序列(序列3所示DNA) 。 PCR擴增的引物5' -CGGGATCCTCTAGCTATAAGCTACGCACACC-3，；5， -GGGGTACCAAAATACTCCAGTTCTGTTCAGCAGT-3'。將OsILIl的編碼序列連入pSN1301的BamHI和Kpnl酶切位點之間，得到含有OsILIl的重組表達載體。重組表達載體經(jīng)過測序檢驗正確。
二、 OsILIl過表達水稻的獲得 將步驟一構(gòu)建的重組表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105，用于轉(zhuǎn)化日本晴水稻，具體步驟如下 1、幼胚愈傷組織的誘導(dǎo) 水稻種子去殼后，浸泡在70%的乙醇中1分鐘，用力振搖后轉(zhuǎn)入無菌三角瓶，倒出
11廢液，再加入2%的次氯酸鈉溶液振蕩消毒60分鐘以上，倒出廢液，用無菌水沖洗2-3遍，然后用無菌濾紙吸干水分。在無菌條件下用手術(shù)刀和鑷子解剖幼胚，將幼胚直接轉(zhuǎn)入NBD2(2，4-D濃度為2mg/L)培養(yǎng)基平板中，于2『C暗培養(yǎng)，每2周繼代一次。
2、根癌農(nóng)桿菌的培養(yǎng) 從YEB固體培養(yǎng)基上挑取含有重組表達載體的農(nóng)桿菌單克隆接種到20ml含抗生素(50mg/L卡納霉素)的YEB液體培養(yǎng)基中，28。C搖菌培養(yǎng)至0D600為0. 6_0. 8。
3、共培養(yǎng)及篩選、分化 1)步驟2的農(nóng)桿菌菌液5000rpm離心10分鐘，在AAM-AS (AS濃度200M/L)液體培養(yǎng)基中重懸沉淀至濃度0D600為0. 6-0. 8。 2)挑選新鮮的胚性愈傷浸泡在步驟1)的農(nóng)桿菌菌懸液中20分鐘，用無菌濾紙吸干后轉(zhuǎn)移至NBD2C培養(yǎng)基上(在培養(yǎng)基表面鋪一張無菌濾紙)，25t:暗培養(yǎng)3天。
3)將共培養(yǎng)后的愈傷組織用含300mg/L頭孢霉素的無菌水洗滌4_5遍，無菌濾紙吸干后轉(zhuǎn)至NBD2-S1培養(yǎng)基上，篩選一代。4)兩周后，轉(zhuǎn)移至NBD2-S2培養(yǎng)基上篩選二代(2周/代)。 5)取出經(jīng)過3代篩選生長旺盛的抗性愈傷組織，轉(zhuǎn)移至預(yù)分化培養(yǎng)基上，在分化培養(yǎng)箱(12小時光周期，白天28t:，夜晚25t:)中培養(yǎng)7天；然后轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上，在分化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至產(chǎn)生再生苗。 6)再生的植株在生根壯苗培養(yǎng)基上生根壯苗。 7)待小苗長至10厘米左右時，打開容器封口膜，煉苗2-3天，然后將小苗移入人工氣候室栽培。 得到的近40株T。代轉(zhuǎn)基因水稻中，其中6株植株(其中兩株為0X-1和0X-2)重現(xiàn)了 ilil-D突變體的表型特征，葉夾角明顯增大。 用pSN1301代替重組表達載體，制備轉(zhuǎn)空載體T。代植株，方法同上。轉(zhuǎn)空載體T。代植株的表型與日本晴一致。 生長4-6周，日本晴、0X-1和0X-2的照片見圖IIA。用Real-time PCR方法檢測0X-1禾P 0X-2中OsILIl的表達情況(引物為ATGTCGAGCAGCCGGAGGTCG ;AAGCTCGGCGATCTGGTCCTC)，結(jié)果見圖IIB。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株的表型確實與OsILIl的高表達相對應(yīng)。 實施例3、 OsILIl抑制表達水稻的獲得
—、重組表達載體的構(gòu)建 提取日本晴水稻的gDNA，以gDNA為模板，進行PCR擴增制備OsILI 1序列(序列3所示DNA) 。 PCR擴增的引物如下: 5' -GGGGTACCTCTAGCTATAAGCTACGCACACC-3 ， ； 5 ，-CGGGATCCAAAATACTCCAGTTCTGTTCAGCAG-3'，將OsILIl的編碼序列反向連入實施例2制備的pSN1301的Kpnl和BamHI酶切位點之間，得到OsILIl反義載體(OsILIl-antisense)。反義載體經(jīng)過測序檢驗正確。
二、0sILI1抑制表達水稻的獲得 將步驟一構(gòu)建的反義載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105，用于轉(zhuǎn)化日本晴水稻，具體步驟同實施例2的步驟二。 用pSN1301代替重組表達載體，制備轉(zhuǎn)空載體T。代植株，方法同上。
獲得了 40余個0sILIl-AS轉(zhuǎn)基因株系，隨機選擇了其中的兩個系A(chǔ)S_5和AS-ll的T。代植株進行進一步的分析(用日本晴和轉(zhuǎn)空載體T。代植株作為對照)。
AS-5和AS-11植株表現(xiàn)為葉片直立，分蘗緊湊。分蘗期的日本晴、AS-5和AS-ll植株的照片見圖12A，葉枕部位的照片見圖12B，可見與野生型相比轉(zhuǎn)基因植株葉枕部位的彎曲度減小，葉片與葉鞘之間的夾角基本為180度。進一步用實時定量PCR的方法對揚花期的日本晴和AS-5和AS-ll中內(nèi)源OsILIl相對表達量進行分析(引物為ATGTCGAGCAGCCGGAGGTCG ;AAGCTCGGCGATCTGGTCCTC)，結(jié)果見圖12C，結(jié)果表明，在AS-5中OsILIl的表達量下調(diào)至野生型的40%左右，而AS-ll中OsILIl的表達量則下調(diào)至野生型的60X左右，這表明轉(zhuǎn)基因植株葉片直立的表型是與0sILIl表達量下降直接相關(guān)的。轉(zhuǎn)空載體T。代植株與日本晴表型相同。 綜合以上的結(jié)果，OsILIl的過量表達促使水稻葉夾角增大，而抑制OsILIl的表達
量后，會使水稻葉片直立，這表明OsILIl直接控制了水稻葉夾角的彎曲。 通過顯微鏡檢測揚花期的日本晴和AS-5植株的葉枕部位的細(xì)胞，照片見圖13。結(jié)
果表明，AS-5植株細(xì)胞顯著短于日本晴細(xì)胞。 實施例4、轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得 —、重組表達載體的構(gòu)建 提取日本晴水稻的gDNA，以gDNA為模板，進行PCR擴增制備OsILI 1序列(序列
3所示DNA)。 PCR擴增的引物如下5' CGGAATTCATGTCGAGCAGCCGGAGGTCG-3' ;5' -GCGTCGA
CCATGAGGAGGCTCCTGATGACT-3'。將OsILIl的編碼序列連入實施例2構(gòu)建的雙元表達載體
pSN1301的EcoRI和Sail酶切位點之間，得到含有OsILIl的重組表達載體。重組表達載體
經(jīng)過測序檢驗正確。 二、轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得 將步驟一構(gòu)建的重組表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101，用于轉(zhuǎn)化Columbia擬南芥，具體步驟如下 1)在YEB平板上挑取含有重組表達載體的農(nóng)桿菌單克隆，接種于10ml含抗生素(50mg/L卡那霉素)的YEB液體培養(yǎng)基中，28°C 、200rpm，振蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長晚期。
2)按1 : 50的比例轉(zhuǎn)接到50ml YEB培養(yǎng)基中，28°C 、200rpm，振蕩培養(yǎng)至0D600為O. 6左右。 3)5，000rpm離心15分鐘，收集菌體，重懸于滲透緩沖液(5 %蔗糖，0.02 %silwetL-77)，調(diào)0D600至0. 6左右。 4)取正在開花的擬南芥，剪去轉(zhuǎn)化前形成的果莢，然后將整個花序浸泡在步驟3)的菌懸液中15秒，使得農(nóng)桿菌很好的粘附在花序中進行轉(zhuǎn)化。 5)農(nóng)桿菌侵染后的擬南芥放于陰暗處保濕培養(yǎng)24小時，然后將擬南芥移到培養(yǎng)室中繼續(xù)正常培養(yǎng)，7-10天后再浸泡轉(zhuǎn)化一次。 6)收獲成熟的擬南芥種子，充分晾干后用10%次氯酸鈉消毒后，鋪在含有相應(yīng)抗
生素的1/2MS培養(yǎng)基上，篩選得到的抗性苗(1\代)移入土中繼續(xù)培養(yǎng)。 用pSN1301代替重組表達載體，制備轉(zhuǎn)空載體1\代植株，方法同上。 共得到了 20余個陽性轉(zhuǎn)基因株系，繼續(xù)將1\代陽性植株繁殖后，種子用潮霉素篩
選的方法確定純合體植株，并對分離出的純合體株系進行表型分析(用日本晴和轉(zhuǎn)空載體
13L代植株作為對照)。 生長三周的Columbia擬南芥、7號株系、8號株系和9號株系植株的照片見圖14?？梢钥吹?，7號，8號和9號株系植株的葉柄明顯伸長，彎曲。轉(zhuǎn)空載體T。代植株與Columbia擬南芥表型相同。 Columbia擬南芥、轉(zhuǎn)空載體植株、7號株系、9號株系和11號株系的種子播種于1/2MS培養(yǎng)基上，黑暗下生長6天后統(tǒng)計下胚軸的長度，結(jié)果見圖15。結(jié)果表明7號、9號、11號的下胚軸明顯比野生型長，轉(zhuǎn)空載體T。代植株與擬南芥Columbia表型相同。序列表〈110〉中國科學(xué)院植物研究所中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所華盛頓卡內(nèi)基研究院〈120〉 一種調(diào)控植物發(fā)育的蛋白及其編碼基因和應(yīng)用〈130〉CGGNARY92642〈160>3〈210>1〈211>104〈212>PRT〈213〉粳稻日本晴(0ryza sativa)〈400>1Met Ser SerSerArgArg SerArg SerArg ArgAla GlySer SerVal151015Pro Ser SerSerSerSer SerArg ThrSer lieSer GluAsp Ginlie202530Ala Glu LeuLeuSerLys LeuGin AlaLeu LeuPro GluSer GinAla354045Arg Asn GlyAlaHisArg GlySer AlaAla ArgVal LeuGin GluThr505560Cys Ser TyrlieArgSer LeuHis GinGlu Val Asp AsnLeu SerGlu65707580Thr Leu AlaGinLeuLeu AlaSer ProAsp ValThr SerAsp GinAla859095Ala Val lieArgSerLeu LeuMet100〈210>2〈211>315〈212>DNA〈213〉粳稻日本晴(0ryza sativa)〈400>2atgtcgagca gccggaggtc gcgctcacgg cgagccggga gctcggtgcc:gtcgtcgtcg
tcgtcgtcgaggacgtcgatctcggaggaccagatcgccgagcttctctccaagcttcag120gccctgctcccggagtctcaggctcgcaatggcgcccateggggctcggcggcg郷gtt180ttgC3gg卿cgtgcagcteC3tC3gg3gCctgcaccaggcctcagcgag240acgctcgctcagctgctcgcctcccccgacgtcaccagcg3CC3ggCggCcgtcatcagg300agcctcctcatgtga315〈210>3〈211>643〈212>DNA〈213〉粳稻日本晴(0ryza sativa)〈400>3tctegcteteagctecgcacacctegcttgctcttctegctcaacteagctettegtect60ateteagctegctegategctgcactgcaagtggttgt皿tttgcaaccatgtcgagrag120ccggaggtcgcgctcacggcgagccgggagctcggtgccgtcgtcgtcgtcgtcgtcgag180gacgtcgatctcggaggaccagatcgccgagcttctctcc皿gcttcaggccctgctccc240ggagtctcaggctcgcaatggcgcccategggteagcategcatcctttccatgtcgaac3003C朋CC3g3g3g3g3gCCCCgtegctegtgagctcacagccgcgtgtgcg360tetg朋tgcagggctcggcggcgagggttttgcaggagacgtgcagctecatcaggagcc420tgC3CC3gg3ggtggacaacCtC3gCg3g3cgctcgctcagctgctcgcctcccccgacg■tcaccagcgaccaggcggccgcctcctcatgtgaccgatcgccaccgacc540atgcatcteccgategctcggcgcatccgtggctggccgttegatcgagcatgcctgcgg600ctcaactectagcccctcctgCtg皿C3g3actggagtetttt64權(quán)利要求
一種蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的蛋白質(zhì)經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物發(fā)育相關(guān)的由其衍生的蛋白質(zhì)；所述植物發(fā)育體現(xiàn)在葉夾角大小和/或種子大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度性狀上。
2. 權(quán)利要求l所述蛋白的編碼基因。
3. 如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于所述蛋白的編碼基因為如下1)或2)或3) 或4)的DNA分子1) 其編碼序列是序列表中序列2所示的DNA分子；2) 序列表中序列3所示的DNA分子；3) 在嚴(yán)格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA分子；4) 與1)或2)或3)限定的DNA序列具有90X以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的 DNA分子。
4. 含有權(quán)利要求2或3所述基因或其反義基因的重組表達載體、表達盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系 或重組菌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體為如下(I) 或(II):(I) 將序列表的序列3所示DNA分子插入質(zhì)粒pSN1301的多克隆位點得到的含有權(quán)利 要求2或3所述基因的重組表達載體；(II) 將序列表的序列3所示基因的反義基因插入質(zhì)粒pSN1301的多克隆位點得到的含 有權(quán)利要求2或3所述基因的反義基因的重組表達載體；(I)或(II)中的所述質(zhì)粒pSN1301是將質(zhì)粒pCAMBIA1301的EcoRI和HindIII酶切位 點間插入35S-Noster序列得到的；所述35S-Noster序列是用限制性內(nèi)切酶EcoRI部分酶切和HindIII完全酶切質(zhì)粒 pUC19-35S-Noster得到的；所述質(zhì)粒pUC19-35S-Noster是將質(zhì)粒pUC19-Noster的HindiII和BamHI酶切位點間 插入35S啟動子片段得到的；所述35S啟動子片段是用限制性內(nèi)切酶HindiII和BamHI雙酶切質(zhì)粒pBI221得到的；所述質(zhì)粒pUC19-Noster是將質(zhì)粒pUC19的Sacl和EcoRI酶切位點間插入Nosterpoly A終止序列得到的；所述Noster poly A終止序列是用限制性內(nèi)切酶Sac I和EcoRI雙酶 切質(zhì)粒pBI 221得到的。
6. —種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將權(quán)利要求2或3所述基因或其反義基因?qū)肽康?植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物為如下(A)和/或(B)和/或(C)和/或(D)和 /或(E):(A) 與目的植物相比葉夾角大小改變的轉(zhuǎn)基因植物；(B) 與目的植物相比細(xì)胞長度改變的轉(zhuǎn)基因植物；(C) 與目的植物相比種子大小改變的轉(zhuǎn)基因植物；(D) 與目的植物相比葉柄長度改變的轉(zhuǎn)基因植物；(E) 與目的植物相比下胚軸長度改變的轉(zhuǎn)基因植物。
7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述方法中，是將含有所述基因的重組表達 載體或含有所述基因的反義基因的重組表達載體導(dǎo)入所述目的植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)基因植物的葉夾角小于所述目的植 物的葉夾角；所述方法是將權(quán)利要求5的(II)所述重組表達載體導(dǎo)入所述目的植物中，得 到葉夾角變小的轉(zhuǎn)基因植物。
9. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)基因植物的葉夾角大于所述目的植 物的葉夾角；所述方法是將權(quán)利要求5的(I)所述重組表達載體導(dǎo)入所述目的植物中，得到 葉夾角變大的轉(zhuǎn)基因植物。
10. 如權(quán)利要求6至9中任一所述的方法，其特征在于所述植物為水稻或擬南芥；所 述水稻為日本晴水稻；所述擬南芥為Columbia擬南芥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種調(diào)控植物發(fā)育的蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供的蛋白，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的蛋白質(zhì)經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物發(fā)育相關(guān)的由其衍生的蛋白質(zhì)；所述植物發(fā)育體現(xiàn)在葉夾角大小和/或種子大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度性狀上。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一個新蛋白OsILI1及其編碼基因OsILI1，并獲得了含有該編碼基因或其反義基因的重組表達載體，用重組表達載體轉(zhuǎn)化目的植物，可以得到葉夾角大小和/或種子大小和/或細(xì)胞長度和/或葉柄長度和/或下胚軸長度改變的轉(zhuǎn)基因植物。因此OsILI1可以作為一種潛在的分子育種工具，改良植物株型，提高植物產(chǎn)量。
文檔編號C12N15/82GK101781363SQ20091023779
公開日2010年7月21日 申請日期2009年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月19日
發(fā)明者吳金霞, 張麗穎, 朱佳瑛, 王志勇, 白明義, 種康, 路鐵剛 申請人:中國科學(xué)院植物研究所;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;華盛頓卡內(nèi)基研究院