專利名稱：包含家族44木葡聚糖酶變體的洗滌劑組合物的制作方法
包含家族44木葡聚糖酶變體的洗滌劑組合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含屬于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶變體的洗滌劑組合物。
背景技術(shù)：
木葡聚糖是植物初生(生長(zhǎng))細(xì)胞壁中的主要結(jié)構(gòu)多糖。在結(jié)構(gòu)上，木葡聚糖由 纖維素樣β_1，4-連接葡萄糖主鏈組成，它在很多情況下被不同的側(cè)鏈取代。木葡聚糖據(jù) 信在植物初生壁中通過交聯(lián)纖維素微原纖維形成纖維素-木葡聚糖網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)發(fā)揮作用。木葡聚糖酶能夠催化木葡聚糖增溶成木葡聚糖低聚糖。一些木葡聚糖酶僅表現(xiàn) 出木葡聚糖酶活性，然而其他木葡聚糖酶表現(xiàn)出木葡聚糖酶和纖維素酶活性?？蓪⒛酒?聚糖酶歸類為EC 3. 2. 1.4或EC. 3.2. 1. 151。具有木葡聚糖酶活性的酶如Vincken等人 (1997)Carbohydrate Research 298(4) :299-310中所述的酶，其中表征了三個(gè)不同的內(nèi) 葡聚糖酶EndoI、EndoV和EndoVI，它們來自綠色木霉(Trichoderma viride)(類似于里 氏木霉，T.reesei)。Endol、EndoV和EndoVI分別屬于糖基水解酶家族5、7和1 2，參見 Henrissat,B.等人(1991,1993)。WO 94/14953 公開了克隆自真菌棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的家族12木葡聚糖酶(EGII)。WO 99/(^663公開了分別克隆自地衣芽孢桿菌 (Bacillus licheniformis)和 Bacillus agaradhaerens 的家族 12 和家族 5 木葡聚糖酶。 WO 01/062903公開了家族44木葡聚糖酶。具體地講，WO 99/02663和WO 01/062903提出木葡聚糖酶可用于洗滌劑。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供包含屬于家族44糖基水解酶的木葡聚糖酶變體的洗滌 劑組合物，所述木葡聚糖酶變體與其親本酶相比具有改善的性能。發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含親本木葡聚糖酶的分離變體的洗滌劑組合物，所述木葡聚糖酶變 體在一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)具有改變，所述位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組68、 123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、 366、1、374、7、140、8、14、21、211、37、45、13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、 139、268、142、159、164、102、168、176、180、482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、 2、240、244、5、247、249、328、252、259、406、267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、 18、302、165、80、303、316、169、322、120、146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、 389、391、10、392、396、177、397、399、409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、 225、450、454、3、455、456、299、461、470、204、476、488、347 和 507，這些位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于氨基酸 序列SEQ ID NO :3中的位點(diǎn)，并且其中所述的一個(gè)或多個(gè)改變是獨(dú)立地進(jìn)行的i)在占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸下游插入一個(gè)氨基酸，ii)去除占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸，或者iii)用一個(gè)不同的氨基酸取代占據(jù)所述位點(diǎn)氨基酸；以及所述親本木葡聚糖酶 是家族44木葡聚糖酶；并且所述變體具有木葡聚糖酶活性。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含親本家族44木葡聚糖酶變體的洗滌劑組合物，所述木葡聚糖酶變體具有一個(gè)改變，優(yōu)選地是在一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上的取代形式和/或插入形式 和/或去除形式，其中所述位點(diǎn)的編號(hào)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO :3的位點(diǎn)編號(hào)。本發(fā)明的變體具 有木葡聚糖酶活性并且潛在地還具有水解纖維素活性。本發(fā)明的變體與親本木葡聚糖酶相 比具有改善的性能。在一個(gè)方面，所述變體在液體洗滌劑，尤其是液體衣物洗滌劑組合物中 具有改善的穩(wěn)定性。
木葡聚糖酶活性本文將術(shù)語“木葡聚糖酶活性”定義為催化木葡聚糖水解的酶。 所述反應(yīng)涉及木葡聚糖中的l，4-i3_D-葡糖苷鍵的內(nèi)部水解。就本發(fā)明目的而言，使用 AZCL-木葡聚糖(來自Megazyme)作為反應(yīng)底物來測(cè)定木葡聚糖酶活性?？赏ㄟ^若干方法 進(jìn)行測(cè)定，例如本專利申請(qǐng)實(shí)施例2所述的方法或者如WO 01/6四03所述的方法。一單位 木葡聚糖酶活性(XyloU)的定義參照如WO 01/62903，第60頁，第3-17行所述的檢測(cè)分析 法。纖維素酶活性本文將術(shù)語“纖維素酶活性”定義為催化β-1，4_葡聚糖(纖維 素)中的l，4-i3-D-葡糖苷鍵水解的酶。就本發(fā)明目的而言，使用AZCL-HE-纖維素(來自 Megazyme)作為反應(yīng)底物來測(cè)定纖維素酶活性。變體本文將術(shù)語“變體”定義為具有木葡聚糖酶活性的多肽，所述多肽在一個(gè)或 多個(gè)(若干個(gè))特定位點(diǎn)上包含一個(gè)改變，例如取代、插入、和/或去除一個(gè)或多個(gè)(若干 個(gè))氨基酸殘基，所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO :3中的氨基酸位點(diǎn)。本發(fā)明的變體也可具有 纖維素酶活性。改變了的多肽(變體)通過修改編碼親本酶的多核苷酸序列進(jìn)行人工干預(yù) 獲得。親本酶可由SEQ ID NO 1, SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :6或與這些序列中的其中一 個(gè)具有至少75%的同一性的序列編碼。變體多肽序列優(yōu)選地是非天然存在的序列。野生型酶術(shù)語“野生型”木葡聚糖酶指由天然存在的微生物，例如天然存在的細(xì) 菌、酵母、或絲狀真菌表達(dá)的木葡聚糖酶。術(shù)語野生型可與術(shù)語“天然存在的”互換使用。親本酶如本文所用，術(shù)語“親本”木葡聚糖酶或“親本的”木葡聚糖酶指對(duì)其進(jìn)行 修改例如一種或多種取代、插入、去除、和/或截短以制備本發(fā)明的酶變體的木葡聚糖酶。 該術(shù)語也指與變體進(jìn)行比較及比對(duì)的多肽。親本可為天然存在的(野生型)多肽如SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 7的酶。然而親本多肽也可為天然存 在的多肽的變體，所述天然存在多肽的氨基酸序列已經(jīng)進(jìn)行了修改或改變。親本也可為等 位變體，它是由占據(jù)相同染色體座位的基因的兩個(gè)或更多個(gè)供選擇的替代形式中的任何一 個(gè)編碼的多肽。分離的變體或多肽如本文所用，術(shù)語“分離的變體”或“分離的多肽”指分離自某 種來源的變體或多肽，例如它從其中表達(dá)的宿主細(xì)胞或它通常存在于其中的酶絡(luò)合物。優(yōu) 選地，所述多肽根據(jù)SDS-PAGE測(cè)定純度為至少40%，更優(yōu)選純度為至少60%，甚至更優(yōu)選 純度為至少80%，最優(yōu)選地純度為至少90%，甚至最優(yōu)選純度為至少95%?；旧霞兊淖凅w或多肽術(shù)語“基本上純的變體”或“基本上純的多肽”本文指一種 多肽制品，所述多肽制品按重量計(jì)包含最多10%，優(yōu)選最多8%，更優(yōu)選最多6%，更優(yōu)選最 多5 %，更優(yōu)選最多4 %，更優(yōu)選最多3 %，甚至更優(yōu)選最多2 %，最優(yōu)選最多1 %，甚至最優(yōu)選 最多0. 5%的與其天然或重組結(jié)合的其他多肽材料。因此，基本上純的變體或多肽的純度按 制品中存在的多肽材料總重量計(jì)優(yōu)選為至少92%，優(yōu)選至少94%，更優(yōu)選至少95%，更優(yōu)選至少96 %，更優(yōu)選至少96 %，更優(yōu)選至少97 %，更優(yōu)選至少98 %，甚至更優(yōu)選至少99 %， 最優(yōu)選至少99. 5%，甚至最優(yōu)選100%。本發(fā)明的變體和多肽優(yōu)選地為基本上純的形式。這 可通過例如熟知的重組方法或經(jīng)典的純化方法制備變體或多肽來完成。成熟多肽本文將術(shù)語“成熟多肽”定義為具有木葡聚糖酶活性的多肽，該多肽是 其在翻譯和任何翻譯后修飾之后的最終形式，所述修飾例如是N-末端加工、C-末端截短、 糖基化、磷酸化等。就如SEQ ID NO :2所示的多肽而言，理論上成熟木葡聚糖酶序列可起始 于SEQ ID N0:2的位點(diǎn)觀。成熟序列終止于SEQ ID NO :2的位點(diǎn)551。理論上成熟的木葡 聚糖酶序列如SEQ ID NO 3所示。成熟多肽編碼序列本文將術(shù)語“成熟多肽編碼序列”定義為編碼具有木葡聚糖酶 活性的成熟多肽的核苷酸序列。在一個(gè)方面，成熟多肽編碼序列為SEQ ID NO :1的核苷酸 82 至 1653。同一性兩個(gè)氨基酸序列之間或兩個(gè)核苷酸序列之間的相關(guān)性，這種相關(guān)性用參 數(shù)“同一性”描述。就本發(fā)明目的而言，兩個(gè)氨基酸序列之間的同一性程度使用Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch，1970，J. Mol. Biol. 48 :443-453)如 EMBOSS 軟件包在 Needle 程序中執(zhí)行的(EMBOSS 歐洲分子生物學(xué)開放軟件包(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice 等人，2000 年，Trends in Genetics 16 :276-277 ;http:// emboss, org)算法進(jìn)行測(cè)定，優(yōu)選3. 0. 0或更新的版本。所用的任選參數(shù)是，10的空位罰分， 0. 5的空位延伸罰分，和EBL0SUM62 (EMBOSS版的BL0SUM62)取代矩陣。使用標(biāo)記為“最長(zhǎng) 同一性”的Needle輸出(使用-nobrief選項(xiàng)獲得)作為百分比同一性，并且如下計(jì)算(相同殘基X100)/(序列長(zhǎng)度-序列中的總空位數(shù))。就本發(fā)明目的而言，兩個(gè)脫氧核糖核苷酸序列之間的同一性程度使用 Needleman-Wunsch 算法(Needleman 和 Wunsch，1970，同上)如 EMBOSS 軟件包在 Needle 程序中執(zhí)行的(EMBOSS 歐洲分子生物學(xué)開放軟件包(The European Molecular Biology Open Software Suite), Rice 等人，2000 年，同上;http://emboss. org)算法進(jìn)行測(cè)定， 優(yōu)選3. 0. 0或更新的版本。所用的任選參數(shù)是10的空位罰分，0. 5的空位延伸罰分，和 EDNAFULL(EMBOSS版的NCBI NUC4. 4)取代矩陣。使用標(biāo)記為“最長(zhǎng)同一性”的Needle輸出 (使用-nobrief選項(xiàng)獲得)作為百分比同一性，并且如下計(jì)算(相同脫氧核糖核苷酸X100)/(序列長(zhǎng)度-序列中的總空位數(shù))。功能片段術(shù)語“多肽功能片段”用于描述來源于較長(zhǎng)多肽的多肽，例如成熟多肽， 并且該多肽已經(jīng)被從N-末端區(qū)域或C-末端區(qū)域或上述兩個(gè)區(qū)域截短以生成親本多肽的片 段。為了成為功能多肽，所述片段必須保留全長(zhǎng)/成熟多肽至少20%，優(yōu)選至少40%，更優(yōu) 選至少50 %，更優(yōu)選至少60 %，更優(yōu)選至少70 %，更優(yōu)選至少80 %，甚至更優(yōu)選至少90 %， 最優(yōu)選至少95%，甚至最優(yōu)選至少100%的木葡聚糖酶活性。等位變體術(shù)語“等位變體”本文指占據(jù)相同染色體座位的基因的任何兩個(gè)或更多 個(gè)供選擇的替代形式。等位變體天然來源于突變，并且可導(dǎo)致種群內(nèi)的多態(tài)性?；蛲蛔?可為沉默突變(不改變編碼的多肽)或者可編碼具有改變的氨基酸序列的多肽。多肽的等 位變體是由基因等位變體編碼的多肽。分離的多核苷酸如本文所用，術(shù)語“分離的多核苷酸”指分離自某種來源的多核苷酸。在一個(gè)方面，分離的多核苷酸的純度經(jīng)瓊脂糖電泳測(cè)定為至少40%，更優(yōu)選至少 60 %，甚至更優(yōu)選至少80 %，最優(yōu)選至少90 %，甚至最優(yōu)選至少95 %?；旧霞兊亩嗪塑账崛绫疚乃?，術(shù)語“基本上純的多核苷酸”指不含其他外來 的或不期望的核苷酸并且其形式適用于遺傳工程的多肽制備體系的多核苷酸。因此基本 上純的多核苷酸按重量計(jì)包含最多10%，優(yōu)選最多8 %，更優(yōu)選最多6 %，更優(yōu)選最多5%， 更優(yōu)選最多4 %，更優(yōu)選最多3 %，甚至更優(yōu)選最多2 %，最優(yōu)選最多1 %，甚至最優(yōu)選最多 0. 5%的與其天然或重組結(jié)合的其他多核苷酸材料。然而基本上純的多核苷酸可包括天然 存在的5’和3’非翻譯區(qū)例如啟動(dòng)子和終止子?；旧霞兊亩嗪塑账岬募兌葍?yōu)選地為按重 量計(jì)至少90 %，優(yōu)選至少92 %，更優(yōu)選至少94 %，更優(yōu)選至少95 %，更優(yōu)選至少96 %，更優(yōu) 選至少97 %，甚至更優(yōu)選至少98 %，最優(yōu)選至少99 %，甚至最優(yōu)選至少99. 5 %。本發(fā)明的 多核苷酸優(yōu)選地為基本上純的形式，即，多核苷酸制劑基本上不含與其天然或重組結(jié)合的 其他多核苷酸材料。多核苷酸可為基因組、cDNA、RNA、半合成的、合成來源的、或它們的任何 組合。編碼序列當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語“編碼序列”指多核苷酸，它直接確定其多肽產(chǎn)物的 氨基酸序列。編碼序列的邊界一般由開放閱讀框確定，它通常起始于ATG起始密碼子或供 選擇的起始密碼子如GTG和TTG并終止于終止密碼子如TAA、TAG、和TGA。編碼序列可為 DNA、cDNA、合成的、或重組的多核苷酸?？刹僮鞯剡B接術(shù)語“可操作地連接”本文指一種構(gòu)型，其中將對(duì)照序列相對(duì)于多 核苷酸序列的編碼序列置于合適的位點(diǎn)上使得所述對(duì)照序列引導(dǎo)多肽編碼序列的表達(dá)。宿主細(xì)胞如本文所用，術(shù)語“宿主細(xì)胞”包括易于用包含本發(fā)明多核苷酸的核酸 構(gòu)建體或載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)等的任何細(xì)胞類型。術(shù)語“宿主細(xì)胞”涵蓋親本細(xì)胞的 任何子代，它們由于在復(fù)制期間發(fā)生突變而不同于親本細(xì)胞。改善的化學(xué)穩(wěn)定性本文將術(shù)語“改善的化學(xué)穩(wěn)定性”定義為在存在化學(xué)制品的情 況下孵育一段時(shí)間后顯示保留酶活性的變體酶，所述化學(xué)制品是天然存在的或合成的，它 們減少親本酶的酶活性。改善的化學(xué)穩(wěn)定性也可使變體能夠在存在此類化學(xué)品的情況下更 好地催化反應(yīng)。在本發(fā)明的一個(gè)特定方面，改善的化學(xué)穩(wěn)定性是在洗滌劑、具體地講在液體 洗滌劑中的改善的化學(xué)穩(wěn)定性。當(dāng)把本發(fā)明的木葡聚糖酶變體混合到液體洗滌劑制劑中并 隨后在介于15和50°C之間的溫度下存儲(chǔ)時(shí)，改善的洗滌劑穩(wěn)定性具體地講是木葡聚糖酶 活性的改善穩(wěn)定性。在本發(fā)明中液體洗滌劑用作液體衣物洗滌劑特別有效。變體設(shè)計(jì)的規(guī)則就本發(fā)明而言，將SEQ ID NO :3中公開的木葡聚糖酶的氨基酸序列用于測(cè)定在另 一種木葡聚糖酶中對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基。將另一種木葡聚糖酶的氨基酸序列與SEQ ID NO 3中公開的木葡聚糖酶的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，并且基于比對(duì)結(jié)果，可確定對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO 3中公開的木葡聚糖酶氨基酸序列中的任何氨基酸殘基的氨基酸位點(diǎn)編號(hào)?？墒褂美纭癈lustalW” 進(jìn)行多肽序列比對(duì)(Thompson, J. D.，Higgins，D. G.和 Gibson, Τ. J. ,1994, CLUSTAL W:Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting,positions-specific gap penalties and weight matrix choice, Nucleic Acids Research 22:4673—4680)。可使用多月太比對(duì)作為模板，用來自DNA序列的對(duì)應(yīng)密碼子取代氨基酸來進(jìn)行DNA序列比對(duì)。在對(duì)本發(fā)明的不同木葡聚糖酶變體的描述中，使用以下命名法以便于參考。在所 有情況下，使用公認(rèn)的IUPAC單字母或三字母氨基酸縮寫。盥仗。就氨基酸取代而言，使用以下命名初始氨基酸，/位點(diǎn)/取代氨基酸。因 此將在位點(diǎn)2 上用丙氨酸取代蘇氨酸表示為“Thr2^Ala”或“T226A”。用加號(hào)(“ + ”) 分隔多個(gè)突變，例如“G205R+S411F”代表在位點(diǎn)205和411上分別用精氨酸(R)取代甘氨 酸(G)以及用苯丙氨酸(F)取代絲氨酸(S)。其中初始氨基酸可被選自由下列組成的組的 氨基酸取代將它表示為“KU9R，S，A，I，F(xiàn)，Q”，代表在位點(diǎn)129用選自由下列組成的組的 氨基酸取代賴氨酸(K)精氨酸(R)、絲氨酸(S)、丙氨酸(A)、異亮氨酸(I)、苯丙氨酸(F) 和谷氨酰胺(Q)。作為另外一種選擇，可將“K129R，S，A，I，F(xiàn)，Q”寫成K129R或KU9S、或 K129A、或 K129I 或 K129F 或 K129Q去臉。就氨基酸去除而言，使用以下命名初始氨基酸/位點(diǎn)/星號(hào)O。因此將 在位點(diǎn)195去除甘氨酸表示為“Glyl95*”或“G195*”。用加號(hào)(“ +，，)分隔多個(gè)去除，例如 “G195*+S4ir”。ΜΑ。就氨基酸插入而言，使用以下命名星號(hào)O/位點(diǎn)/小寫字母/插入的氨 基酸，其中小寫字母指示在位點(diǎn)編號(hào)下游增加的氨基酸。因此，在位點(diǎn)10下游插入谷氨酸 (E)表示為“*10aE”。如果第二個(gè)氨基酸例如纈氨酸(V)將在谷氨酸(E)之后被插入位點(diǎn) 10下游，將其表示為“*10aE+*10bV”。加到多肽的N-末端用0 (零)表示。將谷氨酸(E)和 纈氨酸(V)加到多肽的N-末端氨基酸用*0aE+*0bV表示。親本木葡聚糖酶在本發(fā)明中，親本木葡聚糖酶是(a)屬于糖基水解酶家族44的木葡聚糖酶，也稱 為家族44木葡聚糖酶；或(b)選自由下列組成的組的多肽SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5和 SEQ ID NO 7 ；或(c)包含具有與SEQ ID NO :3的成熟多肽至少75%同一性的氨基酸序列 的多肽；或(d)由在至少中嚴(yán)格條件下與以下序列雜交的多核苷酸編碼的多肽(i)SEQID NO :1或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :6的成熟多肽編碼序列，(ii)包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO 6的成熟多肽編碼序列的基因組DNA序列，或(iii) (i)或(ii)的 全長(zhǎng)互補(bǔ)鏈；或(e)由多核苷酸編碼的多肽，所述多核苷酸包含具有與SEQ ID N0:1的成熟 多肽編碼序列至少70%的同一性的核苷酸序列。在第一方面，親本木葡聚糖酶包含氨基酸序列，所述氨基酸序列優(yōu)選地具有與SEQ ID NO 3的成熟多肽至少70 %，更優(yōu)選至少75 %，更優(yōu)選至少80 %，更優(yōu)選至少85 %，更優(yōu) 選至少90 %，更優(yōu)選至少95 %，更優(yōu)選至少96 %，甚至更優(yōu)選至少97 %，最優(yōu)選至少98 %， 或甚至最優(yōu)選至少99%的同一性，其具有木葡聚糖酶活性(下文稱為“同源多肽”)。在一 個(gè)方面，同源多肽具有與SEQ ID NO :3的成熟多肽有十個(gè)氨基酸，優(yōu)選地九個(gè)，更優(yōu)選地八 個(gè)，更優(yōu)選七個(gè)，更優(yōu)選六個(gè)，更優(yōu)選五個(gè)氨基酸，更優(yōu)選四個(gè)氨基酸，甚至更優(yōu)選三個(gè)氨基 酸，最優(yōu)選兩個(gè)氨基酸，甚至最優(yōu)選一個(gè)氨基酸不同的氨基酸序列。基本上同源的親本木葡聚糖酶可具有一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))氨基酸改變?nèi)缛〈?去除和/或插入。這些改變優(yōu)選地影響不大，即保守氨基酸取代和其他取代不顯著地影響 蛋白或多肽的三維折疊構(gòu)型或活性；小的去除通常為一至約9個(gè)氨基酸，優(yōu)選地一至約15 個(gè)氨基酸并且最優(yōu)選地一至約30個(gè)氨基酸；以及小的氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸殘基，小的連接肽為至多約五至十個(gè)殘基，優(yōu)選地10至15個(gè)殘基并且最優(yōu)選地 20至25個(gè)殘基，或者有利于純化(親和標(biāo)記物)的小的延伸，例如聚組氨酸片段或蛋白質(zhì) A(Nilsson 等人，1985，EMBO J. 4 :1075 ；Nilsson 等人，1991，Methods Enzymo 1. 198 :3。一 般來講也參見 Ford 等人，1991，Protein Expression and Purification 2:95-107。雖然上述改變優(yōu)選地影響不大，但此類改變也可為實(shí)質(zhì)性的例如融合至多300個(gè) 氨基酸或更大的較大多肽作為氨基或羧基末端延伸。保守取代的實(shí)例包括堿性氨基酸(精氨酸、賴氨酸和組氨酸)、酸性氨基酸(谷氨 酸和天冬氨酸)、極性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和 纈氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、絲氨 酸、蘇氨酸和甲硫氨酸)。一般不改變比活性的氨基酸取代是本領(lǐng)域已知的并且描述于例如 Neurath 和 Hill，1979，The Proteins, Academic Press, New York。最經(jīng)常發(fā)生的改變?yōu)?Ala/^er、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser,Ala/Gly,Ala/Thr,Ser/Asn.Ala/Val、Ser/Gly,Tyr/ Phe> Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、禾口 Asp/Gly。本發(fā)明的木葡聚糖酶多肽的必需氨基酸可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行鑒定，例如 定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變(Cunninghan^P flfells，Science244 :1081-1085,1989) 在 后一項(xiàng)技術(shù)中，將單個(gè)丙氨酸突變導(dǎo)入分子的每個(gè)殘基，并測(cè)試所得突變分子的生物活性 (即木葡聚糖酶活性)以鑒定對(duì)該分子活性至關(guān)重要的氨基酸殘基。也參見Hilton等人， J. Biol. Chem. 271 =4699-4708,1996。酶的活性位點(diǎn)或其他生物學(xué)相互作用也能通過結(jié)構(gòu)物 理分析進(jìn)行鑒定，這通過如核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和標(biāo)記技術(shù)，連同推定接觸 位點(diǎn)氨基酸突變技術(shù)一起進(jìn)行測(cè)定。參見例如de Vos等人，Science 255 =306-312,1992 ； Smith 等人，J. Mol. Biol. 224 :899-904,1992 ；Wlodaver 等人，F(xiàn)EBS Lett. 309 :59_64，1992。 必需氨基酸的確定也能從分析與本發(fā)明多肽相關(guān)的多肽的同源性而推斷出來。屬于家族44 糖基水解酶的酶晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)公布于Kitago等人，J. Biol. Chem. Vol. 282 :35703-35711, 2007。基于這一結(jié)構(gòu)，在計(jì)算機(jī)中生成親本木葡聚糖酶(SEQ ID NO 3)的三維結(jié)構(gòu)是可 能的。基于與公布結(jié)構(gòu)的比較，已經(jīng)確定SEQ ID NO :3中的以下殘基對(duì)酶功能至關(guān)重要 E187 (催化-酸/堿)、E358 (催化-親核物質(zhì))、E56 (羧酸根基團(tuán)配位Ca2+)和DIM (羧 酸根基團(tuán)配位Ca2+)。因此，這些位點(diǎn)應(yīng)該優(yōu)選不在親本酶中突變。親本木葡聚糖酶優(yōu)選包含SEQ ID NO 3的氨基酸序列或其等位變體；或其具有木 葡聚糖酶活性的片段。在一個(gè)方面，親本木葡聚糖酶包含SEQID NO :2的氨基酸序列。在另 一方面，親本木葡聚糖酶包含SEQ ID NO :2的成熟多肽。在另一方面，親本木葡聚糖酶由 SEQ ID NO 3的氨基酸序列或其等位變體組成；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。在另一 方面，親本木葡聚糖酶包含SEQ ID NO :5的氨基酸序列或其等位變體；或其具有木葡聚糖 酶活性的片段。在另一方面，親本木葡聚糖酶包含SEQ ID NO :7的氨基酸序列或其等位變 體；或其具有木葡聚糖酶活性的片段。SEQ ID NO 3的成熟多肽的片段是從該氨基酸序列的氨基和/或羧基末端去除一 個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))氨基酸并仍保留木葡聚糖酶活性的多肽。在第二方面，親本木葡聚糖酶由在非常低的嚴(yán)格條件下，優(yōu)選低嚴(yán)格條件下，更優(yōu) 選中嚴(yán)格條件下，更優(yōu)選地中-高嚴(yán)格條件下，甚至更優(yōu)選高嚴(yán)格條件下，最優(yōu)選非常高的 嚴(yán)格條件下與以下序列雜交的多核苷酸編碼(i) SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :4或SEQ IDNO 6的成熟多肽編碼序列，(ii)包含SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 6的成 熟多肽編碼序列的基因組DNA序列，(iii)⑴或( )的亞序列，或(iv) (i)、(ii)、或(iii) 的全長(zhǎng)互補(bǔ)鏈(J. Sambrook, E. F. Fritsch，和 T. Maniatis，1989，Molecular Cloning, A Laboratory Manual，第 2 版，Cold Spring Harbor, New York)。所述亞序列可編碼具有木 葡聚糖酶活性的多肽片段。在一個(gè)方面，所述互補(bǔ)鏈?zhǔn)荢EQ ID NO :1或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO 6的成熟多肽編碼序列的全長(zhǎng)互補(bǔ)鏈。SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :6的成熟多肽編碼序列的亞序列或它 們的同源物是其中已經(jīng)從5’ -和/或3’ -末端去除一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))核苷酸的核苷 酸序列，其中由所述亞序列編碼的多肽具有木葡聚糖酶活性。親本酶也可為具有木葡聚糖酶活性的多肽的等位變體。SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 6的多核苷酸；或它們的亞序列；以 及SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 7的氨基酸序列；或它們的片段；可用于設(shè) 計(jì)核酸探針以根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法鑒定并克隆編碼親本木葡聚糖酶的DNA，所述親本木 葡聚糖酶來自不同屬或菌種的菌株。具體地講，此類探針可用于按照標(biāo)準(zhǔn)的Southern印跡 法與受關(guān)注的屬或菌種的基因組或cDNA雜交以鑒定并分離其中對(duì)應(yīng)的基因。此類探針可 顯著地比完整序列更短，但是長(zhǎng)度應(yīng)為至少14個(gè)，優(yōu)選至少25個(gè)，更優(yōu)選至少35個(gè)，最優(yōu) 選至少70個(gè)核苷酸。然而優(yōu)選地是核酸探針長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸。例如核酸探針長(zhǎng) 度可為至少200個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少300個(gè)核苷酸，更優(yōu)選至少400個(gè)核苷酸，或最優(yōu)選至 少500個(gè)核苷酸。甚至可使用更長(zhǎng)的探針，例如核酸探針長(zhǎng)度為優(yōu)選至少600個(gè)核苷酸，更 優(yōu)選至少700個(gè)核苷酸，甚至更優(yōu)選至少800個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少900個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少 1000個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少1100個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少1200個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少1300個(gè)核苷 酸，優(yōu)選至少1400個(gè)核苷酸，優(yōu)選至少1500個(gè)核苷酸或最優(yōu)選至少1600個(gè)核苷酸。能夠 使用DNA和RNA探針。探針通常進(jìn)行標(biāo)記以檢測(cè)對(duì)應(yīng)的基因(例如用％P、3H、35S、生物素、或 親和素標(biāo)記)。本發(fā)明涵蓋此類探針?？珊Y選從其他生物中制備的基因組DNA文庫以獲取與上述探針雜交并編碼親本 木葡聚糖酶的DNA。可通過瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他分離技術(shù)分離來自其他生 物的基因組或其他DNA。可將來自文庫的DNA或分離的DNA轉(zhuǎn)移到硝化纖維或其他合適載 體材料上并固定在其上。為了鑒定與SEQ ID NO :1或其亞序列同源的克隆或DNA，將載體 材料用于Southern印跡法。就本發(fā)明目的而言，雜交指所述多核苷酸在低至非常高的嚴(yán)格 條件下雜交到對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO :1所示的多核苷酸、它的互補(bǔ)鏈、或其亞序列的標(biāo)記核苷 酸探針上。與所述探針雜交的分子能夠使用例如X射線膠片或本領(lǐng)域已知的任何其他檢測(cè) 手段進(jìn)行檢測(cè)。在一個(gè)方面，核酸探針是SEQ ID NO=I的成熟多肽編碼序列。在另一方面，核酸探 針是SEQ ID NO 1的核苷酸82至1653。在另一方面，核酸探針是編碼SEQ ID NO 2的多 肽的多核苷酸序列或其亞序列。在另一方面，核酸探針是SEQ ID NO :1。就長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的長(zhǎng)探針而言，將非常低至非常高的嚴(yán)格條件定義為 在42°C，在5X SSPE，0. 3% SDS，200微克/mL剪切變性鮭精DNA，以及25%甲酰胺(非常低 和低嚴(yán)格條件)或35%甲酰胺(中和中-高嚴(yán)格條件)或50%甲酰胺(高和非常高嚴(yán)格 條件)中預(yù)雜交和雜交，隨后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)Southern印跡程序12至M小時(shí)(最適)。
就長(zhǎng)度為至少100個(gè)核苷酸的長(zhǎng)探針而言，最后用2X SSC，0.2% SDS優(yōu)選地在 450C (非常低的嚴(yán)格條件)，更優(yōu)選地在50°C (低嚴(yán)格條件)，更優(yōu)選地在55°C (中嚴(yán)格條 件)，更優(yōu)選地在60°C (中-高嚴(yán)格條件)，甚至更優(yōu)選地在65°C (高嚴(yán)格條件)，最優(yōu)選在 700C (非常高的嚴(yán)格條件)洗滌載體材料三次，每次15分鐘。就長(zhǎng)度為約15個(gè)核苷酸至約70個(gè)核苷酸的短探針而言，將嚴(yán)格條件定義為在約 5°C至約10°C (低于計(jì)算出的Tm，所用的計(jì)算根據(jù)Bolton和McCarthy (1962，Proceedings of the National Academy of Sciences USA 48 :1390))，在 0. 9M NaCl，0.09M Tris-HCl pH 7. 6，6mM EDTA,0. 5 % NP-40, IX Denhardt 溶液，ImM 焦磷酸鈉，ImM 磷酸二 氫鈉， 0. ImMATP,以及0. 2mg酵母RNA每毫升中預(yù)雜交、雜交、以及雜交后洗滌，隨后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn) Southern印跡程序12-24小時(shí)(最合適)。就長(zhǎng)度為約15個(gè)核苷酸至約70個(gè)核苷酸的短探針而言，將載體材料在6X SCC加 0. 1 % SDS中洗滌一次，時(shí)間15分鐘，并且用6X SSC洗滌兩次，每次15分鐘，洗滌溫度為 5°C至10°C，低于計(jì)算出的Tm。在第三方面，親本木葡聚糖酶由包含以下核苷酸序列或由以下核苷酸序列組成的 多核苷酸編碼所述核苷酸序列具有與SEQ ID NO :1的成熟多肽編碼序列優(yōu)選至少65%， 更優(yōu)選至少70 %，更優(yōu)選至少75 %，更優(yōu)選至少80 %，更優(yōu)選至少85 %，甚至更優(yōu)選至少 90 %，最優(yōu)選至少95 %，甚至最優(yōu)選地96 %，97 %，98 %，或99 %的同一性，所述成熟多肽編 碼序列編碼活性多肽。在一個(gè)方面，成熟多肽編碼序列為SEQ ID NO :1的核苷酸82至1653。親本木葡聚糖酶可獲取自任何屬的微生物。在一個(gè)方面，將親本木葡聚糖酶分泌 到細(xì)胞外。在另一方面親本木葡聚糖酶可為細(xì)菌木葡聚糖酶。例如木葡聚糖酶可為革蘭氏陽 性菌多肽例如芽孢桿菌屬，優(yōu)選來自芽孢桿菌屬/乳酸桿菌亞群，優(yōu)選來自屬類芽胞桿菌 屬菌種，尤其是多粘類芽孢桿菌，例如多粘類芽胞桿菌ATCC 832，優(yōu)選地所述木葡聚糖酶是 家族44木葡聚糖酶，例如如WO 01/6四03所述的木葡聚糖酶，更優(yōu)選SEQ ID NO 5的木葡 聚糖酶，更優(yōu)選來自SEQ ID NO :7木葡聚糖酶，最優(yōu)選SEQ ID NO :2的木葡聚糖酶或它們的 成熟多肽。變體的制備親本木葡聚糖酶的變體能夠根據(jù)本領(lǐng)域已知的任何誘變程序制備，例如隨機(jī)和/ 或定點(diǎn)誘變、合成基因構(gòu)建、半合成基因構(gòu)建、隨機(jī)誘變、改組等。合成基因構(gòu)建需要體外合成設(shè)計(jì)的多核苷酸分子以編碼受關(guān)注的多肽分子?；?合成能夠利用許多技術(shù)進(jìn)行，例如基于多元芯片的技術(shù)，該技術(shù)在Tian等人(Tian，等人， Nature 432:1050-1054)中進(jìn)行了描述，以及類似的技術(shù)，其中合成寡核苷酸并將其裝配 到光可編程的微流體芯片上。半合成基因構(gòu)建通過組合使用合成基因構(gòu)建、和/或定點(diǎn)誘變、和/或隨機(jī)誘變、 和/或改組來完成。半合成構(gòu)建的典型是通過利用合成多核苷酸片段的過程與PCR技術(shù)組 合使用。因此，可從頭合成限定的基因區(qū)域，然而其他區(qū)域可使用位點(diǎn)特異性誘變引物進(jìn)行 擴(kuò)增，而其他區(qū)域可經(jīng)過易錯(cuò)PCR或非易錯(cuò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增。然后多核苷酸片段可進(jìn)行改組。定點(diǎn)誘變是其中在編碼親本木葡聚糖酶的多核苷酸中的一個(gè)限定位點(diǎn)上制造一 個(gè)或若干個(gè)突變的技術(shù)。該技術(shù)能在體外或體內(nèi)進(jìn)行。
定點(diǎn)誘變能在體外通過PCR完成，所述PCR涉及包含期望誘變的寡核苷酸引物的 使用。定點(diǎn)誘變也能在體外通過盒誘變進(jìn)行，所述盒誘變涉及限制性酶在包含編碼親本木 葡聚糖酶的多核苷酸中的一個(gè)位點(diǎn)上裂解以及隨后連接在多核苷酸中包含突變的寡核苷 酸。通常消化質(zhì)粒和寡核苷酸的限制性酶是相同的，使得質(zhì)粒的粘性末端和插入序列彼 此連接。為了進(jìn)一步描述適用的技術(shù)，參考Sambrook等人(1989)，Molecular cloning A laboratory manual, Cold Spring Harbor lab. , Cold Spring Harbor, NY ；Ausubel, F. Μ.等人(eds. ) “Current protocols in Molecular Biology" . John Wiley 禾口 Sons, 1995 ；Harwood, C. R.禾口 Cutting, S. Μ· (eds. ) "Molecular Biological Methods for Bacillus” · John Wiley 和 Sons, 1990)，以及 WO 96/34946 ；Scherer 和 Davis, 1979，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76 :4949-4955 ；以及 Barton 等人，1990，Nucleic Acids Research 18 :7349-4966ο在連接反應(yīng)后，連接混合物可用于轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞以用于克隆目的。常使用大腸桿 菌細(xì)胞，如Ausubel，F(xiàn). M.等人所述。轉(zhuǎn)化的大腸桿菌細(xì)胞能在液體培養(yǎng)基中或固體瓊脂 板上繁殖，能從轉(zhuǎn)化細(xì)胞中拯救質(zhì)粒并用于轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌細(xì)胞。適用的感受態(tài)芽孢桿 菌屬細(xì)胞如MB1510，168-衍生物(例如以登錄號(hào)IAl 168 trpC2得自BGSC的產(chǎn)品)可如 W003/095658所述進(jìn)行轉(zhuǎn)化。用于文庫構(gòu)建的大腸桿菌質(zhì)粒攜帶的整合盒可用于芽孢桿菌 屬轉(zhuǎn)化。該方法詳述于WO 03/095658。作為另外一種選擇，可使用體外擴(kuò)增的PCR-SOE-產(chǎn) 物(Melnikov 禾口 Youngman, Nucleic Acid Research 27,1056)。定點(diǎn)誘變可通過本領(lǐng)域已知的方法在體內(nèi)完成。參見例如美國(guó)專利公開申請(qǐng)公布 2004/0171154 ；Storici 等人，2001 ,Nature Biotechnology 19 :773-776 ；Kren 等人，1998， Nat. Med. 4 :285-290 ；以及Calissano禾口Macino，1996，F(xiàn)ungal Genet. Newslett. 43 :15_16。本發(fā)明能夠使用任何定點(diǎn)誘變程序。有許多可利用的商業(yè)試劑盒可用于制備親本 木葡聚糖酶變體。能使用已知的誘變、重組、和/或改組方法制造并測(cè)試單個(gè)或多個(gè)氨基酸取 代、去除、和/或插入，隨后進(jìn)行有關(guān)的篩選程序，例如那些由以下文獻(xiàn)公開的程序 Reidhaar-Olson 禾口 Sauer，1988，Science 241 :53-57 ；Bowie 禾口 Sauer，1989，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 :2152-2156 ；WO 95/17413;或 WO 95/22625。可用的其他方法包括易 錯(cuò)PCR、噬菌體展示(例如Lowman等人，1991，Biochem. 30 :10832-10837 ；美國(guó)專利公開 5，223，409 ；WO 92/06204)和定位誘變(Derbyshire 等人，1986，Gene46 145 ；Ner 等人， 1988，DNA 7 :127)。上述的誘變/改組方法能與高通量自動(dòng)篩選方法組合使用以檢測(cè)由克隆的誘變 多肽的活性，所述多肽由宿主細(xì)胞表達(dá)，例如上述的芽孢桿菌屬。編碼具有木葡聚糖酶活性 的多肽的誘變DNA分子可從宿主細(xì)胞中回收并使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法快速測(cè)序。變體在本發(fā)明中，親本木葡聚糖酶的分離變體包含在一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上 的改變，所述位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組:68、123、156、118、200、129、137、193、92、 83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、366、1、374、7、140、8、14、21、211、37、45、 13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、139、268、142、159、164、102、168、176、180、 482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、2、240、244、5、247、249、328、252、259、406、20267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、18、302、165、80、303、316、169、322、120、 146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、389、391、10、392、396、177、397、399、 409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、225、450、454、3、455、456、299、461、470、 204、476、488、347和507，其中具有木葡聚糖酶活性的變體包含氨基酸序列，所述氨基酸序 列具有與親本木葡聚糖酶的氨基酸序列至少70 %，更優(yōu)選至少75 %，更優(yōu)選至少80 %，更 優(yōu)選至少85 %，甚至更優(yōu)選至少90 %，更優(yōu)選至少95 %，更優(yōu)選至少約97 %，最優(yōu)選至少 98%，以及甚至更優(yōu)選99%的同一性。位點(diǎn)編號(hào)為相對(duì)于SEQ ID NO :3的氨基酸序列。與親 本木葡聚糖酶相比，在一個(gè)或多個(gè)上文確定的位點(diǎn)包含改變的變體優(yōu)選地具有在洗滌劑、 優(yōu)選地在液體洗滌劑中提高的穩(wěn)定性。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中變體包含一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))以下改變的組合Vl*+V2*+H3* ；VlQ+*laE+*lbV ；H3A ；H3A+H436A ；K8A, Q, S ；T9D ；T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T ；I10V+D33E+M40L+A41T+Q67M+Y73F+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+T374A+S416A+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S522* ；I10V+F17S+D33E+M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+V219A+D249N+V272A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+K470T+I473S+V477I ；I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+H164N+N168K+T172A+V219A+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+V272A+I337L+M356L+T374A+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+D33E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+N168K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473S+V477I+E489A+A490V+T517A+S522*；I10V+F17S+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+T320A+I337L+M356L+T374A+V397A+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473S+V477I+T517A+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T104A+Q137E+N153K+R156Q+V219A+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+N415S+D420G+T4
21I+S424H+N441D+D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+T104A+Q137E+R156Q+V159A+H164N+N168K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A ；110V+F17S+Y53H+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+T172V+A177T+I222V+V228I+D249N+S269N+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；K13A+K129A ；K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P ；K13A, R ；K18R ；R20A ；K21Q+K129A ；K21Q, R, T ；Q32H+M40L+R49G+D65E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+T104A+Q137E+H164N+K202E+I222V+V228I+D249N+M356L+T374A ；D33V+Q68H+N168H+V450I ；L34F, I, Μ, V ；L34I+K129A ；D37G, N+K129A+R156Y ；E38I, V ；M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+N153K+H164N+D249N+V272A+I337L+M356L+V397A+N415S+T421I+S424N+N441D+V450I+E489A+A490V+T517A+S522* ；M40V ；L45I ；Q68H, M, N ；Q68H+G200P+N331F ；Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F ；Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+K118R+R156F, Y ；Q68H+K118R+R156Y+G200P ；Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F ；Q68H+K129A, T+R156K+G200P+N331F ；Q68H+R156F, V, Y+G200P+N331F ；Q68H+R156Y ；Q68H+R156Y+H193T ；Q68H+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V ；
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92A, D，I，S，V, Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F ；Q68H+T92V+G200P+M310V ；Q68H+T92V+G200P+M310V+N33IF ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446KQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H, K,Q ；Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T ；Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V ；Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T ；Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N ；Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T ；Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L ；Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92V+K118A, R+R156Y,F ；Q68H+T92V+K118A+S123P, T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C ；Q68H+T92V+R156F, V, Y+G200P+M310V ；Q68H+T92V+R156F, V, Y+G200P+M310V+N331F ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T+G200P+M310V ；Q68H+T92V+R156Y ；S76E, I，K, M, R, Τ, V, W ；S76W+G200P ；S76W+G200P+A224P ；G78A+K118A++K129A+R156Y ；G78A+K118A+K129A+R156Y ；G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ；G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A ；G78A, N, S ；G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y ；
K129A+K445S ；K129A+K470T ；K129A+Q137E+R156Y ；K129A+Q137E+R156Y+G200P ；K129A+Q137E+R156Y+K470T ；K129A+Q137E+V139K+N140F+Q147S+R156Y ；K129A+R156Y ；K129A+R156Y+A177T+V179I+A183S ；K129A+R156Y+A328G ；K129A+R156Y+D247G ；K129A+R156Y+D249G, N, S ；K129A+R156Y+D303I, K, S, V ；K129A+R156Y+D324N ；K129A+R156Y+D366H+T374A ；K129A+R156Y+D461N, Q, T ；K129A+R156Y+E288Q ；K129A+R156Y+G200P ；K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K ；K129A+R156Y+H164N ；K129A+R156Y+H436Y ；K129A+R156Y+I10V+V14I+D19E ；K129A+R156Y+I222V+A224P+V228I+V232A ；K129A+R156Y+K176P, S ；K129A+R156Y+K275T ；K129A+R156Y+K322I+K454Q ；K129A+R156Y+K406N+N415G ；K129A+R156Y+K454Q ；K129A+R156Y+L380F+N383Y+D384G+N389T ；K129A+R156Y+N298F+E299N+G301T ；K129A+R156Y+N302K+D303L, S ；K129A+R156Y+N331F ；K129A+R156Y+P507A ；K129A+R156Y+R267H ；K129A+R156Y+R409L, T ；K129A+R156Y+S443D+K445S+L4491+V4501+S455N+M456Y ；K129A+R156Y+T244D ；K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y ；K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A ；Q137D, E ；N140F ； K142A, Q, R ； F146C+H164C ； F146K,L ； F146L+K322I ； L148K+N168D ； Q149E ；R156A, D, E, F, I，K, L, M, N, P, Q, R, S, Τ, V, W, Y ；R156Y+N331F ；V159M ；H164A,N ；L166I ；N168D ；K169A, Q, R ；K176P ；A177E, T ；K180R ；H193A, D, S, T ； R197A, L ； H199A ；G200A, C, D, E, F, H, I，K, L, M, N, P, Q, R, S, Τ, V, W, Y ； G200P+A224P ； K202N, Q, R ； S214E ； K217A ； A221K ； G225S ； V232A ； G237A, S, V K240A, Q, R K252A, Q, R G253A ； R267A ； L268I ； K275A, Q, R ； L278I ； F281L ； M290R ； R295A ；
S443E,K, Q ；K445A, R, S ；K445C+K470C ；H448A ；K454R ；S467R+G468S+A469T ；G468S, Y ；K470P, R, T ；I473T ；K476Q ；K482A, Q, R ；K488A, Q, R, T ；A490R ；G498A, D, S ；R500A, Τ, V ；H512A ；T517A+G518D ；或G518D ；在一個(gè)方面，在本發(fā)明變體中的氨基酸改變的數(shù)目包括優(yōu)選地總數(shù)55個(gè)，優(yōu)選52 個(gè)，更優(yōu)選50個(gè)，更優(yōu)選40個(gè)，更優(yōu)選30個(gè)，更優(yōu)選20個(gè)，更優(yōu)選15個(gè)，更優(yōu)選十個(gè)，更 優(yōu)選九個(gè)，更優(yōu)選八個(gè)，甚至更優(yōu)選七個(gè)，甚至更優(yōu)選六個(gè)，甚至更優(yōu)選五個(gè)，甚至更優(yōu)選四 個(gè)，甚至更優(yōu)選三個(gè)，最優(yōu)選兩個(gè)改變，以及最優(yōu)選一個(gè)改變。在另一方面改變的總數(shù)為一 個(gè)，優(yōu)選兩個(gè)，更優(yōu)選三個(gè)，甚至更優(yōu)選四個(gè)，甚至更優(yōu)選五個(gè)，甚至更優(yōu)選六個(gè)，甚至更優(yōu) 選七個(gè)，甚至更優(yōu)選八個(gè)，甚至更優(yōu)選九個(gè)，最優(yōu)選十個(gè)。改變可為以下形式i)在占據(jù)所 述位點(diǎn)的氨基酸下游插入一個(gè)氨基酸；ii)去除占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸，或iii)用一個(gè)不 同的氨基酸取代占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸。可進(jìn)行彼此獨(dú)立的改變，例如與親本木葡聚糖酶 相比，在一個(gè)位點(diǎn)可以有一個(gè)插入，而在第二個(gè)位點(diǎn)有一個(gè)取代并在第三個(gè)位點(diǎn)有一個(gè)刪 除。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中所述變體僅包含取代。在本發(fā)明的一個(gè)方面基于共有序列分析鑒定將發(fā)生突變的位點(diǎn)。所述分析通過 將SEQ ID NO 3與SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 7以及來自u(píng)niprot數(shù)據(jù)庫的其他序列比 對(duì)來完成，來自u(píng)niprot數(shù)據(jù)庫的其他序列與SEQ ID NO 3的家族44糖基水解酶區(qū)域具 有30%的同一性。所得共有序列如

圖1所示。共有序列1是在給定位點(diǎn)包含比對(duì)中出現(xiàn) 頻率最高的氨基酸的序列，共有序列2是在給定位點(diǎn)具有出現(xiàn)頻率第2高的氨基酸的序列 等等。在本發(fā)明的一個(gè)方面，SEQ ID NO :3的一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))殘基被來自共有序列 1或共有序列2或共有序列3或共有序列4的對(duì)應(yīng)殘基取代。在本發(fā)明的一個(gè)方面變體在 一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)包含改變，所述位點(diǎn)選自由通過共有序列分析鑒定的52個(gè)位點(diǎn) 組成的組位點(diǎn)編號(hào) 10、19、68、80、89、104、111、117、123、129、137、139、140、147、156、159、 164、165、177、179、183、200、204、211、222、224、225、228、232、259、267、268、269、281、328、 345、366、374、380、383、384、406、415、436、443、445、449、450、455、456、488 和 507。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中所述改變?yōu)槿〈蛉舾蓚€(gè)取代，選自由下列組成的組I10V、D19E、Q68H、 L80V、G89A、T104A、P111Q、A117S、S 123P、K129T、Q137E、V139K、N140F、Q147S、R156Y、V159M、 H164N、F165Y、A177T、V179I、A183S、G200P、G204T、R211K、I222V、A224P、G225S、V228I、 V232A、V259I、R267K、L268K、S269A、F281L、A328G、V345I、D366H、T374A、L380F、N383Y、 D384G、K406N、N415G、H436Y、S443D、K445S、L449I、V450I、S455N、M456Y、K488T 和 P507A。在本發(fā)明的另一方面，變體通過將在親本肽中的那些帶正電荷并位于鈣離子 20 A內(nèi)的氨基酸變成中性或帶負(fù)電的氨基酸來產(chǎn)生。本發(fā)明的優(yōu)選變體包括其中在距鈣 離子20 A內(nèi)的總電荷已經(jīng)為負(fù)的變體。在專利申請(qǐng)條件下，在此類變體中帶正電的氨基酸 可已經(jīng)用中性或帶負(fù)電的氨基酸取代。因此在“化學(xué)穩(wěn)定”或?qū)＠暾?qǐng)條件下，優(yōu)選的變體 可具有部分或全部帶正電的氨基酸殘基，即用帶負(fù)電的或中性氨基酸取代Lys、Arg或His。 優(yōu)選的取代氨基酸可為帶負(fù)電的氨基酸如Asp和Glu或中性氨基酸如Ala、Asn, Gin、Tyr, Trp和Wre。本發(fā)明的優(yōu)選變體在一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)包含改變，所述位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào) 組成的組:49、87、118、129、134、142、156、169和197。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中所述改變 為在一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)上的取代，所述取代選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組87、118、129、134、 142、156、和169。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中所述取代選自由下列組成的組K87A ；K129A,S, F, I ；K118A ；K142A, Q、R156Y, F, V, I, K, W, L, M 和 K169Q, A。在一個(gè)方面，親本木葡聚糖酶的變體在一個(gè)或多個(gè)包含(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改 變，所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或1 或137或193或92或76 或331。所述變體優(yōu)選地在位點(diǎn)68上包含取代，并且在一個(gè)或多個(gè)另外的位點(diǎn)上包含一個(gè) 或多個(gè)取代，所述另外的位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組123、156、118、200、129、137、 193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395 和 366。在另一方面，變體在位點(diǎn)156上包含一個(gè)取代，并且在一個(gè)或多個(gè)另外的位點(diǎn)上 包含一個(gè)或多個(gè)取代，所述另外的位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組10、13、14、19、37、 68、78、92、118、123、129、137、139、140、147、159、164、165、169、176、177、179、183、200、204、 211、222、224、244、247、249、259、267、268、269、275、288、299、301、302、303、310、324、328、 331、366、380、383、384、389、406、409、415、436、443、445、449、450、454、455、456、461、470 和 507。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在兩個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。 所述變體優(yōu)選在位點(diǎn)68或123或156或118或200或1 上包含取代。所述變體甚至更 優(yōu)選在位點(diǎn)1 和位點(diǎn)156上包含取代。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在三個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在四個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在五個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在六個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。
在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在七個(gè)或更多個(gè)(若干個(gè))位點(diǎn)上包含改變， 所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68或123或156或118或200或129或137或193或92或76或331。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)1 和156和331和200和118 的位點(diǎn)上包含改變。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68和1 和156和331和200 和118的位點(diǎn)上包含改變。在另一方面，親本木葡聚糖酶的變體在對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68和92和1 和156和331 和200和118的位點(diǎn)上包含改變。在另一方面所述變體包含一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))取代，所述取代選自由下列組成 的組:Q68H, N, L ；S123P, T ；R156Y, F, V, I，K, W, L, M ；K118A, R ；G200P, E, S, D ；K129T, A, S ； Q137E ；H193T, S, D ；T92V, I，A, S ；A83E ；Q149E ；L34F, I，V ；R340T, N ；S332P ；T9D ；S76W, V, I，K，R，T ；N331F, C ；M310I, V, L ；D324N ；G498A, D ；D395G 和 D366H。所述取代優(yōu)選地選自 由下列組成的組:Q68H ；S123P ；R156Y, F ；K118A ；G200P, E ；K129T, A ；Q137E ；H193T ；T92V 和 N331F。所述取代更優(yōu)選地選自由下列組成的組:Q68H ；S123P ；R156Y, F ；K118A ；G200P, E ； K129T, A ；Q137E ；T92V和N331F。更優(yōu)選地，所述變體在九個(gè)或八個(gè)，七個(gè)或六個(gè)或五個(gè)或 四個(gè)或三個(gè)或兩個(gè)或一個(gè)位點(diǎn)上包含一個(gè)取代，其中所述取代選自由下列組成的組Q68H ； S123P ；R156Y, F ；K118A ；G200P, E ；K129T, A ；Q137E ；T92V 和 N331F。在另一方面，所述變體包含一個(gè)或多個(gè)(若干個(gè))Q68HS123PR156YQ68H+R156YK129A+R156YS123T+K129A+R156YK129A+R156Y+G200PQ68H+K118R+R156FQ68H+R156Y+H193TQ68H+R156F+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+R156YK118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+T92V+K118A+K129A+R156YQ68H+K129T+R156K+G200P+N331FK118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331FT92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169AQ68H+T92V+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331FQ68H+T92V+R156Y+G200P+M310V+N33IF
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366HQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366HQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+S123P, T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中上述所有變體為親本木葡聚糖酶的變體，所述親本木葡 聚糖酶屬于糖基水解酶家族44，更優(yōu)選所述親本木葡聚糖酶選自與SEQ ID N0:3氨基酸 序列具有至少75%的同一性的木葡聚糖酶，更優(yōu)選所述親本木葡聚糖酶選自由下列組成的 組=SEQ ID NO 2, SEQ IDNO :3、SEQ ID NO 5和SEQ ID NO :7，并且最優(yōu)選所述親本木葡聚 糖酶由SEQ ID N0:3組成。組合物本發(fā)明也涉及包含變體木葡聚糖酶或具有本發(fā)明木葡聚糖酶活性的多肽的組合 物。所述組合物優(yōu)選地富集此類變體或多肽。術(shù)語“富集的”指示所述組合物的木葡聚糖 酶活性已經(jīng)被提高了，例如濃縮因子為1.1或更高。優(yōu)選地，配制所述組合物以提供所期望 的特性例如淺色、低氣味和可接受的貯存穩(wěn)定性。所述組合物可包含本發(fā)明的變體或多肽作為主要酶組分，例如單組分組合物。作 為另外一種選擇，所述組合物可包含多種酶活性，例如氨基肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、過 氧化氫酶、纖維素酶、殼多糖酶、角質(zhì)酶、環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶、脫氧核糖核酸酶、酯酶、 α -半乳醣苷酶、β -半乳糖苷酶、葡萄糖淀粉酶、α -葡萄糖苷酶、β -葡萄糖苷酶、鹵素過 氧化物酶、轉(zhuǎn)化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果膠酶、肽谷氨酰胺酶、過氧化物酶、 肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、或木聚糖酶。所述多肽組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備，并且可為液體或干燥制劑形式。 例如多肽可制成為粒狀或微粒狀形式。所述組合物中將包括的變體或多肽可根據(jù)本領(lǐng)域已 知的方法穩(wěn)定。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中將變體木葡聚糖酶配制成液體組合物。艦本發(fā)明也涉及使用木葡聚糖酶變體的方法。將變體木葡聚糖酶優(yōu)選地?fù)饺胂礈靹┙M合物和/或與其一起使用，例如衣物洗 滌劑組合物如家用衣物洗滌劑組合物尤其是液體衣物洗滌劑組合物。洗滌劑組合物通常 包含常規(guī)洗滌劑成分例如表面活性劑(陰離子的、陽離子的、非離子的、兩性離子的、兩性 的表面活性劑)、助洗劑、漂白劑、聚合物、其他酶和其他成分，例如在W02007/130562和 W02007/149806中所述的成分，上述文獻(xiàn)據(jù)此全文以引用方式并入本文。洗滌劑組合物可為任何形式，例如固體、液體、凝膠或它們的任何組合，所述組合 物優(yōu)選地為液體形式，優(yōu)選地為液體衣物洗滌劑組合物。本發(fā)明的一個(gè)方面是將本發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物與洗 滌劑組合物一起使用以賦予織物或衣服抗起球和/或織物柔軟性和/或顏色清晰和/或污 垢移除和/或抗污垢再沉淀和/或抑制染料轉(zhuǎn)移的有益效果。
此外本發(fā)明涉及洗滌織物的方法，所述方法包括用包含洗滌劑組合物和本發(fā)明的 木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物的洗滌溶液處理織物。洗滌處理能夠在例如機(jī)洗 過程或手洗過程中進(jìn)行。洗滌溶液可為例如包含洗滌劑組合物并具有介于3和12之間的 PH的洗滌水溶液。在洗滌和使用期間，織物或衣服表面將通常被破碎的或脫落的纖維片段弄臟，纖 維片段能使織物的外觀褪色并磨損。從織物上移除這些表面纖維將部分恢復(fù)織物的初始顏 色和外觀，導(dǎo)致顏色清晰和外觀改善。本發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物 可通過用于單個(gè)或多個(gè)(重復(fù))洗滌循環(huán)來提供顏色清晰和/或外觀改善的有益效果。此外紡織物表面的微纖維突出能夠聚集成小球，S卩，粘到織物表面并破壞其外觀 的所謂的小球或絨毛。本發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物可用于移除此類 小球，稱為抗起球效應(yīng)。可通過目測(cè)，使用測(cè)試組樣板評(píng)估顏色清晰度和抗起球。該效應(yīng)也可通過光反射 測(cè)量或通過光學(xué)測(cè)量測(cè)定棉制品絨毛。這些方法一般來講是本領(lǐng)域已知的，并且簡(jiǎn)述于 Enzymes in Detergency, 1997,由 Marcel Dekker 公布,第 139 至 140 頁。尤其是隨著洗滌循環(huán)數(shù)的增加，在紡織物纖維表面上積累了堆積物，所述堆積物 可包括粒狀污垢、可溶解污垢、染料和顏料、以及不溶解鹽。這可導(dǎo)致洗滌處理感覺到的清 潔性能發(fā)生可見的劣化，例如導(dǎo)致織物的外觀淺灰色或微黃色。這可通過在洗滌循環(huán)中使 用本發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物來預(yù)防。將該效應(yīng)稱為抗再沉淀或染 料轉(zhuǎn)移抑制或污垢移除效應(yīng)，并且該效應(yīng)可通過光學(xué)測(cè)量進(jìn)行評(píng)估?？椢锉砻嫔虾屠w維間留存的污垢或不溶解的鹽微粒能夠?qū)е驴椢镉不?。通過將本 發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物加入洗滌循環(huán)可軟化織物。用本發(fā)明的方法處理的織物可為常規(guī)的可洗衣物，例如家居衣物。衣物的主要部 分優(yōu)選地是衣服和織物，包括針織品、織造品、牛仔布、紗線、和毛巾，它們由棉布、棉混紡織 物或天然的或人造的纖維(例如來源于木漿)或它們的混紡織物制成。混紡織物的實(shí)例為 棉混紡物或人造絲/粘膠連同一種或多種伴侶材料如羊毛、合成纖維(例如，聚酰胺纖維、 丙烯腈系纖維、聚酯纖維、聚乙烯醇纖維、聚氯乙烯纖維、聚氨酯纖維、聚脲纖維、芳族聚酰 胺纖維)、和含有纖維素的纖維(例如，人造絲/粘膠、苧麻、亞麻/亞麻布、黃麻、乙酸纖維 素纖維、Iyocell纖維)。人們認(rèn)識(shí)到用包含本發(fā)明木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物的洗滌劑溶 液處理織物和/或衣服可尤其與例如新纖維和/或織物和/或衣服的生產(chǎn)有關(guān)，也尤其與 使用的織物和/或衣服的洗滌過程有關(guān)，例如家庭洗衣過程或洗衣店洗衣過程。本發(fā)明的木葡聚糖酶變體或木葡聚糖酶變體組合物的劑量和使用組合物的其他 條件(包括洗滌劑溶液的組成和濃度)可基于本領(lǐng)域已知的方法測(cè)定。木葡聚糖酶可用于本發(fā)明的組合物以影響包含纖維素或半纖維素衍生物的污垢 的移除、促進(jìn)抗再沉淀并改善去垢性。木葡聚糖酶也能用于本發(fā)明的組合物以在隨后的洗 衣過程中賦予棉制品去垢有益效果。在棉制織物和含顯著量棉的所有類型織物諸如棉混紡 (例如聚酯、聚酰胺如NylonTM、和彈力棉)織物上觀察到去垢有益效果。衣物洗滌劑組合物本發(fā)明的衣物洗滌劑組合物包含親本木葡聚糖酶的分離變體。親本木葡聚糖酶的分離變體在上文中詳述。所述組合物優(yōu)選包含特異性的兩親烷氧基化油脂清潔聚合物。所 述組合物優(yōu)選包含去污表面活性劑，優(yōu)選低含量的去污表面活性劑。特定的兩親烷氧基化 的油脂清潔聚合物更詳細(xì)地描述于下文。去污表面活性劑更詳細(xì)地描述于下文。所述組合 物優(yōu)選包含無規(guī)接枝共聚物。下文中詳述了適用的無規(guī)接枝共聚物。優(yōu)選地，所述組合物包含具有下列一般結(jié)構(gòu)的化合物二((C2H5O) (C2H4O)n) (CH3) -N+-CxH2x-N+- (CH3) - 二( (C2H5O) (C2H4O) η)，其中 η = 20 至 30，并且 χ = 3 至 8，或其硫 酸化或磺化的變體。所述組合物優(yōu)選包含香料微膠囊，所述香料優(yōu)選被包封在三聚氰胺甲醛薄膜中。洗滌劑組合物優(yōu)選包含約0. 00003重量％至約0. 2重量％，約0. 00008重量％至 約0. 05重量％，或者甚至約0. 0001重量％至約0. 04重量％的織物調(diào)色劑。所述組合物可 包含0. 0001-0. 2重量％的織物調(diào)色劑，當(dāng)所述組合物是單位劑量小袋形式時(shí)，這可為尤其 優(yōu)選的。所述衣物洗滌劑組合物可為任何形式，如固體、液體、凝膠或它們的任何組合。所 述組合物可為片劑或小袋的形式，包括多隔室小袋。所述組合物可為自由流動(dòng)的粉末形式， 如附聚物、噴霧干燥粉末、膠囊包封物、擠出物、針狀物、條狀物、薄片、或它們的任何組合。 然而，所述組合物優(yōu)選為液體形式。此外，所述組合物為各向同性或各向異性形式。所述組 合物或至少其部分優(yōu)選為層狀相。所述組合物優(yōu)選包含少量的水，如0. 01-10重量％，優(yōu)選至5重量％，優(yōu)選至4重 量％，或至3重量％，或至2重量％，或甚至至1重量％。如果所述組合物為通常至少部分、 優(yōu)選完全被水溶性薄膜包封的小袋形式時(shí)，這是尤其優(yōu)選的。所述水溶性薄膜優(yōu)選包含聚 乙烯醇。所述組合物可包含結(jié)構(gòu)劑、諸如氫化蓖麻油。尤其可用于本發(fā)明的組合物中的結(jié) 構(gòu)化試劑的一種適宜的類型包括非聚合的(除了常規(guī)的烷氧基化作用)晶體羥基功能性材 料。這些結(jié)構(gòu)劑材料通常形成遍布液體基質(zhì)的附連的分子間螺紋樣網(wǎng)絡(luò)，通常在基質(zhì)內(nèi)就 地結(jié)晶。優(yōu)選的結(jié)構(gòu)劑為晶體、含羥基脂肪酸、脂肪族酯或脂肪族蠟。適宜的結(jié)構(gòu)劑通常選 自具有下列化學(xué)式的那些
其中(x+a)介于 11 和 17 之間;33
(y+b)介于11和17之間；并且(z+c)介于 11 和 17 之間。優(yōu)選地，在該式中，x = y = z = 10和/或a = b = c = 5。優(yōu)選的結(jié)晶含羥基結(jié)構(gòu)化劑的具體實(shí)施例包括蓖麻油及其衍生物。尤其優(yōu)選的是 氫化蓖麻油衍生物，例如氫化蓖麻油和氫化蓖麻蠟?？缮藤?gòu)獲得的基于蓖麻油的結(jié)晶含羥 基結(jié)構(gòu)劑包括得自Rheox, Inc.(現(xiàn)為Elementis)的THIXCIN。所述組合物還優(yōu)選包含鏈烷醇胺以中和酸性組分。適宜的鏈烷醇胺的實(shí)例為三乙 醇胺和單乙醇胺。當(dāng)所述組合物包含蛋白酶穩(wěn)定劑，如硼酸或其衍生物，如硼酸時(shí)，這是尤 其優(yōu)選的。適宜的硼酸衍生物的實(shí)例為下列化學(xué)式的苯基硼酸衍生物
權(quán)利要求
1.一種包含親本木葡聚糖酶的分離的變體的洗滌劑組合物，所述變體在一個(gè)或多個(gè) 位點(diǎn)上包含所述親本木葡聚糖酶的改變，所述位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組成的組68、123、 156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、395、366、1、 374、7、140、8、14、21、211、37、45、13、78、87、436、101、104、111、306、117、119、414、139、268、 142、159、164、102、168、176、180、482、183、202、206、217、4、222、19、224、228、232、2、240、 244、5、247、249、328、252、259、406、267、269、275、179、166、278、281、288、298、301、18、302、 165、80、303、316、169、322、120、146、342、348、147、353、380、468、382、383、38、384、389、 391、10、392、396、177、397、399、409、237、413、253、415、418、40、443、445、148、449、225、 450、454、3、455、456、299、461、470、204、476、488、347、和 507，所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于氨基酸序列 SEQ ID NO :3中的位點(diǎn)，并且其中a)所述一個(gè)或多個(gè)改變是i)在占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸下游插入一個(gè)氨基酸，和/或 )去除占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸，和/或iii)用不同的氨基酸取代占據(jù)所述位點(diǎn)的氨基酸；b)所述親本木葡聚糖酶是家族44木葡聚糖酶；以及c)所述變體具有木葡聚糖酶活性。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述親本木葡聚糖酶選自由下列組成的組SEQ ID NO :3, SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :7，或者所述親本木葡聚糖酶選自與所述SEQ ID NO: 3氨基酸序列具有至少75%同一性的木葡聚糖酶。
3.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體包含一個(gè)或多個(gè)以下改變的組合Vl*+V2*+H3* ； VlQ+*laE+*lbV ； H3A ；H3A+H436A ； K8A, Q, S ； T9D ；T9D+L34F+A83E+Q149E+H193T+S332P+R340T ；I10V+D33E+M40L+A41T+Q67M+Y73F+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228 I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+T374A+S416A+D444Y+A469E+K470T+I473G+T51 7A+S522*；I10V+F17S+D33E+M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+V219A+D249N+V272A +I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+K470T+I473S+V477I ；I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+H164N+N168 K+T172A+V219A+I222V+V228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+N415S+T421I+S42 4H+N441D+D444Y+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+D33E+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228 I+D249N+V272A+I337L+M356L+T374A+V397A+S416A+T421I+S424N+N441D+D444Y+V450I+A46 9E+K470T+I473G+T517A+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+D33E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+N168K+T172A+I22 2V+V228I+D249N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A4 69E+K470T+I473S+V477I+E489A+A490V+T517A+S522*；I10V+F17S+M40L+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+I222V+V228I+D24 9N+S269N+V272A+T320A+I337L+M356L+T374A+V397A+N415S+T421I+S424H+N441D+D444Y+A4 69E+K470T+I473S+V477I+T517A+S522P+P523V+V524E ；I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T104A+Q137E+N153K+R156Q+V219A+I222V+V 228I+D249N+S269N+V272A+E333A+I337L+M356L+V397A+N415S+D420G+T421I+S424H+N441D+ D444Y+V450I+A469E+K470T+I473G+T517A+S522*；I10V+F17S+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+T104A+Q137E+R156Q+V159A+H164N+N16 8K+T172A+I222V+V228I+D249N+V272A ；I10V+F17S+Y53H+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+Q137E+T172V+A177T+I22 2V+V228I+D249N+S269N+I337L+M356L+V397A+S416A+T421I+S424H+N441D+D444Y+A469E+K4 70T+I473G+T517A+S522*； K13A+K129A ；K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P ； K13A,R； K18R ； R20A ；K21Q+K129A ； K21Q, R, T ；Q32H+M40L+R49G+D65E+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+T92A+L102Q+T104A+Q137E+H164N +K202E+I222V+V228I+D249N+M356L+T374A ；D33V+Q68H+N168H+V450I ； L34F, I, Μ, V ； L34I+K129A ； D37G, N+K129A+R156Y ； E38I,V；M40L+A41T+Q67M+N72S+S76D+G78A+Q82K+Q137E+N153K+H164N+D249N+V272A+I337L+M3 56L+V397A+N415S+T421I+S424N+N441D+V450I+E489A+A490V+T517A+S522*； M40V ； L45I ； Q68H, M, N ； Q68H+G200P+N331F ；Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F ； Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H ； Q68H+K118R+R156F, Y ； Q68H+K118R+R156Y+G200P ； Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F ；Q68H+K129A, T+R156K+G200P+N331F； Q68H+R156F, V，Y+G200P+N331F ； Q68H+R156Y ； Q68H+R156Y+H193T ； Q68H+R156Y+H193T+D366H ； Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V ； Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+T92A, D，I，S，V, Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F ； Q68H+T92V+G200P+M310V ； Q68H+T92V+G200P+M310V+N33IF ；Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F ； Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T ； Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H ； Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K ； Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H, K,Q ； Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T ； Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H ； Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V ； Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T ； Q68H+T92V+K118A+Q 137E+R156Y+G200P+D324N ； Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T ； Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L ； Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ； Q68H+T92V+K118A, R+R156Y, F ；Q68H+T92V+K118A+S123P, T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C ；Q68H+T92V+R156F, V, Y+G200P+M310V ；Q68H+T92V+R156F, V, Y+G200P+M310V+N331F ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T+D366H ；Q68H+T92V+R156F, Y+H193T+G200P+M310V ；Q68H+T92V+R156Y ；S76E, I，K, M, R, Τ, V, W ；S76W+G200P ；S76W+G200P+A224P ；G78A+K118A++K129A+R156Y ； G78A+K118A+K129A+R156Y ； G78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； G78A+K118A+K129A+R156Y+K169A ； G78A, N, S ；G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y ； G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； G78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169A ； L80V ；A83D, E, H, I，L, N, R, S, T, Y ； K87Q ；K87V+K129A+K169A ； T92I,V ；T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ； T92V+K118A+K129A+R156Y ； T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ； T92V+K118A+K129A+R156Y+H164N+G200P+N331F ；T92V+K129A+R156Y ； K101A+K129A ； KlOlR ； K101R+L102I ；T104A+P111Q+A117S+K129A+R156Y ； PlllQ ； K118A+K129A ；K118A+K129A+F146L+R156Y+G200P+N33IF ；K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F ；K118A+K129A+R156Y ；Kl18A+K129A+R156Y+A224P ；Kl18A+K129A+R156Y+G200P ；K118A+K129A+R156Y+G200P+M310V+N331F ；K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F ；K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F+N399I ；K118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331F ；Kl18A+K129A+R156Y+K470T ；K118A,R；K118A+R156Y ；K118A+R156Y+G200P ；D119L ；G120A ；S123P,T ；S123T+K129A+R156Y ；K129A, F, I，K, R, S, T ；K129A+K169A ；K129A+K176P ；K129A+K275Q ；K129A+K445S ；K129A+K470T ；K129A+Q137E+R156Y ；K129A+Q137E+R156Y+G200P ；K129A+Q137E+R156Y+K470T ；K129A+Q137E+V139K+N140F+Q147S+R156Y ；K129A+R156Y ；K129A+R156Y+A177T+V179I+A183S ； K129A+R156Y+A328G ； K129A+R156Y+D247G ； K129A+R156Y+D249G, N, S； K129A+R156Y+D303I, K, S, V ； K129A+R156Y+D324N ； K129A+R156Y+D366H+T374A ； K129A+R156Y+D461N, Q, T； K129A+R156Y+E288Q ； K129A+R156Y+G200P ； K129A+R156Y+G200P+G204T+R211K ； K129A+R156Y+H164N ； K129A+R156Y+H436Y ； K129A+R156Y+I10V+V14I+D19E ； K129A+R156Y+I222V+A224P+V228I+V232A ； K129A+R156Y+K176P, S ； K129A+R156Y+K275T ； K129A+R156Y+K322I+K454Q ； K129A+R156Y+K406N+N415G ； K129A+R156Y+K454Q ； K129A+R156Y+L380F+N383Y+D384G+N389T ； K129A+R156Y+N298F+E299N+G301T ； K129A+R156Y+N302K+D303L, S ； K129A+R156Y+N331F ； K129A+R156Y+P507A ； K129A+R156Y+R267H ；K129A+R156Y+R409L, T ；K129A+R156Y+S443D+K445S+L4491+V450I+S455N+M456Y ；K129A+R156Y+T244D ；K129A+R156Y+V159M+H164N+F165Y ；K129A+R156Y+V259I+R267K+L268K+S269A ；Q137D, E ；N140F ；K142A, Q, R ；F146C+H164C ；F146K,L ；F146L+K322I ；L148K+N168D ；Q149E ；R156A, D, E, F, I，K, L, M, N, P, Q, R, S, Τ, V, W, Y ；R156Y+N331F ；V159M ；H164A,N ；L166I ；N168D ；K169A, Q, R ；K176P ；A177E, T ；K180R ；H193A, D, S, T ； R197A,L ； H199A ；G200A, C, D, E, F, H, I，K, L, M, N, P, Q, R, S, Τ, V, W, Y ； G200P+A224P ；K202N, Q,RS214E ；K217A ；A221K ；G225S ；V232A ；G237A, S,VK240A, Q,RK252A, Q,RG253A ；R267A ；7L268I ； K275A, Q, R ； L278I ； F281L ； M290R ； R295A ； K306A,R； K307Q ； M310I, L, V ； M310V+N399I ； R314A ； G316I ； K322A,R ； D324N ；N331A, C, D, E, F, G, H, I，K, L, M, P, Q, R, S, Τ, V, W, Y ；S332M,P ；S332P+V397I ；R340A, N, T ；K342A ；V345I ；K347A, Q, R ；D348G ；K353Q,R ；D366H ；M373Q ；T374A ；L380F ；K382A ；N383Y ；N389A, F, N, V ； W391V ； K392G,Q ； D395G ； G396P ； V397S ； N399I ； K406N ； G413A, S ； K414A ；N415S ； T417K ； F418I ； V431E ； H436A ；N441G+A442E+S443D ； S443E, K, Q ； K445A, R, S ； K445C+K470C ； H448A ； K454R ；S467R+G468S+A469T ； G468S, Y ； K470P, R, T ； I473T ； K476Q ； K482A, Q, R ； K488A, Q, R, T ； A490R ； G498A, D, S ； R500A, Τ, V ； H512A ；T517A+G518D ；或 G518D。
4.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體在對(duì)應(yīng)于位點(diǎn)68，或位點(diǎn)123， 或位點(diǎn)156，或位點(diǎn)118，或位點(diǎn)200，或位點(diǎn)129，或位點(diǎn)137，或位點(diǎn)193，或位點(diǎn)92，或位 點(diǎn)76，或位點(diǎn)331的一個(gè)或多個(gè)所述位點(diǎn)上包含改變，所述位點(diǎn)對(duì)應(yīng)于氨基酸序列SEQ ID NO 3中的位點(diǎn)。
5.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體在位點(diǎn)68上包含取代，并且 在一個(gè)或多個(gè)另外的位點(diǎn)上包含一個(gè)或多個(gè)取代，所述另外的位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組 成的組123、156、118、200、129、137、193、92、83、149、34、340、332、9、76、331、310、324、498、 395 和 366。
6.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體在位點(diǎn)156上包含取代，并且 在一個(gè)或多個(gè)另外的位點(diǎn)上包含一個(gè)或多個(gè)取代，所述另外的位點(diǎn)選自由下列位點(diǎn)編號(hào)組 成的組10、13、14、19、37、68、78、92、118、123、129、137、139、140、147、159、164、165、169、 176、177、179、183、200、204、211、222、224、244、247、249、259、267、268、269、275、288、299、 301、302、303、310、324、328、331、366、380、383、384、389、406、409、415、436、443、445、449、 450、454、455、456、461、470 和 507。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述變體在位點(diǎn)1 和位點(diǎn)156上包含取代。
8.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體包含一個(gè)或多個(gè)取代，所述取 代選自由下列組成的組:Q68H, N，L ；S123P, T ；R156Y, F，V, I，K，W, L, M ；K118A, R ；G200P, E, S, D ；K129T, A, S ；Q137E ；H193T, S, D ；T92V, I，A, S ；A83E ；Q149E ；L34F, I，V ；R340T, N ； S332P ；T9D ；S76W, V，I，K，R，T ；N331F, C ；M310I, V, L ；D324N ；G498A, D ；D395G 和 D366H。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述變體包含一個(gè)或多個(gè)取代，所述取代選自由 下列組成的組:Q68H ；S123P ；R156Y, F ；K118A ；G200P, E ；K129T, A ；Q137E ；H193T ；T92V 和 N331F。
10.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體包含一個(gè)或多個(gè)以下取代的 組合Q68HS123PR156YQ68H+R156YK129A+R156YS123T+K129A+R156YK129A+R156Y+G200PQ68H+K118R+R156FQ68H+R156Y+H193TQ68H+R156F+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+R156YK118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+T92V+K118A+K129A+R156YQ68H+K129T+R156K+G200P+N331FK118A+K129A+R156Y+K169A+G200P+N331FT92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FG78A+T92V+K118A+K129A+R156Y+K169AQ68H+T92V+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+N331FQ68H+T92V+R156Y+G200P+M310V+N33IFQ68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366HQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366HQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+S123P, T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331FQ68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F。
11.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中在所述變體中的改變的總數(shù)是二個(gè)，甚至優(yōu)選三個(gè)，甚至更優(yōu)選四個(gè)，甚至更優(yōu)選五個(gè)，甚至更優(yōu)選六個(gè)，甚至更優(yōu)選七個(gè)，甚至更 優(yōu)選八個(gè)，甚至更優(yōu)選九個(gè)，最優(yōu)選十個(gè)。
12.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體包含與所述SEQID N0:3的 親本木葡聚糖酶的氨基酸序列具有75%同一性的氨基酸序列。
13.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述變體與親本木葡聚糖酶相比具有 改善的化學(xué)穩(wěn)定性。
14.如權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述改善的化學(xué)穩(wěn)定性導(dǎo)致改善的洗滌劑穩(wěn)定性。
15.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物是液體衣物洗滌劑組合物。
16.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物包含一種或多種成分，所述 成分選自(a)兩親烷氧基化油脂清潔聚合物；(b)無規(guī)接枝共聚物，其中所述無規(guī)接枝共聚物包含(i)包含選自由下列組成的組的單體的親水性主鏈不飽和WC1-C6羧酸、醚、醇、醛、 酮、酯、糖單元、烷氧基單元、馬來酸酐、諸如甘油的飽和的多元醇、以及它們的混合物；以及 ( ) 一個(gè)或多個(gè)選自由下列組成的組的疏水性側(cè)鏈C4-CM烷基、聚丙烯、聚丁烯、飽 和的C1-C6 —元羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它們的混合物；(c)具有以下通式結(jié)構(gòu)的化合物二((C2H5O) (C2H4O) n) (CH3) -N+-CxH2x-N+- (CH3) - 二 ((C2H5O) (C2H4O) η)，其中η = 20至30，并且χ = 3至8，或其硫酸化或磺化的變體。
17.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物包含香料微膠囊。
18.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物包含織物調(diào)色劑。
19.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物包含按所述組合物重量計(jì) 約0. 至約5%的鈣多價(jià)螯合劑，所述鈣多價(jià)螯合劑在ρΗ 8下具有大于約4的條件穩(wěn)定 常數(shù)。
20.如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物，其中所述組合物為固體形式。
21.木葡聚糖酶在如前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物中的用途以賦予棉制品在隨后 的洗滌過程中的去垢有益效果。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含親本木葡聚糖酶變體的洗滌劑組合物。
文檔編號(hào)C12N9/42GK102057030SQ200980120714
公開日2011年5月11日 申請(qǐng)日期2009年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日
發(fā)明者埃斯本·彼得·弗里斯, 基思·吉布森, 尼爾·約瑟夫·蘭特, 弗蘭克·溫特·拉斯穆森, 邁克爾·紹爾特, 韋爾納·貝森馬特 申請(qǐng)人:寶潔公司