專利名稱：一種菠蘿蜜多糖粗品及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品工程領(lǐng)域。具體而言，涉及從菠蘿蜜中提取的多糖粗品及其制備 方法。
背景技術(shù)：
隨著人民生活水平的提高，人們?cè)絹碓街匾曌约旱纳钯|(zhì)量，然而生活環(huán)境的日 益惡化使人們?nèi)找媸艿礁鞣N疾病的威脅，人們更加關(guān)注營(yíng)養(yǎng)保健，期待著從自然資源中尋 找具有增強(qiáng)免疫作用的天然食物及保健產(chǎn)品。多糖是生物體內(nèi)一類重要的大分子，隨著大量的研究人們發(fā)現(xiàn)一些多糖(如香菇 多糖、靈芝多糖、茯苓多糖等)具有很好的免疫調(diào)節(jié)作用，且無毒副作用，是一類具較大開 發(fā)價(jià)值的免疫調(diào)節(jié)劑。菠蘿蜜，又名木菠蘿、樹菠蘿，屬?？乒鹉緦俪＞G喬木(Artocarpus heterophyllusLam)，為海南主要農(nóng)作物之一，其果肉中含有較高含量的多糖，且具有較強(qiáng) 的增強(qiáng)免疫作用，與該多糖相關(guān)的食品領(lǐng)域開發(fā)應(yīng)用未曾見諸報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種菠蘿蜜多糖粗品及其制法，該粗多糖由均一分子量 的多糖成分組成，且該多糖結(jié)構(gòu)中由葡萄糖一種單糖組成。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，所述菠蘿蜜多糖粗品中的精制后的多糖占總多糖含量的 50-60%。除非特別指明，本申請(qǐng)中所示含量百分比均以重量百分比表示。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的菠蘿蜜多糖粗品的制備方法為(1)取菠蘿蜜粉末，加入10-30倍量水，100°C水浴回流提取1小時(shí)，取出3000rpm
離心，傾出上清液，再加入10-30倍量水，如此提取3次，合并個(gè)各次上清液。(2)將上清液水浴加熱濃縮至約原菠蘿蜜粉末重量的10倍，加入濃縮液1/5體積 的氯仿及氯仿1/5體積的正丁醇，劇烈震動(dòng)，靜置分層，除去下層有機(jī)溶劑及中間變性蛋白 質(zhì)層，保留水層，重復(fù)4-5次。(3)向水層中加入乙醇使醇濃度達(dá)到75%，置4°C下沉淀1小時(shí)，傾出上清液，再加 入乙醇使醇濃度達(dá)到75%，如此沉淀3次，將沉淀真空冷凍干燥，得到的粉末即為菠蘿蜜多 糖粗品。步驟(1)中菠蘿蜜粉末可通過將菠蘿蜜果肉剝離后低溫烘干粉碎制得。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，菠蘿蜜多糖粗品的得率為35-45%。還可向本發(fā)明的菠蘿蜜多糖粗品中添加適當(dāng)輔料或其它成分制成片劑、膠囊等各 種劑型的制劑。
因此，本發(fā)明還提供一種含有本發(fā)明的菠蘿蜜多糖粗品的組合物。本發(fā)明的菠蘿蜜多糖粗品也可單獨(dú)地或者與其他組分混合使用。本發(fā)明所制備的菠蘿蜜多糖粗品及其制劑可用于食品、保健食品、醫(yī)藥、和化妝品 等方面。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的菠蘿蜜多糖粗品無毒，且具有較為顯著的增強(qiáng)免疫作用。菠蘿蜜多糖粗品制備實(shí)例稱取30g菠蘿蜜粉末加蒸餾水300mL，沸水浴回流提取1小時(shí)，取出3000rpm離心， 傾出上清液，再加入300mL蒸餾水，如此提取3次，合并個(gè)各次上清液。將上清液水浴加熱濃 縮至約300mL，加入60mL氯仿及12mL正丁醇，劇烈震動(dòng)，靜置分層，除去下層有機(jī)溶劑及中 間變性蛋白質(zhì)層，保留水層，重復(fù)5次。向水層中加入乙醇使醇濃度達(dá)到75%，置4°C下沉 淀1小時(shí)，傾出上清液，沉淀加蒸餾水溶解，再加入乙醇使醇濃度達(dá)到75%，如此沉淀3次， 將沉淀冷凍真空干燥，得到的粉末即為本發(fā)明產(chǎn)物菠蘿蜜多糖粗品。菠蘿蜜多糖粗品組成分析實(shí)例(1)菠蘿蜜多糖粗品中多糖種類的分析(凝膠柱色譜法)取菠蘿蜜多糖粗品 0. 05g溶于水，上葡聚糖凝膠G-100柱，用蒸餾水洗脫，每5ml收集洗脫液一次，苯酚硫酸 法測(cè)定洗脫液中多糖含量，以洗脫體積為橫坐標(biāo)，多糖含量為縱坐標(biāo)作圖，結(jié)果為單一洗脫 峰，說明菠蘿蜜多糖分子量均一，即菠蘿蜜多糖由分子量均一的多糖成分組成。(2)組成多糖單糖成分的鑒別取菠蘿蜜多糖粗品0. 05g加lmol/L硫酸置具塞試 管中，100°C水浴下封管水解6小時(shí)，取出，用固體碳酸鋇中和至中性，離心，取上清液；取硅 膠G鋪板(CMC為黏合劑)，將上述上清液和單糖標(biāo)準(zhǔn)品樣品點(diǎn)樣，展開劑為正丁醇丙酮 水=4 5 1。薄層板展開后晾干，噴灑苯胺-鄰苯二甲酸顯色劑，置烘箱中110°C加熱 lOmin顯色，在紫外燈365nm下觀察，其斑點(diǎn)位置和比移值與葡萄糖一致，且只顯示一個(gè)葡 萄糖斑點(diǎn)，說明該菠蘿蜜多糖結(jié)構(gòu)中由葡萄糖一種單糖組成。菠蘿蜜多糖安全性及功能評(píng)價(jià)1.實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及藥品分析天平，灌胃器，丙酮，甲醇，4% Giemsa-磷酸緩沖液，菠蘿蜜多糖粗品，本實(shí)驗(yàn) 室自制。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康小鼠，體重18 22g(同次試驗(yàn)體重相差不超過4g)，雌雄各半。由長(zhǎng)沙市開 福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，許可證號(hào)SCXK (湘)2006-0001。動(dòng)物室溫度為20 24°C，相對(duì)濕度為60 70%。雞。3.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3. 1菠蘿蜜多糖粗品的急性毒性實(shí)驗(yàn)3. 1. 1菠蘿蜜多糖粗品LD5(1的測(cè)定在前期預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，取菠蘿蜜多糖，加適量CMC配制成藥液。取健康小鼠10 只，體重18 22g，雌雄各半。以藥液所能配制成的最大濃度(0. 167g/ml)，最大劑量 (0. 8ml/20g) 一次灌胃給藥，連續(xù)觀察7天，記錄小鼠有無異常反應(yīng)和死亡情況。小白鼠灌胃后，活動(dòng)自如，毛色光滑，飲食、二便均正常，連續(xù)觀察7天無明顯異常 反應(yīng)，亦無死亡。限于藥物的濃度與給藥體積不能再增大，不能測(cè)出其LD50，故進(jìn)行最大給
4藥量測(cè)定試驗(yàn)。3. 1. 2菠蘿蜜多糖粗品最大給藥量的測(cè)定取健康小鼠30只，根據(jù)性別、體重分層隨機(jī)分成兩組，受試物組20只，空白對(duì)照組 10只，雌雄各半。受試物組以菠蘿蜜多糖最大濃度(0. 167g/ml)、最大容量(0.8ml/20g) — 日內(nèi)連續(xù)灌胃2次，間隔4小時(shí)；空白對(duì)照組給予相應(yīng)的蒸餾水。連續(xù)觀察7天，記錄動(dòng)物 的情況。在第一次給藥后2h，個(gè)別小鼠出現(xiàn)大便濕軟，而有個(gè)別出現(xiàn)多尿現(xiàn)象，其他指標(biāo)均 無異常，也無1只小鼠死亡；在灌胃2次/日后，連續(xù)7天內(nèi)，給藥組小鼠一切觀察指標(biāo)正常， 未見明顯中毒癥狀，亦無小鼠死亡，實(shí)驗(yàn)前后小鼠平均體重略有增加(見表1)，與對(duì)照組小 鼠比較無明顯差異。表1小鼠經(jīng)口灌胃菠蘿蜜多糖粗品急性毒性試驗(yàn)的體重變化(n = 20，x士s)
組別給藥劑量實(shí)驗(yàn)前體重實(shí)驗(yàn)后體重死亡數(shù)樣品A組6. 68g/kg19. 7 士 0. 8623. 1 士 1. 120空白對(duì)照組19. 8 士 1. 0222. 9 士 2. 130本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菠蘿蜜多糖粗品的LD50值難以測(cè)出，故測(cè)其最大給藥量。以藥 物最大濃度及最大給藥體積，一日內(nèi)2次給小鼠灌胃給予菠蘿蜜多糖，七天內(nèi)小鼠未見明 顯的中毒癥狀，亦無一死亡。故測(cè)得其一日最大給藥量為13.36g/kg。3. 2對(duì)小鼠免疫器官胸腺和脾臟的影響取正常小白鼠30只，隨機(jī)分成3組，每組10只，雌雄各半，各組按劑量每天一次， 連續(xù)灌胃30天，稱重，頸椎脫白處死動(dòng)物，剖取脾臟和胸腺，并稱重，計(jì)算其臟器指數(shù)。脾指 數(shù)=脾重(mg)/體重(g)；胸腺指數(shù)=胸腺重(mg)/體重(g)。結(jié)果見表2。表2菠蘿蜜多糖粗品對(duì)小鼠免疫器官胸腺和脾臟的影響(n = 10，x士s) 注與空白對(duì)照組比較，*P< 0.05。由表2可見，與空白對(duì)照組比較，菠蘿蜜多糖粗品可明顯提高小鼠胸腺指數(shù)，(P < 0. 05)；對(duì)脾臟指數(shù)無明顯影響作用。3. 3對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響無菌操作下，自雞翼下靜脈采血，攪拌去除血纖維，加生理鹽水適量，用生理鹽水洗滌3次，前2次離心速度為1500rpm，離心5min，棄上清液和界面的白細(xì)胞層。最后再連 續(xù)2次離心(2000rpm，5min)直至紅細(xì)胞區(qū)值恒定，用生理鹽水配成體積分?jǐn)?shù)為20%的紅細(xì) 胞懸液。取小鼠30只，并隨機(jī)分為3組，雌雄各半，各組小鼠分別根據(jù)體重灌胃給藥，連續(xù) 30天，實(shí)驗(yàn)前一天，用剪毛剪將每只小鼠腹部同一部位毛去掉，于末次給藥后30min，腹腔 注射20%雞紅細(xì)胞懸液lmL。間隔30min，頸椎脫臼促死動(dòng)物，將其仰位固定鼠板上，正中 剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板lmin。然后吸出腹腔洗液lmL，平均分 滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移置37°C生化培養(yǎng)箱溫育30min。孵畢， 于生理鹽水中漂洗，以除去未粘片的細(xì)胞。晾干，以1 1 (ν/ν)丙酮甲醇溶液固定，用4% Giemsa-磷酸緩沖液染色3min，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞，每片計(jì)數(shù)100 個(gè)，按下式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間方差分析。結(jié)果見表2。表2菠蘿蜜多糖粗品對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響(η = 10，χ士s) 注與空白對(duì)照組比較*P < 0. 05，**P < 0. 01，_P < 0. 001由表2表明，與空白對(duì)照組比較，菠蘿蜜多糖粗品可顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 的吞噬百分率和吞噬指數(shù)(P < 0. 05，P < 0. 01)。菠蘿蜜多糖粗品(4. 5g/kg)可顯著增加小鼠胸腺的重量，提高小鼠胸腺指數(shù)，明 顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬功能。(P <0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示菠蘿蜜多糖 粗品對(duì)小鼠的免疫力具有一定的增強(qiáng)作用。
權(quán)利要求
一種菠蘿蜜多糖粗品，其特征在于，該粗多糖由單一多糖成分組成，且該多糖結(jié)構(gòu)中由葡萄糖一種單糖組成。
2.如權(quán)利要求1所述的菠蘿蜜多糖粗品，其特征在于，所述菠蘿蜜多糖粗品中精制后 的多糖占總多糖含量的50-60%。
3.一種含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的菠蘿蜜多糖粗品的組合物。
4.如權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，所述組合物為片劑、膠囊等各種劑型的制劑。
5.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的菠蘿蜜多糖粗品的制備方法，其特征在于所述方法包 括如下步驟(1)取菠蘿蜜粉末，加入10-30倍量水，100°C水浴回流提取1小時(shí)，取出3000rpm離心， 傾出上清液，再加入10-30倍量水，如此提取3次，合并個(gè)各次上清液。(2)將上清液水浴加熱濃縮至約原菠蘿蜜粉末重量的10倍，加入濃縮液1/5體積的 氯仿及氯仿1/5體積的正丁醇，劇烈震動(dòng)，靜置分層，除去下層有機(jī)溶劑及中間變性蛋白質(zhì) 層，保留水層，重復(fù)4-5次。(3)向水層中加入乙醇使醇濃度達(dá)到75%，置4°C下沉淀1小時(shí)，傾出上清液，再加入乙 醇使醇濃度達(dá)到75%，如此沉淀3次，將沉淀真空冷凍干燥，得到的粉末即為菠蘿蜜多糖粗PΡΠ O
6.如權(quán)利要求5，步驟(1)中菠蘿蜜粉末可通過將菠蘿蜜果肉剝離后低溫烘干粉碎制得。
7.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的菠蘿蜜多糖粗品用于制備增強(qiáng)免疫作用制劑的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有由葡萄糖單糖構(gòu)成的單一多糖成分的菠蘿蜜多糖粗品，及其制備方法和用途。
文檔編號(hào)A23L1/29GK101897399SQ20091030282
公開日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2009年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月1日
發(fā)明者張俊清 申請(qǐng)人:張俊清