專利名稱：：空氣中流感病毒采樣裝置及其病毒采集液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于病毒檢測領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種空氣中流感病毒采樣裝置及其病毒采集液
背景技術(shù)：
：病人是流感的主要傳播源，流感病毒主要潛伏在病人的鼻涕、痰和唾液中，流感病毒主要通過空氣飛沫和接觸傳播。流感病毒主要借助空氣傳播，患者通過咳嗽、打噴嚏、甚至大聲說話時(shí)都會隨唾液飛沫、塵埃例子等，將病毒擴(kuò)散到周圍的空氣中，隨空氣流動傳播?；颊咄ㄟ^呼吸吸入、眼睛結(jié)膜，或接觸過的物體表面附著的病毒再用手觸摸鼻子、眼睛、嘴，造成病毒感染。隨著社會的發(fā)展，不同國家、地區(qū)人們的交往越來越頻繁，因此飛機(jī)、火車、公交車、學(xué)校、車站、機(jī)場、銀行、醫(yī)院等人口密集封閉的場所已經(jīng)成為流感傳播的主要地方。公共場所病毒的檢測，可為流感的預(yù)防及采取應(yīng)急措施，提供極為關(guān)鍵的參考數(shù)據(jù)。但是流感病毒的檢測，由于受到空氣中樣品采集的制約，目前還是一個難題。市場上主要有以下幾類用于空氣中微生物的采集器1)慣性撞擊類自然沉降式采樣器，簡單易操作，但過于粗糙不能測定空氣中小粒子上的細(xì)菌；固體撞擊式采樣器，采樣粒譜范圍廣、效率高，存在壁損失造成的結(jié)果誤差；液體撞擊式采樣器，適于高濃度的空氣微生物采樣，采集的樣品可分別分析，不適于低溫和微生物濃度低時(shí)采樣；2)離心撞擊式采樣器結(jié)構(gòu)簡單，使用方便靈活，對微生物粒子的捕獲率高；3)過濾阻留類的采樣器，能在低溫條件下采樣、采集效率高，但難以保持穩(wěn)定的采氣量；靜電類采樣器，采集空氣樣本容量大，對小粒子捕獲率高、實(shí)用性強(qiáng)，其設(shè)備大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、使用維護(hù)不便；溫差迫降類，采樣糟采集的樣品可直接培養(yǎng)，對低濃度氣溶膠快速、簡單、粒子損傷小，但采氣量小，未在現(xiàn)場中獲得應(yīng)用；4)生物類采樣器除具有一般空氣微生物采樣器所具有的功能外，還能為進(jìn)入呼吸道的微生物粒子提供生長繁殖場所，但目前還無法推廣應(yīng)用。上述的采集器主要針對細(xì)菌類微生物設(shè)計(jì)，對病毒采集的效果較差。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種空氣中流感病毒采樣裝置及其病毒采集液，該裝置可快速檢、靈敏地檢測出空氣中可能存在的流感病毒。本發(fā)明包括裝有病毒采集液的病毒收集容器，其特征在于所述病毒收集容器上設(shè)有下端部伸至病毒采集液的外界氣體導(dǎo)入管，所述病毒收集容器上部經(jīng)一連接管與負(fù)壓源相連接以利病毒氣體的導(dǎo)入。本發(fā)明其特征在于所述病毒采集液是指PH為3.0-8.0的水溶液。本發(fā)明顯著優(yōu)點(diǎn)在于通過在液體體系中添加特異性病毒吸附納米粒子，可有效提高病毒的吸附效率。同時(shí)本發(fā)明能將采集的樣品分別分析，并適合測定單位體積中空氣中不同種類活微生物數(shù)量。圖l為本發(fā)明空氣中流感病毒采樣裝置。具體實(shí)施例方式本發(fā)明包括裝有病毒采集液1的病毒收集容器2，其特征在于所述病毒收集容器上設(shè)有下端部伸至病毒采集液的外界氣體導(dǎo)入管3，所述病毒收集容器上部經(jīng)一連接管4與負(fù)壓源5相連接以利病毒氣體的導(dǎo)入。上述導(dǎo)入管下端部連接有空氣分布器6，所述連接管上設(shè)有調(diào)節(jié)閥門7和氣體流量計(jì)8。本發(fā)明所述病毒采集液是指pH為3.0-8.0的水溶液。上述病毒采集液中添加的粒子復(fù)合如下任意條件a)如殼聚糖、聚酰胺等陽離子樹脂，其粒徑范圍在10nm-10mm;b)殼聚糖、聚酰胺、聚賴氨酸等陽離子高聚物，其分子量范圍在1000-100000Da。為能快速檢驗(yàn)室內(nèi)的空氣質(zhì)量，本發(fā)明開發(fā)出新型的流感病毒空氣采樣器，結(jié)合生物芯片或熒光定量PCR技術(shù)，可快速檢、靈敏地檢測出空氣中可能存在的流感病毒。該裝置主要由負(fù)壓吸氣裝置(手持式或真空泵)、空氣計(jì)量器、及病毒吸附液及吸附粒子組成。利用抽氣裝置，通過負(fù)壓吸附空氣，以每分鐘恒定氣流量，經(jīng)過液體采集區(qū)，在溶液和溶液內(nèi)的病毒特異性吸附粒子的吸附用下，使空氣中的病毒粒子收集在小體積的液體中。然后通過過濾或離心，收集液體中的粒子，用市售的RNA萃取試劑盒萃取病毒mRNA，然后采用國家標(biāo)準(zhǔn)或公認(rèn)的檢測技術(shù)(如熒光定量PCR、原位雜交、芯片技術(shù)等)檢測病毒量，病毒測定的拷貝數(shù)除以吸附的空氣體積，即檢測所得的單位空氣中的病毒數(shù)。以下的實(shí)施例是為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)視為限制本發(fā)明。1、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑分布為10-20nm的殼聚糖納米粒子，分別用O.Olmol/L的NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用O.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約501113的密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m勺。液體采集區(qū)的液體體積15ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.51113的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表l)。表l空氣中病毒粒子的采集結(jié)果采樣方法手持式抽氣真空泵pH筒3.020copy23copy7.023copy28copy9.026copy30copy注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。2、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑布為l.2mm的殼聚糖粒子，分別用O.01mol/L的Na0H和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用0.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約50m3的密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m3)。液體采集區(qū)的液體體積15ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.5m3的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表2)。表2空氣中病毒粒子的采集結(jié)果采樣方法pH手持式抽氣筒真空泵3.011copy15copy7.013copy18copy9.010copy17copy注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。53、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑分布為10-20nm的聚丙烯酰胺納米粒子，分別用0.01mol/L的NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用O.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約50m^勺密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m3)。液體采集區(qū)的液體體積15ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.51113的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表3)。表3空氣中病毒粒子的采集結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。4、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑布為l.2mm的聚丙烯酰胺粒子，分別用O.01mol/L的NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用O.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約50m3的密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m3)。液體采集區(qū)的液體體積15ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.5m3的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表4)。表4空氣中病毒粒子的采集結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>9.09copy11copy注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。5、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑分布為10-20nm的交聯(lián)Sigma售抗體的殼聚糖納米粒子，交聯(lián)度平均為10個抗體/個粒子，分別用O.01mol/L的NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用O.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約501113的密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m3)。液體采集區(qū)的液體體積15ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.51113的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表5)。表5空氣中病毒粒子的采集結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。6、液體采集區(qū)的液體添加lml粒徑布為l.2mm的交聯(lián)Sigma售抗體的殼聚糖粒子，交聯(lián)度平均約為30個抗體/個粒子，，分別用O.01mol/L的NaOH和HCl調(diào)節(jié)溶液的pH，進(jìn)行空氣中流感病毒的采集實(shí)驗(yàn)。將鼠肺適應(yīng)株甲型流感病毒經(jīng)雞胚復(fù)壯后，用O.lmol/L的磷酸鹽溶液配置成1000個病毒/ml配的溶液，然后向體積約501113的密閉空間中，用噴霧器在空氣中噴灑病毒霧狀液體，具體的病毒粒子數(shù)根據(jù)噴霧器中液體的減少量計(jì)算(空氣中的病毒粒子約為100個/m3)。液體采集區(qū)的液體體積30ml，高徑比為3:1，采用不同方式采集O.51113的流感病毒，采用Abi7300實(shí)時(shí)定量PCR及AbiRNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和流感分析試劑盒分析采集結(jié)果(表6)。表6空氣中病毒粒子的采集結(jié)果采樣方法手持式抽氣真空泵pH筒3.015copy20copy7.018copy26copy9.014copy19copy注抽氣筒的有效體積為0.002立方米。采樣方式噴霧后，立刻用采樣器分別在房間的四個角落和中間位置離地1.6m處同時(shí)取樣，然后計(jì)算平均值。l個病毒為l個copy。8權(quán)利要求1.一種空氣中流感病毒采樣裝置，包括裝有病毒采集液的病毒收集容器，其特征在于所述病毒收集容器上設(shè)有下端部伸至病毒采集液的外界氣體導(dǎo)入管，所述病毒收集容器上部經(jīng)一連接管與負(fù)壓源相連接以利病毒氣體的導(dǎo)入。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的空氣中流感病毒采樣裝置，其特征在于所述導(dǎo)入管下端部連接有空氣分布器，所述連接管上設(shè)有調(diào)節(jié)閥門和氣體流量計(jì)。3.如權(quán)利要求l中所述的一種病毒采集液，其特征在于所述病毒采集液是指pH為3.0-8.0的水溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種病毒采集液，其特征在于所述病毒采集液中添加的粒子復(fù)合如下任意條件a)如殼聚糖、聚酰胺等陽離子樹脂，其粒徑范圍在10nm-10mm;b)殼聚糖、聚酰胺、聚賴氨酸等陽離子高聚物，其分子量范圍在1000-100000Da。c)粒子上交聯(lián)有增加粒子對流感吸收強(qiáng)度的流感病毒血紅細(xì)胞凝集素抗體。全文摘要本發(fā)明涉及一種空氣中流感病毒采樣裝置，包括裝有病毒采集液的病毒收集容器，其特征在于所述病毒收集容器上設(shè)有下端部伸至病毒采集液的外界氣體導(dǎo)入管，所述病毒收集容器上部經(jīng)一連接管與負(fù)壓源相連接以利病毒氣體的導(dǎo)入。該裝置可快速檢、靈敏地檢測出空氣中可能存在的流感病毒。文檔編號C12M1/26GK101643698SQ200910304670公開日2010年2月10日申請日期2009年7月22日優(yōu)先權(quán)日2009年7月22日發(fā)明者春孟,航王,郭養(yǎng)浩申請人:福州大學(xué)