專(zhuān)利名稱(chēng)：硅膠膜型dna快速提取及保存試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及硅膠膜型DNA快速提取及保存試劑盒。
背景技術(shù)：
目前，從細(xì)菌或者體液中提取DNA的技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。 傳統(tǒng)的DNA提取是酚氯仿法，該方法廉價(jià)，應(yīng)用范圍廣，但是由于大量使用有機(jī)溶劑容易引起環(huán)境污染。利用樹(shù)脂、硅膠和硅膠膜吸附DNA特性而研發(fā)的DNA提取試劑盒，環(huán)境污染小，但是操作步驟繁瑣，需要裂解液裂解細(xì)胞后通過(guò)多步離心獲得純化的DNA，成本較高并且采用上述方法均不能長(zhǎng)期保存DNA。 DNA保存目前普遍采用的技術(shù)仍然是低溫貯藏，利用低溫抑制核酸內(nèi)切酶對(duì)DNA的降解。采用該方法需要低溫冰箱，保存條件要求高，同時(shí)也不利于DNA的運(yùn)輸。[0005] DNA的提取和保存主要有以下幾種途徑一 現(xiàn)場(chǎng)采集菌液或者體液，立即提取DNA并低溫保存。二 現(xiàn)場(chǎng)采集樣本，低溫凍存防止核酸酶降解，然后運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室提取DNA后低溫凍存。采用方法一的缺陷是采集現(xiàn)場(chǎng)需要離心機(jī)、超凈工作臺(tái)等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，對(duì)于野外采集樣本或者不具備實(shí)驗(yàn)室條件的場(chǎng)所無(wú)法使用該方法提取和保存DNA。采用方法二的缺陷是菌液或者體液低溫運(yùn)輸不方便，如果不需立即提取DNA，樣本必須一直低溫貯藏，成本較高。 因此設(shè)計(jì)一種既能快速提取DNA又能保存DNA的試劑盒非常必要。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是通過(guò)對(duì)硅膠膜進(jìn)行處理后，使樣本DNA直接吸附在硅膠膜上，同時(shí)抑制核酸內(nèi)切酶的活性，再通過(guò)洗脫液洗脫DNA，從而設(shè)計(jì)出一種可以快速?gòu)木夯蛘唧w液中獲得純化的DNA，又能長(zhǎng)期保存DNA的試劑盒。 本試劑盒所采用的技術(shù)方案是設(shè)計(jì)一種硅膠膜型DNA快速提取和保存試劑盒。試劑盒由預(yù)處理硅膠膜保存卡、75% _95%乙醇或異丙醇試劑瓶、超純水或10mmo1/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液試劑瓶組裝在一個(gè)盒子內(nèi)構(gòu)成。 所述預(yù)處理硅膠膜是將硅膠膜浸泡在ra為5. 0-7. 0，由50mmol/L-100mmol/LTris-HCL、15mmol/L-20mmol/L EDTA、1% -5% SDS、3_5mol/L異硫氰酸胍或鹽酸胍組成的裂解緩沖液中烘干后制備而成。 所述預(yù)處理硅膠膜保存卡是由一張潔凈紙片或塑料片上粘附預(yù)處理硅膠膜，由密封材料包裹構(gòu)成。 所述75 % -95 %乙醇或異丙醇試劑瓶由玻璃或塑料瓶?jī)?nèi)含75 % -95 %乙醇或異丙醇構(gòu)成。 所述超純水或10mmol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液試劑瓶由玻璃或塑料瓶?jī)?nèi)含超純水或10mmol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液構(gòu)成。 本實(shí)用新型的硅膠膜型DNA快速提取及保存試劑盒在保存DNA時(shí)，首先將菌液或者體液滴在預(yù)處理硅膠膜保存卡上，在硅膠膜上粘附的裂解緩沖液鹽分的作用之下細(xì)胞膜
破裂，DNA吸附在硅膠膜上。將保存卡包裹密封后，DNA可室溫長(zhǎng)期保存。 本實(shí)用新型的硅膠膜型DNA快速提取及保存試劑盒在提取DNA時(shí)，將上述吸附DNA
的硅膠膜從保存卡中取出，從75 %-95 %乙醇或異丙醇試劑瓶中吸取試劑洗滌硅膠膜上殘
留鹽分和細(xì)胞質(zhì)，再?gòu)某兯騦Ommol/L-2. 5mmol/L Tris-HCL溶液試劑瓶中吸取試劑將
DNA洗脫。 本試劑盒具有攜帶方便、成本低廉、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。
圖1本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖 圖2預(yù)處理硅膠膜保存卡的結(jié)構(gòu)示意圖
具體實(shí)施方式本硅膠膜型DNA快速提取及保存試劑盒實(shí)施例如圖1所示由預(yù)處理硅膠膜保存卡1、85%乙醇試劑瓶2、超純水試劑瓶3組裝在一個(gè)盒子4內(nèi)構(gòu)成。 預(yù)處理硅膠膜保存卡如圖2所示由一張卡片5上粘附兩張圓形預(yù)處理硅膠膜6，外部紙殼7密封構(gòu)成。用來(lái)保存預(yù)處理硅膠膜及吸附的DNA，避免外界環(huán)境對(duì)DNA的降解，外部紙殼可用于標(biāo)記樣本信息。 本試劑盒的使用方法步驟為(1)將硅膠膜保存卡取出，打開(kāi)外殼。(2)常規(guī)采樣。(3)將50ul菌液或體液樣本滴加在硅膠膜表面并晾干。(4)封閉外殼并在外殼上標(biāo)記樣本信息。該保存卡可在室溫環(huán)境下長(zhǎng)期保存DNA。 (5)打開(kāi)保存卡外殼，取下硅膠膜。(6)將硅膠膜轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，從85X乙醇試劑瓶中吸lml試劑加入離心管。(7)水平震蕩5min，吸棄管中溶液。(8)短暫離心后吸棄管底殘留溶液，在室溫空氣中干燥10min。 (9)從超純水試劑瓶中吸50ul試劑，滴加在管內(nèi)硅膠膜上，10分鐘后短暫離心，底部溶液含有純化的DNA可用于后續(xù)測(cè)序、PCR、酶切、轉(zhuǎn)化等反應(yīng)。
權(quán)利要求硅膠膜型DNA快速提取及保存試劑盒，其特征在于由預(yù)處理硅膠膜保存卡(1)、洗滌液試劑瓶(2)、DNA洗脫液試劑瓶(3)組裝在一個(gè)盒子(4)內(nèi)構(gòu)成。
2. 如權(quán)利要求1所述預(yù)處理硅膠膜保存卡，其特征在于由一張卡片(5)上粘附預(yù)處理 硅膠膜(6)，外部紙殼(7)密封構(gòu)成。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)了一種硅膠膜型DNA快速提取及保存DNA試劑盒，本試劑盒包括預(yù)處理硅膠膜保存卡、乙醇或異丙醇試劑瓶、超純水或低鹽溶液試劑瓶。預(yù)處理硅膠膜保存卡是由一張卡片上粘附預(yù)處理硅膠膜，由密封材料包裹構(gòu)成。將樣本滴加在預(yù)處理硅膠膜保存卡上，保存卡可長(zhǎng)期室溫保存DNA。通過(guò)洗脫液處理后吸附在硅膠膜上的DNA可釋放至溶液中獲得純化DNA。本試劑盒具有攜帶方便、成本低廉、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N15/10GK201512539SQ200920043078

公開(kāi)日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2009年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日
發(fā)明者林桂蘭 申請(qǐng)人:林桂蘭