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      多瘤病毒的檢測(cè)的制作方法

      文檔序號(hào):580395閱讀:495來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:多瘤病毒的檢測(cè)的制作方法
      多瘤病毒的檢測(cè)相關(guān)專利申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2008年2月20日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)第61/064,166號(hào)的優(yōu)先 權(quán)日期的權(quán)益,該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
      背景技術(shù)
      人多瘤病毒JC和BK廣泛存在于人群中。這些病毒導(dǎo)致的原發(fā)感染通常是無(wú)癥 狀的,且可導(dǎo)致一過(guò)性病毒尿癥。在原發(fā)感染之后,JC病毒(JCV)和BK病毒(BKV)均在 腎臟組織和B淋巴細(xì)胞中建立潛伏期(G. Lecatsas, B. D. Schoub, A. R. Rabson,以及M. Jfe, Letter, Lancet 2 :907-908,1 976)。多瘤病毒相關(guān)性疾病主要與免疫損傷有關(guān),免疫妥協(xié) 患者中病原的快速檢測(cè)和區(qū)分對(duì)于幫助臨床處理來(lái)說(shuō)是重要的。JCV是神經(jīng)疾病進(jìn)行性多 灶性白質(zhì)腦病的致病因子,該疾病主要在AIDS (獲得性免疫缺陷綜合征)患者中發(fā)生,而 BKV相關(guān)性疾病包括出血性膀胱炎、輸尿管狹窄以及其他泌尿道疾病,這些疾病最常見(jiàn)于進(jìn) 行免疫抑制治療的移植患者。用于檢測(cè)和鑒定多瘤病毒的傳統(tǒng)方法包括血清學(xué)方法、通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的病毒分離 以及電子顯微鏡技術(shù)。最近,研究顯示PCR是用于檢測(cè)各種臨床樣品中多瘤病毒的有效工 具。然而,在開(kāi)發(fā)多瘤病毒的有效檢測(cè)方法中,主要障礙是BKV和JCV核苷酸序列中的 大量種內(nèi)多態(tài)性。迄今,核苷酸多態(tài)性(例如SNP)插入以及缺失已經(jīng)妨礙了檢測(cè)感染的可 靠方法的開(kāi)發(fā)。因此,需要更牢靠的測(cè)定方法。

      發(fā)明內(nèi)容
      根據(jù)本發(fā)明的一方面,提供了用于檢測(cè)樣品中是否存在多瘤病毒的方法,所述方 法包括檢測(cè)所述樣品是否存在具有SEQ ID NO 1的序列的核酸、SEQ ID NO=I的序列的反 向互補(bǔ)序列的核酸或與SEQ ID NO :1具有90%或更多序列同源性的序列的核酸。在一些實(shí)施方式中,所述方法還包括擴(kuò)增SEQ ID NO :1的核酸、或SEQ ID N0:1的 反向互補(bǔ)序列的核酸、或SEQ ID NO :1及其反向互補(bǔ)序列中任一者的一部分的核酸,然后檢 測(cè)是否存在所產(chǎn)生的擴(kuò)增子。在一些方面,所述檢測(cè)步驟包括使所述樣品與在嚴(yán)謹(jǐn)條件下 能夠與SEQ ID NO :1或其反向互補(bǔ)序列的核酸雜交的至少一種寡核苷酸探針接觸,或進(jìn)行 解鏈曲線分析。在一種實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID NO :4和SEQ ID NO :5。在另一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 6,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID NO :4和SEQ ID NO :5。在另一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO :2和SEQ ID NO: 3,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID NO :4和SEQ ID NO :23。在又一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO :2和SEQ ID NO:
      56,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID NO :4和SEQ ID NO :23。在再一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO 8和SEQ ID NO 9。一方面,所述檢測(cè)步驟包括使用與雙鏈DNA結(jié)合的花青染料。在另一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO :4和SEQ ID NO: 6,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID NO :9和SEQ ID N0:13。在所述檢測(cè) 步驟中可單獨(dú)或同時(shí)使用探針SEQ ID NO :9和SEQ ID N0:13。在另一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO :4和SEQ ID NO: 6,所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針SEQ ID N0:14和SEQ ID N0:15。在另一實(shí)施方式中,所述方法包括使用至少擴(kuò)增引物BKV_5. 2和BKV_5. 1。這些引 物位于靠近VP2/3基因的尾端的位置。盡管VP2/3和VPl具有分開(kāi)的開(kāi)放閱讀框(0RF),但 是BKV_5. 2和BKV_5. 1引物擴(kuò)增與VPl基因的起始端重疊的VP2/3基因的區(qū)域。另一方面,本發(fā)明提供試劑盒,所述試劑盒包含在嚴(yán)謹(jǐn)條件下能夠與SEQ ID NO 1 的核酸雜交的至少一種寡核苷酸探針。一方面,所述試劑盒還包含用于擴(kuò)增SEQ ID NO 1 及其互補(bǔ)序列或轉(zhuǎn)錄子的核酸的擴(kuò)增引物或用于擴(kuò)增SEQ ID NO :1及其互補(bǔ)序列或轉(zhuǎn)錄子 的一部分的核酸的擴(kuò)增引物。在一種實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO 4和SEQ ID NO :5。在另一實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 6以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO 4和SEQ ID NO :5。在另一實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO 4和SEQ ID NO :23。在又一實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 6以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO 4和SEQ ID NO :23。在另一實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 6以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO :9和SEQ ID NO 13??蓡为?dú)或同時(shí)使用探針SEQ ID NO :9和SEQ ID NO :13。在一種實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 6以及 寡核苷酸探針SEQ ID NO 14和SEQ ID NO :15。在一種實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO 8和SEQ ID NO :9。在另一實(shí)施方式中,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物BKV_5. 2和BKV_5. 1。這些引物位 于靠近VP2/3基因的尾端的位置。盡管VP2/3和VPl具有分開(kāi)的開(kāi)放閱讀框(ORF),但是 BKV_5. 2和BKV_5. 1引物擴(kuò)增與VPl基因的起始端重疊的VP2/3基因的區(qū)域。在一些實(shí)施方式中,在嚴(yán)謹(jǐn)條件下所述擴(kuò)增引物中的至少一種與BKV基因組DNA 特異性結(jié)合。在一種實(shí)施方式中,所述寡核苷酸探針中的至少一種與BKV基因組DNA特異 性結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方式中,所述寡核苷酸探針中的至少一種與JCV基因組DNA特異性
      纟口口。在一些實(shí)施方式中,所述試劑盒還包含有利于檢測(cè)擴(kuò)增子或結(jié)合的探針的試劑。另一方面,提供了使用上述方法檢測(cè)來(lái)自器官供體的血液樣品是否存在多瘤病毒 的方法。另一方面,提供了用于監(jiān)測(cè)具有多瘤病毒的患者的治療的方法,所述方法包括使用
      6上述方法檢測(cè)所述患者的多瘤病毒的病毒載量。在一個(gè)實(shí)施例中,在所述治療之前和過(guò)程 中檢測(cè)所述病毒載量。這樣的治療可包括進(jìn)行抗病毒劑給藥,所述抗病毒劑諸如西多福韋、 來(lái)氟米特、喹諾酮抗生素和/或靜脈注射免疫球蛋白。根據(jù)下列詳細(xì)說(shuō)明其他目的、特征以及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見(jiàn)。由于對(duì)本領(lǐng)域技術(shù) 人員來(lái)說(shuō)根據(jù)所述詳細(xì)說(shuō)明在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)的各種改變和修改將變得顯而易見(jiàn), 所述詳細(xì)說(shuō)明和特定實(shí)施例僅出于舉例說(shuō)明給出。另外,實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明的原理,并非 能預(yù)期所述實(shí)施例特別例證本發(fā)明應(yīng)用至其對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)明顯有用的所有實(shí) 施例。


      圖1顯示了 BKV和JCV DNA的PCR擴(kuò)增。樣品Al和A7是不含有病毒DNA的對(duì)照。 A2含有具有終濃度為8 X IO5拷貝的BKV DNA。A3至A6分別含有濃度為8 X IO4拷貝、8 X IO3 拷貝、8X IO2拷貝、8X IO1拷貝的系列稀釋度的BKV DNA。A8含有具有終濃度為8X IO5拷 貝的JCV DNA。A9至A12分別含有濃度為8 X IO4拷貝、8 X IO3拷貝、8 X IO2拷貝、8 X IO1拷 貝的系列稀釋度的JCV DNA。圖2顯示了基于圖1的擴(kuò)增曲線的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。該標(biāo)準(zhǔn)曲線的誤差率(P值) 為0. 0949,有效性為1. 935。圖3提供了解鏈曲線分析。該圖分別顯示了不含有病毒DNA的樣品、僅含有JCV DNA的樣品和僅含有BKV DNA的解鏈峰值。圖4顯示了 BKV和JCV DNA的PCR擴(kuò)增。樣品D1是不含有病毒DNA的陰性對(duì)照。 D2含有具有終濃度為8 X IO5拷貝的BKV DNA。D3至D6分別含有濃度為8 X IO4拷貝、8 X IO3 拷貝、8 X IO2拷貝、8 X IO1拷貝的系列稀釋度的BKV DNA。微孔D7至D12分別為微孔Dl至 D6的復(fù)孔。樣品El為空白對(duì)照。樣品E2含有1 1比例的BKV DNA和JCV DNA,具有濃 度為8 X IO5的BKV DNA拷貝和濃度為8 X IO5的JCV DNA拷貝。樣品E3至E6含有微孔E2 的樣品的10倍系列稀釋度,E3的濃度8X IO4的BKV DNA拷貝和8 X IO4的JCV DNA拷貝; E4的濃度8 X IO3的BKV DNA拷貝和8 X IO3的JCV DNA拷貝;E5的濃度8 X IO2的BKV DNA 拷貝和8 X IO2的JCV DNA拷貝;E6的濃度8 X IO1的BKV DNA拷貝和8 X IO1的JCV DNA拷 貝。微孔E7至E12分別為微孔El至E6的復(fù)孔。圖5顯示了基于圖4的擴(kuò)增曲線的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。該標(biāo)準(zhǔn)曲線的誤差率(P值) 為0. 0391,有效性為1.934。圖6提供了解鏈曲線分析。該圖顯示了含有不同濃度的1 1比例的BKVDNA和 JCV DNA的樣品的解鏈峰值。El 不含有病毒DNA的陰性對(duì)照樣品;E2 :8X IO5的BKV DNA 拷貝和 8 X IO5 的 JCV DNA 拷貝;E3 :8X IO4 的 BKV DNA 拷貝和 8 X IO4 的 JCV DNA 拷貝;E4 8 X IO3 的 BKV DNA 拷貝和 8 X IO3 的 JCV DNA 拷貝;E5 :8 X IO2 的 BKV DNA 拷貝和 8 X IO2 的 JCV DNA拷貝;E6 :8X IO1的BKV DNA拷貝和8 X IO1的JCV DNA拷貝。微孔E7至E12分別 為微孔El至E6的復(fù)孔。圖7顯示了測(cè)定能力。在美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)(CAP)進(jìn)行的對(duì)比性測(cè)定中,對(duì)各種 測(cè)定進(jìn)行了比較。使用本申請(qǐng)的方法的定量結(jié)果處于或接近各陽(yáng)性CAP樣品的中值,而由 其他實(shí)驗(yàn)室使用其他技術(shù)獲得的定量值具有高度的可變性。
      圖8顯示了測(cè)定精確度。擴(kuò)增曲線顯示了本申請(qǐng)的方法在寬泛的動(dòng)態(tài)范圍的精確 度和再現(xiàn)性。
      具體實(shí)施例方式闡述并確定BKV基因組的穩(wěn)定保守區(qū)為用于評(píng)價(jià)樣品是否含有多瘤病毒、特別是 BKV的有效靶。對(duì)來(lái)自超過(guò)10種多瘤病毒的氨基酸和核苷酸序列的處于如下條件下的區(qū)域 進(jìn)行了對(duì)比和評(píng)價(jià)即,所述核苷酸序列在形式和功能方面處于嚴(yán)格生物學(xué)限制下,所述序 列的產(chǎn)物經(jīng)歷來(lái)自宿主免疫系統(tǒng)的有限選擇壓力,以及所述核苷酸序列或所述序列的產(chǎn)物 對(duì)于高效病毒復(fù)制和感染是必要的。VP2基因(NCBI登錄號(hào)YP_717937)的C末端、特別是 包含氨基酸272至323的區(qū)域被鑒定為理想的靶。因此,提供了檢測(cè)和定量BKV和JCV的 方法,以及用于這樣的方法的引物、探針以及試劑盒。生物序列下文提供了本文所使用的生物序列的說(shuō)明。NCBI登錄號(hào)NC_001538的序列的一部分1437位至1592位可用作靶BKV序列(SEQ ID NO 1) TCAGGAGAGTTTATAGAAAAAACTATTGCCCCAGGAGGTGCTAATCAAAGAACTGCTCCTCAATGGATGTTGCCTTTACTTCTAGGCCTGTACGGGACTGTAACACCTGCTCTTGAAGCATATGAAGATGGCCCCAACCAAAAGAAAAGGAGAGTG。另夕卜,NCBI登錄號(hào)NC_001538的另一部分1437位至1605位可用作靶序列。另外,NCBI登錄號(hào)NC_001538的另一部分1437位至1679位可用作靶序列。另外,NCBI登錄號(hào)NC_001538的另一部分1位至5153位可用作靶序列。另外,NCBI登錄號(hào)NC_001699的另一部分1位至5130位可用作靶序列。表1鑒定了示例的引物和探針,并提供了它們相對(duì)于NCBI登錄號(hào)NC_001538或 NC_001699 的位置。.
      權(quán)利要求
      1.一種檢測(cè)樣品中是否存在多瘤病毒的方法,所述方法包括檢測(cè)所述樣品是否存在具 有SEQ ID NO 1的序列的核酸、SEQ ID NO 1的序列的反向互補(bǔ)序列的核酸或與SEQ ID NO :1具有90%或更多序列同源性的序列的核酸。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,所述方法還包括擴(kuò)增SEQID NO :1的核酸、或SEQ ID NO :1的反向互補(bǔ)序列的核酸、或SEQ ID NO :1及其反向互補(bǔ)序列中任一者的一部分的核 酸,然后檢測(cè)是否存在所產(chǎn)生的擴(kuò)增子。
      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中,所述檢測(cè)步驟包括使所述樣品與能夠在嚴(yán)謹(jǐn)條 件下與SEQ ID NO :1或其反向互補(bǔ)序列的核酸雜交的至少一種寡核苷酸探針接觸。
      4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述檢測(cè)步驟還包括進(jìn)行解鏈曲線分析。
      5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 2 (BK_F_1. 1)和SEQ ID NO 3 (BK_R_1. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(BK_P_1. 3)和 SEQ ID NO :5(ΒΚ_Ρ_1· 4)。
      6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 2 (BK_F_1. 1)和SEQ ID NO 6 (BK_R_1. 5),所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(BK_P_1. 3)和 SEQ ID NO :5(ΒΚ_Ρ_1· 4)。
      7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 2 (BK_F_1. 1)和SEQ ID NO 3 (BK_R_1. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(BK_P_1. 3)和 SEQ ID NO :23(JC_P_1. 5)。
      8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 2 (BK_F_1. 1)和SEQ ID NO 3 (BK_R_1. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少寡核苷酸探針 SEQ ID NO :5(BK_P_1. 4)和 SEQ ID NO :23(JC_P_1. 5)。
      9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 8 (BK_F_2. 1)和 SEQ ID NO 9 (BK_R_2. 2)。
      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其中,所述檢測(cè)步驟包括使用與雙鏈DNA結(jié)合的花青 染料。
      11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 4 (多瘤病毒_F_3. 1)和SEQ ID NO 6 (多瘤病毒_R_3. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少 寡核苷酸探針 SEQ ID NO 9 (BK_P_3. 3)和 SEQ ID NO :13(JCV_P_3. 4)。
      12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 4 (多瘤病毒_F_3. 1)和SEQ ID NO 6 (多瘤病毒_R_3. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少 寡核苷酸探針 SEQ ID NO 9 (ΒΚ_Ρ_3· 3)。
      13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 4 (多瘤病毒_F_4. 1)和SEQ ID NO 6 (多瘤病毒_R_4. 2),所述檢測(cè)步驟包括使用至少 寡核苷酸探針 SEQ ID NO :14(BK_P_4. 3)和 SEQ ID NO :15(JCV_P_4. 4)。
      14.一種試劑盒,所述試劑盒包含能夠在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQ ID NO :1的核酸雜交的至 少一種寡核苷酸探針。
      15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的試劑盒,所述試劑盒還包含用于擴(kuò)增SEQID N0:1及其互 補(bǔ)序列或轉(zhuǎn)錄子的核酸的擴(kuò)增引物或用于擴(kuò)增SEQ ID NO :1及其互補(bǔ)序列或轉(zhuǎn)錄子的一部 分的核酸的擴(kuò)增引物。
      16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID N0:2(BK_ F_l. 1)和 SEQ ID NO :3(BK_R_1. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(ΒΚ_Ρ_1· 3)和 SEQ ID NO :5(ΒΚ_Ρ_1. 4)。
      17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID Ν0:2(ΒΚ_ F_l. 1)和 SEQ ID NO :6(BK_R_1. 5)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(ΒΚ_Ρ_1· 3)和 SEQ ID NO :5(ΒΚ_Ρ_1. 4)。
      18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID Ν0:2(ΒΚ_ F_l. 1)和 SEQ ID NO :3(BK_R_1. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO :4(ΒΚ_Ρ_1· 3)和 SEQ ID NO :23(JC_P_1. 5)。
      19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID N0:2(BK_ F_l. 1)和 SEQ ID NO :3(BK_R_1. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO :5(ΒΚ_Ρ_1· 4)和 SEQ ID NO :23(JC_P_1. 5)。
      20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID N0:4(多瘤病毒 _F_3. 1)和 SEQ ID NO :6(多瘤病毒 _R_3. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO 9 (BK_P_3. 3) 和 SEQ ID NO 13 (JCV_P_3. 4)。
      21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID N0:4(多瘤病毒 _F_3. 1)和 SEQ ID NO :6(多瘤病毒 _R_3. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO 9 (BK_P_3. 3)。
      22.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQID N0:4(多瘤病毒 _F_4. 1)和 SEQ ID NO :6(多瘤病毒 _R_4. 2)以及寡核苷酸探針 SEQ ID NO :14(ΒΚ_Ρ_4· 3) 和 SEQ ID NO 15 (JCV_P_4. 4)。
      23.—種試劑盒,所述試劑盒包含擴(kuò)增引物SEQ ID NO :8(BK_F_2. 1)和SEQ ID NO: 9 (BK_R_2. 2)。
      24.一種檢測(cè)來(lái)自器官供體的血液樣品是否存在多瘤病毒的方法,所述方法包括權(quán)利 要求1至13任一項(xiàng)所述的方法。
      25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法,其中,被考慮用于供出的器官選自腎臟、肝臟以及 心臟。
      26.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法,所述方法還包括排除來(lái)自被發(fā)現(xiàn)為多瘤病毒陽(yáng)性的 器官供體的器官。
      27.—種監(jiān)測(cè)具有多瘤病毒的患者的治療的方法,所述方法包括使用權(quán)利要求1至13 任一項(xiàng)所述的方法檢測(cè)所述患者的多瘤病毒載量。
      28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法,其中,在所述治療之前和過(guò)程中檢測(cè)所述病毒載量。
      29.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法,其中,所述治療包括進(jìn)行抗病毒劑的給藥。
      30.根據(jù)權(quán)利要求四所述的方法,其中,所述抗病毒劑選自西多福韋、來(lái)氟米特、喹諾 酮抗生素以及靜脈注射免疫球蛋白。
      31.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 2 和 SEQ ID NO 6 以及探針 SEQ ID NO :14。
      32.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQID NO 4 和 SEQ ID NO 6 以及探針 SEQ ID NO :14。
      33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQIDNO :2 和引物 BKV_5. 2 以及探針 SEQ ID NO :14。
      34.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述擴(kuò)增步驟包括使用至少擴(kuò)增引物SEQ ID NO 4 和引物 BKV_5. 2 以及探針 SEQ ID NO :14。
      全文摘要
      本發(fā)明提供了用于檢測(cè)樣品中是否存在諸如BKV(BK病毒)的多瘤病毒的方法和試劑盒。所述方法和試劑盒可用于對(duì)BKV進(jìn)行定量并區(qū)分BKV與JCV。
      文檔編號(hào)C12Q1/70GK102066580SQ200980112961
      公開(kāi)日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2009年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月20日
      發(fā)明者巖城公輔 申請(qǐng)人:巖城公輔
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