專利名稱：：用于治療、診斷和測(cè)試的涉及ms4a12之方法以及靶向ms4a12之試劑的制作方法用于治療、診斷和測(cè)試的涉及MS4A12之方法以及靶向MS4A12之試劑本發(fā)明涉及可用于治療、診斷和測(cè)試疾病狀態(tài)(特別是癌癥疾病)的方法和試劑。特別地，本發(fā)明涉及抑制和測(cè)定例如癌癥患者的贅生性細(xì)胞(neoplasticcell)中(特別是結(jié)腸癌細(xì)胞中)的MS4A12活性。盡管存在跨學(xué)科的方法并已充分應(yīng)用了經(jīng)典的治療方法，但癌癥仍是首要的死亡原因之一?；诳贵w的癌癥療法已被成功應(yīng)用于臨床，并在過(guò)去的幾十年里成為腫瘤學(xué)中最具前景的治療手段(Glennie等，DrugDiscov.Today8=503-10,2003)惡性血液病為基于單克隆抗體(mAb)的治療概念提供了成功的試驗(yàn)場(chǎng)。在這些疾病中，僅在特定造血細(xì)胞譜系中表達(dá)的抗原(例如CD20、CD22、CD25、CD33和CD52(Countouriotis等，StemCells20215-29,2002；DiIlman等，CancerPract.9:71_80，2001；Leget等，Curr.Opin.Oncol.10:548-51,1998))已被證實(shí)為有用的治療靶標(biāo)。其中最為突出的是抗CD20單克隆抗體，這是因?yàn)樗鼈儚氐赘淖兞肆馨土龌颊叩闹委煛Ｇ逗系目笴D20單克隆抗體利妥昔單抗(rituximab)在患有多次復(fù)發(fā)的惰性B細(xì)胞淋巴瘤患者中的應(yīng)答率達(dá)到約40%60%，并成為由美國(guó)食品與藥品管理局批準(zhǔn)的第一種治療癌癥的單克隆抗體(Leget等，Curr.Opin.Oncol.10=548-51,1998)。適用于CD20靶向治療的淋巴增殖性疾病譜仍在不斷擴(kuò)大(Leonard等，Hematology,Am.Soc.Hemato1.Educ.Program335-9,2005)。兩個(gè)關(guān)鍵特性有助于CD20作為抗體靶標(biāo)的臨床成功。第一，該靶標(biāo)提供了最佳的治療窗口，因?yàn)樗荁細(xì)胞譜系的高度選擇性分化標(biāo)志物。CD20的表達(dá)在任何其它正常細(xì)胞類型上或B細(xì)胞譜系之干細(xì)胞前體中均檢測(cè)不到(Cartron等，Blood104=2635-42,2004)。因此，不存在嚴(yán)重的劑量限制性毒性，并且正常的B淋巴細(xì)胞水平最終由靶標(biāo)陰性的干細(xì)胞所恢復(fù)。B細(xì)胞惡性病變(其通常表達(dá)這種分化抗原)可被成功治療。第二個(gè)特性是，與針對(duì)造血分化抗原的其它單克隆抗體相比，抗CD20抗體具有特別高的殺死細(xì)胞的能力(Cragg等，Blood101=1045-52,2003)0至少在體外，它們既介導(dǎo)補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)也介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。對(duì)細(xì)胞免疫效應(yīng)物和可溶性免疫效應(yīng)物的有效募集似乎與CD20分子特有的膜拓?fù)涮卣髅芮邢嚓P(guān)，這解釋了抗體/抗原復(fù)合物的高側(cè)向運(yùn)動(dòng)性以及靶表位與脂質(zhì)雙層之間的短距離(Cragg等，Blood101=1045-52,2003；Cragg等，Blood103:2738_43，2004Johnson等，Semin.Oncol.30:3_8，2003)。除了募集免疫效應(yīng)物以外，抗CD20單克隆抗體還可以在某些細(xì)胞系中介導(dǎo)生長(zhǎng)阻滯和凋亡(Deans等，Immunology107:176_82，2002；Shan等，Blood91:1644_52，1998；Shan等，CancerImmunol.Immunother.48:673_83,2000；Unruh等，Immunologyl16:223_32，2005)。直到最近確定⑶20是由B細(xì)胞受體活化之SOC內(nèi)流途徑(SOCentrypathway)的組分之前，尚不清楚抗CD20單克隆抗體干擾增殖和存活的機(jī)制。胞內(nèi)Ca2+是細(xì)胞功能的重要調(diào)節(jié)劑。通過(guò)生長(zhǎng)受體進(jìn)行的信號(hào)傳導(dǎo)導(dǎo)致Ca2+從細(xì)胞內(nèi)鈣池迅速釋放到細(xì)胞質(zhì)中。鈣池的消耗激活穿過(guò)質(zhì)膜的Ca2+內(nèi)流，再次補(bǔ)充空的鈣池并提供細(xì)胞質(zhì)中游離Ca2+濃度([Ca2+]c)的持續(xù)提高。這種Ca2+內(nèi)流被稱為“庫(kù)容性(capacitative)Ca2+內(nèi)流”或“鈣池操縱性Ca2+(store-operatedCa2+，S0C)內(nèi)流”，它對(duì)于調(diào)節(jié)針對(duì)受體介導(dǎo)之刺激的多種細(xì)胞應(yīng)答(包括存活和增殖)是必要的(Berridge，J.Physiol.499291-306,1997；Berridge等，Nature395645-8,1998；Berridge等，Nat.Rev.Mol.CellBiol.1:11_21，2000)。根據(jù)CD20在調(diào)節(jié)Ca2+信號(hào)傳導(dǎo)中的作用，已顯示Ca2+內(nèi)流對(duì)于利妥昔單抗誘導(dǎo)的抗增殖和凋亡作用是至關(guān)重要的(Shan等，CancerImmunol.Immunother.48673-83,2000；Ghetie等，Blood971392—98，2001；Hofmeister等，BloodCellsMol.Dis.26133-43，2000)。從抗CD20抗體學(xué)到的知識(shí)和血液疾病中發(fā)現(xiàn)的基本原理使得能夠設(shè)計(jì)出實(shí)體癌中的合理的單克隆抗體療法，這在醫(yī)療方面仍具有很高的需求。但是，尚無(wú)可用的針對(duì)實(shí)體瘤的具有類似效力的靶標(biāo)。本發(fā)明的目的是鑒定這樣的靶標(biāo)結(jié)構(gòu)并將其應(yīng)用于癌癥的治療、診斷和測(cè)試中。本發(fā)明的目的通過(guò)權(quán)利要求書中的主題來(lái)實(shí)現(xiàn)。用于發(fā)現(xiàn)可在結(jié)腸癌中用作對(duì)治療性抗體之靶標(biāo)的結(jié)腸上皮細(xì)胞分化基因的數(shù)據(jù)挖掘策略得到了MS4A12——⑶20的“近親”。本發(fā)明人顯示，MS4A12是參與SOC內(nèi)流的結(jié)腸細(xì)胞特異性分化基因，其在EGFR信號(hào)傳導(dǎo)中作為新的調(diào)節(jié)劑發(fā)揮功能。本發(fā)明人提供的數(shù)據(jù)為結(jié)腸上皮細(xì)胞的生理學(xué)特性和某些癌癥疾病(特別是結(jié)腸癌)的生物學(xué)特性提供了意想不到的啟示，并為此類癌癥疾病的治療提供了新靶標(biāo)。一方面，本發(fā)明提供了降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的試劑。優(yōu)選地，所述試劑特異性針對(duì)MS4A12。術(shù)語(yǔ)“特異性針對(duì)MS4A12的試劑”是指，相比于其降低或抑制另一基因產(chǎn)物的表達(dá)或活性來(lái)說(shuō)，該試劑以更高的程度降低或者抑制MS4A12的表達(dá)或活性。優(yōu)選地，與任何其它基因產(chǎn)物的表達(dá)或活性相比，本發(fā)明中降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑以至少1.2倍、至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或者至少1000倍的更高程度降低或者抑制MS4A12的表達(dá)或活性?！敖档突蛘咭种萍?xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的試劑”可以降低或者抑制MS4A12基因的轉(zhuǎn)錄，降低或者抑制MS4A12mRNA前體的加工(如剪接、聚腺苷化、加帽等)，降低MS4A12mRNA的半衰期，和/或降低或者抑制MS4A12mRNA翻譯成MS4A12蛋白質(zhì)。特別地，細(xì)胞中由MS4A12基因合成的MS4A12蛋白質(zhì)的量在所述降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的試劑存在下被降低?！敖档突蛘咭种萍?xì)胞中MS4A12之活性的試劑”可以降低或者抑制MS4A12的一種或多種活性。術(shù)語(yǔ)“MS4A12的活性”涉及細(xì)胞中MS4A12的任何活性。優(yōu)選地，MS4A12的活性與癌癥疾病(例如結(jié)腸癌和結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移)有關(guān)。特別地，它參與腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移(如結(jié)腸腫瘤或結(jié)腸腫瘤轉(zhuǎn)移)的形成、發(fā)展和/或維持。優(yōu)選地，MS4A12的活性選自提高或者產(chǎn)生細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、生存力、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移、趨化性和侵襲。在一些具體實(shí)施方案中，MS4A12的活性包括提高或者產(chǎn)生細(xì)胞中的鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流(Ca2+entry)。應(yīng)該理解，降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12表達(dá)也會(huì)導(dǎo)致如上所述的細(xì)胞中MS4A12活性的降低或者抑制。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，MS4A12的活性提高或者產(chǎn)生了細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性。根據(jù)本發(fā)明，“細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性”是指細(xì)胞在接觸EGF后表現(xiàn)出一種或多種應(yīng)答的能力。所述應(yīng)答可以是任何應(yīng)答，例如生化應(yīng)答，如分子(例如鈣離子)濃度的改變，特別是細(xì)胞內(nèi)Ca2+池的消耗或者鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流，或者分子修飾(例如蛋白質(zhì)的磷酸化、去磷酸化、糖基化或去糖基化或者核酸的甲基化或去甲基化)。此外，所述應(yīng)答可以是信號(hào)傳導(dǎo)活動(dòng)，例如信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活化或抑制(尤其是導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+池消耗或者導(dǎo)致鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流的活化)或者信號(hào)傳導(dǎo)分子(例如激素)的分泌。所述應(yīng)答的另一實(shí)例是在基因水平的應(yīng)答，例如基因表達(dá)的活化或抑制，例如致癌基因的活化或者腫瘤抑制基因的失活。此外，所述應(yīng)答可以是一種或多種細(xì)胞特征的改變，例如細(xì)胞形態(tài)的改變或者細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移、趨化性或侵襲的提高。優(yōu)選的EGF誘導(dǎo)的應(yīng)答有細(xì)胞中EGF誘導(dǎo)的生長(zhǎng)、EGF誘導(dǎo)的增殖、EGF誘導(dǎo)的細(xì)胞周期進(jìn)程、EGF誘導(dǎo)的遷移、EGF誘導(dǎo)的趨化性和EGF誘導(dǎo)的侵襲、及其組合。同樣，“應(yīng)答于EGF的細(xì)胞”是與EGF接觸時(shí)表現(xiàn)出上述任意應(yīng)答的細(xì)胞。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞表達(dá)MS4A12。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞還表達(dá)EGF受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明中降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑降低或者抑制人MS4A12(優(yōu)選具有SEQIDNO2之氨基酸序列的人MS4A12)的表達(dá)或活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑包含特異性靶向MS4A12基因之mRNA并導(dǎo)致其發(fā)生RNAi誘導(dǎo)之降解的siRNA，并優(yōu)選由所述siRNA組成，從而使得不產(chǎn)生MS4A12基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物或者產(chǎn)生量減少。優(yōu)選地，本發(fā)明的siRNA包含有義RNA鏈和反義RNA鏈，其中有義和反義RNA鏈形成RNA雙鏈體。優(yōu)選地，所述有義RNA鏈包含與編碼MS4A12的核酸(優(yōu)選編碼MS4A12的mRNA)中約19至約25個(gè)連續(xù)核苷酸的靶序列基本一致的核苷酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明的siRNA是分離的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的siRNA由兩個(gè)核酸片段組裝而成，其中一個(gè)片段包含所述siRNA分子的有義鏈，第二片段包含所述siRNA分子的反義鏈。在本發(fā)明siRNA的另一個(gè)實(shí)施方案中，形成RNA雙鏈體的有義和反義RNA鏈?zhǔn)枪矁r(jià)連接的，例如通過(guò)單鏈發(fā)夾來(lái)實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的siRNA優(yōu)選進(jìn)一步包含非核苷酸材料。在本發(fā)明siRNA的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述有義和反義RNA鏈針對(duì)核酸酶降解進(jìn)行了穩(wěn)定化處理。優(yōu)選地，本發(fā)明的siRNA進(jìn)一步包含3’突出端，所述3’突出端優(yōu)選包含1至約6個(gè)核苷酸，更優(yōu)選約2個(gè)核苷酸。在本發(fā)明siRNA的一個(gè)實(shí)施方案中，有義RNA鏈包含第一3’突出端，反義RNA鏈包含第二3’突出端，其中優(yōu)選地所述第一和第二3’突出端獨(dú)立地包含1至約6個(gè)核苷酸。更優(yōu)選地，所述第一3’突出端包含二核苷酸，所述第二3’突出端包含二核苷酸，優(yōu)選為二脫氧胸苷酸或二尿苷酸。在本發(fā)明siRNA的一個(gè)實(shí)施方案中，3’突出端針對(duì)核酸酶降解進(jìn)行了穩(wěn)定化處理。在本發(fā)明siRNA的一些具體實(shí)施方案中，所述靶序列具有SEQIDNO1中344-363位核苷酸的核苷酸序列或者SEQIDNO:1中247-266位核苷酸的核苷酸序列。因此，所述靶序列可以具有SEQIDNO3或者SEQIDNO6的核苷酸序列。在本發(fā)明siRNA的另一些具體實(shí)施方案中，有義RNA鏈具有SEQIDNO:4的序列并且反義RNA鏈具有SEQIDNO5的序列，或者有義RNA鏈具有SEQIDNO7的序列并且反義RNA鏈具有SEQIDNO8的序列。在另一實(shí)施方案中，所述試劑包括與編碼MS4A12的核酸選擇性雜交的反義核酸，并優(yōu)選由其組成。特別地，所述反義核酸與MS4A12基因和/或MS4A12mRNA特異性雜交并因此阻止或者降低MS4A12基因的轉(zhuǎn)錄和/或MS4A12mRNA的翻譯。優(yōu)選地，所述反義核酸與編碼MS4A12的核酸(優(yōu)選編碼MS4A12的基因或mRNA)中約20至約30個(gè)連續(xù)核苷酸的靶序列基本上互補(bǔ)。優(yōu)選地，本發(fā)明的反義核酸是分離的。所述靶序列可以定位于MS4A12基因或MS4A12mRNA的任何部分，只要能夠?qū)崿F(xiàn)期望的效果即可。例如，本發(fā)明的反義核酸可以與MS4A12基因的啟動(dòng)子或轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、MS4A12mRNA前體的剪接供體或接納體(acceptor)位點(diǎn)、MS4A12mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)或轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)或者M(jìn)S4A12編碼區(qū)進(jìn)行雜交。本發(fā)明的反義核酸優(yōu)選進(jìn)一步包含非核苷酸材料。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的反義核酸針對(duì)核酸酶降解進(jìn)行了穩(wěn)定化處理。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑包括特異性結(jié)合MS4A12的抗體，并優(yōu)選由其組成。通過(guò)與MS4A12結(jié)合，該抗體降低或者抑制MS4A12的活性。優(yōu)選地，所述抗體與MS4A12的胞外區(qū)(S卩，當(dāng)MS4A12由細(xì)胞表達(dá)時(shí)在細(xì)胞外可接觸的MS4A12區(qū)域)結(jié)合。此處的“細(xì)胞外可接觸的”是指試劑(例如抗體)在添加到細(xì)胞的胞外環(huán)境時(shí)可以與細(xì)胞外靶標(biāo)結(jié)合，優(yōu)選無(wú)需進(jìn)入或者穿越所述細(xì)胞的細(xì)胞膜。優(yōu)選地，所述抗體與人MS4A12的SEQIDNO2中113-126位氨基酸或182-201位氨基酸內(nèi)的區(qū)域或者與人MS4A12的衍生物、同工型、變體或同源物的相應(yīng)區(qū)域結(jié)合。本發(fā)明的抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體，優(yōu)選單克隆抗體。此外，本發(fā)明的抗體可以是嵌合抗體或人源化抗體或者抗體片段(例如抗體的F(ab')2、Fab、Fv或Fd片段)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑是能夠表達(dá)本發(fā)明的siRNA、反義核酸或者抗體的核酸分子(優(yōu)選重組核酸分子)。優(yōu)選地，所述核酸分子包含與用于表達(dá)本發(fā)明之siRNA、反義核酸或者抗體的核酸序列功能性連接的啟動(dòng)子，優(yōu)選誘導(dǎo)型或調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子。優(yōu)選地，所述核酸分子是載體，例如表達(dá)質(zhì)?；虿《据d體。病毒載體可選自腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和皰疹病毒載體。能夠表達(dá)siRNA的核酸分子可以是包含表達(dá)siRNA之有義RNA鏈和反義RNA鏈的核酸序列的單個(gè)載體，或者是兩個(gè)載體的組合(一個(gè)載體包含表達(dá)siRNA之有義RNA鏈的核酸序列，一個(gè)載體包含表達(dá)siRNA之反義RNA鏈的核酸序列)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸分子存在于宿主細(xì)胞中。優(yōu)選地，存在于宿主細(xì)胞中的核酸分子能夠表達(dá)本發(fā)明的抗體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子表達(dá)的抗體由宿主細(xì)胞分泌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑包含選自以下的化合物并優(yōu)選由其組成能夠降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的肽、蛋白質(zhì)、核酸和小分子化合物。例如，能夠降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的肽、蛋白質(zhì)、核酸和小分子化合物可以由本領(lǐng)域中已知的任何合適的篩選測(cè)定來(lái)鑒定?？梢栽诤Y選測(cè)定中使用不同的肽、蛋白質(zhì)、核酸和/或小分子化合物的文庫(kù)。所述文庫(kù)可由化學(xué)合成的化合物、天然化合物或由天然化合物衍生得到的化合物組成。合適的文庫(kù)是本領(lǐng)域已知的。例如，肽或蛋白質(zhì)文庫(kù)可以是包含將肽或蛋白質(zhì)展示于其表面之噬菌體的噬菌體展示文庫(kù)。所述篩選測(cè)定可包括一輪或多輪包含一個(gè)或多個(gè)選擇步驟的選擇?？舍槍?duì)與MS4A12結(jié)合、降低或抑制MS4A12的表達(dá)和/或降低或抑制MS4A12的活性來(lái)篩選文庫(kù)中的成員。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑是不同試劑的混合物。特別地，所述試劑可以是兩種或更多種上述siRNA的混合物、兩種或更多種上述反義核酸的混合物或者兩種或更多種上述抗體的混合物。此外，所述試劑可以是一種或多種上述siRNA和/或一種或多種上述反義核酸和/或一種或多種上述抗體的混合物。在一些具體的實(shí)施方案中，MS4A12mRNA或MS4A12基因包含選自以下的核酸序列(a)SEQIDNO1的核酸序列、其部分或衍生物，(b)嚴(yán)格條件下與(a)的核酸序列雜交的核酸序列，(c)與(a)或(b)的核酸具有簡(jiǎn)并性的核酸序列，(d)與(a)、(b)或(c)的核酸序列互補(bǔ)的核酸序列，和(e)編碼SEQIDNO:2之氨基酸序列、其部分、變體、同工型或同源物的核酸序列。此外，在一些具體實(shí)施方案中，MS4A12蛋白包含選自以下的氨基酸序列SEQIDNO:2、其部分、變體、同工型或同源物的氨基酸序列。本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑可用于治療疾病，其中降低或者抑制MS4A12的表達(dá)或活性對(duì)治療是有益的，尤其是癌癥和癌癥轉(zhuǎn)移(優(yōu)選結(jié)腸癌和結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移)。特別地，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑能夠降低或者抑制腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤侵襲和/或腫瘤轉(zhuǎn)移。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑能夠降低或抑制細(xì)胞中的鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流。此外，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑的組合物。優(yōu)選地，該組合物以有效降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的量和/或濃度包含本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑。該組合物可以僅包含一種本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑，或者包含本發(fā)明降低或抑制MS4A12之表達(dá)或活性的不同試劑的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物進(jìn)一步包含降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑?！敖档突蛘咭种萍?xì)胞中EGF受體之表達(dá)的試劑”可以降低或者抑制EGF受體基因的轉(zhuǎn)錄，降低或者抑制EGF受體mRNA前體的加工(如剪接、聚腺苷化、加帽等)，降低EGF受體mRNA的半衰期，和/或降低或抑制EGF受體從mRNA翻譯成蛋白質(zhì)。特別地，細(xì)胞中由EGF受體基因合成的EGF受體蛋白的量在所述降低或抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)的試劑存在下被降低?！敖档突蛘咭种萍?xì)胞中EGF受體之活性的試劑”可以降低或者抑制EGF受體的一種或多種活性。術(shù)語(yǔ)“EGF受體的活性”是指具有EGF受體的細(xì)胞在EGF受體活化(特別是通過(guò)EGF結(jié)合EGF受體來(lái)實(shí)現(xiàn))后表現(xiàn)出的任何應(yīng)答。但是，如下文進(jìn)一步解釋地，本發(fā)明細(xì)胞中EGF受體的活性不僅可以通過(guò)干擾EGF受體得以降低或者抑制，還可以通過(guò)干擾參與EGF信號(hào)傳導(dǎo)的任何組分得以降低或者抑制。優(yōu)選地，EGF受體的活性涉及腫瘤或腫瘤轉(zhuǎn)移(如結(jié)腸腫瘤或結(jié)腸腫瘤轉(zhuǎn)移)的形成、發(fā)展和/或維持。優(yōu)選地，EGF受體的活性選自提高或者促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、生存力、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移、趨化性和侵襲。降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之活性的試劑可以通過(guò)直接與EGF受體相互作用來(lái)降低或者抑制所述活性。例如，所述試劑可以封閉EGF受體的配體結(jié)合位點(diǎn)從而阻止EGF與受體結(jié)合。特異性針對(duì)EGF受體的抗體、拮抗性EGF模擬物或者能夠與配體結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合的小分子化合物都可適用于這個(gè)方面。此外，所述試劑可以阻斷EGF受體的二聚化。這樣的試劑的實(shí)例是EGF受體單體的無(wú)活性變體(特別是其顯性負(fù)調(diào)控變體)以及與EGF受體單體之二聚化作用表面結(jié)合的抗體或小分子化合物。此外，所述試劑可以封閉EGF受體的蛋白酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，即，所述試劑可以是酪氨酸激酶抑制劑，優(yōu)選小分子酪氨酸激酶抑制劑。此外，所述試劑可以阻斷EGF受體與其下游相互作用配偶體(如PLCy)的相互作用，例如通過(guò)結(jié)合EGF受體與所述相互作用配偶體結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體活性的試劑不直接與EGF受體相互作用。特別地，所述試劑可以結(jié)合EGF從而阻止EGF與受體結(jié)合、阻止EGF的產(chǎn)生或分泌、或者降解EGF。特異性針對(duì)EGF的抗體是這種試劑的一個(gè)實(shí)例。此外，所述試劑可以降低或者抑制一種或多種(優(yōu)選所有)由EGF受體誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，特別是導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+池消耗和/或鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。例如，所述試劑可以降低或者抑制參與所述信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一種或多種蛋白質(zhì)(例如PLCγ)的表達(dá)或活性。這些試劑的實(shí)例是降低或者抑制所述蛋白質(zhì)表達(dá)的siRNA和反義核酸、降低或者抑制所述蛋白質(zhì)之一種或多種活性(例如，酶活性或者與相互作用配偶體結(jié)合的能力)的抗體或小分子化合物。應(yīng)該理解，降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體的表達(dá)還會(huì)導(dǎo)致如上所述地所述細(xì)胞中EGF受體活性的降低或者抑制。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，降低或者抑制EGF受體之表達(dá)或活性的試劑降低或者抑制多于一種不同的EGF受體(優(yōu)選細(xì)胞中存在的所有不同的EGF受體)的表達(dá)或活性。EGF受體優(yōu)選人EGF受體，例如人EGFR、人ErbB-I或人HER1。但是，EGF受體也可以是這些人EGF受體的種間同源物。優(yōu)選地，降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑選自⑴特異性靶向EGF受體mRNA的siRNA；(ii)能夠與編碼EGF受體之核酸特異性雜交的反義核酸；(iii)能夠與EGF受體選擇性結(jié)合的抗體；(iv)能夠表達(dá)⑴的siRNA、(ii)的反義核酸或者(iii)的抗體的核酸分子；和(ν)特異性針對(duì)EGF受體的酪氨酸激酶抑制劑。降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑的具體實(shí)例包括以下抗體西妥昔單抗(cetuximab)、帕木單抗(panitumumab)、扎魯單抗(zalutumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)和馬妥珠單抗(matuzumab)以及酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼(gefitinib)、埃羅替尼(erlotinib)和拉帕替尼(Iapatinib)(例如Sridhar等，LancetOncol.4397-406，2003)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選可用于治療疾病，其中所述疾病中降低或者抑制MS4A12的表達(dá)或活性和/或降低或者抑制EGF受體的表達(dá)或活性對(duì)治療特別是癌癥和癌癥轉(zhuǎn)移(優(yōu)選結(jié)腸癌和結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移)有益。本發(fā)明的藥物組合物可以包含藥物相容性載體。此外，本發(fā)明涉及用于降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法，其包括將所述細(xì)胞與本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑接觸。優(yōu)選地，所述細(xì)胞與有效降低或者抑制所述細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的量和/或濃度的本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑接觸。在一個(gè)實(shí)施方案中，與細(xì)胞的接觸是通過(guò)將試劑添加到細(xì)胞的胞外環(huán)境中來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑優(yōu)選為上述抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑與細(xì)胞的接觸包括將試劑引入細(xì)胞中。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑優(yōu)選上述siRNA、反義核酸或能夠表達(dá)siRNA或反義核酸的核酸分子。向細(xì)胞內(nèi)引入試劑可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法實(shí)現(xiàn)。例如，可使用直接注射、使用脂質(zhì)載體(如脂質(zhì)體)引入、電穿孔或者速度驅(qū)動(dòng)的轉(zhuǎn)染(例如基因槍)向細(xì)胞中引入本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑。此外，可使用載體(如質(zhì)粒載體或病毒載體)、磷酸鈣沉淀、或結(jié)合至陽(yáng)離子聚合物如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染而向細(xì)胞中引入本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑，該試劑由例如siRNA、抗原核酸的核酸和能夠表達(dá)siRNA、抗原核酸或抗體的核酸分子組成。優(yōu)選地，應(yīng)答于EGF的細(xì)胞表達(dá)MS4A12，更優(yōu)選地還表達(dá)EGF受體。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是贅生性細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法還包括將所述細(xì)胞與降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑接觸。降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑優(yōu)選為上述試劑。特別地，所述試劑優(yōu)選地選自(i)特異性靶向EGF受體mRNA的siRNA；(ii)能夠與編碼EGF受體之核酸選擇性雜交的反義核酸；(iii)能夠與EGF受體選擇性結(jié)合的抗體；(iv)能夠表達(dá)(i)的siRNA、(ii)的反義核酸或(iii)的抗體的核酸分子；和(ν)特異性針對(duì)EGF受體的酪氨酸激酶抑制劑?？刹捎门c上述針對(duì)本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑的類似方式來(lái)實(shí)現(xiàn)所述細(xì)胞與降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑的接觸。所述細(xì)胞可以與降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑以及本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑同時(shí)或者連續(xù)接觸。如果細(xì)胞與兩種試劑同時(shí)接觸，所述試劑可以存在于同一組合物中或者存在于分別的組合物中。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法在體外進(jìn)行。在這個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞可以是分離的細(xì)胞，優(yōu)選在體外培養(yǎng)的細(xì)胞。此外，所述細(xì)胞可以包含在組織樣品(其優(yōu)選分離自生物體)中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法在體內(nèi)進(jìn)行。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞存在于生物體(例如動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物例如嚙齒類(如小鼠或大鼠)、靈長(zhǎng)類或人)中。此外，在這個(gè)實(shí)施方案中，將所述細(xì)胞與本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑以及任選的降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑接觸優(yōu)選地包括將所述試劑施用給生物體。施用所述試劑可如下進(jìn)行和/或可包括上述將試劑引入細(xì)胞的任何方法。優(yōu)選地，就施用而言，所述試劑存在于本文上述的藥物組合物中。優(yōu)選地，如果用于降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法在體內(nèi)進(jìn)行，則其用于治療癌癥和/或癌癥轉(zhuǎn)移。因此，另一方面，本發(fā)明涉及治療癌癥和/或癌癥轉(zhuǎn)移(特別是結(jié)腸癌和/或結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移)的方法。所述治療包括將本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑施用給患者。特別地，所述方法包括向有此需要的患者(優(yōu)選患有結(jié)腸癌或結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的患者)施用有效量的本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑。優(yōu)選地，該方法降低或者抑制腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤侵襲和/或腫瘤轉(zhuǎn)移。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療癌癥和/或癌癥轉(zhuǎn)移的方法還包括向患者施用降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑。降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑優(yōu)選為上述試劑。特別地，所述試劑優(yōu)選地選自(i)特異性靶向EGF受體mRNA的siRNA；(ii)能夠與編碼EGF受體之核酸特異性雜交的反義核酸；(iii)能夠與EGF受體選擇性結(jié)合的抗體；(iv)能夠表達(dá)(i)的siRNA、(ii)的反義核酸或(iii)的抗體的核酸分子；和(ν)特異性針對(duì)EGF受體的酪氨酸激酶抑制劑。優(yōu)選地，降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑以有效量施用。優(yōu)選地，本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑以及任選的降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑在本文所述的藥物組合物中進(jìn)行施用。降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑以及本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑可以同時(shí)或者連續(xù)施用。如果兩種試劑同時(shí)施用，則它們可以存在于同一藥物組合物中或者存在于分別的藥物組合物中。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌癥轉(zhuǎn)移”優(yōu)選分別指特征在于表達(dá)MS4A12和/或表達(dá)EGF受體的癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移，即，所述癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移的至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)MS4A12和/或至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)EGF受體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，至少一部分的癌細(xì)胞表達(dá)和/或分泌EGF。優(yōu)選地，所述癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移的至少一部分癌細(xì)胞應(yīng)答于EGF。優(yōu)選地，在所述應(yīng)答于EGF的細(xì)胞中，在EGF存在下細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、生存力、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移、趨化性和/或侵襲得以提高。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥或者癌癥轉(zhuǎn)移中的腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤侵襲和/或腫瘤轉(zhuǎn)移在EGF存在下得以提高。此外，本發(fā)明還涉及用于測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之響應(yīng)性的方法，其包括測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)或活性水平。該方法優(yōu)選地使得能夠得出細(xì)胞是否應(yīng)答于EGF添加以及以何種程度應(yīng)答的定性和/或定量結(jié)論。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)水平包括測(cè)定所述細(xì)胞中MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白質(zhì)的量。優(yōu)選地，測(cè)定MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白質(zhì)的量包括將細(xì)胞與特異性結(jié)合MS4A12mRNA或MS4A12蛋白質(zhì)的試劑相接觸，并測(cè)定試劑與MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白質(zhì)之復(fù)合體的量。根據(jù)本發(fā)明，MS4A12mRNA的量可以使用與MS4A12mRNA特異性雜交的寡核苷酸或多核苷酸探針進(jìn)行測(cè)定，或者可以通過(guò)選擇性擴(kuò)增所述MS4A12mRNA進(jìn)行測(cè)定(例如，利用PCR擴(kuò)增來(lái)實(shí)現(xiàn))。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述寡核苷酸或多核苷酸探針包含與所述MS4A12mRNA之6_50個(gè)(特別是10-30個(gè)、15-30個(gè)以及20-30個(gè))連續(xù)核苷酸互補(bǔ)的序列。根據(jù)本發(fā)明，MS4A12蛋白質(zhì)的量可以使用與所述MS4A12蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的抗體進(jìn)行測(cè)定。在測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法中，用于測(cè)定MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白質(zhì)之量的試劑優(yōu)選地以可檢測(cè)的方式進(jìn)行標(biāo)記，特別是通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記(例如放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記或酶標(biāo)記)來(lái)實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選地，細(xì)胞中存在MS4A12mRNA或MS4A12蛋白質(zhì)指示細(xì)胞應(yīng)答于EGF。優(yōu)選地，細(xì)胞中MS4A12mRNA或MS4A12蛋白質(zhì)的量與所述細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的預(yù)期水平相關(guān)聯(lián)。因此，細(xì)胞中MS4A12mRNA或MS4A12蛋白質(zhì)的量越高，所述細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的預(yù)期水平就越高。測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的活性水平可以包括測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的一種或多種活性。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，用于測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法包括在降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑(特別是本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑)存在和/或不存在下測(cè)定細(xì)胞內(nèi)MS4A12的活性水平。優(yōu)選地，可檢測(cè)水平的MS4A12活性指示細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性。優(yōu)選地，MS4A12的活性水平與細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的預(yù)期水平相關(guān)聯(lián)。如果在降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑存在和/或不存在下測(cè)定MS4A12的活性水平，則在所述試劑存在下MS4A12活性水平的降低指示細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性。在所述試劑存在下MS4A12活性水平的降低程度優(yōu)選地與細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的的預(yù)期水平相關(guān)聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的活性水平包括測(cè)定所述細(xì)胞中鈣庫(kù)操縱性Ca2+內(nèi)流。優(yōu)選地，所述鈣庫(kù)操縱性Ca2+內(nèi)流在降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑(特別是本發(fā)明降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑)存在和不存在下進(jìn)行測(cè)定。優(yōu)選地，所述試劑選自(i)特異性靶向MS4A12mRNA的siRNA；(ii)能夠與編碼MS4A12之核酸選擇性雜交的反義核酸；(iii)能夠與MS4A12選擇性結(jié)合的抗體；(iv)能夠表達(dá)(i)的siRNA或者(ii)的反義核酸的核酸分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)定細(xì)胞中鈣庫(kù)操縱性Ca2+內(nèi)流包括測(cè)定Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞中的量和/或時(shí)程(timecourse)。測(cè)定Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞中的量?jī)?yōu)選地包括在測(cè)量開(kāi)始測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Ca2+和/或Sr2+的濃度并在測(cè)量結(jié)束時(shí)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Ca2+和/或Sr2+的濃度，并計(jì)算測(cè)量結(jié)束時(shí)與測(cè)量開(kāi)始時(shí)細(xì)胞內(nèi)Ca2+和/或Sr2+的濃度差異，其中所述差異對(duì)應(yīng)于Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞中的量。測(cè)定Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的時(shí)程優(yōu)選地包括監(jiān)測(cè)一段時(shí)間內(nèi)細(xì)胞中Ca2+和/或Sr2+的濃度，其中Ca2+和/或Sr2+濃度的升高指示Ca2+和/或Sr2+的內(nèi)流，而Ca2+和/或Sr2+濃度的降低則指示Ca2+和/或Sr2+的流出。從Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的時(shí)程可以計(jì)算出在給定時(shí)間段內(nèi)Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的量以及Ca2+和/或Sr2+內(nèi)流的速度。在一個(gè)實(shí)施方案中，Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的量和/或時(shí)程在給定的細(xì)胞外Ca2+和/或Sr2+濃度下進(jìn)行測(cè)定。細(xì)胞外Ca2+和/或Sr2+可以通過(guò)向細(xì)胞外環(huán)境添加CaCl2和/或SrCl2來(lái)提供。給定的細(xì)胞外Ca2+和/或Sr2+濃度優(yōu)選為約0.OlmM至約100mM、更優(yōu)選約0.ImM至約10mM，更優(yōu)選約0.5mM至約2mM，最優(yōu)選約ImM。Ca2+和/或Sr2+的內(nèi)流可以通過(guò)對(duì)Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物進(jìn)行測(cè)定。優(yōu)選地，所述化合物提供在Ca2+和/或Sr2+缺失和存在下發(fā)生改變的可檢測(cè)信號(hào)。優(yōu)選地，這種可檢測(cè)信號(hào)隨Ca2+和/或Sr2+的濃度而變化，更優(yōu)選地其可與Ca2+和/或Sr2+的濃度相關(guān)聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物是Ca2+敏感型染料。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物用檢測(cè)標(biāo)記進(jìn)行標(biāo)記，其中所述標(biāo)記提供可檢測(cè)的信號(hào)。所述檢測(cè)標(biāo)記優(yōu)選為熒光標(biāo)記或酶標(biāo)記。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述對(duì)Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物存在于待測(cè)定的細(xì)胞中，更優(yōu)選地僅存在于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。例如，可以根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明使用FLIPRCalcium3測(cè)定試劑盒(MolecularDevices)。鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流可以使用顯微鏡測(cè)量。在一個(gè)實(shí)施方案中，Ca2+和/或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的量和/或時(shí)程在細(xì)胞內(nèi)Ca2+池消耗之后進(jìn)行測(cè)定。所述消耗可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何手段來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如通過(guò)施用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA)的抑制劑(如thapsigargin)或者Ca2+池消耗的天然的激活劑(如EGF)來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括將細(xì)胞與EGF和/或thapsigargin接觸。優(yōu)選地，細(xì)胞內(nèi)Ca2+池在不存在細(xì)胞外Ca2+和/或Sr2+的情況下被消耗，并且在所述消耗之后將Ca2+和/或Sr2+添加到細(xì)胞外環(huán)境中。在測(cè)定鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流時(shí)，Sr2+可以被用作Ca2+的替代物，并且Sr2+內(nèi)流的量和/或時(shí)程可被認(rèn)為是Ca2+內(nèi)流的量和/或時(shí)程的測(cè)量值。優(yōu)選地，可檢測(cè)到的鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流指示細(xì)胞對(duì)EGF的響應(yīng)性。優(yōu)選地，鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流的程度對(duì)應(yīng)于細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的預(yù)期水平。如果鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流是在存在和不存在降低或者抑制MS4A12之表達(dá)或活性的試劑的情況下測(cè)定的，則在所述試劑存在下鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流的降低指示細(xì)胞對(duì)EGF的響應(yīng)性。在所述試劑存在下所述鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流的降低程度優(yōu)選地與細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的預(yù)期水平相關(guān)聯(lián)。在測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，將細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性水平的測(cè)定結(jié)果與參考細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性水平的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。優(yōu)選地，參考細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性是已知的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述參考細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。優(yōu)選地，待分析的細(xì)胞和參考細(xì)胞屬于同一物種和/或同一類型。在一些實(shí)施方案中，用于測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法還包括測(cè)定細(xì)胞中EGF受體的表達(dá)或活性水平。優(yōu)選地，EGF受體的表達(dá)或活性水平通過(guò)測(cè)定細(xì)胞中EGF受體mRNA和/或EGF受體蛋白質(zhì)的量來(lái)測(cè)定，其使用例如與EGF受體mRNA特異性結(jié)合的試劑(如與EGF受體mRNA特異性雜交的核酸分子)和/或與EGF受體蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的試劑(如特異性針對(duì)EGF受體蛋白的抗體)。EGF受體的活性水平可以通過(guò)測(cè)定EGF受體的酶活性(特別是使靶蛋白磷酸化的活性)來(lái)測(cè)定。在測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是真核細(xì)胞，優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，更優(yōu)選人細(xì)胞。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，同時(shí)測(cè)定多于一種細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性。優(yōu)選地，用于測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法在體外進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是源自或者存在于腫瘤樣品中的腫瘤細(xì)胞。在這個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可用于測(cè)定腫瘤細(xì)胞所來(lái)源之腫瘤對(duì)EGF的應(yīng)答性。所述腫瘤樣品可以是包含腫瘤細(xì)胞的任何樣品，包括播散的腫瘤細(xì)胞或轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。優(yōu)選地，腫瘤樣品是結(jié)腸腫瘤或者結(jié)腸腫瘤轉(zhuǎn)移的樣品和/或腫瘤細(xì)胞是結(jié)腸腫瘤或者結(jié)腸腫瘤來(lái)源之轉(zhuǎn)移的細(xì)胞。腫瘤樣品可以是來(lái)自腫瘤或者包含轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞之組織的活檢樣品。此外，腫瘤樣品可以是生物樣品例如糞便。優(yōu)選地，腫瘤樣品獲取自診斷為患有癌癥(優(yōu)選結(jié)腸癌)的患者。腫瘤對(duì)EGF的應(yīng)答性意味著腫瘤可以通過(guò)本發(fā)明的治療方法和/或其它抗EGF的腫瘤療法(特別是包括施用本文所述的降低或者抑制EGF受體之表達(dá)或活性的試劑的腫瘤療法)進(jìn)行治療。因此，如果通過(guò)本發(fā)明的方法測(cè)定腫瘤應(yīng)答于EGF，則可以預(yù)期患有所述腫瘤的患者可以通過(guò)本發(fā)明的治療方法和/或其它抗EGF的腫瘤療法成功治療。本發(fā)明還涉及用于提高細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法。該方法包括提高所述細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)和/或活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括向細(xì)胞中引入MS4A12蛋白或者能夠表達(dá)MS4A12蛋白的核酸分子。優(yōu)選地，該核酸分子是載體，例如表達(dá)質(zhì)?；虿《据d體。向細(xì)胞中弓I入MS4A12蛋白或者能夠表達(dá)MS4A12蛋白的核酸分子可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，可以使用直接注射、利用脂質(zhì)載體(如脂質(zhì)體)引入、電穿孔、或者速度驅(qū)動(dòng)的轉(zhuǎn)染方法(例如基因槍)。還可通過(guò)使用例如病毒轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀或與陽(yáng)離子聚合物(如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亞胺)的轉(zhuǎn)染法向細(xì)胞中弓丨入能夠表達(dá)MS4A12蛋白的核酸分子。優(yōu)選地，所述細(xì)胞表達(dá)EGF受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于提高細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法還包括提高所述細(xì)胞中EGF受體的表達(dá)和/或活性。在這個(gè)實(shí)施方案中，該方法優(yōu)選地包括向細(xì)胞中引入EGF受體或能夠表達(dá)EGF受體的核酸分子。其引入可以通過(guò)上述針對(duì)引入MS4A12蛋白或能夠表達(dá)MS4A12蛋白之核酸分子的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。用于提高細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法可以在體外以及體內(nèi)進(jìn)行。發(fā)明詳述應(yīng)該理解，本文中涉及數(shù)值范圍時(shí)具體指明和提及所述范圍所包括的每個(gè)數(shù)值。術(shù)語(yǔ)“MS4A12”涉及“跨膜4結(jié)構(gòu)域，亞家族A，成員12(membrane-spanning4-domains,subfamilyA,member12)，，，并包括由細(xì)胞天然表達(dá)或者由轉(zhuǎn)染有MS4A12基因的細(xì)胞表達(dá)的任何MS4A12變體(特別是剪接變體、構(gòu)象變體、同工型和種間同源物)。優(yōu)選地，“MS4A12的核酸”、“編碼MS4A12的核酸”或“MS4A12基因”是指選自以下的核酸(a)SEQIDNO1的核酸序列、其部分或衍生物，(b)在嚴(yán)格條件下與(a)中核酸雜交的核酸序列，(c)與(a)或(b)中核酸具有簡(jiǎn)并性的核酸序列，和(d)與(a)、(b)或(c)中核酸序列互補(bǔ)的核酸序列。該術(shù)語(yǔ)還可包括編碼MS4A12的mRNA。優(yōu)選地，“MS4A12蛋白”或簡(jiǎn)寫為“MS4A12”包含由上述核酸編碼的氨基酸序列，優(yōu)選選自SEQIDNO:2的氨基酸序列、其部分或衍生物。當(dāng)表達(dá)于細(xì)胞中時(shí)，MS4A12蛋白優(yōu)選定位于質(zhì)膜，更優(yōu)選地嵌入質(zhì)膜中。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，MS4A12以如下方式嵌入細(xì)胞的質(zhì)膜中，即，其氨基端和羧基端定位于細(xì)胞質(zhì)并且存在一個(gè)另外的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域、兩個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域和四個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，MS4A12的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)于SEQIDNO:2的113-126位和182-201位氨基酸或者人MS4A12的衍生物、同工型和種間同源物的對(duì)應(yīng)位置的氨基酸。應(yīng)該理解，MS4A12細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的邊界也可以在MS4A12的氨基酸序列中移動(dòng)1、2、3、4或5個(gè)氨基酸位置。MS4A12優(yōu)選具有圖2A所示的質(zhì)膜拓?fù)涮卣鳌Ｐg(shù)語(yǔ)“MS4A12”還包括由細(xì)胞天然表達(dá)或者由轉(zhuǎn)染有MS4A12基因的細(xì)胞表達(dá)的人MS4A12的翻譯后修飾變體、同工型和種間同源物。根據(jù)本發(fā)明，核酸優(yōu)選是脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。本發(fā)明的核酸包括基因組DNA、cDNA、mRNA、重組產(chǎn)生的分子和化學(xué)合成的分子。根據(jù)本發(fā)明，核酸可以作為單鏈或雙鏈的線性或共價(jià)環(huán)狀閉合分子存在。本文使用的術(shù)語(yǔ)“RNA”指包含至少一個(gè)核糖核苷酸殘基的分子?！昂颂呛塑账帷笔侵冈讦?D-核糖-呋喃糖部分的2’位帶有羥基的核苷酸。該術(shù)語(yǔ)包括雙鏈RNA、單鏈RNA、分離的RNA(例如部分純化的RNA、基本純化的RNA、合成RNA、重組產(chǎn)生的RNA)以及通過(guò)添加、缺失、替換和/或改變一個(gè)或多個(gè)核苷酸而不同于天然RNA的經(jīng)改變的RNA。這樣的改變可包括添加非核苷酸材料，例如向RNA的末端或內(nèi)部(例如在RNA的一個(gè)或多個(gè)核苷酸處)添加。RNA分子中的核苷酸還可包括非標(biāo)準(zhǔn)核苷酸，例如非天然核苷酸或者化學(xué)合成的核苷酸或脫氧核苷酸。這些經(jīng)改變的RNA可稱為天然RNA的類似物。如果本文中涉及檢測(cè)或測(cè)定核酸的量，則實(shí)際檢測(cè)的核酸或?qū)嶋H測(cè)定的量?jī)?yōu)選為mRNA。但是，應(yīng)該理解，這也可以包括mRNA間接檢測(cè)或mRNA的量間接測(cè)定的實(shí)施方案。例如，mRNA可以轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA，并檢測(cè)cDNA或測(cè)定的量。本文中mRNA與cDNA是等價(jià)的。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，cDNA序列與mRNA序列是等價(jià)的并可在本文中用作相同的目的，例如，產(chǎn)生與待檢測(cè)之核酸雜交的探針。因此，如果本文中涉及序列表中所示的序列，則其也包括所述序列的RNA等價(jià)物。本發(fā)明所述核酸優(yōu)選是分離的。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“分離的核酸”是指所述核酸是(i)體外擴(kuò)增的，例如通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，(ii)通過(guò)克隆重組產(chǎn)生的，(iii)經(jīng)純化的，例如通過(guò)切割和凝膠電泳分級(jí)分離來(lái)實(shí)現(xiàn)，或者(iv)合成的，例如通過(guò)化學(xué)合成來(lái)實(shí)現(xiàn)。分離的核酸是可用于重組DNA技術(shù)操作的核酸。本發(fā)明的簡(jiǎn)并性核酸是由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性而在密碼子序列中不同于參照核酸的核酸。根據(jù)本發(fā)明，核酸的“衍生物”是指在所述核酸中存在一個(gè)或多個(gè)(例如至少2個(gè)、至少4個(gè)或至少6個(gè)，并優(yōu)選多至3個(gè)、多至4個(gè)、多至5個(gè)、多至6個(gè)、多至10個(gè)、多至15個(gè)或多至20個(gè))核苷酸替換、缺失和/或添加。此外，術(shù)語(yǔ)“衍生物”還包括在核苷酸堿基、糖或磷酸上對(duì)核酸進(jìn)行化學(xué)衍生。術(shù)語(yǔ)“衍生物”還包括含有非天然核苷酸及核苷酸類似物的核酸。此外，涉及RNA時(shí)的術(shù)語(yǔ)“衍生物”還包括通過(guò)穩(wěn)定序列、加帽和/或聚腺苷化修飾的RNA。優(yōu)選地，本文所述的特定核酸序列與該特定核酸序列之衍生物的核酸序列(其與該特定核酸序列雜交和/或與該特定核酸序列具有簡(jiǎn)并性)之間的同一性程度將為至少70%，優(yōu)選至少75%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%或最優(yōu)選至少95%、96%、97%、98%或99%。同一性程度優(yōu)選在至少約30個(gè)、至少約50個(gè)、至少約70個(gè)、至少約90個(gè)、至少約100個(gè)、至少約150個(gè)、至少約200個(gè)、至少約250個(gè)、至少約300個(gè)或至少約400個(gè)核苷酸的區(qū)域中給出。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，同一性程度在參照核酸序列(例如序列表中給出的核酸序列)的全長(zhǎng)中給出。如果兩個(gè)序列能彼此雜交(雜交優(yōu)選在允許多核苷酸之間發(fā)生特異性雜交的條件(嚴(yán)格條件)下進(jìn)行)并形成穩(wěn)定的雙鏈體，則核酸與另一核酸“互補(bǔ)”。嚴(yán)格條件描述于例如MolecularCloning:ALaboratoryManual,J.Sambrook等編輯,第二版，ColdSpringHarborLaboratorypress,ColdSpringHarbor,NewYork,1989或者CurrentProtocolsinMolecularBiology,F.M.Ausubel等編輯，Johnffiley&Sons,Inc.，NewYork，其是指例如在65°C在雜交緩沖液(3.5XSSC、0.02%Ficoll、0.02%聚乙烯吡咯烷酮、0.02%牛血清白蛋白、2.5mMNaH2PO4(pH7)、0·5%SDS、2mMEDTA)中雜交。SSC為0.15M氯化鈉/0.15M檸檬酸鈉(PH7)。雜交后，清洗已轉(zhuǎn)移有DNA的膜，例如在室溫下用2XSSC清洗，接著在高至68°C的溫度下用0.10.5XSSC/0.IXSDS清洗?；パa(bǔ)性百分比表示核酸分子中可與第二核酸序列形成氫鍵(例如Watson-Crick堿基配對(duì))的連續(xù)殘基的百分比(例如10個(gè)殘基中有5、6、7、8、9、10個(gè)為50%、60%、70%、80%、90%和100%互補(bǔ))。“完全互補(bǔ)”是指核酸序列的所有連續(xù)殘基與第二核酸序列中相同數(shù)目的連續(xù)殘基形成氫鍵。優(yōu)選地，本發(fā)明的互補(bǔ)性程度為至少70%，優(yōu)選至少75%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%，最優(yōu)選至少95%、96%、97%、98%或99%。最優(yōu)選地，本發(fā)明的互補(bǔ)程度為100%。“序列相似性”表示相同氨基酸或代表保守性氨基酸替換的氨基酸的百分比。兩多肽或核酸序列間的“序列同一性”表示在所述序列之間相同的氨基酸或核苷酸的百分比。術(shù)語(yǔ)“同一性百分比”旨在表示待比較的兩序列之間在最佳比對(duì)后獲得的相同核苷酸或氨基酸殘基的百分比，該百分比純粹是統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的，并且兩序列間的差異隨機(jī)分布并分布在其全長(zhǎng)上。兩核苷酸或氨基酸序列之間的序列比較常規(guī)地通過(guò)在將其最優(yōu)比對(duì)后比較其序列來(lái)進(jìn)行，所述比較在區(qū)段或在“比較窗”中進(jìn)行，以鑒定和比較局部區(qū)域的序列相似性。除了手動(dòng)進(jìn)行比較以外，還可通過(guò)以下方法來(lái)為比較進(jìn)行最優(yōu)序列比對(duì)Smith和Waterman，1981，AdsApp.Math.2，482的局部同源性算法、Neddleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48，443的局部同源性算法、Pearson和Lipman，1988，Proc.NatlAcad.Sci.USA85，2444的相似性檢索法或者使用這些算法的計(jì)算機(jī)程序(WisconsinGeneticsSoftwarePackage中的GAP、BESTFIT、FASTA,BLASTP、BLASTN禾口TFASTA，GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wis)。同一性百分比如下計(jì)算測(cè)定兩個(gè)所比較序列之間相同位置數(shù)，用該數(shù)除以所比較的位置數(shù)并將所得結(jié)果乘以100，以獲得這兩個(gè)序列之間的同一性百分比。根據(jù)本發(fā)明，編碼肽或蛋白質(zhì)的核酸或者能夠表達(dá)SiRNA或反義核酸的核酸可單獨(dú)存在或與其它核酸(特別是異源核酸)一起存在。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸與表達(dá)控制序列或調(diào)控序列功能性連接，所述表達(dá)控制序列或調(diào)控序列對(duì)于所述核酸而言可以是同源或異源的。如果編碼/表達(dá)序列與調(diào)控序列以所述編碼/表達(dá)序列的表達(dá)或轉(zhuǎn)錄處于所述調(diào)控序列的調(diào)控或影響之下的方式彼此共價(jià)連接，則它們是“功能性”連接的。如果要將編碼序列翻譯成功能性蛋白質(zhì)，則將調(diào)控序列與所述編碼序列功能性連接，所述調(diào)控序列的誘導(dǎo)引起所述編碼序列的轉(zhuǎn)錄，而不會(huì)導(dǎo)致該編碼序列的移碼或者所述編碼序列不能翻譯成期望的蛋白質(zhì)或肽。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“表達(dá)調(diào)控序列”或“調(diào)控序列”包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子以及調(diào)節(jié)基因表達(dá)的其它調(diào)控元件。在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述表達(dá)調(diào)控序列可受到調(diào)節(jié)。調(diào)控序列的確切結(jié)構(gòu)可作為物種或細(xì)胞類型的函數(shù)而變化，但一般包含分別參與轉(zhuǎn)錄起始及翻譯起始的5’非轉(zhuǎn)錄序列以及5’非翻譯序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。更具體地，5’非轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列包括啟動(dòng)子區(qū)，其包含與基因功能性連接的用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控的啟動(dòng)子序列。調(diào)控序列還可包含增強(qiáng)子序列或上游激活子序列。此外，根據(jù)本發(fā)明，核酸可以與另一核酸存在于一起，所述另一核酸編碼控制由所述核酸編碼的蛋白質(zhì)或肽從宿主細(xì)胞分泌的肽。根據(jù)本發(fā)明，核酸還可以與另一核酸存在于一起，所述另一核酸編碼導(dǎo)致所編碼的蛋白質(zhì)或肽錨定于宿主細(xì)胞之細(xì)胞膜上或者分隔于所述細(xì)胞的特定細(xì)胞器中的肽。類似地，也可以與代表報(bào)告基因或者任何“標(biāo)簽”的核酸組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的重組核酸分子是載體，其中適當(dāng)時(shí)帶有調(diào)控核酸表達(dá)的啟動(dòng)子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“載體”以其最廣泛的含義使用，包括用于核酸的任何中間載體，其使得所述核酸可以例如引入原核和/或真核細(xì)胞中并在適當(dāng)時(shí)整合進(jìn)基因組中。這種載體優(yōu)選地在細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和/或表達(dá)。中間載體可以進(jìn)行調(diào)整，例如針對(duì)在電穿孔、微粒轟擊、脂質(zhì)體、利用農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)移或者通過(guò)DNA或RNA病毒進(jìn)行插入中的應(yīng)用。載體包括質(zhì)粒、噬菌粒、噬菌體或病毒基因組。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞”優(yōu)選是指真核細(xì)胞，更優(yōu)選指哺乳動(dòng)物細(xì)胞，最優(yōu)選是指人細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”是指可用外源核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的任何細(xì)胞。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”包括原核細(xì)胞(如大腸桿菌(E.coli))或真核細(xì)胞(例如樹(shù)突細(xì)胞、B細(xì)胞、CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞、K562細(xì)胞、酵母細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞)。特別優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如來(lái)自人、小鼠、倉(cāng)鼠、豬、山羊、靈長(zhǎng)類的細(xì)胞。所述細(xì)胞可來(lái)自多種組織類型，并包括靈長(zhǎng)類細(xì)胞和細(xì)胞系。具體實(shí)例包括角質(zhì)形成細(xì)胞、外周血白細(xì)胞、骨髓干細(xì)胞及胚胎干細(xì)胞。核酸可以以單拷貝或者兩個(gè)或更多拷貝的形式存在于宿主細(xì)胞中，在一個(gè)實(shí)施方案中，其在宿主細(xì)胞中表達(dá)。優(yōu)選地，宿主細(xì)胞不是人體的一部分。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”以其最廣泛的含義使用，包括RNA的產(chǎn)生或者RNA和蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。它還可以包括核酸的部分表達(dá)。此外，表達(dá)可以是瞬時(shí)的也可以是穩(wěn)定的。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中優(yōu)選的表達(dá)系統(tǒng)包括pcDNA3.1和pRc/CMV(Invitrogen，Carlsbad，CA)，它們包含選擇標(biāo)記如對(duì)抗G418的基因(并因此使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系可被選擇)及巨細(xì)胞病毒(CMV)的增強(qiáng)子-啟動(dòng)子序列?！胺戳x核酸”可以用來(lái)調(diào)節(jié)(特別是降低)核酸的表達(dá)。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“反義核酸”是指在生理?xiàng)l件下與包含特定基因的DNA或與所述基因的mRNA雜交從而抑制所述基因轉(zhuǎn)錄和/或所述mRNA翻譯的寡核苷酸，其是寡核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、修飾的寡核糖核苷酸或修飾的寡脫氧核糖核苷酸。反義核酸可與天然mRNA形成雙鏈體，從而阻止mRNA累積或翻譯。另一種可能是使用使核酸失活的核酶。本發(fā)明優(yōu)選的反義寡核苷酸具有靶核酸中6-50個(gè)、特別是10-30個(gè)、15-30個(gè)和20-30個(gè)連續(xù)核苷酸的序列，并優(yōu)選與靶核酸或與其部分完全互補(bǔ)。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與N端或5’上游位點(diǎn)(如翻譯起始位點(diǎn)、轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)或啟動(dòng)子位點(diǎn))雜交。在另一些實(shí)施方案中，反義寡核苷酸與3’非翻譯區(qū)或mRNA剪接位點(diǎn)雜交。在一個(gè)實(shí)施方案中，寡核苷酸(如本發(fā)明的SiRNA或者本發(fā)明的反義核酸)由核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸或其組合組成，其中一個(gè)核苷酸的5’末端與另一核苷酸的3’末端通過(guò)磷酸二酯鍵彼此連接。這些寡核苷酸可以常規(guī)方式合成，或者可以重組產(chǎn)生。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該寡核苷酸為“修飾的”寡核苷酸。這時(shí)，可以不同的方式來(lái)修飾寡核苷酸而不破壞其結(jié)合其靶標(biāo)的能力，從而提高例如其穩(wěn)定性或治療有效性。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“修飾的寡核苷酸”指這樣的寡核苷酸，其中(i)其至少兩個(gè)核苷酸通過(guò)合成的核苷間鍵(即并非磷酸二酯鍵的核苷間鍵)彼此連接，和/或(ii)通常不存在于核酸中的化學(xué)基團(tuán)與該寡核苷酸連接。優(yōu)選的合成的核苷間鍵為硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯(acetamidate)、羧甲基酯和肽。術(shù)語(yǔ)“修飾的寡核苷酸”還包括具有共價(jià)修飾的堿基和/或糖的寡核苷酸。例如，“修飾的寡核苷酸”包括帶有這樣的糖殘基的寡核苷酸，所述糖殘基與低分子量有機(jī)基團(tuán)共價(jià)連接，而非在3’位與羥基共價(jià)連接并在5’位與磷酸基共價(jià)連接。例如，修飾的寡核苷酸可包括’-ο-烷基化核糖殘基或者代替核糖的另一種糖(如阿拉伯糖)。應(yīng)該理解，在上述所有實(shí)施方案中關(guān)于寡核苷酸的部分也可適用于多核苷酸。本文使用的“小干擾RNA”或“siRNA”指分子或者復(fù)合物，其包含通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的Watson-Crick堿基配對(duì)(base-paring)相互作用(下文稱為“堿基配對(duì)(base-paired)”)退火在一起的有義RNA鏈和互補(bǔ)的反義RNA鏈。siRNA的有義鏈和反義鏈優(yōu)選長(zhǎng)度大于10個(gè)核苷酸，更優(yōu)選長(zhǎng)度大于15個(gè)核苷酸，最優(yōu)選長(zhǎng)度為18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28,29或30個(gè)核苷酸。19-25個(gè)核苷酸對(duì)于siRNA來(lái)說(shuō)是最優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明，siRNA特異性靶向并導(dǎo)致來(lái)自靶基因之mRNA(S卩，靶mRNA)的RNAi誘導(dǎo)之降解，從而不產(chǎn)生靶基因的蛋白產(chǎn)物或產(chǎn)生量減少。本發(fā)明的siRNA可包括部分純化的RNA、基本純化的RNA、合成RNA或重組產(chǎn)生的RNA以及由于一個(gè)或多個(gè)核苷酸的添加、缺失、替換和/或改變而區(qū)別于天然RNA的經(jīng)改變的RNA。這樣的改變可包括添加非核苷酸材料，例如向siRNA的末端或者向siRNA的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部核苷酸添加；修飾以使siRNA抵抗核酸酶消化(例如，使用2’-取代的核糖核苷酸或修飾糖_磷酸骨架)；或者用脫氧核糖核苷酸替換該siRNA中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸。此外，可以如上文修飾寡核苷酸所述地來(lái)修飾siRNA以提高其穩(wěn)定性，特別是引入一個(gè)或多個(gè)硫代磷酸酯鍵。siRNA的一條或兩條鏈還可包含3’突出端。本文使用的“3’突出端”是指RNA鏈3’末端伸出的至少一個(gè)未配對(duì)核苷酸。因此在一個(gè)實(shí)施方案中，siRNA包含至少一個(gè)3’突出端，其長(zhǎng)度為1至約6個(gè)核苷酸(包括核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)，優(yōu)選長(zhǎng)度為1至約5個(gè)核苷酸，更優(yōu)選長(zhǎng)度為1至約4個(gè)核苷酸，尤其優(yōu)選長(zhǎng)度為約2至約4個(gè)核苷酸。在siRNA分子的兩條鏈均包含3’突出端的實(shí)施方案中，每條鏈的突出端長(zhǎng)度可以相同或不同。在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，siRNA的兩條鏈上均存在3’突出端，并且長(zhǎng)度為2個(gè)核苷酸。例如，本發(fā)明siRNA的每條鏈可包含二脫氧胸苷酸(“TT”)或二尿苷酸(“im”)的3’突出端。為了增強(qiáng)siRNA的穩(wěn)定性，還可以對(duì)3’突出端進(jìn)行穩(wěn)定以避免降解。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)包含嘌呤核苷酸(如腺苷或鳥(niǎo)苷核苷酸)來(lái)穩(wěn)定突出端?；蛘?，用經(jīng)修飾的類似物替換嘧啶核苷酸(例如用2’-脫氧胸苷替換3’突出端中的尿苷核苷酸)是可以耐受的，并且不影響RNAi降解的效率。特別地，2’-脫氧胸苷中缺少2’-羥基顯著增強(qiáng)了該3’突出端在組織培養(yǎng)基中的核酸酶抗性。siRNA的有義鏈和反義鏈可包含兩個(gè)互補(bǔ)的單鏈RNA分子，或者可包含單個(gè)分子(其中兩個(gè)互補(bǔ)部分堿基配對(duì)并通過(guò)單鏈“發(fā)夾”區(qū)共價(jià)連接。也就是說(shuō)，有義區(qū)和反義區(qū)可通過(guò)連接分子共價(jià)連接。該連接分子可以是多核苷酸或非核苷酸連接分子。不希望受任何理論的限制，相信后一類型siRNA分子的發(fā)夾區(qū)在細(xì)胞內(nèi)被“Dicer”蛋白(或其等價(jià)物)切割形成兩條單獨(dú)堿基配對(duì)RNA分子的siRNA。本文使用的“靶mRNA”是指作為下調(diào)靶標(biāo)的RNA分子。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，cDNA序列等價(jià)于mRNA序列，并且可用于本文的相同目的，例如產(chǎn)生siRNA?？梢詮木酆厦窱II(polIII)表達(dá)載體來(lái)表達(dá)siRNA而不改變靶位點(diǎn)，因?yàn)檎J(rèn)為從聚合酶III啟動(dòng)子表達(dá)的RNA僅在第一個(gè)轉(zhuǎn)錄的核苷酸是嘌呤時(shí)才有效。本發(fā)明的siRNA可靶向任何靶mRNA序列中任何約19_25個(gè)連續(xù)核苷酸的節(jié)段(“靶序列”)。選擇siRNA靶序列的技術(shù)在例如TuschlT.等，“ThesiRNAUserGuide(siRNA用戶指南)”，2002年10月11日修訂版中給出，其全部公開(kāi)內(nèi)容均通過(guò)引用并入本文?！皊iRNA用戶指南”在互聯(lián)網(wǎng)上由ThomasTuschl博士，RNA分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，RockefellerUniversity,NewYork,USA維護(hù)的站點(diǎn)上提供，并可通過(guò)進(jìn)入RockefellerUniversity網(wǎng)站并搜索關(guān)鍵詞“siRNA”而找到。因此，本發(fā)明siRNA的有義鏈包含與靶mRNA中任何約19至約25個(gè)核苷酸的連續(xù)節(jié)段基本一致的核苷酸序列。一般而言，靶mRNA上的靶序列可從對(duì)應(yīng)于該靶mRNA的給定cDNA序列中選擇，優(yōu)選從起始密碼子下游(即3’方向)50至IOOnt開(kāi)始。然而，靶序列可以位于5’或3’非翻譯區(qū)中，或者在起始密碼子附近的區(qū)域中。例如，MS4A12cDNA中合適的靶序列選自以下的靶序列(i)GATCATGGTTGGATTGATGCA(SEQIDNO3)(ii)GTCAACCGGGTCAAGGAAATA(SEQIDNO6)靶向序列(i)并在每條鏈上具有3’突出端(突出端以粗體顯示)的優(yōu)選siRNA為5'ucaugguuggauugaugcaTT3'(SEQIDNO4)3‘CTaguaccaaccuaacuacgu5‘(SEQIDNO5)靶向序列(ii)并在每條鏈上具有3’突出端(突出端以粗體顯示)的優(yōu)選siRNA為5'caaccgggucaaggaaauaTA3‘(SEQIDNO7)3'CAguuggcccaguuccuuuau5'(SEQIDNO8)在以上列表中，核酸序列中的所有脫氧核糖核苷酸均以大寫字母表示(例如脫氧胸苷為“T”)，核酸序列中的核糖核苷酸以小寫字母表示(例如尿苷為“U”)。應(yīng)該理解，本文給出的靶序列是參考人MS4A12cDNA給出的，因此這些序列含有以“T”表示的脫氧胸苷。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，在MS4A12mRNA的實(shí)際靶序列中，脫氧胸苷將被尿苷(“U”)替代。同樣，本發(fā)明siRNA中包含的靶序列也將含有替代脫氧胸苷的尿苷?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種技術(shù)來(lái)獲得siRNA。例如，可使用本領(lǐng)域已知的方法來(lái)化學(xué)合成或重組產(chǎn)生siRNA，例如Tuschl等的美國(guó)公開(kāi)申請(qǐng)2002/0086356中描述的果蠅體外系統(tǒng)，其全部公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)弓I用并入本文。優(yōu)選地，使用經(jīng)適當(dāng)保護(hù)的核糖核苷亞磷酰胺和常規(guī)的DNA/RNA合成儀來(lái)化學(xué)合成siRNA。siRNA可以作為兩個(gè)獨(dú)立的互補(bǔ)RNA分子而合成，或者作為帶有兩個(gè)互補(bǔ)區(qū)的單個(gè)RNA分子而合成。或者，還可以使用任何合適的啟動(dòng)子從重組的環(huán)狀或線性DNA質(zhì)粒中表達(dá)siRNA。根據(jù)本發(fā)明，此類實(shí)施方案包括于涉及施用siRNA時(shí)或者將siRNA摻入藥物組合物中時(shí)。用于從質(zhì)粒中表達(dá)本發(fā)明siRNA的合適的啟動(dòng)子包括例如U6或HlRNA聚合酶III的啟動(dòng)子序列以及巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子。選擇其它合適的啟動(dòng)子在本領(lǐng)域技術(shù)范圍之內(nèi)。包含表達(dá)siRNA之核酸序列的核酸分子(例如重組質(zhì)?；虿《据d體)還可包含用于在特定組織或在特定胞內(nèi)環(huán)境中表達(dá)siRNA的誘導(dǎo)型或調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子。從重組質(zhì)粒中表達(dá)的SiRNA可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)從培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中分離，或者可以在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。siRNA可以作為兩個(gè)獨(dú)立的互補(bǔ)RNA分子或作為帶有兩個(gè)互補(bǔ)區(qū)的單個(gè)RNA分子從重組載體中表達(dá)。選擇適于表達(dá)siRNA的質(zhì)粒、用于將表達(dá)siRNA的核酸序列插入該質(zhì)粒的方法以及將重組質(zhì)粒遞送至目的細(xì)胞的方法在本領(lǐng)域技術(shù)范圍之內(nèi)。還可以在體內(nèi)從重組病毒載體胞內(nèi)表達(dá)siRNA。所述重組病毒載體包含編碼該siRNA的序列以及用于表達(dá)該siRNA的任何適當(dāng)?shù)膯?dòng)子。所述重組病毒載體還可包含用于在特定組織或在特定胞內(nèi)環(huán)境中表達(dá)siRNA的誘導(dǎo)型或調(diào)節(jié)型啟動(dòng)子。siRNA可以作為兩個(gè)獨(dú)立的互補(bǔ)RNA分子或作為帶有兩個(gè)互補(bǔ)區(qū)的單個(gè)RNA分子從重組病毒載體中表達(dá)。轉(zhuǎn)錄自人MS4A12基因的mRNA可以通過(guò)本領(lǐng)域中公知的技術(shù)分析其替代性剪接形式。上述技術(shù)包括逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、Northern印跡和原位雜交。一種名為“RNA酶保護(hù)”的技術(shù)也可以用來(lái)鑒定替代性剪接的MS4A12mRNA。RNA酶保護(hù)包括基因序列轉(zhuǎn)錄成合成RNA，它與來(lái)源于其它細(xì)胞(例如誘導(dǎo)表達(dá)MS4A12的細(xì)胞)的RNA雜交。然后，雜交的RNA與識(shí)別RNA:RNA雜交錯(cuò)配的酶一起孵育。比預(yù)期片段小的片段表示存在替代性剪接的mRNA。假擬的替代性剪接mRNA可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行克隆和測(cè)序。RT-PCR也可以用于鑒定替代性剪接的MS4A12mRNA。在RT-PCR中，來(lái)自已知表達(dá)MS4A12之細(xì)胞的mRNA由逆轉(zhuǎn)錄酶被轉(zhuǎn)換成cDNA，其使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。然后，cDNA的完整編碼序列使用位于3’非翻譯區(qū)的正向引物和位于5’非翻譯區(qū)的反向引物通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物可用于分析替代性剪接形式，例如通過(guò)比較擴(kuò)增產(chǎn)物與正常剪接之mRNA的預(yù)期產(chǎn)物的大小來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)比較。擴(kuò)增產(chǎn)物大小的任何改變均可指示替代性剪接的存在。從突變的MS4A12基因產(chǎn)生的mRNA也可以容易地使用上述鑒定替代性剪接形式的技術(shù)進(jìn)行分析。本文使用的“突變的”MS4A12基因或者mRNA包括序列與上述MS4A12序列不同的人MS4A12基因或mRNA。因此，MS4A12基因的等位形式及其產(chǎn)生的mRNA在本發(fā)明中被認(rèn)為是“突變體”。本文使用的“降低”或“抑制”指導(dǎo)致水平(例如蛋白質(zhì)或mRNA的水平)與參照樣品(如未經(jīng)siRNA處理的樣品)相比總體降低(優(yōu)選20%或更多，更優(yōu)選50%或更多，最優(yōu)選降低75%、90%或95%或更多)的能力。這種RNA或蛋白質(zhì)表達(dá)的降低或抑制可通過(guò)靶mRNA的切割或降解而發(fā)生。蛋白質(zhì)表達(dá)或核酸表達(dá)的測(cè)定為本領(lǐng)域已知，包括例如用于蛋白質(zhì)表達(dá)的ELISA、western印跡分析以及用于RNA的northern印跡或RNA酶保護(hù)測(cè)定。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“抑制”指完全抑制，即水平下降100%。術(shù)語(yǔ)“肽”包含寡肽和多肽，其是指包含通過(guò)肽鍵共價(jià)連接的兩個(gè)或更多個(gè)(優(yōu)選3個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選4個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選6個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選8個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選10個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選13個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選16個(gè)或更多個(gè)，優(yōu)選21個(gè)或更多個(gè)，直至優(yōu)選8、10、20、30、40或50特別是100個(gè))氨基酸的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“蛋白質(zhì)”是指大的肽，優(yōu)選具有多于100個(gè)氨基酸殘基的肽，但一般而言，術(shù)語(yǔ)“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中是同義的并可互換使用。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的蛋白質(zhì)和肽已被分離。術(shù)語(yǔ)“分離的蛋白質(zhì)”或“分離的肽”指該蛋白質(zhì)或肽已從其天然環(huán)境中分離出來(lái)。分離的蛋白質(zhì)或肽可以為基本純化的狀態(tài)。術(shù)語(yǔ)“基本純化的”指該蛋白質(zhì)或肽基本不含在自然界或體內(nèi)與其相關(guān)的其它物質(zhì)。例如，這樣的蛋白質(zhì)和肽可用于產(chǎn)生抗體以及用于免疫測(cè)定或診斷測(cè)定或作為治療劑。本發(fā)明所述的蛋白質(zhì)和肽可從生物樣品(如組織或細(xì)胞勻漿)中分離，也可在多種原核或真核表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)。就本發(fā)明的目的而言，蛋白質(zhì)或肽或者氨基酸序列的“衍生物”包括氨基酸插入變體、氨基酸缺失變體和/或氨基酸替換變體。氨基酸插入變體包括氨基和/或羧基端融合以及在特定氨基酸序列中一個(gè)、兩個(gè)或多個(gè)氨基酸的插入。在含有插入的氨基酸序列變體的情形中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被插入氨基酸序列的特定位點(diǎn)中，但也可以隨機(jī)插入并對(duì)所得產(chǎn)物進(jìn)行適當(dāng)篩選。氨基酸缺失變體的特征在于從該序列中去除了一個(gè)或多個(gè)氨基酸。氨基酸替換變體的特征在于去除了該序列中至少一個(gè)殘基并在其位置插入另一殘基。優(yōu)選地，該修飾位于氨基酸序列中在同源蛋白質(zhì)或肽之間不保守的位置中和/或?qū)被崽鎿Q為具有相似特性的其它氨基酸。優(yōu)選地，蛋白質(zhì)或肽或氨基酸序列的“衍生物”是指多至50個(gè)，更優(yōu)選多至20個(gè)、多至15個(gè)、多至10個(gè)、多至8個(gè)、多至5個(gè)、多至4個(gè)、多至3個(gè)、多至2個(gè)或僅1個(gè)氨基酸是被插入、缺失和/或替換的變體?！氨Ｊ匦蕴鎿Q”可以基于例如所涉及殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/或兩性性質(zhì)的相似性進(jìn)行。例如(a)非極性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；(b)極性中性氨基酸包括甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；(C)正電荷(堿性)氨基酸包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸；和(d)負(fù)電荷(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。替換通常在(a)-(d)組內(nèi)進(jìn)行。另外，由于可以破壞α-螺旋結(jié)構(gòu)，甘氨酸和脯氨酸可以互相替換。一些優(yōu)選的替換可在如下組中進(jìn)行(i)S和T;(ii)P和G;和(iii)A、V、L和I。鑒于已知的遺傳密碼和重組DNA與合成DNA的技術(shù)，熟練的科學(xué)家可以很容易地構(gòu)建編碼保守氨基酸變體的DNA。優(yōu)選地，本文所述特定氨基酸序列與作為所述特定氨基酸序列之衍生物的序列之間的相似性程度(優(yōu)選同一性)為至少70%，優(yōu)選至少80%，優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%，或者最優(yōu)選至少95%、96%、97%、98%或99%。相似性或同一性的程度優(yōu)選針對(duì)至少約20個(gè)、至少約40個(gè)、至少約60個(gè)、至少約80個(gè)、至少約100個(gè)、至少約120個(gè)、至少約140個(gè)、至少約160個(gè)、至少約200個(gè)或250個(gè)氨基酸的區(qū)域而給出。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，相似性或同一性程度針對(duì)參照氨基酸序列的全長(zhǎng)而給出。上述氨基酸變體可借助于已知的肽合成技術(shù)(例如固相合成(Merrifield，1964)及類似技術(shù))或通過(guò)重組DNA操作而容易地制備。用于制備含有替換、插入或缺失的蛋白質(zhì)和肽的DNA序列操作詳細(xì)描述于例如Sambrook等(1989)。根據(jù)本發(fā)明，蛋白質(zhì)和肽的“衍生物”還包括該蛋白質(zhì)或肽中任意相關(guān)分子(例如碳水化合物、脂質(zhì)和/或蛋白質(zhì)或肽)的一個(gè)或多個(gè)替換、缺失和/或添加。術(shù)語(yǔ)“衍生物”還擴(kuò)展至所述蛋白質(zhì)和肽的所有功能性化學(xué)等同物。根據(jù)本發(fā)明，蛋白質(zhì)或肽的部分或片段優(yōu)選具有其來(lái)源蛋白質(zhì)或肽的功能特性。這樣的功能特性包括與抗體相互作用、與其它肽或蛋白質(zhì)相互作用、選擇性結(jié)合核酸和酶活性。蛋白質(zhì)或肽的部分或片段優(yōu)選包含該蛋白質(zhì)或肽中至少6個(gè)、特別是至少8個(gè)、至少10個(gè)、至少12個(gè)、至少15個(gè)、至少20個(gè)、至少30個(gè)或至少50個(gè)連續(xù)氨基酸的序列。蛋白質(zhì)或肽的部分或片段優(yōu)選包含該蛋白質(zhì)或肽中多至8個(gè)、特別是多至10個(gè)、多至12個(gè)、多至15個(gè)、多至20個(gè)、多至30個(gè)或多至55個(gè)連續(xù)氨基酸的序列。蛋白質(zhì)或肽的部分或片段優(yōu)選是蛋白或肽的一部分，其對(duì)應(yīng)于非跨膜部分、尤其是蛋白質(zhì)或肽的胞外部分，或是包含于其中。根據(jù)本發(fā)明，編碼蛋白質(zhì)或肽的核酸的部分或片段涉及該核酸中至少編碼上述蛋白質(zhì)或肽和/或所述蛋白質(zhì)或肽的部分或片段的部分。編碼蛋白質(zhì)或肽之核酸的部分或片段優(yōu)選為該核酸中對(duì)應(yīng)于開(kāi)放讀碼框的部分。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合”優(yōu)選地指特異性結(jié)合?！疤禺愋越Y(jié)合”指，和結(jié)合其它靶標(biāo)相比，試劑(例如抗體)與靶標(biāo)(例如表位)更強(qiáng)地結(jié)合。如果試劑與第一靶標(biāo)的解離常數(shù)(Kd)低于與第二靶標(biāo)的解離常數(shù)，那么與第二靶標(biāo)相比該試劑更強(qiáng)地與第一靶標(biāo)結(jié)合。優(yōu)選地，試劑特異性結(jié)合靶標(biāo)的解離常數(shù)(Kd)比試劑不特異性結(jié)合靶標(biāo)的解離常數(shù)(Kd)低出多于10倍，優(yōu)選多于20倍，更優(yōu)選多于50倍，更優(yōu)選多于100倍、200倍、500倍或1000倍。根據(jù)本發(fā)明，特異性抗體是指特異性與其靶標(biāo)結(jié)合的抗體。這種特異性抗體可以例如是用其靶標(biāo)(例如MS4A12蛋白或其部分(如其胞外區(qū)域))免疫后獲得的抗體?？梢酝ㄟ^(guò)多種標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)制備含有特異性結(jié)合靶蛋白的特異性抗體的抗血清，參閱例如"MonoclonalAntibodies:APracticalApproach"PhilipShepherd,ChristopherDeanISBN0-19-963722-9；"Antibodies=ALaboratoryManual"EdHarlow,DavidLane,ISBN0879693142L^l^"UsingAntibodies:ALaboratoryManual=PortableProtocolNOldwardHarlow,DavidLane,EdHarlowISBN0879695447。由此還可以產(chǎn)生識(shí)別天然形式復(fù)雜膜蛋白的親合(affine)的特異性抗體(Azorsa等，J.Immunol.Methods229=35-48,1999；Anderson等，J.Immunol.1431899-1904，1989；Gardsvoll,J.Immunol.Methods234:107-116,2000)。這特別適用于制備治療性應(yīng)用的抗體。就此而言，可以用完整蛋白質(zhì)、胞外部分序列以及用表達(dá)生理折疊形式之靶分子的細(xì)胞來(lái)進(jìn)行免疫。常規(guī)地使用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備單克隆抗體(技術(shù)細(xì)節(jié)參閱“MonoclonalAntibodies:APracticalApproach，，PhilipShepherd,ChristopherDeanISBN0-19-963722-9；"Antibodies:ALaboratoryManual"EdHarlow,DavidLaneISBN0879693142；"UsingAntibodies:ALaboratoryManualportableProtocolNO"EdwardHarlow,DavidLane,EdHarlowISBN0879695447)。已知抗體分子中僅有一小部分(互補(bǔ)位(paratope))參與該抗體與其表位的結(jié)合(參閱Clark,W.R.(1986),TheExperimentalFoundationsofModernImmunology,Wiley&Sons,Inc.,NewYork;Roitt,I.(1991),EssentialImmunology,第七版，BlackwellScientificPublications,Oxford)。例如，pFc，和Fc區(qū)是補(bǔ)體級(jí)聯(lián)的效應(yīng)物，但不參與抗原結(jié)合。已酶促去除pFc’區(qū)或以無(wú)pFc’區(qū)方式產(chǎn)生的抗體(稱為F(ab’)2片段)帶有完整抗體的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。類似地，已酶促去除Fc區(qū)或以無(wú)所述Fc區(qū)方式產(chǎn)生的抗體(稱為Fab片段)帶有完整抗體分子的一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。此外，F(xiàn)ab片段由共價(jià)結(jié)合的抗體輕鏈和所述抗體的部分重鏈(稱為Fd)組成。Fd片段是抗體特異性的主要決定簇(一個(gè)Fd片段可與多達(dá)10種不同輕鏈相關(guān)聯(lián)，而不改變抗體的特異性)，分離的Fd片段保留了與表位結(jié)合的能力。位于抗體的抗原結(jié)合部分中的是與抗原表位直接相互作用的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)以及維持該互補(bǔ)位三級(jí)結(jié)構(gòu)的框架區(qū)(FR)。IgG免疫球蛋白的重鏈Fd片段及輕鏈都包含4個(gè)框架區(qū)(FRl至FR4)，它們各自被3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(⑶Rl至⑶R3)分隔開(kāi)。⑶R特別是⑶R3區(qū)(更特別地為重鏈的⑶R3區(qū))在很大程度上決定了抗體特異性。已知哺乳動(dòng)物抗體的非CDR區(qū)可以替換為具有相同或不同特異性的抗體的相似區(qū)域，而保留原始抗體的表位特異性。這使得有可能開(kāi)發(fā)出“人源化”抗體，其中非人CDR與人FR和/或Fc/pFc’區(qū)共價(jià)連接而產(chǎn)生功能性抗體。作為另一實(shí)例，WO92/04381描述了人源化小鼠RSV抗體的產(chǎn)生和使用，其中至少一部分小鼠FR區(qū)被替換為人源的FR區(qū)。這類抗體(包括具有抗原結(jié)合能力的完整抗體之片段)常稱為“嵌合”抗體。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“抗體”還包括抗體的F(ab，)2、Fab、Fv以及Fd片段；Fc和/或FR和/或CDRl和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區(qū)已替換為同源的人或非人序列的嵌合抗體；FR和/或CDRl和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區(qū)已替換為同源的人或非人序列的嵌合F(ab’)2片段抗體；FR和/或CDRl和/或CDR2和/或輕鏈CDR3區(qū)已替換為同源的人或非人序列的嵌合Fab片段抗體；以及FR和/或CDRl和/或CDR2區(qū)已替換為同源的人或非人序列的嵌合Fd片段抗體。術(shù)語(yǔ)“抗體”還包括“單鏈”抗體?？贵w還可以與用于展示表達(dá)靶抗原之細(xì)胞及組織的特異性標(biāo)記物質(zhì)偶聯(lián)。它們還可以與治療上有用的物質(zhì)偶聯(lián)在一起。標(biāo)記物質(zhì)包括發(fā)揮以下功能的任何標(biāo)記(i)提供可檢測(cè)信號(hào)；(ii)與第二標(biāo)記相互作用以改變由該第一或第二標(biāo)記所提供的可檢測(cè)信號(hào)，例如FRET(熒光共振能轉(zhuǎn)移)；(iii)通過(guò)電荷、疏水性、形狀或其它物理參數(shù)而影響遷移率，例如電泳遷移率；或(iv)提供捕獲部分，例如親和力、抗體/抗原或離子絡(luò)合。適于作為標(biāo)記的是諸如以下的結(jié)構(gòu)熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生色團(tuán)標(biāo)記、放射性同位素標(biāo)記、同位素標(biāo)記(優(yōu)選穩(wěn)定同位素標(biāo)記)、同量異位標(biāo)記、酶標(biāo)記、顆粒標(biāo)記(特別是金屬顆粒標(biāo)記、磁性顆粒標(biāo)記、聚合物顆粒標(biāo)記)、有機(jī)小分子如生物素、受體的配體或結(jié)合分子(如細(xì)胞粘附蛋白或凝集素)、包含可使用結(jié)合劑檢測(cè)的核酸和/或氨基酸殘基的標(biāo)記序列等。標(biāo)記物質(zhì)包括但不僅限于硫酸鋇、碘西他酸(iocetamicacid)、碘番酸、碘泊酸鈣(calciumipodate)、泛影酸鈉、泛影葡胺、甲泛葡胺、酪泮酸鈉以及放射性診斷劑包括正電子發(fā)射體如氟-18和碳-11、Y發(fā)射體如碘-123、锝-99m、碘-131和銦-111，用于核磁共振的核素如氟和釓。根據(jù)本發(fā)明，“小分子化合物”是低分子量的化合物，優(yōu)選地分子量最高20.OOODa,更優(yōu)選最高15.OOODa、最高10.OOODa、最高7.500Da、最高5.OOODa、最高2.OOODa或最高1.OOODa0優(yōu)選地，小分子化合物是有機(jī)化合物。小分子化合物可以是經(jīng)修飾或者未經(jīng)修飾的天然化合物或化學(xué)合成的化合物。優(yōu)選地，小分子化合物不是聚合的化合物。但是，小分子化合物還可以是多核苷酸或多肽。根據(jù)本發(fā)明，EGF受體是結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(印idermalgrowthfactor,EGF)的受體。優(yōu)選地，EGF受體定位于質(zhì)膜，并且更優(yōu)選是跨膜蛋白質(zhì)。優(yōu)選地，EGF受體是酪氨酸激酶受體，其活性是磷酸化靶蛋白質(zhì)。優(yōu)選的EGF受體是人EGFR、人ErbB-I或者人HER1。但是，EGF受體還可以是上述人EGF受體的種間同源物。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“治療上有用的物質(zhì)”指發(fā)揮治療作用的任何分子。根據(jù)本發(fā)明，治療上有用的物質(zhì)包括抗癌劑、放射性碘標(biāo)記的化合物、毒素、細(xì)胞抑制藥物或細(xì)胞裂解藥物等。例如，抗癌劑包括氨魯米特(aminoglutethimide)、硫唑嘌呤、硫酸博來(lái)霉素、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉬、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、阿糖胞苷(cytarabidine)、達(dá)卡巴嗪、更生霉素、柔紅霉素(daimorubin)、多柔比星、紫杉醇、依托泊苷、氟尿嘧啶、干擾素-α、洛莫司汀、巰嘌呤、氨甲喋呤、米托坦、鹽酸丙卡巴胼、硫鳥(niǎo)嘌呤、硫酸長(zhǎng)春堿和硫酸長(zhǎng)春新堿。其它抗癌劑描述于例如Goodman和Gilman，“ThePharmacologicalBasisofTherapeutics，，，第八版，1990，McGraw-Hill,Inc.，特別是第52章(AntineoplasticAgents(PaulCalabresiandBruceA.Chabner)。毒素可以是蛋白質(zhì)如美洲商陸抗病毒蛋白、霍亂毒素、百日咳毒素、蓖麻毒素、白樹(shù)毒素、相思豆毒素、白喉外毒素或假單胞菌(Pseudomonas)外毒素。毒素殘基(toxinresidue)還可以是高能發(fā)射的放射性核素，例如鈷-60。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“患者”指人、非人靈長(zhǎng)類或其它動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物如牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓或嚙齒動(dòng)物(如小鼠和大鼠)。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者為人。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“提高的”或“量增加的”優(yōu)選指提高至少10%，特別是至少20%、至少50%或至少100%。此外，術(shù)語(yǔ)“提高”還可以指想要提高的效果或者量在提高之前不存在(即為0)但提高之后存在(即大于0)的情況。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“癌癥”包括任何癌癥且優(yōu)選指特征在于表達(dá)MS4A12的癌癥，即，該癌癥的至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)MS4A12。此外，癌癥優(yōu)選地特征在于表達(dá)EGF受體，即，至少該癌癥的部分癌細(xì)胞表達(dá)EGF受體。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，癌癥的特征在于表達(dá)EGF受體并表達(dá)EGF受體，即，該癌癥的至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)MS4A12且該癌癥的至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)EGF受體。最優(yōu)選地，該癌癥的至少一部分癌細(xì)胞表達(dá)MS4A12和EGF受體。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“癌癥”包括癌癥轉(zhuǎn)移。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，癌癥是結(jié)腸癌，癌癥轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移(即源自結(jié)腸癌的癌癥轉(zhuǎn)移)。優(yōu)選地，癌癥是癌(carcinoma)如結(jié)腸癌，特別是腺癌如結(jié)腸腺癌。本文中互換使用術(shù)語(yǔ)“結(jié)腸癌”和“結(jié)直腸癌”，其包括結(jié)腸的癌癥以及直腸的癌癥。類似地，術(shù)語(yǔ)“結(jié)腸腫瘤”和“結(jié)腸癌”也分別包括“結(jié)直腸腫瘤”和“結(jié)直腸癌”?！澳[瘤”是指通過(guò)失控的快速細(xì)胞增殖而生長(zhǎng)并在起始該新生長(zhǎng)的刺激停止后繼續(xù)生長(zhǎng)的異常細(xì)胞或組織群。腫瘤顯示部分或完全缺少結(jié)構(gòu)組織以及與正常組織的功能協(xié)調(diào)，并且通常形成可為良性或惡性的獨(dú)立的組織塊。優(yōu)選地，本發(fā)明的腫瘤是結(jié)腸腫瘤。根據(jù)本發(fā)明，贅生性細(xì)胞(neoplasticcell)是細(xì)胞增殖異常提高的細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，“癌細(xì)胞”是參與癌癥疾病的細(xì)胞，包括腫瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞和轉(zhuǎn)移的細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，腫瘤細(xì)胞是存在于腫瘤組織中的細(xì)胞。優(yōu)選地，“癌細(xì)胞”或“腫瘤細(xì)胞”是贅生性細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“至少部分的癌細(xì)胞”優(yōu)選指至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或約100%的癌細(xì)胞?！稗D(zhuǎn)移”是指癌細(xì)胞從其原始部位擴(kuò)散到機(jī)體的其它部位。轉(zhuǎn)移的形成是非常復(fù)雜的過(guò)程，其依賴于惡性細(xì)胞從原發(fā)腫瘤上脫落，侵襲細(xì)胞外基質(zhì)，穿透內(nèi)皮基底膜進(jìn)入體腔和血管，然后通過(guò)血液轉(zhuǎn)運(yùn)，滲入靶器官。最后，靶部位新腫瘤的生長(zhǎng)依賴于血管發(fā)生。即使在已移除原發(fā)腫瘤后仍常常發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，這是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞或組分可能保留并產(chǎn)生轉(zhuǎn)移的潛力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)移”涉及“遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移”，其表示距離原發(fā)腫瘤和局部淋巴結(jié)系統(tǒng)很遠(yuǎn)的轉(zhuǎn)移。根據(jù)本發(fā)明，“腫瘤樣品”是包含一個(gè)或更多腫瘤細(xì)胞的樣品。腫瘤樣品可以是組織樣品(包括體液)和/或細(xì)胞樣品，并可以常規(guī)方式獲得，例如組織活檢(包括穿刺活檢)以及采集血、支氣管抽吸物、痰、尿、糞便或其它體液。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“腫瘤樣品”還包括腫瘤樣品的級(jí)分。優(yōu)選地，腫瘤樣品獲得自患有腫瘤的患者，并優(yōu)選分離自所述患者。本發(fā)明還提供用于施用的核酸、蛋白質(zhì)或肽。核酸、蛋白質(zhì)和肽可使用已知的方法施用。例如，可通過(guò)使用載體(如病毒和靶標(biāo)受控性脂質(zhì)體)在體內(nèi)施用核酸。根據(jù)本發(fā)明，如果涉及核酸藥物組合物的施用或摻入時(shí)，它包括核酸存在于上述載體中的實(shí)施方案。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，施用核酸的病毒或者病毒載體選自腺病毒、腺相關(guān)病毒、天花病毒(包括牛痘病毒和減毒天花病毒)、森林腦炎病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、辛德畢斯病毒和Ty病毒樣顆粒。特別優(yōu)選的是腺病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常是復(fù)制缺陷的(即它們無(wú)法產(chǎn)生感染性顆粒)。體外或體內(nèi)向細(xì)胞中引入核酸的方法包括磷酸鈣沉淀核酸轉(zhuǎn)染、與DEAE相關(guān)的核酸轉(zhuǎn)染、用攜帶目的核酸的上述病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染或感染、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染等。在在一些具體實(shí)施方案中，優(yōu)選將核酸導(dǎo)入至特定細(xì)胞。在這樣的實(shí)施方案中，用于將核酸施用至細(xì)胞的載體(例如逆轉(zhuǎn)錄病毒或脂質(zhì)體)可與靶向控制分子結(jié)合。例如，可將諸如特異性針對(duì)靶細(xì)胞表面膜蛋白的抗體或者針對(duì)靶細(xì)胞上受體的配體的分子摻入所述核酸載體中或附著于其上。如果期望通過(guò)脂質(zhì)體施用核酸，則可將與胞吞作用相關(guān)表面膜蛋白結(jié)合的蛋白質(zhì)摻入該脂質(zhì)體制劑中，以使靶向控制和/或攝取成為可能。這樣的蛋白質(zhì)包括對(duì)特定細(xì)胞類型具有特異性的衣殼蛋白或其片段、針對(duì)內(nèi)化蛋白的抗體、可進(jìn)入胞內(nèi)位點(diǎn)的蛋白質(zhì)等。本發(fā)明的治療性組合物可在藥物相容性制劑中施用。這樣的制劑通?？砂幬锵嗳菪詽舛鹊柠}、緩沖物質(zhì)、防腐劑、載體、補(bǔ)充性免疫增強(qiáng)物質(zhì)如佐劑(例如CpG寡核苷酸、細(xì)胞因子、趨化因子、皂苷、GM-CSF和/或RNA)并在適當(dāng)時(shí)包含其它治療活性化合物。本發(fā)明的治療活性試劑可通過(guò)任何常規(guī)途徑施用，包括注射或輸注。例如，可以經(jīng)口、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、透皮或直腸內(nèi)施用。反義核酸優(yōu)選通過(guò)緩慢靜脈內(nèi)施用。本發(fā)明的組合物以有效量施用?！坝行Я俊笔侵竼为?dú)或與其它給藥一起獲得期望反應(yīng)或期望效果的量。在治療特定疾病或特定病癥的情形中，期望的反應(yīng)優(yōu)選涉及抑制該疾病的病程。這包括減緩該疾病的發(fā)展，特別是中斷或逆轉(zhuǎn)該疾病的發(fā)展。疾病或病癥治療中期望的反應(yīng)還可以是延緩或預(yù)防所述疾病或所述病癥的發(fā)病。根據(jù)本發(fā)明，對(duì)癌癥的治療還可以包括治療已形成或即將形成的腫瘤轉(zhuǎn)移的治療。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“治療”包括治療和預(yù)防性治療(即預(yù)防)。本發(fā)明組合物的有效量將取決于諸如以下的因素待治療的病癥；該疾病的嚴(yán)重程度；患者的個(gè)體參數(shù)，包括年齡、生理狀況、身高和體重；治療的持續(xù)時(shí)間；聯(lián)合治療(如果有的話)的類型；具體的施用途徑以及類似的因素。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選為無(wú)菌的并含有有效量的治療活性試劑，以產(chǎn)生期望的反應(yīng)或期望的效果。所施用的本發(fā)明組合物的劑量可取決于多種參數(shù)，例如施用類型、患者的狀況、期望的施用周期等。對(duì)于起始劑量不足以在患者中獲得反應(yīng)的情況，可以使用更高的劑量(或通過(guò)不同的更加局部的給藥途徑實(shí)現(xiàn)的更有效劑量)。一般地，本發(fā)明針對(duì)治療或者產(chǎn)生或提高免疫應(yīng)答而配制和施用的試劑劑量從Ing至lmg，優(yōu)選從IOng至100μg。如果需要施用核酸(DNA和RNA)例如siRNA、反義核酸或編碼抗體的核酸分子，則配制和施用的劑量是Ing至0.Img0本發(fā)明的藥物組合物一般以藥物相容性的量在藥物相容性組合物中施用。術(shù)語(yǔ)“藥物相容性”是指不與該藥物組合物中活性成分的作用發(fā)生相互作用的無(wú)毒物質(zhì)。這類制劑通常可含有鹽、緩沖物質(zhì)、防腐劑、載體，適當(dāng)時(shí)還含有其它治療活性化合物。藥用時(shí)，鹽應(yīng)當(dāng)是藥物相容性的。然而，非藥物相容性的鹽可用于制備藥物相容性鹽，并包括在本發(fā)明中。這類藥理學(xué)及藥物相容性鹽包括但不僅限于由以下酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來(lái)酸、乙酸、水楊酸、檸檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。藥物相容性鹽也可制備成堿金屬鹽或堿土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。本發(fā)明的藥物組合物可包含藥物相容性載體。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“藥物相容性載體”是指適于對(duì)人施用的一種或多種相容性固體或液體填充劑、稀釋劑或包封物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“載體”是指與活性成分組合以利于施加的天然或合成性質(zhì)的有機(jī)或無(wú)機(jī)組分。本發(fā)明藥物組合物的成分通常使得不發(fā)生顯著損害所期望藥效的相互作用。本發(fā)明的藥物組合物可包含合適的緩沖物質(zhì)，例如鹽形式的乙酸、鹽形式的檸檬酸、鹽形式的硼酸和鹽形式的磷酸。適當(dāng)時(shí)，所述藥物組合物還可包含合適的防腐劑，例如苯扎氯銨、三氯叔丁醇、對(duì)羥基苯甲酸酯和硫柳汞。所述藥物組合物通常以均一劑型提供，并可以已知的方式制備。本發(fā)明的藥物組合物可采用例如膠囊劑、片劑、栓劑、錠劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑、酏劑的形式，或者采用乳劑的形式。適于腸胃外施用的組合物通常包含活性化合物的無(wú)菌含水或非水制劑，其優(yōu)選與受試者的血液等滲。相容性載體和溶劑的實(shí)例為林格液和等滲氯化鈉溶液。此外，通常使用無(wú)菌的不揮發(fā)油作為溶液或懸液的介質(zhì)。通過(guò)以下附圖和實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，它們僅用于說(shuō)明目的，并不意在限制。由于這些描述和實(shí)施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員易于理解同樣包括在本發(fā)明中的其它實(shí)施方案。圖1.MS4A12表達(dá)限于正常結(jié)腸粘膜和結(jié)腸癌。(A)終點(diǎn)法RT_PCR(左)和定量實(shí)時(shí)RT_PCR(右)測(cè)定正常組織和結(jié)腸癌中的MS4A12。對(duì)于每一個(gè)正常組織，顯示了多達(dá)5個(gè)獨(dú)立組織樣本的平均表達(dá)值。誤差線，標(biāo)準(zhǔn)差(STD)；虛線，表達(dá)取舍值。(B)轉(zhuǎn)染2種獨(dú)立的siRNA雙鏈體48小時(shí)后LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞中MS4A12蛋白表達(dá)的沉默。ns-siRNA，非沉默性siRNA(左)。用抗MS4A12/N端抗血清檢測(cè)正常組織和結(jié)腸癌中MS4A12蛋白表達(dá)(右)。β-肌動(dòng)蛋白用作上樣對(duì)照，細(xì)胞角蛋白18(KRT18)用作表皮細(xì)胞特異性標(biāo)記。(C)正常結(jié)腸和結(jié)腸癌中MS4A12蛋白表達(dá)的IHC檢測(cè)，高表達(dá)(MS4A12+++)和低表達(dá)(MS4A12+)。圖2.MS4A12是CD20樣質(zhì)膜蛋白。(A)預(yù)測(cè)的MS4A12的質(zhì)膜拓?fù)涮卣鳌Ｅc⑶20高度同源的區(qū)域以灰色框表示。⑶轉(zhuǎn)染MS4A12-eGFP的CHO細(xì)胞用抗MS4A12-N端的抗血清染色后的IF顯微鏡分析。(C)用對(duì)照siRNA或MS4A12特異性siRNA轉(zhuǎn)染LoVo細(xì)胞48小時(shí)后用抗MS4A12/N端抗體染色后的IF顯微鏡分析。(D)FACS分析轉(zhuǎn)染有N端或C端經(jīng)eGFP標(biāo)記的MS4A12的CHO細(xì)胞。未經(jīng)透化的和經(jīng)透化的細(xì)胞用兔多克隆抗eGFP抗體和Cy5標(biāo)記的抗兔第二抗體進(jìn)行染色。圖3.MS4A12介導(dǎo)的鈣池操縱性鈣內(nèi)流。(A)轉(zhuǎn)染有MS4A12或僅轉(zhuǎn)染載體作為對(duì)照的CHO細(xì)胞中Ca2+(ImM)和Sr2+(ImM)內(nèi)流在用Tg(300nM)進(jìn)行Ca2+池消耗后進(jìn)行測(cè)量，分別不用(左)或者用(右)已知的SOC阻斷劑La3+(25yM)預(yù)處理。(B)分別不用(左)或者用(右)La3+(25μM)預(yù)處理LoVo細(xì)胞，在用Tg(300nM)進(jìn)行Ca2+池消耗后的Ca2+(ImM)內(nèi)流。(C)分別不用(左)或者用(右)La3+(25μM)預(yù)處理細(xì)胞，測(cè)量在Ca2+池消耗后應(yīng)答于EGF(50ηΜ，上排；2ηΜ，下排)的Ca2+內(nèi)流。(所示結(jié)果是3次獨(dú)立進(jìn)行的一式三份實(shí)驗(yàn)的代表性結(jié)果。)圖4.MS4A12沉默降低了LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖。(A)轉(zhuǎn)染siRNA48小時(shí)后，將LoVo細(xì)胞與50nMEGF培養(yǎng)48小時(shí)。通過(guò)向新合成的DNA中摻入BrdU來(lái)測(cè)量增殖。(B)在相同條件下培養(yǎng)的LoVo細(xì)胞的細(xì)胞周期分析，顯示為在不同細(xì)胞周期狀態(tài)下的細(xì)胞級(jí)分的柱狀圖。所有的實(shí)驗(yàn)均一式三份進(jìn)行，重復(fù)2次，所顯示的是所有實(shí)驗(yàn)的平均值+/"STD0*ρ<0.05，〃ρ<0.005。圖5.MS4A12沉默降低了LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)力和侵襲。(A)在transwell遷移測(cè)定中，向上層小室和下層小室添加不同濃度的EGF，12小時(shí)后分析化學(xué)激活現(xiàn)象(chemokinesis)(細(xì)胞運(yùn)動(dòng)力)。(B)在添加不同濃度的EGF作為趨化物至下層小室24小時(shí)后，分析向Matrigel趨化侵襲的能力。數(shù)據(jù)針對(duì)每個(gè)EGF濃度下的未轉(zhuǎn)染對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行歸一化，顯示MS4A12敲低(knockdown)對(duì)低EGF濃度下的運(yùn)動(dòng)和侵襲的影響最大。所有的實(shí)驗(yàn)均一式三份進(jìn)行，重復(fù)2次，所顯示的是所有實(shí)驗(yàn)的平均值+/-STD0*p<0.05，**p<0.005。圖6.使用siRNA進(jìn)行的MS4A12轉(zhuǎn)錄物敲低的定量在轉(zhuǎn)染2種獨(dú)立的MS4A12特異性siRNA雙鏈體48小時(shí)后，利用實(shí)時(shí)RT-PCR對(duì)表達(dá)MS4A12的結(jié)腸癌細(xì)胞系LoVo的細(xì)胞中MS4A12轉(zhuǎn)錄物敲低進(jìn)行定量。觀察到組成型MS4A12mRNA的表達(dá)穩(wěn)定地、可重復(fù)地下降了90%，而亂序的非沉默對(duì)照雙鏈體則沒(méi)有任何影響。圖7.正常組織中MS4A12表達(dá)的IHC分析。用抗MS4A12/N端抗體對(duì)獲得自睪丸和胃腸組織(除正常結(jié)腸粘膜以外)的切片進(jìn)行免疫組化分析顯示檢測(cè)不到MS4A12染色，不排除這些復(fù)合器官組織中存在表達(dá)該蛋白質(zhì)的較小亞群。圖8.MS4A12的氨基酸序列比對(duì)(A)MS4A12蛋白質(zhì)序列與CD20家族其它家族成員的比對(duì)。MS4A1=SEQIDNO17；MS4A2=SEQIDNO18；MS4A3:SEQIDNO19；MS4A12:SEQIDNO:2。(B)MS4A12蛋白質(zhì)序列與CD20結(jié)構(gòu)域(pfam04103；SEQIDNO20)的比對(duì)。實(shí)施例本文中提到的技術(shù)和方法以已知的方式實(shí)施，并描述于例如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEdition(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y中。除非特別指明，包括使用試劑盒和試劑的所有方法均根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行操作。篩選在腫瘤中異?；罨奶ケP特異性基因組織和細(xì)胞系重組DNA工作得到了Rheinland-Palatinate州政府的官方許可并按照其規(guī)定進(jìn)行。新鮮凍存的組織作為常規(guī)診斷或治療操作中的人類剩余材料獲得。采取預(yù)防措施，以避免長(zhǎng)時(shí)間暴露并將組織保存于_80°C待用。結(jié)腸癌細(xì)胞系LoVo用DMEM+10%FBS進(jìn)行培養(yǎng)。用于發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)挖掘策略作為第一步，我們利用所有可用的文庫(kù)創(chuàng)建了一個(gè)人的通用表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)文件，其在dbEST報(bào)告文件(ftp://ncbi.nlm.nih.gov/r印ository/dbEST)的物種字段(organismfield)包含關(guān)鍵詞“Homosapiens”。為了降低該方法的復(fù)雜程度，只有代表了超過(guò)100個(gè)EST的文庫(kù)以及編碼已知全長(zhǎng)基因的EST才予以考慮。下一步，通過(guò)從通用文件中提取在文庫(kù)名、生物、組織類型、器官或者細(xì)胞系字段里包含“colon”的所有EST而產(chǎn)生一個(gè)結(jié)腸組織特異的子文件。我們總共分析了4021個(gè)cDNA文庫(kù)中的6280883個(gè)EST。為了補(bǔ)償幾個(gè)EST可能來(lái)自同一個(gè)基因這一事實(shí)，結(jié)腸組織EST被分為包含共有一個(gè)或多個(gè)序列高度同一性節(jié)段的EST的聚類。相對(duì)于通用列表中所有的人EST，對(duì)結(jié)腸組織EST子文件中的每條序列依次運(yùn)行序列同源性檢索程序blastn(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)，其同源性嚴(yán)格程度設(shè)置為S=300；V=300；B=300；η=-20。對(duì)于來(lái)自結(jié)腸組織子文件的每個(gè)查詢EST，檢索提取出來(lái)自通用EST文件中EST項(xiàng)(命中)的列表，其中每個(gè)均注明其組織來(lái)源并提供“電子Northern”。確定這樣的命中列表中不同的非結(jié)腸組織的編號(hào)作為每個(gè)獨(dú)立EST的結(jié)腸組織特異性程度的量度。將該方法獲得的所有候選物均提交SMART(http://smart,embl.de/smart)進(jìn)行基序和結(jié)構(gòu)分析以鑒定出潛在的表面分子。將該方法獲得的候選物提交SMART進(jìn)行基序和結(jié)構(gòu)分析以鑒定出拓?fù)涮卣髋cCD20相似的表面分子(最低要求至少4個(gè)疏水區(qū)域根據(jù)TMHMM可作為跨膜結(jié)構(gòu)域，并且預(yù)測(cè)出至少一個(gè)胞外環(huán)區(qū))。RNA分離、RT-PCR和實(shí)時(shí)RT-PCR如前所述進(jìn)行RNA提取、第一鏈cDNA合成、RT-PCR和實(shí)時(shí)RT-PCR(Koslowski等，CancerRes.64=5988-93,2004)簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明，用RNeasyMini試劑盒(Qiagen)從冰凍組織提取細(xì)胞總RNA，用dT18寡核苷酸作為引物，并用SuperscriptII(Invitrogen-LifeTechnologies,Inc.)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。所獲得cDNA的完整性通過(guò)30個(gè)循環(huán)的針對(duì)P53轉(zhuǎn)錄物的PCR擴(kuò)增進(jìn)行檢驗(yàn)(有義5'-CGTGAGCGCTTCGAGATGTTCCG-3'(SEQIDNO:15)；反義5'-CCTAACCAGCTGCCCAACTGTAG-3'(SEQIDNO:16)；退火溫度67V)。對(duì)于終點(diǎn)分析，在35個(gè)循環(huán)的RT-PCR中使用MS4A12特異性寡核苷酸(有義5，-GAGCTTTCCCGTTGTCTGGTG-3，(SEQIDNO11)；反義5，-GCTGAAGAAGACGCTGGTGTC-3'(SEQIDNO12)，60°C退火)。在40個(gè)循環(huán)的RT-PCR中一式三份進(jìn)行實(shí)時(shí)定量表達(dá)分析。以HPRT(有義5，-TGACACTGGCAAAACAATGCA-3，(SEQIDNO13)；反義5'-GGTCCTTTTCACCAGCAAGCT-3，(SEQIDNO:14)，62°C退火)歸一化后，使用ΔACT計(jì)算相對(duì)于正常組織定量腫瘤樣品中的MS4A12轉(zhuǎn)錄物。PCR反應(yīng)的特異性通過(guò)對(duì)任意選擇的樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測(cè)序來(lái)驗(yàn)證?？寡濉⒚庖邿晒夂兔庖呓M化通過(guò)定制的抗體服務(wù)(Squarix)產(chǎn)生針對(duì)MS4A12重組表達(dá)片段(1_63位氨基酸)的多克隆抗血清，并親和純化。根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明，用VECTORNovaRED底物試劑盒(Vector)對(duì)組織冰凍切片進(jìn)行免疫組化分析。就Western印跡分析而言，使用從以Triton-X裂解的細(xì)胞中提取的20μg總蛋白質(zhì)。用還原性樣品緩沖液(Roth，Karlsruhe,Germany)稀釋提取物，進(jìn)行SDS-PAGE，隨后電轉(zhuǎn)至PVDF膜(Pall)上。對(duì)于免疫染色來(lái)說(shuō)，使用對(duì)MS4A12、KRT18(Abeam)和β-肌動(dòng)蛋白(Abeam)具有反應(yīng)性的抗體，其后使用與辣根過(guò)氧化物酶綴合的山羊抗小鼠和山羊抗兔第二抗體(Dako)檢測(cè)第一抗體。siRNA雙鏈體設(shè)計(jì)了兩個(gè)獨(dú)立的MS4A12siRNA雙鏈體(Qiagen)，其分別靶向MS4A12mRNA序列(NM017716.1；SEQIDNO1)的344-363位核苷酸(siRNA#l，有義:5，_r(UCAUGGUUGGAUUGAUGCA)dTdT-3，(SEQIDNO:4)，反義:5，_r(UGCAUCAAUCCAACCAUGA)dTdC_3，(SEQIDNO5))以及247-266位核苷酸(siRNA#2，有義5，-r(CAACCGGGUCAAGGAAAUA)dTdA-3，(SEQID而7)，反義5，-r(UAUUUCCUUGACCCGGUUG)dAdC_3，(SEQIDNO:8))。使用非沉默siRNA雙鏈體(有義5，-r(UAACUGUAUAAUCGACUAG)dTdT_5，(SEQIDNO:9)，反義5，-r(CUAGUCGAUUAUACAGUUA)dGdA_3，(SEQIDNO10))作為對(duì)照。為進(jìn)行MS4A12沉默研究，根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明，使用HiPerFect轉(zhuǎn)染試劑(Qiagen)以IOnMsiRNA雙鏈體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。鈣成像所有緩沖液均含有125mMNaCl、5mMKClUmMMgCl2、20mMHEPES，并用NaOH將pH調(diào)整為7.4。CaCl2和SrCl2以所示終濃度ImM加入到緩沖液中。不含Ca2+的緩沖液含有0.2mMEGTA。Thapsigargin、EGF和La3+按照所示濃度使用。根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明，用FLII3RCalcium3測(cè)定試劑盒(MolecularDevices)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光團(tuán)標(biāo)記。細(xì)胞內(nèi)鈣的變化用奧林巴斯-1X71倒置顯微鏡和TILLvisION軟件(TILLPhotonics)進(jìn)行記錄。在注入各種試劑時(shí)在大于50個(gè)細(xì)胞的視野中記錄熒光值。所有測(cè)試均一式四份進(jìn)行，并重復(fù)2次。細(xì)胞增殖分析轉(zhuǎn)染SiRNA雙鏈體24小時(shí)后，將IXIO4個(gè)細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)12小時(shí)。向培養(yǎng)基補(bǔ)充EGF(50nM)48小時(shí)后，根據(jù)生產(chǎn)商的說(shuō)明，使用DELFIA細(xì)胞增殖試劑盒(PerkinElmer)利用WallacVictor2多標(biāo)記計(jì)數(shù)器(PerkinElmer)測(cè)量新合成DNA鏈中的BrdU摻入，以分析增殖。所有測(cè)試均一式三份進(jìn)行，并重復(fù)2次。細(xì)胞周期分析轉(zhuǎn)染siRNA雙鏈體24小時(shí)后，將1XIO5個(gè)細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)12小時(shí)。向培養(yǎng)基補(bǔ)充EGF(50nM)48小時(shí)后，收集細(xì)胞，用乙醇固定，并用碘化丙錠染色，然后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)DNA含量分析。使用FlowJo(TreeStar)流式細(xì)胞分析軟件定量處于不同細(xì)胞周期中的細(xì)胞。所有測(cè)試均一式三份進(jìn)行，并重復(fù)2次。細(xì)胞遷移和體外侵襲測(cè)定細(xì)胞運(yùn)動(dòng)力(化學(xué)激活現(xiàn)象)測(cè)定在具有8.0μm孔徑的膜(BDBiosciences)的transwell小室中進(jìn)行，其中使細(xì)胞培養(yǎng)于不同濃度EGF的培養(yǎng)基中。轉(zhuǎn)染siRNA雙鏈體24小時(shí)后，將細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)12小時(shí)，然后將4XIO4個(gè)細(xì)胞加至上層小室。上層和下層小室均含有相同濃度EGF(50、10、2或0.4nM)的培養(yǎng)基。24小時(shí)后將遷移到膜底面的細(xì)胞固定于冰冷的甲醇中。切下膜，置于顯微鏡載玻片上，并用Hoechst(Dako)封片以供熒光顯微鏡鏡檢。針對(duì)每個(gè)膜計(jì)數(shù)5個(gè)隨機(jī)視野(100X放大)中的細(xì)胞數(shù)。所有實(shí)驗(yàn)均一式三份進(jìn)行。對(duì)于體外侵襲測(cè)定來(lái)說(shuō)，在上層小室中準(zhǔn)備100μ1用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋成lmg/ml的Matrigel(BDBiosciences)。在37°C孵育小室5小時(shí)以形成凝膠。所有測(cè)定均一式三份進(jìn)行，并重復(fù)2次。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用GraphPadPrism軟件包(GraphPadSoftware)利用Kruskal-Wallis非參數(shù)ANOVA檢驗(yàn)對(duì)不同腫瘤階段和分級(jí)的結(jié)腸癌樣品中歸一化的MS4A12mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。使用GraphPadPrism軟件包(GraphPadSoftware)利用非配對(duì)t_檢驗(yàn)計(jì)算，與未經(jīng)處理的細(xì)胞相比，在經(jīng)siRNA處理的細(xì)胞中MS4A12沉默對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移和侵襲的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果和討論應(yīng)用基因組范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)挖掘策略來(lái)搜索用于對(duì)結(jié)腸癌單克隆抗體治療的靶標(biāo)?；跀?shù)字cDNA文庫(kù)消減，該方法發(fā)現(xiàn)了對(duì)結(jié)腸上皮細(xì)胞具有極高特異性的、結(jié)構(gòu)類似于⑶20的、具有至少4個(gè)作為跨膜結(jié)構(gòu)域的疏水區(qū)的分化基因。隨后，測(cè)試這些候選物在源自該譜系的癌癥中的保守性表達(dá)。計(jì)算機(jī)篩選出的與所使用搜索標(biāo)準(zhǔn)完全吻合的命中基因之一是MS4A12。事實(shí)上，該分子是MS4A家族的成員，所述MS4A家族包括結(jié)構(gòu)上相關(guān)的細(xì)胞表面蛋白例如⑶20(MS4A1)、高親和力IgE受體β鏈(FeεRIB)(MS4A2)和HTm4(MS4A3)(Ishibashi等，Gene264:87_93，2001；Liang等，Immunogenetics53:357-68，2001;Liang等，Genomics72:119_27，2001)。與MS4A家族中的大多數(shù)成員(先前顯示為造血或淋巴細(xì)胞譜系的分化基因)不同，MS4A12尚未在這些細(xì)胞中檢測(cè)到(Liang等，Immunogenetics53:357_68,2001；Liang等，Genomics72:119_27,2001)。為了確定哪些人組織表達(dá)MS4A12，通過(guò)特異性終點(diǎn)RT-PCR和定量實(shí)時(shí)RT-PCR對(duì)覆蓋較廣的27種不同的正常人組織樣本(每種組織類型來(lái)自多至5個(gè)供者)進(jìn)行分析。如果在終點(diǎn)RT-PCR中如果沒(méi)有可見(jiàn)的擴(kuò)增產(chǎn)物并且如果沒(méi)有超出所有正常非結(jié)腸組織樣品中表達(dá)的平均取舍值+3倍STD(99%)的話，則組織被歸類為陰性。發(fā)現(xiàn)MS4A12的表達(dá)僅限于正常結(jié)腸粘膜。在所有其它正常組織中，轉(zhuǎn)錄物水平低于標(biāo)準(zhǔn)35個(gè)循環(huán)RT-PCR的檢出限(圖la，左圖)，只有痕量的MS4A12轉(zhuǎn)錄物可在40個(gè)循環(huán)的定量實(shí)時(shí)RT-PCR后被檢出(圖la，右圖)，只有1/5睪丸樣本略微超出表達(dá)取舍值(表1)。表1.通過(guò)定量實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)MS4A12在組織中的表達(dá)。針對(duì)每種正常組織類型，研究了獲得自2-5個(gè)不同個(gè)體的樣本。正常組織的取舍值設(shè)定為除結(jié)腸之外正常組織中表達(dá)平均值+3倍STD(相對(duì)表達(dá)高于檢出限10倍的)。在腫瘤組織中，只有表達(dá)值高出檢出限至少100倍時(shí)才被認(rèn)定為陽(yáng)性。權(quán)利要求1.降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性的試劑。2.權(quán)利要求1的試劑，其中所述降低或者抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性降低或抑制所述細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、生存力、細(xì)胞周期進(jìn)程、遷移、趨化性和/或侵襲。3.權(quán)利要求1或2的試劑，其中所述細(xì)胞中MS4A12的活性是提高或產(chǎn)生所述細(xì)胞對(duì)EGF的應(yīng)答性，其中所述細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的提高優(yōu)選為所述細(xì)胞在下述方面的提高EGF誘導(dǎo)的生長(zhǎng)、EGF誘導(dǎo)的增殖、EGF誘導(dǎo)的細(xì)胞周期進(jìn)程、EGF誘導(dǎo)的遷移、EGF誘導(dǎo)的趨化性和/或EGF誘導(dǎo)的侵襲。4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的試劑，其選自(i)特異性靶向MS4A12mRNA的siRNA，()能夠與編碼MS4A12的核酸選擇性雜交的反義核酸，(iii)能夠選擇性結(jié)合MS4A12的抗體，和(iv)能夠表達(dá)(i)的siRNA、(ii)的反義核酸或者(iii)的抗體的核酸分子。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的試劑，其中所述細(xì)胞中MS4A12的活性涉及提高或產(chǎn)生所述細(xì)胞的鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流。6.包含權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)之試劑的組合物。7.權(quán)利要求6的組合物，其還包含降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑。8.權(quán)利要求6或7的組合物，其是藥物組合物。9.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的試劑或權(quán)利要求8的組合物，其用于醫(yī)藥中。10.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的試劑或權(quán)利要求8的組合物，其用于治療癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移。11.降低或者抑制細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法，其包括使所述細(xì)胞與權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的試劑相接觸。12.權(quán)利要求11的方法，其還包括使所述細(xì)胞與降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑相接觸。13.治療患者中癌癥或癌癥轉(zhuǎn)移、優(yōu)選結(jié)腸癌或結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的方法，其包括向該患者施用權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的試劑。14.權(quán)利要求13的方法，其還包括向該患者施用降低或者抑制細(xì)胞中EGF受體之表達(dá)或活性的試劑。15.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述組合物降低或者抑制患者中的腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤侵襲和/或腫瘤轉(zhuǎn)移。16.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的方法，其中癌細(xì)胞中的至少一部分對(duì)EGF具有應(yīng)答性。17.測(cè)定細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法，其包括測(cè)定所述細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)和/或活性的水平。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)水平包括測(cè)定所述細(xì)胞中MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白質(zhì)的量，和/或所述測(cè)定細(xì)胞中MS4A12的活性水平包括測(cè)定所述細(xì)胞中的鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流，其中所述鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流優(yōu)選在存在和不存在降低或抑制細(xì)胞中MS4A12之表達(dá)或活性之試劑的情況下進(jìn)行測(cè)定。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述測(cè)定細(xì)胞中鈣池操縱性Ca2+內(nèi)流包括測(cè)定Ca2+或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的量和/或時(shí)程，其中Ca2+或Sr2+進(jìn)入細(xì)胞的量和/或時(shí)程優(yōu)選在細(xì)胞內(nèi)Ca2+池消耗之后測(cè)定。20.權(quán)利要求17-19中任一項(xiàng)的方法，其中所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，并且其中所述方法優(yōu)選地用于測(cè)定腫瘤對(duì)EGF的應(yīng)答性和/或腫瘤針對(duì)抗EGF腫瘤療法的應(yīng)答性。21.用于提高細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法，其包括提高所述細(xì)胞中MS4A12的表達(dá)或活性。全文摘要本發(fā)明涉及可用于治療、診斷和測(cè)試疾病狀態(tài)(特別是癌癥疾病)的涉及MS4A12的方法以及靶向MS4A12的試劑。特別地，本發(fā)明涉及降低或抑制MS4A12的表達(dá)或活性的試劑、包含這些試劑的組合物以及用于減少、測(cè)定或提高細(xì)胞對(duì)EGF之應(yīng)答性的方法。文檔編號(hào)C12N15/113GK101998992SQ200980112819公開(kāi)日2011年3月30日申請(qǐng)日期2009年3月30日優(yōu)先權(quán)日2008年4月10日發(fā)明者烏爾·沙欣,厄茲萊姆·圖雷奇,米夏埃爾·科斯洛夫斯基申請(qǐng)人:加尼梅德藥物公司;約翰內(nèi)斯·古滕伯格美因茲大學(xué)