專利名稱：病毒培養(yǎng)瓶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種病毒培養(yǎng)器皿，尤其涉及一種可以直接進(jìn)行離心操作和免疫鑒定的病毒培養(yǎng)瓶。
背景技術(shù)：
病毒性傳染病是當(dāng)今人類感染性疾病中的主要疾病。新近資料顯示，近30年新發(fā)現(xiàn)的傳染病中，已明確病原體的約有60%是由病毒引起的,而呼吸道疾病中約有50%由病毒引起，其中的典例就是SARS冠狀病毒和高致病性禽流感病毒。傳染病的明確診斷依賴于病原學(xué)檢查，當(dāng)前該領(lǐng)域的重點(diǎn)之一是建立快速而敏感的病原學(xué)診斷方法。病毒分離培養(yǎng)是唯一能夠獲得活病毒的方法，這不僅對(duì)臨床疾病的確定診斷有極為重要的價(jià)值，而且對(duì)開(kāi)展病毒學(xué)的后續(xù)研究如病毒的遺傳與變異的研究、致病機(jī)理的探索、藥物敏感性的檢測(cè)、相應(yīng)疫苗的研發(fā)等等都是不可缺少的前提條件。在國(guó)外,病毒培養(yǎng)也一直是新研發(fā)的免疫學(xué)方法和分子病毒學(xué)方法賴以比較與評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)。而病毒的培養(yǎng)又要以哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)為基礎(chǔ)。
目前常用的細(xì)胞培養(yǎng)器包括細(xì)胞培養(yǎng)皿(方瓶、平皿)，多孔細(xì)胞培養(yǎng)板和細(xì)胞培養(yǎng)管。培養(yǎng)皿呈長(zhǎng)方形、梯形或圓形，現(xiàn)有玻璃和塑料兩種質(zhì)地，瓶體透明，瓶壁厚薄均勻、平整，培養(yǎng)時(shí)平放，可供細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。此為病毒培養(yǎng)傳統(tǒng)的方法，以在顯微鏡下觀察CPE(細(xì)胞病變)為主。因?yàn)椴煌牟《居懈髯缘拿舾屑?xì)胞，所以培養(yǎng)不同的病毒需要不同的細(xì)胞和不同的培養(yǎng)基，細(xì)胞品種以及數(shù)量都十分巨大。加上細(xì)胞容易老化，需要不斷更新，造成前期準(zhǔn)備工作繁多。CPE出現(xiàn)所需的時(shí)間較長(zhǎng)(4-7天)，判斷CPE的主觀性很強(qiáng)，不能符合臨床診斷需要快速、重復(fù)性高的要求。而且CPE的出現(xiàn)僅提示病毒的存在，還需要從培養(yǎng)器皿中取出少量被病毒感染的細(xì)胞作進(jìn)一步分析(如免疫熒光、PCR),操作繁雜。多孔細(xì)胞培養(yǎng)板為病毒培養(yǎng)的改進(jìn)方法，也是以在顯微鏡下觀察CPE(細(xì)胞病變)為主。培養(yǎng)板可放離心機(jī)內(nèi)離心，使CPE出現(xiàn)時(shí)間提早2 - 4天。每一塊板可培養(yǎng)96孔細(xì)胞，可以一次接種多個(gè)標(biāo)本，減少了細(xì)胞培養(yǎng)的工作量。其缺點(diǎn)是l.由于樣品接種量少(通常是l 0 0微升)，造成檢測(cè)壽文感性有所下降；2。在操作過(guò)程中比較容易發(fā)生交叉污染；3。如果一次沒(méi)有足夠的標(biāo)本，會(huì)造成細(xì)胞和材料的浪費(fèi)。另夕卜，國(guó)內(nèi)暫時(shí)沒(méi)有同類產(chǎn)品，現(xiàn)有的都是進(jìn)口的，而且都是一次性使用，故成本很高。細(xì)胞培養(yǎng)管則有效地減少了細(xì)胞和培養(yǎng)基的用量，并克服了9 6孔培養(yǎng)板容易污染和浪費(fèi)的缺點(diǎn)。但是其結(jié)果判斷還是依靠CPE，客觀性差，故發(fā)現(xiàn)CPE后，還是需要取出少量細(xì)胞作進(jìn)一步分析。
因此，提供一種操作簡(jiǎn)單、不容易污染、縮短培養(yǎng)時(shí)間、提高檢測(cè)的敏感性、降低成本的細(xì)胞培養(yǎng)(病毒培養(yǎng))器具尤為迫切，這對(duì)于病毒性疾病的診斷、預(yù)防、研究都具有重大實(shí)際意義。
發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型提供一種操作簡(jiǎn)單、不容易污染、減少培養(yǎng)時(shí)間、又能增加檢測(cè)敏感性的病毒培養(yǎng)瓶。
本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶包括中空的瓶身、與瓶身活動(dòng)連接的瓶蓋和設(shè)置在瓶身中的細(xì)胞培養(yǎng)片。所述瓶身的底部為平底，所述細(xì)胞培養(yǎng)片可在瓶身中活動(dòng)，所述瓶蓋密封瓶身，即所述瓶身與瓶蓋共同圍成一個(gè)密閉空間。其中，所述細(xì)胞培養(yǎng)片為聚苯乙烯培養(yǎng)片或玻璃培養(yǎng)片，其形狀為圓形或多邊形。在本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例中，所述瓶身為圓柱形。優(yōu)選地，所細(xì)胞培養(yǎng)片為圓形，由優(yōu)質(zhì)透明玻璃制成，所述瓶身由優(yōu)質(zhì)透明玻璃制成。
所述瓶蓋包括握持部和與握持部相連接的插入部，所述插入部包括插入本體和密封翼，所述密封翼環(huán)繞插入本體并與插入本體密封連接。
其中，所述握持部為中空結(jié)構(gòu)。所述插入本體中設(shè)置有一個(gè)盲孔，其開(kāi)口端與握持部的中空部位相連通。所述密封翼設(shè)置有一片、兩片或多片。 優(yōu)選地，所述瓶蓋的握持部設(shè)置有防滑紋。
在本實(shí)用新型的 一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述瓶蓋的插入部本體為圓柱體， 所述盲孔設(shè)置在圓柱體的中央，所述瓶蓋的握持部和插入部一體成型，所述 瓶蓋由軟塑料制成。
本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶，其瓶身高約在4.0-4.8cm，外徑為約1.5-1.6cm， 內(nèi)徑為約1.3cm，優(yōu)選地，由優(yōu)質(zhì)透明玻璃制成，材料對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，并能抗 一定強(qiáng)度的震動(dòng)，不容易破碎，利于運(yùn)輸；細(xì)胞培養(yǎng)片為圓形或多邊形，其 可平放在瓶身內(nèi)，可貼在瓶底，細(xì)胞培養(yǎng)片可為光學(xué)透明的聚苯乙烯培養(yǎng)片 或玻璃培養(yǎng)片，其厚度約在0.1-0.16mm，優(yōu)選地由透明優(yōu)質(zhì)玻璃制成，沒(méi)有 自發(fā)熒光，抗一定強(qiáng)度的震動(dòng)，不容易破碎，利于運(yùn)輸，若細(xì)胞培養(yǎng)片用光 學(xué)透明的聚苯乙烯制成，需經(jīng)等離子微波技術(shù)(專利技術(shù)U.S. Patent No. 6,617,152)處理，使其表面結(jié)合更多的氧離子(02>OH)，從而使其在加 入培養(yǎng)基后，表面攜帶更多的負(fù)電荷和具有更好的親水性((Hudis, 1974; Amstein and Hartman, 1975; Ramsey et. al., 1984)，可為細(xì)胞生長(zhǎng)提供非 常好的表面；瓶蓋高約1.5-20.cm，瓶蓋最大外直徑與瓶身的內(nèi)徑相等或略大， 中空，由透明軟塑料制成，可透光，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，密封性好，蓋上瓶蓋后， 瓶身內(nèi)的液體絕對(duì)不會(huì)漏出。
本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶，設(shè)計(jì)為平底的瓶子，在瓶中加設(shè)有細(xì)胞培養(yǎng) 片，所述細(xì)胞培養(yǎng)片表面光滑平整，本實(shí)用新型的培養(yǎng)瓶培養(yǎng)病毒時(shí)，動(dòng)物 細(xì)胞接種在瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)片表面，用蓋子蓋緊，在適合的條件下進(jìn)行培養(yǎng)， 為了促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞，縮短培養(yǎng)時(shí)間，可直接把本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶 進(jìn)行離心操作。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)以后，可以直接把培養(yǎng)瓶放顯微鏡下觀察細(xì)胞病變。
本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶，設(shè)計(jì)為平底，又添加有平貼在平底的細(xì)胞培 養(yǎng)片，該結(jié)構(gòu)的培養(yǎng)瓶可直接進(jìn)行離心操作，促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞，減少培養(yǎng) 時(shí)間，每個(gè)瓶中可接種0.5ml樣品，保證了檢測(cè)的敏感性；每個(gè)培養(yǎng)瓶獨(dú)立使用，可以避免交叉污染；本實(shí)用新型的培養(yǎng)瓶其瓶蓋設(shè)計(jì)為帶有密封翼的插 入式，相對(duì)現(xiàn)有的螺旋包裹式蓋子的細(xì)胞管，新型的培養(yǎng)瓶既可以很容易地 密封瓶身，又可以省力地操作，減少了對(duì)細(xì)胞的損傷和其他意外的發(fā)生。利 用本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶進(jìn)行病毒培養(yǎng)，可以將病毒培養(yǎng)與免疫學(xué)鑒定結(jié) 合在一起進(jìn)行，簡(jiǎn)化了操作步驟，進(jìn)一步縮短檢驗(yàn)時(shí)間。本產(chǎn)品可回收利用， 減低污染，降低了成本。
下面將結(jié)合附圖，詳細(xì)介紹本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶。


圖1為本實(shí)用新型一個(gè)實(shí)施例中，病毒培養(yǎng)瓶的結(jié)構(gòu)示意圖2為本實(shí)用新型病毒培養(yǎng)瓶的瓶身的正面視圖3為圖2所示瓶身的立體圖4為本實(shí)用新型病毒培養(yǎng)瓶的細(xì)胞培養(yǎng)片的結(jié)構(gòu)示意圖； 圖5為本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例中，病毒培養(yǎng)瓶瓶蓋的正面視圖； 圖6為圖5所示瓶蓋的立體圖； 圖7為圖5所示意瓶蓋的俯視圖。
具體實(shí)施方式
如圖1所示，為本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例中，所述病毒培養(yǎng)瓶的正面視圖。 本實(shí)用用新型的病毒培養(yǎng)瓶包括中空的瓶身010、與瓶身活動(dòng)連接的瓶蓋030 和設(shè)置在瓶身中的細(xì)胞培養(yǎng)片020。如圖2和圖3所示，所述瓶身010的底部為 平底Oll,與底部011相對(duì)的另一端為瓶身010的開(kāi)口013,所述細(xì)胞培養(yǎng)片020 可在瓶身中活動(dòng)，所述瓶蓋密封瓶身。在本優(yōu)選實(shí)施例中，所述瓶身010為圓 柱形，瓶身內(nèi)也為圓柱形腔體；在其他實(shí)施例中，所述瓶身可為棱柱體，其 內(nèi)空腔可為圓柱體或棱柱體。如圖4所示，在本優(yōu)選實(shí)施例中，所述瓶身中的細(xì)胞培養(yǎng)片020為薄的玻 璃質(zhì)圓片，表面光滑平整，細(xì)胞可貼在所述細(xì)胞培養(yǎng)片020表面生長(zhǎng)。在本實(shí) 用新型的其他實(shí)施例中，所述細(xì)胞培養(yǎng)片020可設(shè)置為除了圓形以外的多邊形 其材質(zhì)還可以用聚苯乙烯。
圖5、圖6和圖7所示，所示為本實(shí)用新型的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，瓶蓋030 的結(jié)構(gòu)示意圖。所述瓶蓋030包括握持部031和插入部035,所述插入部035包 括插入部本體033和環(huán)繞所述插入部本體033的密封翼034。所述握持部031為 圓柱形，其內(nèi)部為中空結(jié)構(gòu)035。所述插入部本體033為圓柱形結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部 有一個(gè)盲孔036,所述盲孔036的開(kāi)口端與握持部031相連通，即握持部031的 中空部位與插入部本體中的盲孔相通，光線通過(guò)握持部031的中間可直接到達(dá) 插入部本體033中盲孔的底部，所述盲孔底部為平底結(jié)構(gòu)。所述瓶蓋030由透 明軟塑料制成，可一體成型，該種設(shè)計(jì)的瓶蓋，不用打開(kāi)瓶蓋，就可以直接 看到培養(yǎng)瓶瓶底。為了進(jìn)一步完善本實(shí)用新型的培養(yǎng)瓶，在所述瓶蓋的握持
部外表面還設(shè)置有防滑紋032。在本實(shí)用新型的其他實(shí)施例中，所述握持部031 和插入部035可獨(dú)立地設(shè)置為棱柱形或圓柱形，其內(nèi)部的空腔也可獨(dú)立地設(shè)置 為圓柱形或棱柱形狀。在本優(yōu)選實(shí)施例中，所述密封翼設(shè)置有2片。在其他實(shí) 施例中，所述密封翼可設(shè)置為一片，或多片。
以上所述僅為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本實(shí)用新型， 凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等， 均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求1、一種病毒培養(yǎng)瓶，其特征在于，包括中空的瓶身、與瓶身活動(dòng)連接的瓶蓋和設(shè)置在瓶身中的細(xì)胞培養(yǎng)片，所述瓶身的底部為平底，所述細(xì)胞培養(yǎng)片可在瓶身中活動(dòng)，所述瓶蓋密封瓶身。
2、 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述瓶身為圓柱形或棱柱形。
3、 如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)片為光學(xué)透 明的聚苯乙烯培養(yǎng)片或玻璃培養(yǎng)片，所述培養(yǎng)片的形狀為圓形或多邊形。
4、 如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)片為圓形， 所述瓶身由透明玻璃制成。
5、 如權(quán)利要求1或4所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述瓶蓋包括握持部 和與握持部相連接的插入部，所述插入部包括插入本體和密封翼，所述密封 翼環(huán)繞插入本體并與插入本體密封連接。
6、 如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述握持部為中空結(jié)構(gòu)。
7、 如權(quán)利要求6所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述插入本體中設(shè)置有一 個(gè)盲孔，其開(kāi)口端與握持部的中空部位相連通。
8、 如權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述密封翼設(shè)置有一片、 兩片或多片。
9、 如權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述瓶蓋的握持部設(shè)置有防滑紋。
10、如權(quán)利要求9所述的培養(yǎng)瓶，其特征在于，所述瓶蓋的插入部本體 為圓柱體，所述盲孔設(shè)置在圓柱體的中央，所述瓶蓋的握持部和插入部一體 成型，所述瓶蓋由透明軟塑料制成。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種病毒培養(yǎng)器皿，尤其涉及一種可以直接進(jìn)行離心操作的病毒培養(yǎng)瓶。包括中空的瓶身、與瓶身活動(dòng)連接的瓶蓋和設(shè)置在瓶身中的細(xì)胞培養(yǎng)片，所述瓶身的底部為平底，所述細(xì)胞培養(yǎng)片可在瓶身中活動(dòng)，所述瓶蓋密封瓶身。使用時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞接種在瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)片上，本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶可以進(jìn)行離心操作，促進(jìn)病毒進(jìn)入動(dòng)物細(xì)胞，縮短了培養(yǎng)時(shí)間。該培養(yǎng)瓶還可以直接放置在顯微鏡下觀察。本實(shí)用新型的病毒培養(yǎng)瓶可回收利用，節(jié)約成本，每個(gè)培養(yǎng)瓶單獨(dú)使用，避免交叉污染。
文檔編號(hào)C12M3/04GK201400687SQ200920053528

公開(kāi)日2010年2月10日 申請(qǐng)日期2009年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月27日
發(fā)明者榮 周, 楊子峰, 笙 秦, 莫自耀, 鐘南山, 陳敬賢 申請(qǐng)人:廣州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;廣州呼吸疾病研究所;呼吸疾病國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室