專利名稱：膠束裝配體的制作方法
技術領域：
本文中描述了從聚合物形成的膠束裝配體和此類膠束裝配體的用途。
背景技術：
在某些情況下，給活細胞提供治療劑(例如，寡核苷酸)是有益的。在一些情況下， 此類寡核苷酸至活細胞的遞送提供了治療有益性。發(fā)明概述在本文中的某些實施方案中，提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中 殼包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物 (hydrophobe)，并且其中殼嵌段在約中性pH下為親水性的。在一些實施方案中，術語“膜” 是指細胞質膜、囊泡膜、有被小窩膜(coated pit membrane)、內(nèi)體膜和/或細胞膜。在本文的某些實施方案中，提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼 包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其 包含在約中性PH下是陰離子性的第一可帶電荷種類，芯嵌段是共聚物嵌段，并且其中殼嵌 段在約中性PH下為親水性的。當pH約為該可帶電荷種類的pKa時，所述可帶電荷種類的 兩種形式之間將存在平衡分布。在陰離子性種類的情況下，當PH為該陰離子性種類的PKa 時，約50%的群體將是陰離子性的并且約50%將不帶電荷。pH離該可帶電荷種類的pKa越 遠，則這種平衡將存在相應移動，以使在更高的PH值下，陰離子形式占優(yōu)勢，而在更低的pH 值下，不帶電荷形式占優(yōu)勢。本文中描述的實施方案包括在任意PH值下的共聚物形式。在本文中的一些實施方案中，提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼 包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼嵌段，其中芯嵌段是pH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其 包含在約中性PH下是陰離子性的第一可帶電荷種類，該第一可帶電荷種類被疏水性隔離， 并且其中殼嵌段在約中性PH下是親水性的。在本文中的某些實施方案中，提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼 包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性的膜去穩(wěn)定化疏水物， 其包含在約中性PH下為陰離子性的第一可帶電荷種類和在中性pH下為陽離子性的第二可 帶電荷種類，并且其中殼嵌段在約中性PH下為親水性的。在本文中的一些實施方案中，提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼 包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性的膜去穩(wěn)定化疏水物， 其包含在約中性PH下為陰離子性的第一可帶電荷種類，并且其中殼嵌段是在約中性pH下 為不依賴于溫度的親水物。在一個實施方案中，“不依賴于溫度的親水物”是指具有在20 至40°C的溫度范圍內(nèi)基本上無變化的親水性質的親水物。因此，在給人患者施用膠束裝配 體之前和之后，親水性質基本不變。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含在約 6. 5或更低，約5. 0至約6. 5，或約6. 2或更低的pH下具有膜去穩(wěn)定性的膜去穩(wěn)定化嵌段共 聚物。在一些實施方案中，用于本文中提供的膠束裝配體的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含 至少2個嵌段，或為二嵌段共聚物。在某些實施方案中，膠束裝配體的殼包含聚乙二醇基團。在具體的實施方案中，膜 去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段是聚乙二醇或包含聚乙二醇。在一些實施方案中，殼嵌段包 含多個殼單體單元，并且其中所述多個殼單體單元中的一個或更多個用PEG基團取代或官 能化。在一些實施方案中，膠束裝配體在約6. 2至7. 5的pH范圍內(nèi)的形式是膠束、假膠 束(pseudo-micelle)或膠束樣結構。在另外的或備選的實施方案中，膠束裝配體在約6. 2 至7. 5的pH范圍內(nèi)的形式是膠束。在某些實施方案中，本文中提供了其中一個或更多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中的 至少一個嵌段是梯度嵌段的膠束裝配體。在一些實施方案中，本文中提供了包含至少一種研究試劑(research reagent) 的膠束裝配體。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體包含至少一種診斷試劑。在 一些實施方案中，膠束裝配體包含至少一種治療劑。在具體的實施方案中，通過共價鍵、非 共價相互作用或其組合將治療劑連接至膠束裝配體中的至少一個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的殼嵌段。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含連接至至少一個膜去穩(wěn)定化 嵌段共聚物的殼嵌段的第一治療劑和膠束裝配體的芯部分內(nèi)的至少一種第二治療劑。在 一些實施方案中，每一膠束裝配體包含平均1至5、5至250、5至1000、250至1000個、至 少2個、至少5個、至少10個、至少20個或至少50個治療劑。在一些實施方案中，本文 中描述的膠束裝配體中提供的治療劑包含至少一個核苷酸、至少一個碳水化合物或至少 一個氨基酸。在某些實施方案中，治療劑是多核苷酸、寡核苷酸、基因表達調節(jié)劑、敲低劑 (knock down agent)、siRNA、RNAi試劑、切丁酶底物、miRNA, shRNA、反義寡核苷酸或適 體。在一些實施方案中，治療劑是蛋白質性質的治療劑(例如，蛋白質、肽、酶、顯性陰性 (dominant-negative)蛋白、激素、抗體、抗體樣分子或抗體片段)。在某些實施方案中，治 療劑是具有大于約500道爾頓的分子量的碳水化合物或小分子。在一些實施方案中，所述 多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中的一個或更多個連接至治療劑。
在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段包含至少一個核苷酸，至少 一個碳水化合物或至少一個氨基酸。在一些實施方案中，殼嵌段是非肽。在某些實施方案 中，至少一個核苷酸是核糖核苷酸。在一些實施方案中，至少一個核苷酸是基因表達調節(jié) 劑、敲低劑、siRNA, RNAi試劑、切丁酶底物、miRNA、shRNA、反義寡核苷酸或適體。在具體的 實施方案中，敲低劑是siRNA、反義寡核苷酸、miRNA或shRNA。在一些實施方案中，本文中提供了包含至少一個靶向部分的膠束裝配體。在某些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段是帶電荷的或可帶電荷的。 在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段在約中性PH下是聚陽離子性的。在某 些實施方案中，殼嵌段包含陽離子性或非陽離子性的單體單元。在一些實施方案中，殼嵌段 包含至少一個陽離子性的可帶電荷單體單元和至少一個不可帶電荷的(non-chargeable) 單體單元。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含具有為均聚物嵌段的殼嵌段的 多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物。在另外或可替代選擇的實施方案中，本文中提供的膠束裝配 體包含具有為雜聚物嵌段的殼嵌段的多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物。在一些實施方案中，本 文中提供的膠束裝配體的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段包含N，N-二(C1-C6)烷基-氨基 (C1-C6)烷基-乙基丙烯酸酯(ethacrylate)單體單元、N，N-二 (C1-C6)烷基-氨基(C1-C6) 烷基-甲基丙烯酸酯單體單元、N，N-二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-丙烯酸酯單體單 元或其組合。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含具有至少一個可帶電荷種類和 至少一個第二可帶電荷種類的芯，其中第一可帶電荷種類是可帶電荷或帶電荷成為陰離子 種類，其中第二可帶電荷種類是可帶電荷的或帶電荷成為陽離子種類，并且其中存在于芯 中的第一可帶電荷種類對第二可帶電荷種類的比例是約1 4至約4 1。在一些實施方案 中，芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團的比例在約中性PH下為約1 4至約4 1。在 某些實施方案中，芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團的比例在約中性PH下為約1 2 至約2 1。在一些實施方案中，芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團的比例在約中性 PH下為約1 1. 1至約1. 1 1。在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5個以上、20個以上、50個以上或 100個以上帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類的可帶電荷種類。在一些實施方案中，膜 去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5個以上、20個以上、50個以上或100個以上第一可帶電荷種類。 在具體的實施方案中，各第一可帶電荷種類可帶電荷或帶電荷成為陰離子性種類。在一些 實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5個以上、20個以上、50個以上或100個以上第二 可帶電荷種類。在具體的實施方案中，各第二可帶電荷種類帶電荷或可帶電荷成為陽離子 性種類。在某些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5個以上、20個以上、50個以上或 100個以上多個疏水性種類。在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段包含5個 以上、20個以上、50個以上或100個以上帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類的可帶電荷 種類。在某些實施方案中，本文中提供的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段包含5個以上、20 個以上、50個以上或100個以上第一可帶電荷種類。在具體的實施方案中，各第一可帶電荷 種類是可帶電荷或帶電荷成陰離子性的種類。在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的芯嵌段包含5個以上、20個以上、50個以上或100個以上第二可帶電荷種類。在具體的實施方案中，各第二可帶電荷種類是帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類。在某些實施方 案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段包含5個以上、20個以上、50個以上或100個以上疏 水性種類。在一些實施方案中，至少一個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段包含存在于第一單 體單元上的第一可帶電荷種類(例如可帶陰離子電荷的)和存在于第二單體單元上的第二 可帶電荷種類(例如，可帶陽離子電荷的)。在可選擇的實施方案中，第一和第二可帶電荷 種類在相同的單體單元(例如，可帶兩性離子電荷的單體單元)上。在一些實施方案中，存 在于芯上的第一單體單元的數(shù)目對第二單體單元的數(shù)目的比例是約1 4至約4 1。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含至少一個具有芯嵌段的膜去穩(wěn) 定化嵌段共聚物，所述芯嵌段包含至少一個第一可帶電荷的單體單元和至少一個第二可帶 電荷的單體單元。在一些實施方案中，第一可帶電荷的單體單元是布郎斯臺德酸。在某些 實施方案中，至少80 %的第一可帶電荷單體單元在約7. 4的pH下通過失去H+而帶電荷成 為陰離子性種類。在另外的或可替代選擇的實施方案中，低于50%的第一可帶電荷單體單 元在約PH6下帶電荷而成為陰離子性種類。在一些實施方案中，第一可帶電荷單體單元是 (C2-C8)烷基丙烯酸。在某些實施方案中，第二可帶電荷的單體單元是布朗斯臺德堿。在一 些實施方案中，至少40 %的第二可帶電荷單體單元在約7. 4的pH下通過獲得H+而帶電荷成 為陽離子性種類。在某些實施方案中，第二可帶電荷單體單元是N，N-二(C1-C6)烷基-氨 基(C1-C6)烷基-乙基丙烯酸酯、N，N-二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-甲基丙烯酸酯或 N，N-二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-丙烯酸酯。在一些實施方案中，芯嵌段還包含至 少一個不可帶電荷的單體單元。在某些實施方案中，所述不可帶電荷的單體單元是(C2-C8) 烷基-乙基丙烯酸酯、(C2-C8)烷基甲基丙烯酸酯或(C2-C8)烷基丙烯酸酯。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體是具有約IOnm至約200nm的平均流 體動力學直徑的顆粒。在具體的實施方案中，膠束裝配體具有約20nm至約IOOnm的平均流 體動力學直徑。在更具體的實施方案，膠束裝配體具有約30nm至約SOnm的平均流體動力 學直徑。在一些實施方案中，本文中提供了自我裝配的膠束裝配體。在某些實施方案中，膠 束裝配體在約6. 5至約7.5內(nèi)的pH下于含水介質中自我裝配。在一些實施方案中，自我裝 配在2小時以內(nèi)，1小時以內(nèi)，30分鐘以內(nèi)，15分鐘以內(nèi)發(fā)生。在一些實施方案中，膠束裝配 體在約5. 0至約7. 4的pH下在含水介質中是膜去穩(wěn)定化的。在某些實施方案中，本文中提供了在約pH 5下比在約pH 7下包含更多凈陽離子 電荷的膠束裝配體。在一些實施方案中，膠束裝配體的電荷的絕對值在約PH 5下比在約pH 7下更大。在一些實施方案中，本文中提供了包含多個具有芯嵌段和殼嵌段的膜去穩(wěn)定化嵌 段共聚物的膠束裝配體，其中芯嵌段的數(shù)均分子量與殼嵌段的數(shù)均分子量之比為約5 1 至約1 1、或1 1至約5 1。在更具體的實施方案中，芯嵌段的數(shù)均分子量與殼嵌段 的數(shù)均分子量之比為約2 1。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含多個具有芯嵌段的膜去穩(wěn)定 化嵌段共聚物，所述芯嵌段具有任意適當?shù)臄?shù)均分子量(Mn)，例如大于2，000道爾頓，約 2，000道爾頓至約200，000道爾頓、約2，000道爾頓至約100，000道爾頓、約2，000道爾頓至約100，000道爾頓、約10，000道爾頓至約200，000道爾頓或約10，000道爾頓至約100，000
道爾頓的數(shù)均分子量。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含多個具有殼嵌段 的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物，所述殼嵌段具有任意適當?shù)臄?shù)均分子量(Mn)，例如，大于5，000 道爾頓或約5，000道爾頓至約50，000道爾頓的數(shù)均分子量。在一些實施方案中，本文中提供的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物具有小于2，小于1.8、 小于1. 6、小于1. 5、小于1. 4、或小于1. 3的多分散性指數(shù)。在一些實施方案中，本文中提供了在約7. 4的pH下穩(wěn)定的膠束裝配體。在某些實 施方案中，膠束裝配體在約PH 5. 8下顯著不如在約pH7. 4下穩(wěn)定。在某些實施方案中，本文中提供了在約lOyg/ml或更大(例如，在約中性pH下) 的濃度下穩(wěn)定的膠束裝配體。在一些實施方案中，本文中提供了在約100μ g/mL或更大(例 如，在約中性PH下)的濃度下穩(wěn)定的膠束裝配體。在某些實施方案中，本文中描述了組成本文中描述的膠束裝配體的任意聚合物。 即，聚合物亞單元(例如，嵌段共聚物)或單個的聚合物(無論是否以膠束裝配體的形式存 在)也是本文中描述的實施方案。為了清楚起見，各個和每一個本文中提供的嵌段共聚物 (作為單個聚合物或作為本文中描述的膠束裝配體的聚合物單元/鏈/組分)在本文中描 述的本發(fā)明的范圍內(nèi)。附圖概述本發(fā)明的新特征具體地示于所附權利要求中。通過參考下列利用本發(fā)明原理的舉 例說明性實施方案中所示的詳細描述和附圖，將獲得對本發(fā)明的特征和有利方面的更好理 解，所述附圖是圖IA =RAFT合成的聚合物的組成和性質的舉例說明性實例。圖IB :PEGMA-DMAEMA共聚物的組成和性質的舉例說明性實例。圖2 嵌段共聚物PRx07^v6的NMR光譜分析的舉例說明例性實例。圖3 與SiRNA復合的聚合物PRx07^v6的粒度的動態(tài)光散射(DLS)測定的舉例 說明性實例。圖4 不同電荷比的聚合物PRx07^V6/siRNA復合物的凝膠移位分析的舉例說明 性實例。圖 5 聚合物PRx07^v6 的臨界穩(wěn)定性濃度(criticals tabilityconcentration, CSC)的舉例說明性實例。圖6 有機溶劑中聚合物PRx07^v6顆粒穩(wěn)定性的舉例說明性實例。圖7 :siRNA-膠束復合物在培養(yǎng)的哺乳動物細胞中的敲低活性的舉例說明性實 例。圖8 聚合物膠束及其SiRNA復合物的膜去穩(wěn)定化活性的舉例說明性證明。圖9 聚合物PRx07^v6的舉例說明性透射電子顯微鏡(TEM)分析的舉例說明性 實例。

圖10 聚合物-SiRNA復合物的細胞攝取和細胞內(nèi)分布的熒光顯微鏡檢查的舉例 說明性實例。圖11 :pH對聚合物結構的影響的舉例說明性實例。圖12 :siRNA-膠束復合物在培養(yǎng)的哺乳動物細胞中的敲低數(shù)據(jù)的舉例說明性概述。圖13 半乳糖末端官能化的聚[DMAEMA]-macro CTA的舉例說明性實例。圖14 [PEGMA-MAA (NHS) ] - [B-P-D]的合成的舉例說明性實例。圖15 =PEGMA和MAA-NHS的RAFT共聚合的舉例說明性實例。圖16 半乳糖官能化的DMAEMA-MAA(NHS)或PEGMA-MAA(NHS) 二嵌段共聚物的舉 例說明性實例。圖17 可綴合的SiRNA、肽和吡啶基二硫胺的結構的舉例說明性實例。發(fā)明詳述在本文中的某些實施方案中提供了膠束裝配體和用于制備其的方法。在一些實施 方案中，本文中提供的膠束裝配體包含多個嵌段共聚物，所述嵌段共聚物包含殼嵌段和芯 嵌段。在一些實施方案中，膠束裝配體包含芯和殼，其中芯包含多嵌段聚合物的芯嵌段，并 且其中殼包含多嵌段聚合物的殼嵌段。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體是自 我裝配的。在具體的實施方案中，膠束裝配體是自發(fā)地自我裝配的。在一些實施方案中，膠 束裝配體是膠束。在某些實施方案中，膠束裝配體的芯包含多個疏水性基團。在一些實施方案中，所 述疏水性基團在約中性PH下是疏水性的。在更具體的實施方案中，所述疏水性基團在微酸 性PH (例如，在約6的pH下和/或約5的pH下)是疏水性的。在某些實施方案中，存在兩 個或更多個不同疏水性基團。在一些實施方案中，疏水性基團具有約1或更大的η值?；?合物的η值是其相對親水性-親脂性值的度量(參見，例如，Cates、L.A.、〃 Calculation of Drug Solubilities by Pharmacy Students" Am. J. Pharm. Educ. 45 :11_13(1981))。在一些實施方案中，膠束裝配體的芯在約中性pH(例如，約7.4)下包含至少一個 電荷。在具體的實施方案中，至少一個電荷是負電荷。在更特定的實施例中，至少一個電荷 是至少一個負電荷和至少兩個正電荷。在具體的實施方案中，殼嵌段是親水性的(例如，在約中性pH下)。在一些實施方 案中，膠束裝配體在約4. 7至約6. 8內(nèi)的pH下被破裂或解離。在一些情況下，本文中提供了適合用于將治療劑(包括，例如寡核苷酸或肽)遞送 至活細胞的膠束裝配體。在一些實施方案中，膠束裝配體包含多個嵌段聚合物和任選地至 少一個治療劑。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體是生物相容性的、穩(wěn)定的(包 括化學和/或物理穩(wěn)定的)和/或可重現(xiàn)地合成的。此外，在一些實施方案中，本文中提供 的膠束裝配體是無毒性的(例如，展示低毒性)，保護治療劑(例如寡核苷酸或肽)凈載荷 (payload)免于降解，通過天然存在的過程(例如，通過內(nèi)吞作用)進入活細胞，和/或在與 細胞接觸后將治療劑(例如，寡核苷酸或肽)凈載荷遞送入活細胞的細胞質。在某些情況 下，多核苷酸(例如，寡核苷酸)是siRNA和/或另一種改變細胞中至少一個基因表達的“基 于核苷酸的”試劑。因此，在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體可用于將siRNA或 肽遞送入細胞。在某些情況下，細胞是體外的，而在其他情況下，細胞是體內(nèi)的。在一些實施 方案中，給有此需要(例如，具有敲低某一基因的需要，其中所述基因能夠被施用的siRNA 敲低)的個體施用治療有效量的包含siRNA或肽的膠束裝配體。在特定的情況下，膠束裝 配體可用于或經(jīng)特殊設計用于將siRNA或肽遞送至個體內(nèi)被特異性靶向的細胞。定義
有關本申請應理解，除非另有特別指定，否則應用的單數(shù)形式包括復數(shù)形式，且反 之亦然。即無冠詞修飾或"一種(個)(a)“和"所述的(the)“均意指該詞所修飾名稱的 一種(個)或多種(個)。例如，“所述聚合物"或"核苷酸"可以意指一種/個聚合物 或核苷酸或多種/個聚合物或核苷酸。作為相同標記，除非也有另外特別指定或上下文中 明顯表明沒有這種意圖，否則"聚合物"和"核苷酸"可以意指一種/個聚合物或一種/ 個核苷酸和多種/個聚合物或核苷酸。如本文中所使用的，如果兩個部分或化合物通過任意相互作用，包括但不限于一 個或多個共價鍵、一個或多個非共價相互作用(例如，離子鍵、靜力、范德瓦爾斯相互作用、 其組合等)或其組合保持在一起，那么它們是“結合的”。脂族或脂族基團術語“脂族”或“脂族基團”，如本文中所使用的，意指烴部分，可 以是直鏈(即無支鏈的)、支鏈或環(huán)狀(包括稠合、橋連和螺稠合的多環(huán))并且可以是完全 飽和的或可以包含一個或多個不飽和單元，但不是芳族的。除非另有指定，否則脂族基團包 含1-20個碳原子。陰離子性單體“陰離子性單體”或“陰離子性單體單元”，如本文中所使用的，是指 這樣的單體或單體單元，其具有以陰離子帶電荷狀態(tài)存在的基團，或以不帶電荷狀態(tài)存在、 但處于不帶電荷狀態(tài)時能夠變成陰離子帶電荷狀態(tài)(例如在除去親電體例如質子(H+)，例 如以PH依賴性方式)的基團。在某些情況中，該基團在約生理pH下基本上帶負電，但在弱 酸性PH下發(fā)生質子化并且基本上變成中性。這種基團的非限制性實例包括羧基、巴比妥酸 及其衍生物、黃嘌呤及其衍生物、硼酸、次膦酸類、膦酸類、亞磺酸類、磷酸類和磺酰胺類。陰離子性種類“陰離子性種類”，如本文中所使用的，是這樣的基團、殘基或分子， 其以陰離子帶電荷狀態(tài)存在，或以不帶電荷狀態(tài)存在，但處于不帶電荷狀態(tài)時能夠變成陰 離子帶電荷狀態(tài)，例如在除去親電體時(例如質子(H+)，例如以pH依賴性方式)。在某些 情況中，這種基團、殘基或分子在約生理PH下基本上帶負電，但在弱酸性pH下發(fā)生質子化 并且基本上變成中性。芳基或芳基基團如本文中所使用的，術語“芳基”或“芳基基團”意指具有總計 5-14個環(huán)成員的單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)環(huán)系，其中該環(huán)系中至少一個環(huán)是芳族的，且其中該環(huán)系 中的每一個環(huán)都包含3-7個環(huán)成員。如本文中所使用的，“電荷中和的”意指具有為士 10至士30mV的kta電位和/或 存在第一數(shù)目(ζ)的可帶負電荷的可帶電荷種類(例如在去質子化時變成陰離子性的酸性 種類)和第二數(shù)目(0.5 · ζ)的可帶正電荷的可帶電荷種類(例如在質子化時變成陽離子 性的堿性種類)的顆粒。如本文中所使用的，正常生理pH是指哺乳動物身體的主要流體例如血液、血清、 正常細胞的細胞溶膠等的ΡΗ。在某些情況下，正常生理pH是約中性ρΗ，包括例如約7. 2至 約7. 4的ρΗ。在一些情況下，約中性ρΗ是6. 6至7. 6的ρΗ。如本文中所使用的，術語中性 ρΗ、生理和生理學ρΗ是同義詞并且可互換使用。如本文中所使用的，如果膠束裝配體不以與穩(wěn)定膠束裝配體相同、基本上類似或 類似方式起作用和/或不具有與穩(wěn)定膠束裝配體相同、基本上類似或類似的物理和/或化 學特征，則它是“被破裂的”。可以以任意適當?shù)姆绞酱_定膠束裝配體的“被破裂”。在一種 情況下，如果膠束裝配體不具有低于包含相同嵌段共聚物并且在PH 7.4的水溶液或人血清中形成的膠束裝配濃度5倍、4倍、3倍、2倍、1. 8倍、1. 6倍、1. 5倍、1. 4倍、1. 3倍、1. 2倍 或1. 1倍的流體動力學粒度，則它是“被破裂的”。在一種情況中，如果膠束裝配體不具有低 于包含相同嵌段共聚物并且在PH 7. 4的水溶液或人血清中形成的膠束裝配體的裝配體濃 度5倍、4倍、3倍、2倍、1. 8倍、1. 6倍、1. 5倍、1. 4倍、1. 3倍、1. 2倍或1. 1倍的裝配體濃 度，則它是“被破裂的”。雜烷基術語“雜烷基”意指其中至少一個骨架碳原子被雜原子替代的烷基。雜芳基術語“雜芳基”意指其中至少一個環(huán)成員是雜原子的芳基。如本文中所使用的，“可帶電荷的種類”、“可帶電荷的基團”或“可帶電荷的單體單 元”是帶電荷或不帶電荷狀態(tài)的種類、基團或單體單元。在某些情況中，“可帶電荷的單體 單元"是可以通過添加或除去親電體(例如質子(H+)，例如以pH依賴性方式)轉化成帶電 荷狀態(tài)(陰離子或陽離子帶電荷狀態(tài))的單體單元。除非另有說明，否則應用的任意術語" 可帶電荷的種類"、“可帶電荷的基團"或"可帶電荷的單體單元"包括公開"可帶電荷 的種類"、“可帶電荷的基團"或"可帶電荷的單體單元"中的任意其他用語。為"帶電 荷或可帶電荷成為陰離子"或"帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類"的"可帶電荷種 類"是陰離子性帶電荷狀態(tài)的種類或基團，或不帶電荷狀態(tài)的種類或基團，但在不帶電荷 狀態(tài)下能夠通過例如除去親電體例如質子(H+)而被轉化成陰離子性帶電荷狀態(tài)。在一些具 體的實施方案中，可帶電荷種類是在約中性PH下帶電荷成為陰離子的種類。應強調的是， 并非聚合物上的每一可帶電荷種類在接近該可帶電荷種類的PKa (酸解離常數(shù))的pH下是 陰離子性的，而是陰離子性和非陰離子性種類的平衡共存。屬"帶電荷或可帶電荷成為陽 離子"或"帶電荷或可帶電荷成為陽離子性種類"的"可帶電荷種類"是陽離子性帶電 荷狀態(tài)的種類或基團，或不帶電荷狀態(tài)的種類或基團，但在不帶電荷狀態(tài)下能夠通過例如 添加親電體例如質子(H+)而被轉化成陽離子性帶電荷狀態(tài)。在一些具體的實施方案中，帶 電荷的種類是在約中性PH下帶電荷成為陽離子的種類。應強調，并非聚合物上的每一可帶 電荷的陽離子性種類在接近該可帶電荷種類的PKa(酸解離常數(shù))的pH下是陽離子性的， 而是陽離子性和非陽離子性種類的平衡共存。本文所述的"可帶電荷的單體單元"與"可 帶電荷的單體殘基"互換使用。雜原子術語“雜原子”是指非氫或碳的原子，例如，氧、硫、氮、磷、硼、砷、硒或硅原子。疏水性種類“疏水性種類”(在本文中可與“增強疏水性的部分”互換使 用)，如本文中所使用的，是例如這樣的取代基、殘基或基團，其在與分子例如單體或 聚合物共價連接時，能增加分子的疏水性或充當增強疏水性的部分。術語"疏水性" 是描述根據(jù)化合物在非極性溶劑與水之間的轉移自由能衡量的物理特性的專門術語 (Hydrophobicityregained. Karplus P. A. >Protein ScL、1997、6 1302—1307)?；衔锏氖?水性可以由其IogP值即分配系數(shù)(P)的對數(shù)度量，其被定義為化合物在兩種不能溶混的溶 劑例如辛醇和水的混合物的兩相中的濃度比。疏水性的實驗測定方法和計算機輔助的IogP 值計算方法是本領域技術人員公知的。本發(fā)明的疏水性種類包括、但不限于脂族基團、雜脂 族基團、芳基和雜芳基。如本文中所使用的，“疏水性芯〃包含疏水性部分。在一些情況中，“疏水性 芯"基本上不帶電荷(例如電荷是基本上凈中性的)。
抑制術語“抑制”、“沉默”和“弱化”，如本文中所使用的，是指與在敲低劑不存在 的情況下靶mRNA或相應蛋白質的表達相比較而言，靶mRNA或相應蛋白質的表達的可測量 的減少?！扒玫汀被蛘甙衜RNA或相應蛋白質的表達的減少可通過使用本領域內(nèi)熟知的技術 測量mRNA的水平來估量，所述技術是例如定量聚合酶鏈式反應(qPCR)擴增、RNA溶液雜交、 核酸酶保護、northern印跡和雜交以及使用微陣列的基因表達監(jiān)控；以及在蛋白質的情況 下利用本領域內(nèi)熟知的技術例如SDS-PAGE、抗體結合、western印跡分析、免疫沉淀、放射 免疫測定或酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、熒光激活細胞分析和免疫細胞化學來估量。不受權利要求中沒有特別引述的理論約束，膜去穩(wěn)定化聚合物可以直接或間接引 起細胞膜結構(例如內(nèi)體膜)的改變(例如滲透性改變)，以便允許活性劑例如多核苷酸 (其與膠束裝配體或膠束(或其組成聚合物)締合或與之獨立地)通過這種膜結構-例如 進入細胞或離開細胞囊泡(例如內(nèi)體)。膜去穩(wěn)定化聚合物可以是(但不一定是)膜破裂 性聚合物。膜破裂性聚合物可以直接或間接引起細胞囊泡的裂解或細胞膜破裂(例如針對 大部分細胞膜群體所觀察到的)。一般而言，可以通過各種方式評價聚合物或膠束的膜去穩(wěn)定化或膜破裂特性。在 一種非限制性手段中，可以通過試驗評價來觀察細胞膜結構改變，所述試驗測定(直接或 間接)活性劑(例如多核苷酸)從細胞膜(例如內(nèi)體膜)的釋放-例如通過在對這種膜而 言是外部的環(huán)境中測定這種活性劑的存在或不存在或者這種活性劑的活性。另一種非限制 性手段包括測定紅細胞溶解(溶血)_例如作為所關注細胞膜的替代試驗。這種試驗可以 任選地在單一 pH值下或在多個pH值下進行。如本文中所使用的，“膠束”包括包含芯和親水性殼的顆粒，其中芯至少部分地、主 要地或基本上通過疏水性相互作用而保持在一起。在一些情況中，本文所用的"膠束"是 多成分納米粒，其包含至少兩個結構域，即內(nèi)域或芯和外域或殼。芯至少部分地、主要地或 基本上通過疏水性相互作用而保持在一起，并且存在于膠束中心。本文所用的"膠束殼" 定義為膠束的非芯部分。如本文中所使用的，如果顆粒或裝配體表現(xiàn)基本上如膠束一樣(1)其在從與水 混溶的溶劑(例如但不限于乙醇)稀釋至水性溶劑(例如磷酸緩沖鹽溶液、PH 7.4)時通 過嵌段共聚物的自發(fā)性自我締合作用形成有組織的裝配體(例如，膠束)來形成；( 其對 于稀釋(例如，低至100 μ g/ml,50 μ g/ml UOy g/ml,5 μ g/ml或1 μ g/ml的聚合物濃度，所 述濃度構成了臨界穩(wěn)定性濃度或臨界膠束濃度(CMC))是穩(wěn)定的；C3)其對于周圍介質的高 離子強度(例如0. 5M NaCl)是穩(wěn)定的；和/或(4)隨著有機溶劑的濃度增加其不穩(wěn)定性逐 漸降低(此類有機溶劑包括但不限于二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMS)和二噁烷)， 則所述裝配體或顆粒是“膠束樣的”?！?pH依賴性的膜去穩(wěn)定化疏水物〃是至少部分地、主要地或基本上疏水性并且 以PH依賴性方式使膜去穩(wěn)定化的基團。在某些情況下，pH依賴性的膜去穩(wěn)定化的可帶電 荷疏水物是嵌段共聚物的疏水性聚合節(jié)段和/或包含多個疏水性種類；并且包含多個陰離 子性可帶電荷的種類。在一些實施方案中，該陰離子性可帶電荷種類在約中性PH下是陰離 子性的。在另一些或可替代選擇的實施方案中，該陰離子性可帶電荷種類在較低例如內(nèi)體 PH下不帶電荷。在一些實施方案中，使膜去穩(wěn)定化的可帶電荷的疏水物包含多個陽離子性 種類。該PH依賴性的膜去穩(wěn)定化可帶電荷疏水物包含非肽和非脂質的聚合物骨架。
如本文中所使用的，如果本文中描述的膠束裝配體不解離或不變得不穩(wěn)定，那么 其是“穩(wěn)定的”。在某些情況下，穩(wěn)定的膠束裝配體是具有的流體動力學粒度在最初在PH 7. 4的水溶液(例如磷酸緩沖鹽溶液，pH 7.4)中形成的包含相同嵌段共聚物的膠束裝配體 的流體粒度的約60 %、50 %、40 %、30 %、20 %或10 %范圍內(nèi)的膠束裝配體。在一些情況下， 穩(wěn)定的膠束裝配體是其形成/裝配濃度的膠束裝配體在包含相同嵌段共聚物并最初在PH 7. 4水溶液(例如磷酸緩沖鹽水，pH 7.4)中形成的膠束裝配體形成/裝配濃度的約60%、 50%、40%、30%、20%或10%范圍內(nèi)的膠束裝配體。納米粒如本文中所使用的，術語“納米?！笔侵妇哂行∮?000納米(nm)的直徑 的任意顆粒。一般地，納米粒應當具有小至足以允許它們被真核細胞攝取的尺寸。通常， 納米粒具有200nm或更小的最長直線尺寸(例如，直徑)。在一些實施方案中，納米粒具有 IOOnm或更小的直徑。更小的納米粒，例如具有約IOnm至約200nm，約20nm至約IOOnm或 50nm或更小，例如5nm-30nm或10nm_30nm的直徑的納米粒被用于一些實施方案。核苷酸如本文中所使用的，術語“核苷酸”，在其最廣義上意指摻入或可以摻入多 核苷酸(例如寡核苷酸)鏈的任意化合物和/或物質。在一些實施方案中，核苷酸是通過磷 酸二酯鍵摻入或可以摻入多核苷酸(例如寡核苷酸)鏈的化合物和/或物質。在一些實施 方案中，"核苷酸“意指各核酸殘基(例如核苷酸和/或核苷)。在一些實施方案中，“ 至少一個核苷酸"意指存在一個或多個核苷酸；在不同的實施方案中，所述一個或多個核 苷酸是不連續(xù)的核苷酸、彼此以非共價鍵方式結合或彼此以共價鍵方式結合。照此，在一些 情況中，"至少一個核苷酸"意指一個或多個多核苷酸(例如寡核苷酸)。在一些情況中， 多核苷酸是包含兩個或更多個核苷酸單體單元的聚合物。寡核苷酸基因表達調節(jié)劑如本文中所使用的，“寡核苷酸基因表達調節(jié)劑”是 這樣的寡核苷酸試劑，其能夠通過一些機制(包括但不限于反義機制)或通過RNA干擾 (RNAi)介導的途徑(其可包括⑴轉錄失活；(ii)mRNA降解或螯合(sequestration)； (iii)轉錄抑制或弱化或(iv)翻譯的抑制或弱化)在活細胞中誘導基因表達的選擇性調 節(jié)。寡核苷酸基因表達調節(jié)劑包括調控RNA(包括實際上任意調控RNA)，例如但不限于反義 寡核苷酸、miRNA、siRNA、RNAi、shRNA、適體和其任意類似物或前體。寡核苷酸敲低劑如本文所用的，“寡核苷酸敲低劑"是這樣的寡核苷酸種類， 它們可以通過以序列特異性方式靶向和結合胞內(nèi)核酸來抑制基因表達。寡核苷酸敲低劑的 非限制性實例包括siRNA、miRNA、shRNA、切丁酶(dicer)底物、反義寡核苷酸、誘餌DNA或 RNA、反基因寡核苷酸及其任意類似物和前體。如本文中所使用的，術語"寡核苷酸"意指包含7-200個核苷酸單體單元的聚合 物。在一些實施方案中，"寡核苷酸"包括單和或/雙鏈RNA以及單和/或雙鏈DNA。此外， 術語〃核苷酸〃、“核酸〃、“DNA"、“ RNA"和/或類似術語包括核酸類似物，即具有被 修飾的骨架的類似物，包括、但不限于肽核酸(PNA)、鎖定的核酸(LNA)、膦?；?PNA、嗎啉 代核酸或具有被修飾的磷酸酯基的核酸(例如硫代磷酸酯、膦酸酯、5' -N-亞磷酰胺鍵)。 核苷酸可以純化自天然來源、使用重組表達系統(tǒng)產(chǎn)生并任選地純化、化學合成等。本文所 用的"核苷"是描述包含單糖和堿基的化合物的術語。單糖包括、但不限于戊糖和己糖單 糖。單糖還包括通過用商素、甲氧基、氫或氨基取代羥基或通過酯化其他羥基而修飾的單糖 模擬物和單糖。在一些實施方案中，核苷酸是或包含天然核苷磷酸酯(例如腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷和脫氧胞苷磷酸酯)。在一些實施方案中，堿 基包括天然存在于各種核酸中的任意堿基和其他模擬或類似這種天然存在堿基的修飾物。 被修飾或衍生的堿基的非限制性實例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿 嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙酰胞嘧啶、5_(羧基羥甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨甲基-2-硫 脲苷、5-羧甲基氨甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β -D-galactosylqueosine、肌苷、N6_異戊烯 腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、 3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧 基氨甲基-2-硫脲嘧啶、0-D-mannosylqueosine、5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基 尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸、懷丁苷(wybutoxosine)、假 尿嘧啶、queosine、2-硫胞嘧啶、5-甲基_2_硫尿嘧啶、2_硫尿嘧啶、4_硫尿嘧啶、5-甲基 尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧基乙酸、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3- (3-氨 基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、2-氨基腺嘌呤、吡咯并嘧啶和2，6_二氨基嘌呤。核苷堿基還包 括通用核堿基例如二氟甲苯基、硝基吲哚基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。核苷酸還包括攜有 標記或包含脫堿基即缺乏堿基的單體的核苷酸。除非另有指示，否則核酸序列以5' -3' 方向顯示。核苷酸可以以序列特異性方式通過經(jīng)Watson-Crick堿基對的氫鍵結合另一個 核苷酸。這種堿基對被稱為彼此互補。寡核苷酸可以是單鏈、雙鏈或三鏈的。RNA干擾(RNAi)如本文中所使用的，術語“RNA干擾”或“RNAi”是指由至少部分 雙鏈RNA介導的基因表達的序列特異性抑制和/或靶mRNA和蛋白質水平的減少，所述雙鏈 RNA還包含與靶RNA實質上互補的部分。RNAi試劑如本文中所使用的，術語“RNAi試劑”是指可通過RNAi機制介導基因 表達的抑制的寡核苷酸，其包括但不限于siRNA、microRNA(miRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA)、不 對稱干擾RNA(aiRNA)、切丁酶底物和其前體。短干擾RNA(siRNA)如本文中所使用的，術語“短干擾RNA”或〃 siRNA"是指包 含核苷酸雙鏈體的RNAi試劑，所述雙鏈體在長度上具有約15-50個堿基對并且任選地還包 含0至2個單鏈突出端。siRNA的一條鏈包括以互補方式與靶RNA雜交的部分。在一些實 施方案中，siRNA與靶RNA的被靶向部分之間可能存在一個或多個錯配。在一些實施方案 中，siRNA通過導致靶轉錄物降解而介導基因表達抑制。短發(fā)夾RNA(shRNA)短發(fā)夾RNA (shRNA)意指具有至少兩個雜交或能夠彼此雜交 形成雙鏈(雙鏈體)結構的互補性部分和至少一個單鏈部分的寡核苷酸。切丁酶底物“切丁酶底物"是大于約25個堿基對的雙鏈體RNA，其為細胞中 RNase III家族成員切丁酶(Dicer)的底物。切丁酶底物被切割而產(chǎn)生約21個堿基對的雙 鏈體小干擾RNAs (siRNAs)，它引起RNA干擾效應，從而通過mRNA敲低而引起基因沉默。抑制基因表達如本文中所使用的，短語“抑制基因表達”意指引起基因的表達產(chǎn) 物的量的任意可測量的減少。表達產(chǎn)物可以是從基因轉錄的RNA(例如mRNA)和/或從基 因轉錄的mRNA翻譯的多肽。可使用用于測量mRNA或蛋白質的標準技術測定表達的水平。如本文中所使用的，“基本上不帶電荷”包括士 10-士30mV的ζ電位和/或存在第 一數(shù)目(Z)的可帶負電荷的可帶電荷種類(例如在去質子化時變成陰離子性的酸性種類) 和第二數(shù)目(0.5·ζ)的可帶正電荷的可帶電荷種類(例如在質子化時變成陽離子性的堿 性種類)。
治療劑如本文中所使用的，術語“治療劑”是指當給受試者、器官、組織或細胞施 用時具有治療效果和/或引發(fā)期望的生物學和/或藥理學效果的任意試劑。治療有效量如本文中所使用的，術語治療劑的“治療有效量”是指當給患有或懷 疑患有某種疾病、障礙和/或病癥的受試者施用時足以治療、診斷、預防和/或延緩該疾病、 障礙和/或病癥癥狀發(fā)作的用量。膠束裝配體的結構在本文中的一些實施方案中提供了包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體。在某些實施方案中，膠束裝配體包含芯和殼。在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段是膜去穩(wěn)定化的。在具體的 實施方案中，本文中描述的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水 物。在某些實施方案中，殼嵌段是親水性的。在具體的實施方案中，殼嵌段在約中性PH下 是親水性的。如本文中所使用的，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包括膜破裂性嵌段共聚物(例如，裂 解內(nèi)體膜的聚合物)和使膜局部去穩(wěn)定(例如，通過內(nèi)體膜中的臨時裂隙)的嵌段共聚物。 在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含(i)多個疏水性單體殘基，(ii)多個具有 可帶電荷種類的陰離子性單體殘基，該可帶電荷種類在血清生理PH下是陰離子性的，以及 在內(nèi)體PH下基本上是中性的或不帶電荷的，以及(iii)任選地多個陽離子性單體殘基。在 一些實施方案中，嵌段共聚物中陰離子性種類與陽離子性種類之比例的變動允許本文中描 述的膠束裝配體的膜去穩(wěn)定化活性改變。在一些此類實施方案中，嵌段共聚物中陰離子 性陽離子性種類之比在血清生理PH下在約4 1至約1 4的范圍內(nèi)。在一些此類實施 方案中，嵌段聚合物的疏水性嵌段中陰離子性與陽離子性種類之比的變化允許本文中描述 的膠束裝配體的膜去穩(wěn)定化活性改變。在一些此類實施方案中，本文中描述的嵌段共聚物 的疏水性嵌段中陰離子性陽離子性種類的比例在血清生理PH下在約1 2至約3 1， 或約1 1至約2 1的范圍內(nèi)。在某些實施方案中，存在于本文中提供的膠束裝配體中的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 包含含有多個疏水性基團的芯部分(例如，芯嵌段)。在一些具體的實施方案中，芯部分 (例如，芯嵌段)包含多個疏水性基團和多個第一可帶電荷種類或基團。在更具體的實施方 案，此類第一可帶電荷種類或基團是帶負電荷的和/或可帶電荷成為帶負電荷的種類或基 團(例如，在約中性PH下，或約7.4的pH)。在一些特定的實施方案中，芯部分(例如，芯 嵌段)包含多個疏水性基團，多個第一可帶電荷種類或基團和多個第二可帶電荷種類或基 團。在更具體的實施方案中，該第一可帶電荷種類或基團是帶負電荷的和/或可帶電荷成 為帶負電荷的種類或基團，并且該第二可帶電荷種類或基團帶正電荷和/或可帶電荷成為 帶正電荷的種類或基團(例如，在約中性PH或約7. 4的pH下)。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼和/或膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的殼嵌段還包含可帶電荷的種類或基團。在一些實施方案中，存在于本文中描述的膠束裝 配體中的一個或多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物具有包含多個可帶陽離子電荷的種類或基團 的殼部分。取決于圍繞膠束裝配體的介質中電解質的濃度(例如，取決于pH)，此類可帶陽 離子電荷的種類以帶陽離子電荷或不帶電荷的狀態(tài)存在。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在約5的pH下具有凈陽離子電荷。
19在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體在約中性PH下具有凈中性電荷。在某些實施 方案中，本文中描述的膠束裝配體在約中性PH (例如，在約7. 4的pH下)具有凈陽離子電 荷。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體在約5的pH下比在約7的pH下具有更 多的凈陽離子電荷。在另外的或可替代選擇的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在約 5的pH下具有比在約7的pH下更多的名義(或絕對值)電荷。在某些實施方案中，本文中提供了膠束裝配體，其中膠束裝配體的形式在約6和 以上、約6. 5和以上、約7和以上、約6至約14或更高；約6至約10或更高、約6至約9. 5 或更高、約6至約9或更高、約6至約8. 5或更高、約6至約8或更高、約6. 5至約14或更 高、約6. 5至約10或更高、約6. 5至約9. 5或更高、約6. 5至約9或更高、約6. 5至約8. 5或 更高、約7至約14或更高、約7至約10或更高、約7至約9. 5或更高、約7至約9或更高、 約7至約8. 5或更高、約6. 2至約7. 5或更高、6. 2至7. 5、或約7. 2至約7. 4的pH范圍內(nèi) 是膠束、假膠束或膠束樣結構。在某些實施方案中，在約7或以下、約6. 8或以下、約6. 5或 以下、約6. 2或以下、約6或以下、約5. 8或以下、或約5. 7或以下的pH下，本文中提供的膠 束裝配體、膠束、假膠束或膠束樣結構基本上，或至少部分地破裂或解離。在具體的實施方 案中，膠束裝配體的形式在約6. 2至7. 5的pH范圍內(nèi)是膠束。要理解，如本文中所使用的， 膠束裝配體在至少所述PH范圍內(nèi)具有某種形式，而且可能在所述pH范圍外的pH下也具有 所描述的形式。在某些實施方案中，本文中描述的“嵌段共聚物”包括芯部分和殼部分。如本文中 所論述的，芯部分任選地是或包含芯嵌段并且殼部分任選地包含或是殼嵌段。在一些實施 方案中，至少一個這樣的嵌段是梯度聚合物嵌段。在另外的實施方案中，本文中使用的嵌段 共聚物任選地被梯度聚合物取代(即，用于膠束裝配體的聚合物是具有芯部分和殼部分的 梯度聚合物)。在某些實施方案中，膠束裝配體是納米粒。在具體的實施方案中，膠束裝配體是膠 束。在另外的實施方案中，膠束裝配體是具有約IOnm至約200nm、約IOnm至約IOOnm或約 30-80nm大小的納米?；蚰z束。粒度可以以任意方式來測定，包括但不限于凝膠滲透色譜法 (GPC)、動態(tài)光散射(DLS)、電子顯微鏡檢查技術(例如，TEM)和其他方法。在某些實施方案中，殼和/或殼嵌段是親水性的和/或帶電荷的(例如，不帶電 荷的、陽離子性的、聚陽離子性的、陰離子性的、聚陰離子性的或兩性離子性的)。在某些實 施方案中，殼和/或殼嵌段是親水性的和中性的(不帶電荷的)。在具體的實施方案中，殼 和/或殼嵌段包含凈正電荷。在具體的實施方案中，殼和/或殼嵌段包含凈負電荷。在具 體的實施方案中，殼和/或殼嵌段包含凈中性電荷。在一些實施方案中，芯和/或芯嵌段是 疏水性的和/或包含疏水性基團、部分、單體單元、種類等。在具體的實施方案中，疏水性芯 和/或芯嵌段包含多個疏水性基團、部分、單體單元、種類等以及多個可帶電荷的種類或單 體單元。在更具體的實施方案，多個可帶電荷的單體單元或種類包含多個可帶陰離子電荷 的單體單元或種類。在更具體的實施方案中，多個可帶電荷的單體單元或種類包含多個可 帶陽離子電荷的單體單元或種類。在更具體的實施方案中，多個可帶電荷的單體單元或種 類包含多個陽離子性和多個陰離子性的可帶電荷的單體單元或種類。在一些實施方案中， 嵌段共聚物各自具有(1)形成膠束裝配體(例如，膠束)的殼的親水性帶電荷的嵌段(例 如，陰離子性的或聚陰離子性的；陽離子性的或聚陽離子性的；或兩性離子性的；或不帶電荷的)，⑵疏水性嵌段，和⑶多個可帶陰離子電荷的種類，并且為膜去穩(wěn)定化的(例如， 以PH依賴性的方式變成膜去穩(wěn)定化的)。在一些實施方案中，多個可帶陰離子電荷的種類 存在于疏水性嵌段中。在某些實施方案中，疏水性核和/或芯嵌段任選地包含可包含或可 不包含疏水性基團、可帶電荷的基團或其組合的間隔子單體單元。在一些實施方案中，形成 膠束裝配體(例如，膠束)的芯或存在于其上的聚合物嵌段(例如，共聚物的一個或多個芯 嵌段)是可帶電荷的(例如，在生理PH下包含陽離子性種類和/或陰離子性種類)。在一 些情況下，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)從自締合的多個嵌段共聚物形成。在某 些情況下，自締合通過嵌段共聚物的疏水性嵌段的相互作用發(fā)生，并且所得的膠束裝配體 (例如，膠束)通過存在于膠束裝配體芯中的疏水性嵌段的疏水相互作用來穩(wěn)定。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)在50%的人血清中 保持活性(例如，膠束裝配體遞送治療劑例如多核苷酸的活性)至少2小時、至少4小時、 至少6小時、至少8小時、至少12小時或至少M小時。在另外的或可替代選擇的實施方案 中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)在至少50%的人血漿中保持活性(例如，膠束 裝配體遞送多核苷酸的活性)至少2小時、至少4小時、至少6小時、至少8小時、至少12 小時或至少M小時。在另外的或可替代選擇的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例 如，膠束)在50%的小鼠血清中保持活性(例如，膠束裝配體遞送多核苷酸的活性)至少2 小時、至少4小時、至少6小時、至少8小時、至少12小時或至少M小時。在另外的或可替 代選擇的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)在至少50%的小鼠血漿中保 持活性(例如，膠束裝配體遞送治療劑例如多核苷酸的活性)至少2小時、至少4小時、至 少6小時、至少8小時、至少12小時或至少M小時。在具體的實施方案中，本文中提供的 膠束裝配體(例如，膠束)在50%的人血清中保持活性(例如，膠束裝配體遞送治療劑例如 多核苷酸的活性)至少2小時，在至少50%的人血漿中保持活性至少2小時，在50%小鼠 血清中保持活性至少2小時，在至少50%的小鼠血漿中保持活性至少2小時或其組合。在不同的實施方案，用于本文中描述的膠束裝配體(例如，膠束)中的嵌段共聚物 對本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)的某些方面或功能性具有或經(jīng)選擇具有影響，所 述方面或功能性包括但不限于(1)膠束裝配體(例如，膠束)的生物物理性質，例如但不 限于例如可溶性、水溶解度、穩(wěn)定性、含水介質中的穩(wěn)定性、親水性、親脂性、疏水性等；(2) 膠束裝配體便于配制成可施用形式，或其他目的；C3)膠束裝配體能夠靶向指定的或選擇 的類型的細胞(例如，通過攜帶靶向部分)的能力；和/或(4)增加膠束裝配體(例如，膠 束)的生物相容性的能力。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)的 特征在于一個或多個下列方面(1)通過在從與水混溶的溶劑(例如但不限于乙醇)稀釋 至水性溶劑(例如磷酸緩沖鹽溶液，PH7. 4)時嵌段共聚物的自發(fā)自締合形成有組織的裝配 體(例如膠束)來形成膠束裝配體(例如，膠束)；(2)膠束裝配體(例如，膠束)對于稀 釋(例如，低至構成臨界穩(wěn)定性濃度或臨界膠束濃度(CMC)的100 μ g/ml、50 μ g/mlUO μ g/ ml、5yg/ml或lyg/ml的聚合物濃度)是穩(wěn)定的；(3)膠束裝配體(例如，膠束)對于周圍 介質的高離子強度(例如，0. 5M NaCl)是穩(wěn)定的；和/或(4)膠束裝配體(例如，膠束)隨著 有機溶劑的濃度增加而穩(wěn)定性逐漸降低，此類有機溶劑包括但不限于二甲基甲酰胺(DMF)、 二甲基亞砜(DMS)和二噁烷。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束) 特征在于具有至少兩個上述特性。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)的特征在于具有至少3個上述特性。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例 如，膠束)的特征在于具有全部上述特性。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)的另外或可替代選擇 的特征在于其他標準(1)單個嵌段的分子量及其相對長度比減少或增加以控制形成的膠 束裝配體的大小和其相對穩(wěn)定性，和( 改變形成殼的聚合物陽離子性嵌段的大小以提供 與陰離子性治療劑(例如，寡核苷酸藥物)的有效復合物形成和/或所述陰離子性治療劑 的電荷中和。此外，在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體將小的疏水性分子，例如疏水 性小分子化合物(例如，疏水性小分子藥物)選擇性攝入膠束裝配體的疏水性芯。在具體 的實施方案中，本文提供的膠束裝配體將小的疏水性分子，例如疏水性小分子化合物芘選 擇性攝入膠束裝配體的疏水性芯。芯在本文中的某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的芯包含多個pH依賴性 膜去穩(wěn)定化疏水物。在某些實施方案中，至少部分地、基本上地或主要地通過疏水相互作用 將本文中描述的膠束裝配體的芯保持在一起。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的芯包含多個第一可帶電荷的種 類。在具體的實施方案中，該第一可帶電荷的種類帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類。要 理解，芯內(nèi)的第一可帶電荷種類中沒有一個、有一些或全部帶電荷。在某些實施方案中，本文中描述的膜去穩(wěn)定化聚合物的芯嵌段包含多個第一可帶 電荷的種類和多個第二可帶電荷的種類。在一些情況下，第一可帶電荷的種類帶電荷或可 帶電荷成為陰離子性種類；并且第二可帶電荷的種類帶電荷或可帶電荷成陽離子性種類。 在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的芯包含多個第一可帶電荷的種類；多個第 二可帶電荷的種類；和多個疏水性種類。在某些實施方案中，當芯包含多個可帶陰離子電荷的種類和多個可帶陽離子電荷 的種類時，該多個可帶陰離子電荷的種類的數(shù)目對多個可帶陽離子電荷的種類的數(shù)目的 比例是約1 10至約10 1、約1 8至約8 1、約1 6至約6 1、約1 4至約 4 1、約1 2至約2 1、約3 2至約2 3或是約1 1。在一些實施方案中，芯包 含多個帶陰離子電荷的可帶陰離子電荷的種類和多個帶陽離子電荷的可帶陽離子電荷的 種類，其中存在于芯中的帶陰離子電荷的種類的數(shù)目對帶陽離子電荷的種類的數(shù)目的比例 是約1 10至約10 1、約1 8至約8 1、約1 6至約6 1、約1 4至約4 1、 約1 2至約2 1、約3 2至約2 3或為約1 1。在一些實施方案中，在約中性pH(例如，在約7.4的pH下)，所述多個可帶陰離 子電荷的種類的數(shù)目對所述多個可帶陽離子電荷的種類的數(shù)目的比例是約1 10至約 10 1、約1 8至約8 1、約1 6至約6 1、約1 4至約4 1、約1 2至約2 1、 約2 3至約3 2、約1 1.1至約1.1 1或為約1 1.在一些實施方案中，芯包含多 個帶陰離子電荷的可帶陰離子電荷的種類和多個帶陽離子電荷的可帶陽離子電荷的種類， 其中在約中性PH(例如，在約7. 4的pH下)，芯中存在的帶陰離子電荷的種類的數(shù)目對帶陽 離子電荷的種類的數(shù)目的比例是約1 10至約10 1、約1 8至約8 1、約1 6至 約6 1、約1 4至約4 1、約1 2至約2 1、約2 3至約3 2、約1 1. 1至約1.1 1、或約1 1。在具體的實施方案中，存在于芯中的帶正電荷的種類對芯中帶負電 荷的種類的比例在約中性PH下是約1 4至約4 1。在更具體的實施方案中，存在于芯 中的帶正電荷的種類對芯中帶負電荷的種類的比例在約中性PH下是約1 2至約2 1。 在具體的實施方案中，存在于芯中的帶正電荷的種類與芯中帶負電荷的種類之比在約中性 PH下是約1 1. 1至約1. 1 1。在具體的實施方案中，所述第一可帶電荷的種類是布郎斯臺德酸。在某些情況下， 如本文中所使用的，可帶電荷的種類包括其中質子的添加或除去(例如，以PH依賴性的方 式)分別提供了陽離子性或陰離子性種類、基團或單體單元的種類。在一些實施方案中，存在于芯中的第一可帶電荷的種類是在約中性pH(例如，在 約7. 4的pH下)至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少85 %或至少95 %帶負電 荷的種類。在具體的實施方案中，第一可帶電荷的種類在約中性PH下通過失去H+而帶電荷 成為陰離子性種類。在另外的或可替代選擇的實施方案中，存在于芯中的第一可帶電荷的 種類是在微酸性PH (約6. 5或更低、約6. 2或更低、約6或更低、約5. 9或更低、約5. 8或更 低的PH或約內(nèi)體pH)下至少20 %、至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、 至少80%、至少85%或至少95%為中性或不帶電荷的種類。在一些實施方案中，第一可帶電荷的種類是但不限于例如羧酸、酸酐、磺酰胺、磺 酸、亞磺酸、硫酸、磷酸、次膦酸、硼酸、亞磷酸等。在一些實施方案中，存在于芯中的第二可帶電荷的種類是在約中性pH下(例如， 在約7. 4的pH下)至少20 %、至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少 80%、至少85%或至少95%帶正電荷的種類。在具體的實施方案中，此類第二可帶電荷的 種類通過添加H+而帶電荷成為陽離子性種類。在另外的或可替代選擇的實施方案中，存在 于芯中的第二可帶電荷的種類是在微酸性PH (例如，約6. 5或更低、約6. 2或更低、約6或 更低、約5. 9或更低、約5. 8或更低的pH或約內(nèi)體pH)下至少20 %、至少30 %、至少40 %、 至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%或至少95%帶正電荷的種類。在本文中提供的一些實施方案中提供了在膠束裝配體的芯中包含多個膜去穩(wěn)定 化部分的膠束裝配體。殼在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼是親水性的。在具體的實施方 案中，本文中描述的膠束裝配體的殼包含多個可帶電荷的種類。在具體的實施方案中，可帶 電荷的種類帶電荷或可帶電荷成為陽離子性種類。在其他具體的實施方案中，可帶電荷的 種類帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類。在其他實施方案中，膠束裝配體的殼是親水性 和不帶電荷的(例如，基本上不帶電荷的)。要理解此類殼嵌段包括其中可帶電荷種類中沒 有一個、有一些或全部帶電荷的種類。在具體的實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼在約中性pH(例如，在約7. 4 的PH下)是聚陽離子性的。在一些實施方案中，膠束裝配體的殼中的可帶電荷種類是在約 中性pH (例如，在約7. 4的pH)下至少20 %、至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、 至少70%、至少80%、至少85%或至少95%帶正電荷的種類、基團或單體單元。在具體的 實施方案中，膠束裝配體的殼中的此類可帶電荷種類通過添加H+而帶電荷成為陽離子性種 類(例如，布朗斯臺德堿)。在另外的或可替代選擇的實施方案中，本文中描述的膠束裝配
23體的殼中的可帶電荷種類是在微酸性PH (例如，約6. 5或更低、約6. 2或更低、約6或更低、 約5. 9或更低、約5. 8或更低的pH或約內(nèi)體pH)下至少20%、至少30%、至少40%、至少 50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少85 %或至少95 %帶正電荷的種類。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼在生理pH(例如，循環(huán)人血漿 WpH)下或其附近是陽離子性的。在一些實施方案中，殼嵌段是聚陽離子性的。在一些實 施方案中，殼包含一個或多個治療劑(例如，多核苷酸，例如siRNA)，其中治療劑是聚陰離 子性的。在一些實施方案中，所述多個治療劑包含總共χ個陰離子，本文中描述的膠束裝配 體的聚陽離子性殼包含約0. 6x、約0. 7x、約0. 8x、約0. 9x、約1. Ox、約1. Ix個陽離子或更多 陽離子。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼是親水性的并且不帶電荷?？?用于本文中的親水性的不帶電荷種類包括但不限于例如聚乙醇(PEG)、聚氧化乙烯(PEO)等。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的殼包含多個不同的親水性種類 (例如，至少一個不帶電荷的親水性種類和至少一個帶電荷的親水性種類)。粒度在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體是具有任意適當大小的納米粒。通 過調整芯部分、殼部分、另外的部分或其組合的聚合程度來調整納米粒的大小以滿足特殊 需要。在具體的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體具有約IOnm至約200nm的平均流體 動力學直徑。在更具體的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在含水介質中具有約Inm 至約 500nm、約 5nm 至約 250nm、約 IOnm 至約 200nm、約 IOnm 至約 lOOnm、約 20nm 至約 lOOnm、 約30nm至約SOnm等的平均流體動力學直徑。在更具體的實施方案中，本文中提供的膠束 裝配體在具有約中性pH(例如，約7. 4的pH)的含水介質中具有約Inm至約500nm、約5nm 至約 250nm、約 IOnm 至約 200nm、約 IOnm 至約 lOOnm、約 20nm 至約 lOOnm、約 30nm 至約 80nm 等的平均流體動力學直徑。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在人血清中具有 約Inm至約500nm、約5nm至約250nm、約IOnm至約200nm、約IOnm至約lOOnm、約20nm至約 lOOnm、約30nm至約SOnm等的流體動力學直徑。在具體的實施方案中，本文中提供了在具 有約7. 4的pH的含水介質和在人血清中都具有約IOnm至約200nm的粒度的膠束裝配體。裝配體在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體是自我裝配的。在某些實施方案中， 膠束裝配體在含水介質中是自我裝配的或能夠自我裝配。在一些實施方案中，膠束裝配體 在具有約中性pH(例如，具有約7.4的pH)的含水介質中是自我裝配的或能夠自我裝配。在 一些實施方案中，膠束裝配體在用具有約中性PH (例如，具有約7. 4的pH)的含水介質稀釋 嵌段共聚物的有機溶液后是自我裝配的或能夠自我裝配。在一些實施方案中，膠束裝配體 在人血清中是自我裝配的或能夠自我裝配。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體 是自我裝配的。在具體的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在約6至約9、約6至約8、約6. 5 至約9、約6. 5至約8、約6. 5至約7. 5、約7至約9或約7至約8內(nèi)的至少一個pH值下的含 水介質中自我裝配。在一些實施方案中，膠束裝配體在約5. 0至約7. 4內(nèi)的pH值下的含水 介質中是膜去穩(wěn)定化的。要理解，如本文中所使用的，膠束裝配體在至少本文中描述的PH下自我裝配，但還可在本文中描述的PH范圍外的一個或多個pH值下自我裝配。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在任意適當?shù)臐舛认伦晕已b配。 在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在約2μ g/mL、約5μ g/mL、約8μ g/mL、約 10 μ g/ml、約 20 μ g/mL、約 25 μ g/mL、約 30 μ g/mL、約 40 μ g/mL、約 50 μ g/mL、約 60 μ g/mL、 約70 μ g/mL、約80 μ g/mL、約90 μ g/mL、約100 μ g/mL或更高的濃度(例如，具有這樣的臨 界裝配濃度下自我裝配(CAC)，或膠束裝配體形成的最低濃度)。在某些實施方案中，本文 中提供的膠束裝配體在約1 μ g/mL至約100 μ g/mL之間的至少一個濃度下自我裝配。在一些實施方案中，通過本文中描述的聚合物的自發(fā)自我裝配來制備本文中提供 的膠束裝配體(例如，膠束)。在某些實施方案中，在(a)將與水混溶的有機溶劑中的聚合 物溶液稀釋入含水介質中；或(b)直接溶解于含水溶液后，本文中描述的聚合物裝配成本 文中提供的膠束裝配體。在一些實施方案中，本文中描述的聚合物在多核苷酸不存在的情 況下裝配成本文中提供的膠束裝配體。在一些實施方案中，膠束裝配體(例如，膠束)對于含水溶液中的稀釋是穩(wěn)定的。 在具體的實施方案中，膠束裝配體(例如，膠束)對生理PH(包括人循環(huán)血液的pH)下的稀 釋穩(wěn)定，其臨界穩(wěn)定性濃度(例如，臨界膠束濃度(CMC))為約50至約100 μ g/mL或約10至 約50 μ g/mL、低于10 μ g/mL、低于5 μ g/mL或低于2 μ g/mL。如本文中所使用的，“膠束裝配 體的去穩(wěn)定化”意指形成膠束裝配體的聚合物鏈至少部分地解聚，結構改變(例如，大小的 擴大和/改變形狀)，和/或可形成無定形超分子結構(例如，非膠束超分子結構)。術語 臨界穩(wěn)定性濃度(CSC)、臨界膠束濃度(CMC)和臨界裝配濃度(CAC)在本文中可互換使用。穩(wěn)定性在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在含水介質中是穩(wěn)定的。在某些實 施方案中，本文中提供的膠束裝配體在選擇的pH，例如約生理pH(例如，循環(huán)人血漿的pH) 下在含水介質中是穩(wěn)定的。在具體的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在約中性PH下 (例如，約7.4的pH下)在含水介質中是穩(wěn)定的。在具體的實施方案中，含水介質是動物 (例如，人)血清或動物(例如，人)血漿。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體在 人血清和/或人血漿中是穩(wěn)定的。在具體的實施方案中，膠束裝配體在循環(huán)人血漿中是穩(wěn) 定的。要理解，膠束裝配體的穩(wěn)定性不限于指定的PH，而且其還在最低限度包括該指定pH 的PH值下是穩(wěn)定的。在具體的實施方案中，本文中描述的膠束裝配體在酸性pH下明顯不 如在約中性的PH下穩(wěn)定。在更具體的實施方案，本文中描述的膠束裝配體在約5. 8的pH 下明顯不如在約7. 4的pH下穩(wěn)定。在具體的實施方案中，膠束裝配體在約10 μ g/ml或更高的濃度下(例如，在約中 性PH下)是穩(wěn)定的。在一些實施方案中，膠束裝配體在約100 μ g/mL或更高的濃度下(例 如，在約中性pH)是穩(wěn)定的。嵌段共聚物在一些實施方案中，本文中提供的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物在任意適當?shù)膒H下是 膜去穩(wěn)定化的。在一些實施方案中，該膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物在內(nèi)體pH、約6. 5或更低、約 5. 0至約6. 5或約6. 2或更低的pH下是膜去穩(wěn)定化的(例如，在含水介質中)。在具體的實施方案中，本文中提供的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段包括多個第 一可帶電荷的基團、種類或單體單元和多個第二可帶電荷的種類、基團或單體單元。在某些情況下，第一可帶電荷的基團、種類或單體單元帶負電荷或可帶電荷成為帶負電的種類、基 團或單體單元。在一些情況下，第二可帶電荷的基團、種類或單體單元帶正電荷或可帶電荷 成為陽離子性種類、基團或單體單元。在某些實施方案中，隨著含有本文中描述的膠束裝配 體的含水介質的PH增加，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段和膠束裝配體的芯將帶更多的 正電荷，從而導致膠束裝配體的形狀和/或大小的破裂，并且引起膜(例如，圍繞膠束裝配 體的內(nèi)體膜)的部分破裂或顯著破裂。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含多個以pH依賴性方式使內(nèi)體 膜去穩(wěn)定的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚體。在不同的實施方案中，所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物當 裝配在膠束裝配體中和/或當獨立于膠束裝配體形式而存在(例如，當膠束裝配體被解離 和/或去穩(wěn)定化時)時，能夠使膜去穩(wěn)定。在一些實施方案中，在生理PH(例如，循環(huán)血液的 PH)下或其附近，組成膠束裝配體的聚合物具有程度最低的膜去穩(wěn)定性，但在暴露于降低的 pH(例如，內(nèi)體pH)時，聚合物是膜去穩(wěn)定化的。在某些情況下，這種向膜去穩(wěn)定化狀態(tài)的轉 變是通過摻入聚合物的微酸性殘基的質子化發(fā)生的，這樣的質子化導致聚合物的疏水性增 加。在某些情況下，聚合物的增加的疏水性導致膠束裝配體的構象變化，使膠束裝配體具有 膜去穩(wěn)定化作用(例如，引起膜的去穩(wěn)定化)。在一些實施方案中，本文中提供的膠束裝配 體的膜去穩(wěn)定化機制不依賴于聚陽離子例如PEI或其他聚陽離子的純粹質子-海綿膜去穩(wěn) 定化機制。在一些實施方案中，兩個膜破裂機制(a)聚陽離子(例如DMAEMA)和(b)疏水 化的聚陰離子(例如丙基丙烯酸)一起作用的組合對由聚合物提供的膜去穩(wěn)定化效力具有 累加或協(xié)同作用。在一些實施方案中，聚合物嵌段任選地選自但不限于例如多核苷酸、寡核苷酸、聚 乙二醇、親水性嵌段、疏水性嵌段、帶電荷的嵌段等。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物，其中 嵌段共聚物是非肽和/或非脂質的。本文中提供了包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配 體，其中芯嵌段是非肽和/或非脂質的。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體包含 膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物，其中殼嵌段是非肽的和/或非脂質的。在一些實施方案中，形成 膠束裝配體的嵌段共聚物的骨架是非肽的和/或非脂質的。在某些實施方案中，芯嵌段的 骨架是非肽和/或非脂質的。在一些實施方案中，殼嵌段是非肽和/或非脂質的。如本文 中所使用的，脂質是在廣義上被定義為疏水性或兩親性分子的化合物大組，所述分子完全 或部分起源于兩個不同類型的生物化學亞單元酮脂酰和異戊二烯基，例如脂肪酸、甘油脂 質、磷酸甘油脂質(glycerophoispholipid)、鞘脂、糖脂、多聚乙酰、固醇脂(sterol lipid) 和孕烯醇酮脂(prenol lipid)。在一些實施方案中，本文中提供了膠束裝配體，其包含多個含有芯部分(例如，芯 嵌段)和殼部分(例如，殼嵌段)的膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物，其中芯部分(例如，芯嵌段) 的數(shù)均分子量與殼部分(例如，殼嵌段)的數(shù)均分子量之比以任意適當?shù)谋嚷蚀嬖?。在?體的實施方案中，在膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中芯部分(例如，芯嵌段)的數(shù)均分子量與殼 部分(例如，殼嵌段)的數(shù)均分子量之比以約1 10至約5 1、約1 1至約5 1、約 5 4 至約 5 1、約 1 2 至約 2 1、約 2 1、約 1.5 1、約 1. 1 1、約 1.2 1、約 1.3 1、約 1.4 1、約 1.6 1、約 1.7 1、約 1.8 1、約 1.9 1 或約 2. 1 1 的比率 存在。在一些實施方案中，在膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中芯部分(例如，芯嵌段)的數(shù)均分子
26量與殼部分(例如，殼嵌段)的數(shù)均分子量之比以約2(或更高)比1;約1.5(或更高)比 1;約1.1(或更高)比1;約1.2(或更高)比1;約1.3(或更高)比1;約1.4(或更高)比 1;約1.6(或更高)比1;約1.7(或更高)比1;約1.8(或更高)比1;約1.9(或更高)比 1或約2.1(或更高)比1的比率存在。在具體的實施方案中，芯嵌段的數(shù)均分子量與殼嵌 段的數(shù)均分子量之比是約2 1。在具體的實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含至少一種類型的具有親水性 節(jié)段和疏水性節(jié)段的聚合物(例如，嵌段共聚物和/或單嵌段聚合物，包括單嵌段共聚物)。 在某些實施方案中，親水性節(jié)段是親水性嵌段并且疏水性節(jié)段是疏水性嵌段。在一些實施 方案中，此類聚合物是非肽的。在其他實施方案中，親水性節(jié)段和疏水性節(jié)段是單嵌段梯度 共聚物的不同區(qū)域。在不同的情況下，“聚合物節(jié)段”是具有給定的物理性質(例如，本文中 描述的嵌段的物理性質，例如，疏水性、親水性、荷電率(chargeability)等)的聚合物部分 或包含一個或多個具有相似物理性質(例如，疏水性、親水性、荷電率等)的嵌段的聚合物 部分。在某些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體的一個或多個或全部聚合物(包括 至少多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物以及任選地非膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)各自具有(1)形成 膠束裝配體(例如，膠束)殼的至少一部分的任選地帶電荷的親水性節(jié)段(例如，殼嵌段)； 和( 形成膠束裝配體(例如，膠束)疏水性芯的至少一部分的基本上疏水性的節(jié)段(例 如，芯嵌段)，所述膠束裝配體通過形成芯的聚合物節(jié)段的疏水性相互作用來穩(wěn)定。在一些 實施方案中，所述親水性節(jié)段是中性的或不帶電荷的。在一些實施方案中，所述親水性節(jié)段 是帶電荷的和陽離子性的或聚陽離子性的。在一些實施方案中，親水性節(jié)段是帶電的和陰 離子性的或聚陰離子性的。在一些實施方案中，親水性節(jié)段是帶電荷的和兩性離子性的。在 一些情況下，親水性節(jié)段可起至少3個作用(1)形成膠束結構的殼，(2)增加膠束裝配體的 水分散性，和(3)連接至(例如，結合)一個或多個治療劑(例如，基于寡核苷酸的治療性 分子例如siRNA)。在一些實施方案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段和/或膠束裝配體 的芯還包含可帶電荷的或帶電荷的種類(例如，在生理PH下為陰離子性和/或陽離子性的 種類/單體單元)并且是膜去穩(wěn)定性的(例如，以PH依賴性的方式使膜去穩(wěn)定)。在一些 實施方案中，膠束裝配體的基本上疏水的嵌段(例如，芯嵌段)和/或芯包含一個或多個可 帶電荷的種類(例如，單體單元、部分、基團等)。在更具體的實施方案中，膠束裝配體的基 本上疏水的嵌段和/或芯包含多個陽離子性種類和多個陰離子性種類。在更具體的實施方 案中，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌段和/或膠束裝配體的芯包含基本上相似數(shù)量的陽離 子性和陰離子性種類(即，疏水性嵌段和/或芯基本上是凈中性的)。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體包含含有第一和第二可帶電荷種類 的疏水性芯嵌段。在一些實施方案中，第一可帶電荷種類是如本文中所描述的并且第二可 帶電荷種類是當質子化時可帶電荷成為陽離子性種類。在具體的實施方案中，第一可帶電 荷種類在酸性pH(例如，內(nèi)體pH，低于約6. 5的pH，低于約6. 0的pH，低于約5. 8的pH，低 于約5.7的pH等)下不帶電荷。在具體的實施方案中，第二可帶電荷種類的PKa為約6至 約10、約6. 5至約9、約6. 5至約8、約6. 5至約7. 5或任意其他適當?shù)膒Ka。在某些實施方 案中，第一可帶電荷種類中的至少一個和第二可帶電荷種類中的至少一個存在于單個單體 單元上。在一些實施方案中，第一可帶電荷的種類存在于第一可帶電荷的單體單元上并且第二可帶電荷的種類存在于第二可帶電荷的單體單元上。在某些實施方案中，第一可帶電 荷的種類在去質子化后可帶電荷成為陰離子性種類，第二可帶電荷的種類在質子化后可帶 電荷成為陽離子性種類，并且陰離子性種類與陽離子性種類之比在約中性PH下為約1 10 至約10 1，約1 6至約6 1、約1 4至約4 1、約1 2至約2 1、約1 2至 3 2之間，或為約1 1。在一些實施方案中，第一可帶電荷的單體單元與第二可帶電荷的 單體單元之比是約1 10至約10 1、約1 6至約6 1、約1 4至約4 1、約1 2 至約2 1、約1 2至3 2或為約1 1。術語“共聚物”，如本文中所使用的，表示聚合物是兩個或更多個不同單體聚合的 結果。本文中描述的膠束裝配體的“單嵌段聚合物”或“亞單元聚合物(subimit polymer)“ 是單個聚合步驟的合成產(chǎn)物。術語單嵌段聚合物包括共聚物(即，超過一種類型的單體的 聚合產(chǎn)物)和均聚物(即，單個類型的單體的聚合產(chǎn)物)?！扒抖巍惫簿畚锸侵赴Y構單 元或單體單元(在本文中可互換使用)的一個或多個亞組合的結構。此類結構單元或單體 單元包含聚合單體的殘基。在一些實施方案中，本文中描述的嵌段共聚物包含非脂質結構 單元或單體單元。在一些實施方案中，嵌段共聚物是二嵌段共聚物。二嵌段共聚物包含兩 個嵌段；這種聚合物的圖示概括表列如下[AaBbC。. . . ]ffl-[XxYyZz- · · ]n，其中每個字母表示結 構單元或單體單元，并且其中每個結構單元的下標表示該具體嵌段中該單元的摩爾分數(shù)， 三個點表示每個嵌段中可以存在更多(也可以更少)個結構單元，m和η表示二嵌段共聚物 中每個嵌段的分子量。正如圖示提示的，在一些情況中，對每個嵌段分別控制每個結構單元 的數(shù)量和性質。圖示并不意味著且不應解釋為推定各嵌段中結構單元數(shù)或不同類型結構單 元數(shù)之間何種情況下的任意關系。該圖示也不意味著描述具體嵌段內(nèi)結構單元的任意具體 數(shù)量或排列。在每一嵌段中，除非另有特別描述，否則結構單元可以以純粹隨機、交替隨機、 規(guī)整交替、規(guī)整嵌段或隨機嵌段結構形式排列。例如，純粹隨機結構可以具有形式(非限制 性的)X-X-y-z-X-y-y-Z-y-Z-Z-Z...。非限制性的示例性交替隨機結構可以具有形式(非 限制性的)X-y-X-Z-y-X-y-Z-y-X-Z...，示例性的規(guī)整交替結構可以具有形式(非限制性 的)X-y-Z-X-y-Z-X-y-Z...。示例性的規(guī)整嵌段結構可以具有如下結構(非限制性的).
..x-x-x-y-y-y-z-z-z-x-x-x...，而示例性的隨機嵌段結構可以具有結構(非限制性的). . χ-χ-x-z-z-x-x-y-y-y-y-z-z-z-x-x-z-z-z-...。在梯度聚合物中，一個或多個單體單元 的含量以梯度方式從聚合物的α端值增加或減少到ω端值。在上述一般實例中無一指的 是單個結構單元或嵌段的具體并列或嵌段中結構單元的數(shù)量或嵌段的數(shù)量，也不應將它們 視為以任意方式具有或限制形成本發(fā)明膠束裝配體的嵌段共聚物的實際結構。在某些實施 方案中，本文中提供了本文中描述的任意亞單元聚合物或亞單元聚合物的組成，無論此類 聚合物是否裝配成膠束裝配體。如本文中所使用的，括入結構單元的括號并非意指且并非視為意指結構單元自身 形成嵌段。即方括號內(nèi)的結構單元可以以任意方式與嵌段內(nèi)的其他結構單元組合，即純粹 隨機、交替隨機、規(guī)整交替、規(guī)整嵌段或隨機嵌段結構。本文所述的嵌段共聚物是任選地交 替、梯度或隨機嵌段共聚物。在一些實施方案中，嵌段共聚物是樹狀、星型或接枝共聚物。在某些實施方案中，本文中提供的膠束裝配體的嵌段共聚物(例如膜去穩(wěn)定化嵌 段共聚物)包含乙烯型不飽和單體。術語“乙烯型不飽和單體”在本文中定義為具有至少 一個碳雙鍵或三鍵的化合物。乙烯型不飽和單體的非限定性實例是(烷基)丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯、烷基丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、丙烯酰胺、苯乙烯、烯丙基胺、 烯丙基銨、二烯丙基胺、二烯丙基銨、N-乙烯基甲酰胺、乙烯醚、乙烯磺酸酯、丙烯酸、硫代甜 菜堿、羧基甜菜堿、磷甜菜堿(phosphobetaine)或馬來酸酐。 在不同實施方案中，使用適合用于提供本文中描述的膠束裝配體的聚合物(包 括，例如，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)的任意單體。在一些實施方案中，適合用于制備本文中 提供的膠束裝配體的聚合物(包括，例如，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)的單體包括但不限于 例如一個或多個下列單體甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丙酯(全部同分異 構體)、甲基丙烯酸丁酯(全部同分異構體)、甲基丙烯酸2-乙基己酯、甲基丙烯酸異冰片 酯、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸芐酯、甲基丙烯酸苯酯、甲基丙烯腈、α -甲基苯乙烯、丙烯酸甲 酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯(全部同分異構體)、丙烯酸丁酯(全部同分異構體)、丙烯酸 2-乙基己酯、丙烯酸異冰片酯、丙烯酸、丙烯酸芐酯、丙烯酸丙酯、丙烯腈、苯乙烯、選自如下 的丙烯酸酯類和苯乙烯類甲基丙烯酸縮水甘油酯、甲基丙烯酸2-羥基乙酯、甲基丙烯酸 羥丙酯(全部異構體)、甲基丙烯酸羥丁酯(全部異構體)、甲基丙烯酸N，N-二甲氨基乙 酯、甲基丙烯酸N，N- 二乙基氨基乙酯、甲基丙烯酸三乙二醇酯、甲基丙烯酸寡乙二醇酯、衣 康酸酐、衣康酸、丙烯酸縮水甘油酯、丙烯酸2-羥乙酯、丙烯酸羥丙酯(全部異構體)、丙烯 酸羥丁酯(全部異構體)、丙烯酸N，N-二甲氨基乙酯、丙烯酸N，N-二乙氨基乙酯、丙烯酸 三乙二醇酯、甲基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰胺、N, N-二甲基丙烯酰胺、N-叔丁基甲基丙烯 酰胺、N-正丁基甲基丙烯酰胺、N-羥甲基丙烯酰胺(N-methylolacrylamide)、Ν-羥乙基丙 烯酰胺(N-ethylolacrylamide)、乙烯基苯甲酸(全部異構體)、二乙氨基苯乙烯(全部異 構體)、α-甲基乙烯基苯甲酸(全部異構體)、二乙氨基α-甲基苯乙烯(全部異構體)、 對-乙烯基苯磺酸、對-乙烯基苯磺酸鈉鹽、甲基丙烯酸三甲氧基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯 酸三乙氧基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸三丁氧基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二甲氧基甲基 甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二乙氧基甲基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二丁氧基甲基甲硅烷 基丙酯、甲基丙烯酸二異丙氧基甲基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二甲氧基甲硅烷基丙酯、甲 基丙烯酸二乙氧基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二丁氧基甲硅烷基丙酯、甲基丙烯酸二異丙 氧基甲硅烷基丙酯、丙烯酸三甲氧基甲硅烷基丙酯、丙烯酸三乙氧基甲硅烷基丙酯、丙烯酸 三丁氧基甲硅烷基丙酯、丙烯酸二甲氧基甲基甲硅烷基丙酯、丙烯酸二乙氧基甲基甲硅烷 基丙酯、丙烯酸二丁氧基甲基甲硅烷基丙酯、丙烯酸二異丙氧基甲基甲硅烷基丙酯、丙烯酸 二甲氧基甲硅烷基丙酯、丙烯酸二乙氧基甲硅燒基丙酯、丙烯酸二丁氧基甲硅烷基丙酯、丙 烯酸二異丙氧基甲硅烷基丙酯、乙酸乙烯酯、丁酸乙烯酯、苯甲酸乙烯酯、乙烯基氯、乙烯基 氟、乙烯基溴、馬來酸酐、N-芳基馬來酰亞胺、N-苯基馬來酰亞胺、N-烷基馬來酰亞胺、N-丁 基馬來酰亞胺、N-乙烯基吡咯烷酮、N-乙烯基咔唑、丁二烯、異戊二烯、氯丁二烯、乙烯、丙 烯、1，5_己二烯類、1，4_己二烯類、1，3_ 丁二烯類、1，4_戊二烯類、乙烯醇、乙烯基胺、N-烷 基乙烯基胺、烯丙基胺、N-烷基烯丙基胺、二烯丙基胺、N-烷基二烯丙基胺、亞烷基亞胺、丙 烯酸類、烷基丙烯酸酯類、丙烯酰胺類、甲基丙烯酸類、甲基丙烯酸烷基酯類、甲基丙烯酰胺 類、N-烷基丙烯酰胺類、N-烷基甲基丙烯酰胺類、N-異丙基丙烯酰胺、乙烯基萘、乙烯基吡 啶、乙基乙烯基苯、氨基苯乙烯、乙烯基吡啶、乙烯基咪唑、乙烯基聯(lián)苯、乙烯基茴香醚、乙烯 基咪唑基、乙烯基吡啶基、乙烯基聚乙二醇、二甲氨基甲基苯乙烯、三甲基銨乙基甲基丙烯 酸酯、三甲基銨乙基丙烯酸酯、二甲氨基丙基丙烯酰胺、三甲基銨乙基丙烯酸酯、三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯、三甲基銨丙基丙烯酰胺、丙烯酸十二烷基酯、丙烯酸十八酯或甲基丙烯 酸十八酯單體或其組合。在一些實施方案中，任選地使用此類單體的官能化形式。官能化的單體，如本文 中所使用的，是包含掩蔽或未掩蔽的官能團(例如在聚合后可以連接其他部分的基團)的 單體。此類基團的非限定性實例是伯氨基、羧基、硫氫基、羥基、疊氮基和氰基。幾個適當 的掩蔽基團是可供利用的(參見，例如，T. W. Greene&P. G. Μ. Wuts、Protective Groupsin Organic Synthesis (第 2 版)J. Wiley&Sons、1991. P. J. Kocienski、Protecting Groups、 Georg Thieme Verlag、1994)。按照任意適當?shù)姆绞街苽浯颂幩龅木酆衔?。用于產(chǎn)生本文中提供的聚合物的適 當合成方法包括但不限于例如陽離子、陰離子和自由基聚合。在一些情況下，當使用陽離子 方法時，用催化劑處理單體以引發(fā)聚合。任選地，一種或多種單體用于形成共聚物。在一些 實施方案中，這種催化劑是引發(fā)劑，包括例如質子酸(布郎斯臺德酸)或路易斯酸，在使用 路易斯酸的情況下，還任選地使用一些促進劑例如水或醇。在一些實施方案中，催化劑是但 不限于例如碘化氫、高氯酸、硫酸、磷酸、氟化氫、氯磺酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、三氯化鋁、烷 基氯化鋁、三氟化硼復合物、四氯化錫、五氯化銻、氯化鋅、四氯化鈦、五氯化磷、三氯氧磷或 氯氧化鉻。在某些實施方案中，聚合物合成純凈地或在任意適合的溶劑中進行。適當?shù)娜?劑包括但不限于戊烷、己烷、二氯甲烷、氯仿或二甲基甲酰胺(DMF)。在某些實施方案中，在 任意適當?shù)姆磻獪囟认?，包括例如約_50°C至約100°C或約0°C至約70°C的溫度下進行聚合 物合成。在某些實施方案中，通過自由基聚合制備聚合物。當使用自由基聚合方法時，提供 (i)單體、(ii)任選地共聚單體和(iii)任選的自由基來源以引發(fā)自由基聚合過程。在一 些實施方案中，自由基的來源是任選的，因為一些單體可在于高溫下加熱時自我引發(fā)。在某 些情況下，在形成聚合混合物后，將混合物接觸聚合條件。聚合條件是如本文中所述引起至 少一種單體形成至少一種聚合物的條件。這種條件任選地可改變至任意適當?shù)乃?，包?但不限于例如溫度、壓力、氣氛、聚合混合物中使用的原料的比例和反應時間。以任意適當 的方式包括例如在溶液、分散體、懸浮液、乳劑中或批量進行聚合。在一些實施方案中，引發(fā)劑存在于反應混合物中。如果可用于本文中描述的聚合 方法，則任選地使用任意適當?shù)囊l(fā)劑。這種引發(fā)劑包括但不限于例如一種或多種烷基過 氧化物、取代的烷基過氧化物、芳基過氧化物、取代的芳基過氧化物、?；^氧化物、烷基氫 過氧化物、取代的烷基氫過氧化物、芳基氫過氧化物、取代的芳基氫過氧化物、雜烷基過氧 化物、取代的雜烷基過氧化物、雜烷基氫過氧化物、取代的雜烷基氫過氧化物、雜芳基過氧 化物、取代的雜芳基過氧化物、雜芳基氫過氧化物、取代的雜芳基氫過氧化物、烷基過酸酯、 取代的烷基過酸酯、芳基過酸酯、取代的芳基過酸酯或偶氮化合物。在具體的實施方案中， 過氧化苯酰(BPO)和/或AIBN用作引發(fā)劑。在一些實施方案中，聚合過程以活潑形式按照任意適合的方式進行，例如，但不 限于原子轉移自由基聚合(ATRP)、一氧化二氮-為介體的活潑自由基聚合(NMP)、開環(huán)聚 合(ROP)、簡并性轉移(DT)或可逆添加分段轉移(RAFT)。使用常規(guī)和/或活潑/受控 聚合方法，可以生產(chǎn)各種聚合物結構，例如、但不限于嵌段、接枝、星形和梯度共聚物，其 中單體單元在整個鏈上以統(tǒng)計學方式或以梯度方式分布，或以嵌段順序或側鏈接枝形式均聚化。在其他實施方案中，通過大分子設計，經(jīng)黃原酸酯類(MADIX)的可逆添加-分 段鏈轉移合成聚合物(Direct Synthesis ofDoubIe Hydrophilic Statistical Di-and Triblock CopolymersComprised of Acrylamide and Acrylic Acid Units via the MADlXProcess " , Daniel Taton 等人,Macromolecular Rapid Communications, 22, No. 18, 1497-1503(2001).)。在某些實施方案中，可逆添加-分段鏈轉移或RAFT用于合成本發(fā)明的乙烯型骨架 聚合物。RAFT是一種活潑聚合過程。RAFT包含自由基簡并性鏈轉移過程。在一些實施方 案中，用于制備本文所述聚合物的RAFT方法使用硫羰基硫基化合物，例如、但不限于二硫 酯類、二硫氨基甲酸酯類和黃原酸酯類，以通過可逆鏈轉移機制介導聚合。在一些情況中， 聚合物自由基與任意上述化合物的C = S基團的反應導致形成穩(wěn)定化的自由基中間體。典 型地，這些穩(wěn)定化的自由基中間體不發(fā)生標準自由基聚合所典型的終止反應，而是再引入 能夠再引發(fā)或增殖單體的自由基，從而在該過程中重新形成C = S鍵。在大部分情況中，這 種添加到C = S鍵上、然后使隨后的自由基段裂的循環(huán)持續(xù)至全部單體耗盡或反應被淬滅。 一般而言，低濃度的活性自由基在任意具體時間均限制正常終止反應。在一些實施方案中，用于本文中提供的膠束裝配體(例如，膠束)中的聚合物(例 如，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)具有較低的多分散性指數(shù)(PDI)或在鏈長上的差異。按照任 意適合的方式測定多分散性指數(shù)(PDI)，例如通過將聚合物鏈的重均分子量除以其數(shù)均分 子量來測量。數(shù)均分子量是各鏈分子量的總和除以鏈數(shù)量。重均分子量與分子量的平方除 以該分子量的分子的數(shù)量成正比。由于重均分子量始終大于數(shù)均分子量，所以多分散性始 終大于或等于1。當數(shù)值越來越接近相同時，即當多分散性趨近于值1時，聚合物變成更加 接近單分散性，其中每一鏈具有實際上相同的數(shù)目的結構單元。趨近于1的多分散性值可 以使用活潑自由基聚合得到。測定多分散性的方法例如、但不限于尺寸排阻色譜法、動態(tài)光 散射、基質輔助的激光解吸/電離色譜法和電噴霧質量色譜法是本領域眾所周知的。在一 些實施方案中，本文提供的膠束裝配物(例如膠束)的嵌段共聚物(例如膜去穩(wěn)定化嵌段 共聚物)具有小于2. 0，或小于1. 8，或小于1. 6，或小于1. 5，或小于1. 4，或小于1. 3，或小 于1. 2的多分散性指數(shù)(PDI)。本文所述的聚合過程任選在任意適合的溶劑或其混合物中發(fā)生。適當?shù)娜軇┌?水、醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、丁醇)、四氫呋喃(THF) 二甲基亞砜(DMSO)、二甲 基甲酰胺(DMF)、丙酮、乙腈、六甲基磷酰胺、乙酸、甲酸、己烷、環(huán)己烷、苯、甲苯、二噁烷、二 氯甲烷、醚(例如乙醚)、氯仿和乙酸乙酯。在一個方面，溶劑包括水和水與水易溶混有機溶 劑例如DMF的混合物。在某些實施方案中，以任意合適的方式制備本文中使用的聚(DMAEMA)和其他聚 合物實體(例如，BMA, DMAEMA和PAA的共聚物或共聚物嵌段)。在一個實施方案中，通過 在RAFT CTA、ECT和自由基引發(fā)劑存在的情況下聚合DMAEMA來制備聚(DMAEMA)。在一些 實施方案中，將嵌段聚(DMAEMA)macr0CTA用于制備一系列二嵌段共聚物，其中第二嵌段包 含BMA、DMAEMA和PAA。在其他具體的實施方案中，反轉二嵌段聚合物上嵌段的方向，以使 在自我裝配后，聚合物的ω末端暴露在膠束或膠束裝配體的親水性節(jié)段上。在不同的實施 方案中，這通過任意適當?shù)姆绞桨ㄔS多合成方法來實現(xiàn)。例如，在一些實施方案中，本文 中描述的嵌段共聚物的合成始于形成芯的PAA/BMA/DMAEMA疏水性嵌段的制備，然后在第二合成步驟中通過將所得的PAA/BMA/DMAEMA macroCTA經(jīng)歷第二 RAFT聚合步驟來加入形 成殼的親水性帶電荷嵌段。變通方法包括還原PAA/BMA/DMAEMA macroCTA以形成硫氫基末 端，然后將預先形成的親水性帶電荷聚合物共價連接至形成的硫氫基。該合成方法提供了 在暴露于膠束表面的聚合物鏈的ω-末端上引入反應性基團的方法，從而提供了對膠束進 行化學綴合的可選擇的方法。在一些實施方案中，通過化學綴合由分別的聚合方法制備的幾種聚合物嵌段來合 成嵌段共聚物。在一些情況下，嵌段共聚物(例如膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)包含具有反應性基團 的單體，所述反應性基團可用于通過本領域內(nèi)已知的化學法例如“Click”化學法(關于 例如 “Click” 反應，參見恥，P. ；Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne Cycloaddition Reactivity andApplications. Aldrichim. Acta, 2007,40, 7-17)聚合后引入額外的功能性。在特定的情況下，本文中提供了下列結構的聚合物(例如，嵌段共聚物，包括膜去 穩(wěn)定化嵌段共聚物)α -[Ds-XJb-[Bx-Py-D丄-ω [結構 1]α - [Bx-Py-DJ a_ [Ds-Xj b_ ω [結構 2]其中x、y、z、s和t是各個單體單元D (DMAEMA)、Β (BMA)、Ρ (PAA)和親水性中性單體 (X)在聚合物嵌段中的摩爾百分比組成(通常為0-50%)，a和b是嵌段的分子量，[Ds-XJ是 親水性芯嵌段，α和ω表示聚合物的相對末端。在某些實施方案中，χ為50%、y為25%并 且ζ為25%。在某些實施方案中，χ為60%、y為20%以及ζ為20%。在某些實施方案中，χ 為70%、y為15%以及ζ為15%。在某些實施方案中，χ為50%、y為25%并且ζ為25% . 在某些實施方案中，χ為33%、y為33%并且ζ為33%。在某些實施方案中，χ為50%、y為 20%并且ζ為30%。在某些實施方案中，χ為20%、y為40%并且ζ為40%。在某些實施 方案中，χ為30%、y為40%并且ζ為30%。在一些實施方案中，本文中描述的膠束裝配體 包含約 2，OOODa 至約 30，OOODaj^J 5，OOODa 至約 20，OOODa 或約 7，OOODa 至約 15，OOODa 的 親水性嵌段。在具體的實施方案中，親水性嵌段為約7，000Da、8，000Da、9，OOODa、10, OOODa、 11，OOODa、12，OOODa、13，OOODa、14，OOODa或15，OOODa。在某些實施方案中，本文中描述的 膠束裝配體包含約2，OOODa至約50，OOODa、約10，OOODa至約50，OOODa、約15，OOODa至約 35，OOODa或約20，OOODa至約30，OOODa的疏水性芯嵌段。在一些具體的實施方案中，具有 12，500Da的親水性嵌段和25，OOODa的疏水性芯嵌段(1 2的長度比)的聚合物形成膠束 裝配體(例如，膠束)。在一些具體的實施方案中，具有10，OOODa的親水性嵌段和30，OOODa 的疏水性芯嵌段(1 3的長度比)的聚合物形成膠束裝配體(例如，膠束)。在一些具體 的實施方案中，具有10，OOODa的親水性嵌段和25，OOODa的疏水性芯嵌段(1 2. 5的長度 比)的聚合物形成約45nm(如通過動態(tài)光散射測量或電子顯微鏡檢查測定的)的膠束裝配 體(例如，膠束)。在一些具體的實施方案中，膠束為80或130nm(例如通過動態(tài)光散射測 量或電子顯微鏡檢查測定的)。通常，隨著形成膠束殼的[Ds-Xt]的分子量(或長度)相對 于[Bx-Py-DJ (形成芯的疏水性芯嵌段)增加，膠束的大小增加。在一些情況下，形成殼的聚 合物陽離子嵌段([Ds-Xt])的大小在提供與寡核苷酸藥物的有效復合物形成/電荷中和中 非常重要。例如，在某些情況下，對于約20個堿基對(即，40個陰離子電荷)的siRNA，陽離子嵌段具有適合于提供有效結合的長度，例如40個陽離子電荷。對于包含80個pKa值 為7. 4的DMAEMA單體(MW= 11，680)的殼嵌段，嵌段在pH 7. 4下包含40個陽離子電荷。 在一些情況下，穩(wěn)定的聚合物-siRNA綴合物(例如，復合物)通過相似數(shù)目的相反電荷之 間的靜電相互作用形成。在某些情況下，避免大量的過量正電荷有助于防止顯著的體外和 體內(nèi)毒性。在具體的實施方案中，嵌段共聚物的疏水性芯嵌段包含多個可帶陽離子電荷的種 類，例如，甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)。因此，在一些實施方案中，此類聚合物節(jié)段 的結構由結構3表示Q「[BMAx-PAAy-DMAEMAJ -Q2 [結構 3]其中上述命名中的％和％表示其他聚合物嵌段或末端官能團，并且其中x、y和ζ 是各個單體單元的摩爾百分比組成(通常，0-50%)。在某些情況下，各個單體單元發(fā)揮單 獨的和協(xié)同的功能。例如，包含陰離子性種類和疏水性種類的聚丙基丙烯酸(具有約6. 7的 PKa值)在高于約6. 7的pH下是親水性的，并且在低于約6. 7的pH下疏水性逐漸增加，其中 羧酸根開始質子化。在某些情況下，例如通過增加嵌段中占主導的疏水性單體單元BMA的 摩爾百分比來增加局部環(huán)境的疏水性，可以提高PAA的pKa，從而導致PAA在更高的pH下質 子化，即，包含PAA的嵌段在更高的pH下變得更加具有膜去穩(wěn)定性，從而在低于生理pH7. 4 的PH下對更小的酸性變化更敏感。在一些情況下，PAA的質子化導致疏水性的大大增加和 隨后構象變化，從而產(chǎn)生具有膜去穩(wěn)定化性質的形式。上述聚合物嵌段中的第三單體單元 是陽離子性種類，例如DMAEMA，其在一些情況下起著多個作用，包括但不限于下列作用。當 以等摩爾量與PAA陰離子性種類匹配時，其產(chǎn)生電荷中和和形成可促成膠束結構疏水性芯 的穩(wěn)定性的靜電相互作用的電位，其中上述結構中的A或％是親水性均聚物嵌段，例如聚 DMAEMA。在某些實施方案中，嵌段共聚物(例如，膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物)具有化學式I
權利要求
1.包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中 所述芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中所述殼包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的多個殼嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其包含在約中性pH下為陰離 子性的第一可帶電荷種類，芯嵌段是共聚物嵌段，并且其中殼嵌段在約中性PH下是親水性 的。
2.包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中 芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼 嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其包含在約中性pH下為陰離子性的第一 可帶電荷種類，該第一可帶電荷種類被疏水性隔離，并且其中殼嵌段在約中性PH下是親水 性的。
3.包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中 芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼 嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其包含在約中性pH下為陰離子性的第一 可帶電荷種類和在約中性PH下為陽離子性的第二可帶電荷種類，并且其中殼嵌段在約中 性PH下是親水性的。
4.包含多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的膠束裝配體，所述膠束裝配體包含芯和殼，其中 芯包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個芯嵌段，其中殼包含膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的多個殼 嵌段，其中芯嵌段是PH依賴性膜去穩(wěn)定化疏水物，其包含在約中性pH下為陰離子性的第一 可帶電荷種類，并且其中殼嵌段在約中性PH下是不依賴于溫度的親水物。
5.權利要求1至4中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物在約6.5 或更低，約5. 0至約6. 5，或約6. 2或更低的pH下是膜去穩(wěn)定化的。
6.權利要求1至5中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物是二嵌段 共聚物。
7.權利要求1至6中任一項的膠束裝配體，其中所述所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物具有 小于2. 0、或小于1. 8、或小于1. 6、或小于1. 5、或小于1. 4、或小于1. 3、或小于1. 2的多分散性指數(shù)。
8.權利要求1至7中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含第三 嵌段。
9.權利要求1至8中任一項的膠束裝配體，其中所述殼包含聚乙二醇基團。
10.權利要求1至5中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段是或包含聚乙二醇。
11.權利要求10的膠束裝配體，其中所述殼嵌段包含多個殼單體單元，并且其中所述 多個殼單體單元中的一個或更多個被PEG基團取代或官能化。
12.權利要求1至11中任一項的膠束裝配體，其中在約6.2至7. 5的pH范圍內(nèi)所述膠 束裝配體的形式是膠束、假膠束或膠束樣結構。
13.權利要求12的膠束裝配體，其中在約6.2至7. 5的pH范圍內(nèi)所述膠束裝配體的形 式是膠束。
14.權利要求1至13中任一項的膠束裝配體，其中一個或更多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚 物的至少一個嵌段是梯度嵌段。
15.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體包含至少一種研究 試齊LU
16.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體包含至少一種診斷劑。
17.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體包含至少一種治療劑。
18.權利要求17的膠束裝配體，其中所述治療劑位于膠束裝配體的殼內(nèi)。
19.權利要求18的膠束裝配體，其中所述治療劑通過共價鍵、非共價相互作用或其組 合而連接至膠束裝配體中的至少一個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段。
20.權利要求19的膠束裝配體，其中在膠束裝配體的芯部分內(nèi)有另外的治療劑。
21.權利要求17的膠束裝配體，其中各膠束裝配體包含平均1至5個、5至250、5至 1000個、250至1000個、至少2個、至少5個、至少10個、至少20個或至少50個治療劑。
22.權利要求17的膠束裝配體，其中所述治療劑包含至少一個核苷酸、至少一個碳水 化合物或至少一個氨基酸。
23.權利要求17的膠束裝配體，其中所述治療劑是多核苷酸、寡核苷酸、基因表達調節(jié) 劑、敲低劑、siRNA, RNAi試劑、切丁酶底物、miRNA、shRNA、反義寡核苷酸或適體。
24.權利要求17的膠束裝配體，其中所述治療劑是蛋白質、肽、酶、抗體或抗體片段。
25.權利要求17的膠束裝配體，其中所述治療劑是具有大于約500道爾頓的分子量的 碳水化合物或小分子。
26.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中 的一個或更多個連接至治療劑。
27.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中 的一個或更多個連接至第一治療劑，并且其中所述多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中的一個或 更多個被連接至第二治療劑。
28.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中所述多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物中 的一個或更多個被連接至第一治療劑，并且其中一個或更多個另外的聚合物連接至第二治 療劑。
29.權利要求1至14中任一項的膠束裝配體，其中一個或多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的殼嵌段包含至少一個核苷酸、至少一個碳水化合物或至少一個氨基酸。
30.權利要求四的膠束裝配體，其中所述至少一個核苷酸是至少一個核糖核苷酸。
31.權利要求30的膠束裝配體，其中所述至少一個核苷酸是基因表達調節(jié)劑、敲低劑、 siRNA, RNAi試劑、切丁酶底物、miRNA、shRNA、反義寡核苷酸或適體。
32.權利要求31的膠束裝配體，其中所述敲低劑是siRNA、反義寡核苷酸、miRNA或 ShRNA0
33.權利要求1至32中任一項的的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體包含至少一個靶 向部分。
34.權利要求1至32中任一項的膠束裝配體，其中一個或多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的殼嵌段是(a)帶電荷的或可帶電荷的；或(b)不帶電荷的。
35.權利要求34的膠束裝配體，其中一個或多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的殼嵌段是(a)在約中性pH下為聚陽離子性的；(b)在約中性pH下為聚陰離子性的；(c)在約中性PH下不帶電荷的；或(d)在約中性pH下是兩性離子性的。
36.權利要求35的膠束裝配體，其中所述殼嵌段包含可帶陽離子電荷的和非陽離子性 的單體單元。
37.權利要求1至36中任一項的膠束裝配體，其中一個或多個膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物 的殼嵌段是均聚物嵌段。
38.權利要求37的膠束裝配體，其中所述殼嵌段包含N，N-二(C1-C6)烷基-氨基 (C1-C6)烷基-乙基丙烯酸酯單體單元、N, N- 二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-甲基丙 烯酸酯單體單元、N，N-二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-丙烯酸酯單體單元或其組合。
39.權利要求1至38中任一項的膠束裝配體，其中所述芯包含至少一個第一可帶電荷 種類和至少一個第二可帶電荷種類，其中所述第一可帶電荷種類可帶電荷或帶電荷成為陰 離子性種類，其中所述第二可帶電荷種類可帶電荷或帶電荷成為陽離子性種類，并且其中 存在于芯中的第一可帶電荷種類對第二可帶電荷種類的比率為約1 4至約4 1。
40.權利要求1至39的膠束裝配體，其中所述芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團 的比率在約中性PH下為約1 4至約4 1。
41.權利要求40的膠束裝配體，其中所述芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團的比 率在約中性PH下為約1 2至約2 1。
42.權利要求41的膠束裝配體，其中所述芯中帶正電荷的基團對帶負電荷的基團的比 率在約中性PH下為約1 1.1至約1.1 1。
43.權利要求42的膠束裝配體，其中第一可帶電荷種類存在于第一單體單元上，并且 第二可帶電荷種類存在于第二單體單元上。
44.權利要求43的膠束裝配體，其中存在于芯中的第一單體單元的數(shù)目對第二單體單 元的數(shù)目的比率為約1 4至約4 1。
45.權利要求1至44中任一項的膠束裝配體，其中所述芯嵌段包含至少一個第一可帶 電荷的單體單元和至少一個第二可帶電荷的單體單元。
46.權利要求45的膠束裝配體，其中第一可帶電荷的單體單元是布郎斯臺德酸。
47.權利要求45的膠束裝配體，其中至少80%的第一可帶電荷的單體單元在約7.4的 PH下通過失去H+而帶電荷成為陰離子性種類。
48.權利要求45的膠束裝配體，其中低于50%的第一可帶電荷的單體單元在約6的pH 下帶電荷成為陰離子性種類。
49.權利要求45的膠束裝配體，其中第一可帶電荷的單體單元是(C2-C8)烷基丙烯酸。
50.權利要求45的膠束裝配體，其中第二可帶電荷的單體單元是布朗斯臺德堿。
51.權利要求45的膠束裝配體，其中至少40%的第二可帶電荷的單體單元在約7.4的 PH下通過獲得H+而帶電荷成為陽離子性種類。
52.權利要求51的膠束裝配體，其中第二可帶電荷的單體單元是N，N-二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-乙基丙烯酸酯、N, N- 二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-甲基丙 烯酸酯或N，N- 二(C1-C6)烷基-氨基(C1-C6)烷基-丙烯酸酯。
53.權利要求45的膠束裝配體，其中所述芯嵌段還包含至少一個不可帶電荷的單體單元。
54.權利要求53的膠束裝配體，其中所述不可帶電荷的單體單元是(C2-C8)烷基-乙 基丙烯酸酯、(C2-C8)烷基-甲基丙烯酸酯或(C2-C8)烷基-丙烯酸酯。
55.權利要求1至M中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體具有約IOnm至約 200nm的平均流體動力學直徑。
56.權利要求65的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體具有約20nm至約IOOnm的平均有 效直徑。
57.權利要求56的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體具有約30nm至約SOnm的平均有效直徑。
58.權利要求1至57中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體是自我裝配的。
59.權利要求1至58中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約6.5至約7. 5 范圍內(nèi)的PH下于含水介質中自我裝配。
60.權利要求1至59中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約5.0至約7. 4 范圍內(nèi)的PH下在含水介質中是膜去穩(wěn)定性的。
61.權利要求1至60中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約pH5下比在約 PH 7下包含更多的凈陽離子電荷。
62.權利要求1至61中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體的電荷的絕對值在 約pH 5下比在約pH 7下更大。
63.權利要求1至62中任一項的膠束裝配體，其中所述芯嵌段的數(shù)均分子量對殼嵌段 的數(shù)均分子量的比率為約1 1至約5 1。
64.權利要求63的膠束裝配體，其中所述芯嵌段的數(shù)均分子量對殼嵌段的數(shù)均分子量 的比率為約2 1。
65.權利要求1至64中任一項的膠束裝配體，其中所述芯嵌段具有約10，000道爾頓至 約100，000道爾頓的數(shù)均分子量(Mn)。
66.權利要求1至65中任一項的膠束裝配體，其中所述殼嵌段具有約5，000道爾頓至 約20，000道爾頓的數(shù)均分子量(Mn)。
67.權利要求1至66中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約7.4的pH下是 穩(wěn)定的。
68.權利要求66的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約pH5. 8下明顯不如在約pH 7. 4下穩(wěn)定。
69.權利要求1至68中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約10μ g/ml或更 高的濃度下是穩(wěn)定的。
70.權利要求1至69中任一項的膠束裝配體，其中所述膠束裝配體在約100μ g/mL或 更高的濃度下是穩(wěn)定的。
71.權利要求1至70中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5 個以上、20個以上、50個以上或100個以上第一可帶電荷種類，其中各第一可帶電荷種類帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類。
72.權利要求1至71中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物包含5 個以上、20個以上、50個以上或100個以上第二可帶電荷種類，其中各第二可帶電荷種類帶 電荷或可帶電荷成為陽離子性種類。
73.權利要求1至72中任一項的膠束裝配體，其中所述膜去穩(wěn)定化嵌段共聚物的芯嵌 段包含5個以上、20個以上、50個以上或100個以上帶電荷或可帶電荷成為陰離子性種類 的可帶電荷種類。
74.權利要求1至73中任一項的膠束裝配體，其中所述殼嵌段的電荷狀態(tài)在約中性pH 下和在約內(nèi)體PH下基本上是相同的。
75.包含多個嵌段共聚物的膠束裝配體，所述嵌段共聚物包含(a)包含在正常生理pH下為親水性的第一結構單元的第一嵌段；和(b)第二嵌段，其包含(i)在正常生理PH下是陽離子性的并且可與第一結構單元相同或不同的第二結構單元；( )在正常生理PH下為陰離子性的第三結構單元；(iii)增強疏水性的部分，所述增強疏水性的部分共價地連接至第二嵌段的第二結構 單元、第三結構單元、第四結構單元，或其組合。
76.權利要求75的膠束裝配體，其中所述第二嵌段在總電荷上基本上是中性的。
77.包含式I的多個嵌段共聚物的膠束裝配體
全文摘要
本文中提供了包含多個共聚物的膠束裝配體。在某些情況下，本文中提供的膠束裝配體是pH敏感型顆粒。
文檔編號C12N15/11GK102066444SQ200980123440
公開日2011年5月18日 申請日期2009年5月13日 優(yōu)先權日2008年5月13日
發(fā)明者A·J·肯沃汀, A·S·霍夫曼, A·帕沙爾, A·高爾, C·L·杜瓦爾, C·迪亞布, D·本諾特, M·普里福, P·S·司泰同, P·德, P·約翰遜, R·歐沃瑞爾 申請人:華盛頓大學, 菲澤爾克斯公司