專利名稱：發(fā)酵乳制品中雙歧桿菌生長的改善的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過所選擇的細菌菌株改善發(fā)酵乳制品中雙歧桿菌的生長。
背景技術(shù)：
乳制品，特別是酸乳類制品形成了目前益生菌制品市場的最大部分。乳制品是用 于遞送有益益生細菌諸如雙歧桿菌并將它們引入到胃腸道內(nèi)的優(yōu)良載體雙歧桿菌BB-12 是可從丹麥H0rsholm的Chr. Hansen A/S得到的眾所周知的 益生菌。以BB-12 為例，可獲得的臨床證據(jù)表明需要至少IO9-IOiciCfu活益生細菌的日劑 量(cfu/CFU是細胞形成單位的縮寫)。因此，希望具有例如IO8Cfu活益生細菌細胞/g發(fā) 酵乳制品(例如發(fā)酵乳酸乳制品)的高水平。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是，提供在用于制造發(fā)酵乳制品(例如酸乳)的發(fā)酵過程中 改善乳中雙歧桿菌菌群生長，以便在最終制品中得到高雙歧桿菌細胞數(shù)的方法。解決方案是基于本發(fā)明人的驚奇發(fā)現(xiàn)，即特定的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株在乳發(fā)酵過程中明顯改善雙歧桿菌的生長。通過使用這些菌株中的一種，所 得到的發(fā)酵乳制品包含高于108cfu/g的雙歧桿菌(發(fā)酵后不久)。因此，為了得到具有例 如108cfu/g雙歧桿菌的制品，在發(fā)酵終止后無需加入額外的雙歧桿菌。發(fā)明人測試了一 系列不同的乳酸乳球菌菌株，并且發(fā)現(xiàn)鑒定為乳酸乳球菌CHCC3912和CHCC4462并分別以 DSM21406和DSM21408保藏的菌株在乳發(fā)酵過程中明顯改善雙歧桿菌的生長。事實上，乳酸 乳球菌的一些其它菌株負面地影響雙歧桿菌的生長。此外，發(fā)明人觀察到，嗜熱鏈球菌(Sti^ptococcusthermophilus) (CHCC7018)菌 株具有獨特的特性，這是因為該菌株也改善雙歧桿菌的生長。因此，本發(fā)明的一個方面涉及用于制備發(fā)酵乳制品，諸如包含至少IO8Cfu雙歧桿 菌/g發(fā)酵乳制品的制品的方法，其中所述方法包括i)將乳接種包含至少一種乳酸乳球菌、至少一種嗜熱鏈球菌菌株、至少一種 雙歧桿菌菌株和任選至少一種保加利亞乳桿菌(LactcAacillus bulgaricus)菌株的 培養(yǎng)物(諸如酸乳培養(yǎng)物)，其中所述乳酸乳球菌菌株之一優(yōu)選選自乳酸乳球菌菌株 CHCC3912 (DSM21406)、CHCC3912 突變體和 CHCC3912 變異體；或 CHCC4462 (DSM21407)、 CHCC4462突變體和CHCC4462變異體；ii)在適宜條件下將乳發(fā)酵；和iii)任選地將適宜量的發(fā)酵乳制品包裝在適宜包裝中。感興趣的實施方案涉及用 于制備包含至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵乳制品的發(fā)酵乳制品的方法，其中所述方法包括i)將乳接種包含至少一種保加利亞乳桿菌菌株、至少一種嗜熱鏈球菌菌株、至少 一種乳酸乳球菌菌株和至少一種雙歧桿菌菌株的酸乳培養(yǎng)物，其中所述乳酸乳球菌菌株之 一是乳酸乳球菌菌株 CHCC3912(DSM21406)或 CHCC4462 (DSM21407)之一；ii)在適宜條件下將乳發(fā)酵以得到具有至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵乳的發(fā)酵乳制品；和iii)將適宜量的發(fā)酵乳制品包裝在適宜包裝中。而且，本發(fā)明還涉及登錄號為DSM21408的嗜熱鏈球菌菌株CHCC7018及其突變體/ 變異體，并且涉及包含本發(fā)明菌株(任選與另一菌株諸如雙歧桿菌菌株(如BB-12 )在 一起)的培養(yǎng)物(諸如起子培養(yǎng)物)。感興趣的組合物包含i)從IO5至1012cfu/g BB-12 和 ii)從 IO5 至 1012cfu/g CHCC7018。發(fā)明詳述在第一個方面中，本發(fā)明涉及用于制備發(fā)酵乳制品的方法，其包括i)將乳接種a)屬于雙歧桿菌菌株的細菌，和b)屬于選自下列菌株的細菌乳酸乳球菌菌株，優(yōu)選增強雙歧桿菌菌株生長的菌 株,諸如CHCC4462 (DSM21407)、CHCC3912 (DSM21406)，嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選增強雙歧桿菌 菌株生長的菌株，諸如CHCC7018，和這些菌株中任何菌株的突變體或變異體；ii)將乳發(fā)酵；iii)任選地向發(fā)酵乳中加入另外的微生物和/或添加劑；和iv)任選地包裝發(fā)酵乳制品。在當(dāng)前優(yōu)選的實施方案中，步驟i)還包括以屬于選 自保加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌和嗜酸乳桿菌的菌種的細菌接種乳。本發(fā)明方法的實施方案是這樣一種方法，其中步驟i)包括將乳接種包含下列的 培養(yǎng)物a)雙歧桿菌菌株；b)保加利亞乳桿菌菌株；c)選自 CHCC4462、CHCC4462 突變體、CHCC4462 變異體、CHCC3912、CHCC3912 突變體 和CHCC3912變異體的乳酸乳球菌菌株；和/或選自CHCC7018、CHCC7018突變體和CHCC7018
變異體的嗜熱鏈球菌菌株。另一實施方案涉及用于制備發(fā)酵乳制品(諸如包含至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵 乳制品的制品)的方法，其中所述方法包括i)將乳以包含至少一種乳酸乳球菌菌株和至少一種雙歧桿菌菌株和任選至少一 種嗜熱鏈球菌菌株和至少一種保加利亞乳桿菌菌株的培養(yǎng)物(諸如酸乳培養(yǎng)物)接種， 其中所述乳酸乳球菌菌株之一選自登錄號為DSM21406的乳酸乳球菌菌株CHCC3912、 CHCC3912突變體和CHCC3912變異體，或者登錄號為DSM21407的CHCC4462、CHCC4462突變 體和CHCC4462變異體；ii)在適宜條件下將乳發(fā)酵；和iii)任選地將適宜量的發(fā)酵乳制品包裝在適宜包裝中。再一實施方案涉及用于制備包含至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵乳制品的發(fā)酵乳制 品的方法，其中所述方法包括i)將乳以包含至少一種保加利亞乳桿菌菌株、至少一種嗜熱鏈球菌菌株、至少一 種乳酸乳球菌菌株和至少一種雙歧桿菌菌株的酸乳培養(yǎng)物接種，其中所述乳酸乳球菌菌株 之一是登錄號為DSM21406的乳酸乳球菌菌株CHCC3912或登錄號為DSM21407的乳酸乳球菌菌株CHCC4462 ；ii)在適宜條件下將乳發(fā)酵以得到具有至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵乳的發(fā)酵乳 制品；禾口iii)將適宜量的發(fā)酵乳制品包裝在適宜包裝中。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法還包括以另外的嗜熱鏈球菌菌株(優(yōu)選增稠菌 株(texturizing strain)，諸如選自 ST-B0DY-3 (Chr. Hansen A/S, Ifersholm,丹麥)和 ST8833(DSM17876)的菌株)接種乳。雙歧桿菌菌株優(yōu)選屬于選自青春雙岐桿菌(Bifidobacteriuma adolescentis) > 動物雙歧桿菌(Bifidobacterium animal is)> 星狀雙歧桿菌(Bifidobacterium asteroids)、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacterium catenulatum)、嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacterium infantis)、IL 雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)禾口 假鏈狀雙歧桿菌(Bifidobacterium pseudocatenulatum)的種，并且當(dāng) 前優(yōu)選地，雙歧桿菌菌株是動物雙歧桿菌乳酸亞種(Bifidobacterium animal is subspecies lactis)菌株。菌株實例是選自登錄號為 DSM15954 的 CHCC5445 (BB-12 )、 CHCC7158(HN019，保藏號為DSM17^0)、作為ATCC 27536保藏的雙歧桿菌菌株、嬰兒雙歧桿 菌菌株 Bbi99(DSM 13692)、BB-420、BI-04、CHCC2037、LAFTIB-94、DN 173010、STB-2938、 R0071、R0175和BB_46 (DSM15950和這些菌株的任何菌株的突變體/變異體的菌株。在有用的實施方案中，所得到的發(fā)酵乳制品在發(fā)酵結(jié)束時包含至少IO8Cfu雙歧桿 菌/g發(fā)酵乳制品和/或發(fā)酵乳制品在儲存于+6°C 28天后包含至少108cfu/g雙歧桿菌。根據(jù)本方法的重要實施方案，步驟i)中的乳以IO5至3xl07cfU/g雙歧桿菌接種和 /或以IO4至3.hl06CfU/g嗜熱鏈球菌或乳酸乳球菌細菌接種?？梢砸远鄠€細菌種同時接 種乳。這可通過以包含兩種細菌種的起子培養(yǎng)物接種乳方便地實現(xiàn)。在又一實施方案中，乳還以至少一種細菌菌株，諸如乳酸乳球菌乳酸亞種 (Lactococcus lactis subs, lactis)菌株(例如選自乳酸乳球菌乳酸亞種DN2M ；乳酸乳 球菌乳酸亞種DN223 ；和這些菌株中任何菌株的突變體或變異體)接種。當(dāng)前優(yōu)選的是，該 額外的輔助生物體是選自乳酸乳球菌乳酸亞種DN224、乳酸乳球菌乳酸亞種DN223的乳酸 乳球菌乳酸亞種菌株。應(yīng)當(dāng)理解，乳可以分別地/相繼地以每一細菌種接種，或者同時以兩種或更多種 細菌種接種。目前優(yōu)選的是乳以所有細菌種同時接種。這通過以包含細菌種的起子培養(yǎng)物 接種乳方便地實現(xiàn)。通過本發(fā)明方法得到的制品可以定義為“酸乳”，即當(dāng)乳以保加利亞乳桿菌菌株和 嗜熱鏈球菌菌株接種時所獲者。發(fā)酵乳制品(諸如酸乳)方便地包裝在密封包裝中，包裝中包含10_5000ml的制 品，諸如從25至3000ml或從50至1000ml。示例性的包裝可包含10-300ml、20-200ml或 30-100ml。在第二個方面中，本發(fā)明涉及包含下列的培養(yǎng)物a)屬于雙歧桿菌菌株的細菌，諸如CHCC5445 (BB-12 ),和b)屬于選自下列菌株的細菌乳酸乳球菌菌株，優(yōu)選增強雙歧桿菌菌株生長的菌株，諸如CHCC4462、CHCC3912和嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選增強雙歧桿菌菌株生長的菌株(諸如 CHCC7018)，或者這些菌株中任何菌株的突變體或變異體。本發(fā)明還涉及包含從IO5 至 1012cfu/g BB-12 和從 IO5 至 1012cfu/gCHCC7018 和 /或從IO5至1012cfu/g乳酸乳球菌CHCC3912或CHCC4462的培養(yǎng)物(諸如起子培養(yǎng)物)。 培養(yǎng)物可進一步包含從IO5至1012cfu/g的DN2M或DN223。本發(fā)明的進一步的方面涉及通過本發(fā)明方法可得到的發(fā)酵乳制品，特別是包含選 自CHCC7018(DSM21408) ；CHCC7018突變體；和CHCC7018變異體的嗜熱鏈球菌菌株的發(fā)酵 乳制品。目前優(yōu)選的是，本發(fā)明的發(fā)酵乳制品包含IO3至101(lCfU/g的嗜熱鏈球菌菌株。本發(fā)明還涉及包含屬于選自下列菌株的細菌的發(fā)酵乳制品CHCC4462和 CHCC3912和這些菌株中任何菌株的突變體或變異體。發(fā)酵乳制品優(yōu)選包含103、優(yōu)選至少 105cfu/g的細菌菌株。本發(fā)明的發(fā)酵乳制品可進一步包含從IO3至101(lCfU/g的雙歧桿菌和/或從IO3至 1010cfu/g的乳酸乳球菌菌株(諸如CHCC3912、CHCC4462、DN2M或DN223)。在目前優(yōu)選的 實施方案中，發(fā)酵乳制品包含至少105、優(yōu)選至少107cfu/g的雙歧桿菌和/或至少105、優(yōu)選 至少107cfu/g的乳酸乳球菌乳酸亞種菌株。在進一步的方面中，本發(fā)明涉及選自CHCC7018、CHCC7018突變體、CHCC7018變異 體、CHCC4462、CHCC4462 突變體、CHCC4462 變異體、CHCC3912、CHCC3912 突變體和 CHCC3912 變異體的細菌菌株。優(yōu)選的是具有母本菌株特性中的一個或多個(優(yōu)選全部)特性的突變 體/變異體菌株，例如能夠促進雙歧桿菌菌株(特別是BB-12 )生長的突變體/變異體 菌株。菌株可以是分離的形式，例如基本上無其它細菌菌株。在優(yōu)選的實施方案中，雙歧桿菌是至少一種選自青春雙岐桿菌、動物雙歧桿菌、星 狀雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、長雙 歧桿菌和假鏈狀雙歧桿菌的雙歧桿菌。還可以使用包含兩種或更多種所列這些菌株的混合 物。在所述方法的優(yōu)選實施方案中，雙歧桿菌菌株是動物雙歧桿菌乳酸亞種菌株。 具體而言，其中菌株是以登錄號DSM159M保藏的動物雙歧桿菌乳酸亞種菌株BB-12 (CHCC5445)。另一優(yōu)選動物雙歧桿菌乳酸亞種菌株是菌株HNO19 (也稱作DR-10 或H0WARU )。 該菌株是從于2000年在臺灣銷售的標簽為!^rnleafDR-IObifidus的商業(yè)可得到的嬰兒配 方制品中分離的。其在Hansen培養(yǎng)物保藏中心(Hansen Culture Collection)的登錄號 為CHCC7158并且以登錄號DSM17280保藏在DSMZ中。通過根據(jù)本領(lǐng)域的標準方法在瓊脂平板上計數(shù)菌落來定量系列稀釋發(fā)酵制品中 的菌落形成單位(Cfu)數(shù)，實現(xiàn)對雙歧桿菌Cfu/g細胞數(shù)的測量。適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)如 下給出培養(yǎng)基MRS(deMan 等· I960. J. Appl. Bacteriol. 23 130)無酸+1%雙氯西林(SIGMAD-9Ol6)+1 %半胱氨酸(MERCK n° ^39)；禾口培養(yǎng)在無氧條件下于37°C培養(yǎng)3天。如本文所討論，CHCC3912或CHCC4462 (和/或CHCC7018)的使用提供了在發(fā)酵過 程中直接從雙歧桿菌的生長得到大于108cfu/g雙歧桿菌的可能性。因此，第一個方面的步驟ii)的至少108cfu/g雙歧桿菌涉及與發(fā)酵后直接得到的cfu/g雙歧桿菌。如在工作實施例中所示，當(dāng)雙歧桿菌BB-12 與乳酸乳球菌菌株CHCC3912或 CHCC4462和/或嗜熱鏈球菌菌株CHCC7018 —起生長時具有良好的存活率。因此，在優(yōu)選的實施方案中，發(fā)酵乳制品在儲存于+6°C 1天后具有至少IO8Cfu/ g雙歧桿菌，更優(yōu)選在儲存于+6°C 7天后至少108cfu/g雙歧桿菌，甚至更優(yōu)選在儲存于 +60C 14天后至少108cfu/g雙歧桿菌，甚至更優(yōu)選在儲存于+6°C 21天后至少108cfu/g雙 歧桿菌并且最優(yōu)選在儲存于+6°C 28天后至少108cfu/g雙歧桿菌。技術(shù)人員知道與具有本文相關(guān)細菌的發(fā)酵乳相關(guān)的適宜發(fā)酵條件。適宜條件是例如將乳以細菌接種并在38°C至43°C下，最佳溫度為40°C下發(fā)酵，直 到達到pH 4. 4至4. 6 (大致在約8小時后)。將乳冷卻至+6°C終止本文相關(guān)細菌(諸如雙歧桿菌)的發(fā)酵和生長。在本文所述的優(yōu)選實施方案中，改善的生長通過接種從IO5至3xl07cfu/g的雙 歧桿菌；并且通過以從IO4至3. 5xl06cfu/g的濃度同時接種乳酸乳球菌菌株CHCC3912或 CHCC4462和/或嗜熱鏈球菌菌株CHCC7018得到。如果需要的話，人們可以在感興趣的一些點(例如發(fā)酵完成之后)加入額外的細 菌(例如額外的雙歧桿菌)。如技術(shù)人員所已知，多種不同的發(fā)酵乳制品可以通過將乳發(fā)酵得到，并且可以是 液體或固體形式。在優(yōu)選的實施方案中，發(fā)酵乳制品是選自酸乳、飲用酸乳、攪拌酸乳、凝固 酸乳和酸乳類飲料、苦乳、酪乳、酸奶油、鮮乳酪和乳酪的制品。如本文所述的包含至少108cfu/g雙歧桿菌的發(fā)酵乳還可以用作制品添加劑，以便 例如加入到其它可食用食物制品中，諸如凝乳酪、巧克力、果汁、肉制品和嬰幼兒干奶粉制
P
ΡΠ O在本文中，保加利亞乳桿菌可以是任何適宜(例如商業(yè)可得到的)保加利亞乳桿 菌菌株。如技術(shù)人員所已知，它可以以足夠的量接種以在最終發(fā)酵乳制品中得到足夠量的 保加利亞乳桿菌。在本發(fā)明方法中，可以加入其它感興趣的細菌，諸如輔助細菌。此類細菌可以在發(fā) 酵過程中或者發(fā)酵結(jié)束之后加入。此類額外細菌的實例包括選自乳球菌屬(Lactococcus) 和乳桿菌屬(LactcAacillus)的細菌。優(yōu)選的乳桿菌屬是嗜酸乳桿菌菌株LA-5 (可從 丹麥的 Chr. Hansen A/S 商業(yè)性獲得)。如在 W098/54337 (Chr. Hansen,作為 EP0985043B1 授權(quán))中所描述，可以在發(fā)酵過程中加入其丙酮酸代謝具有缺陷的乳酸輔助細菌以得到許 多改善，包括改善細菌的儲存期。其丙酮酸代謝具有缺陷的菌株DN224(保藏為DSM 11037) 和DN223(保藏為DSM 11036)被描述為適宜細菌輔助生物實例。因此，在本發(fā)明的實施方案 中，還可向乳中加入其丙酮酸代謝具有缺陷的乳酸細菌輔助生物以如本文所述進行發(fā)酵。 在優(yōu)選的實施方案中，乳酸細菌輔助生物是選自下列的細菌以登錄號DSM 11036保藏的 乳酸乳球菌乳酸亞種菌株DN223和乳酸乳球菌乳酸亞種菌株DN224(以DSM 11037保藏)。 最優(yōu)選地，乳酸細菌輔助生物是DN2M。一個實施方案涉及組合物，諸如培養(yǎng)物，包含i)從 IO5 至 1012cfu/g BB-12 3ii)從 IO5 至 1012cfu/g CHCC7018,
iii)從 IO5 至 1012cfu/g DN224。保藏的微生物體[專家方案]菌株乳酸乳球菌CHCC3912、乳酸乳球菌CHCC4462、乳酸乳球菌CHC(^907和嗜熱 1]! CHCC7018 Β ^ DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Inhoffenstr. 7B, D_381MBraunschweig，德國)中，登錄號分別為 DSM21406、DSM21407、DSM21421 禾口 DSM 21408，保藏日期為 2008 年 4 月 23 日。已經(jīng)按照國 際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約進行了保藏。所有申請人要求所保藏微生物的樣品僅對于經(jīng)申請人認可的專家可以得到。定義在本文中，酸乳起子培養(yǎng)物是包含至少一種保加利亞乳桿菌菌株和至少一種嗜熱 鏈球菌菌株的細菌培養(yǎng)物。依照本說明書，酸乳是通過以保加利亞乳桿菌菌株和嗜熱鏈球 菌菌株接種和發(fā)酵乳可得到的發(fā)酵乳制品。在本文中，術(shù)語“乳”包括哺乳動物或植物的乳。乳實例為母牛乳(牛乳)、駱駝乳、 水牛乳、山羊乳、綿羊乳和大豆乳。任選地，乳被酸化，例如通過加入酸(諸如檸檬酸、醋酸 或乳酸)，或者與例如水混合。乳可以是未加工過的或者例如通過過濾、滅菌、巴斯德滅菌、 均勻化等加工過的，或者其可以是重構(gòu)干乳。根據(jù)本發(fā)明，“牛乳”的重要實例是巴斯德滅菌 的母牛乳。應(yīng)當(dāng)理解，乳可以在以細菌接種之前、之中和/或之后被酸化、混合或加工。在本文中，術(shù)語在適宜包裝中“包裝”(適宜量)發(fā)酵乳涉及發(fā)酵乳的最終包裝以 得到可以由例如人或一群人攝入的制品。因此，適宜包裝可以是瓶或類似物，并且適宜量可 以是例如IOml至5000ml，但是目前優(yōu)選的是包裝中的量是從50ml至1000ml。在本文中，術(shù)語“突變體”應(yīng)當(dāng)理解為通過例如遺傳工程、輻射和/或化學(xué)處理手 段從本發(fā)明菌株(或本發(fā)明中使用的菌株)衍生的菌株。優(yōu)選地，突變體是功能等效突變 體。本發(fā)明菌株的優(yōu)選突變體是增加乳介質(zhì)中雙歧桿菌細胞生長的突變體，例如具有與母 本菌株基本相同或改善的雙歧桿菌生長促進特性的突變體。此種突變體是本發(fā)明的一部 分。特別地，術(shù)語“突變體”指通過使菌株(其為本發(fā)明的菌株)經(jīng)受任何常規(guī)使用的誘變 處理，包括用化學(xué)誘變劑如甲基磺酸乙酯(EMQ或N-甲基-N'-硝基-N-硝基胍(NTG)、 紫外線處理得到的菌株，或指自發(fā)產(chǎn)生的突變體。突變體可已經(jīng)經(jīng)受了數(shù)次誘變處理(單 一處理應(yīng)理解為一個誘變步驟后接篩選/選擇步驟)，但是目前優(yōu)選的是開展不超過20次、 或者不超過10次、或者不超過5次處理。在目前優(yōu)選的突變體中，與母本菌株相比，細菌基 因組中小于5%、或者小于或者甚至小于0. 的核苷酸已經(jīng)被另一核苷酸替換或者缺 失。在本文中，術(shù)語“變異體”應(yīng)該理解為與母本菌株功能等效的菌株，諸如增加乳介 質(zhì)中雙歧桿菌細胞生長的菌株。變異體應(yīng)當(dāng)屬于與母本菌株相同的種。例如，CHCC7018變 異體應(yīng)當(dāng)理解為與CHCC7018功能等效的嗜熱鏈球菌菌株，諸如增加乳介質(zhì)中雙歧桿菌細 胞生長的菌株，例如具有與母本菌株相同或基本相同或改善的雙歧桿菌生長促進特性的菌 株，并且CHCC3912變異體應(yīng)當(dāng)理解為與CHCC3912功能等效的乳酸乳球菌菌株，例如具有與 母本菌株相同或基本相同或改善的雙歧桿菌生長促進特性的菌株。可以使用適當(dāng)?shù)暮Y選技 術(shù)鑒定的此類變異體是本發(fā)明的一部分。術(shù)語“一 (a) ”和“一(an) ”和“該(the) ”和相似指代在描述本發(fā)明的上下文中(特別是后附權(quán)利要求書的上下文中)的使用應(yīng)當(dāng)解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非本文另外 指出或者上下文明顯矛盾。術(shù)語“包含”、“具有”、“包括”和“含有”應(yīng)當(dāng)理解為開放式術(shù)語 (即，意思是“包括，但不限于”)，除非另外指出。除非本文另外指出，本文中對數(shù)值范圍的 描述僅旨在用作分別提及處于該范圍內(nèi)的各個單獨數(shù)值的速記法，并且各個單獨數(shù)值整合 入說明書中，如同它們在本文中分別描述一樣。除非本文另外指出或者除非通過上下文明 顯矛盾，本文所描述的所有方法以任何適宜順序開展。本文所提供的任何和全部實例或示 例性措辭(如，“例如”)的使用僅旨在更好地闡述本發(fā)明并且不限制本發(fā)明的范圍，除非 另外聲明。說明書中的文字不能解釋為表示著任何非要求保護的元素作為實施本發(fā)明的要
ο
實施例實施例1 使用多種乳酸乳球菌菌株的BB-12 生長改善乳介質(zhì)(9. 5%重構(gòu)的脫脂奶粉，加熱至99°C達30秒)以0. 01% BB-12 F-DVS 培養(yǎng)物和0. 01%乳球菌屬F-DVS培養(yǎng)物接種，導(dǎo)致起始BB-12 濃度為IxlO7CFUt5之后，將 乳于40°C下發(fā)酵16小時并于8°C下儲存。分別在1、14、觀和45天的儲存后開展BB-12 細胞計數(shù)分析。表 權(quán)利要求
1.用于制備發(fā)酵乳制品的方法，其包括i)將乳接種下列a)屬于雙歧桿菌菌株的細菌，和b)屬于選自下列菌株的細菌增加所述雙歧桿菌菌株生長的乳酸乳球菌菌株，和增加 所述雙歧桿菌菌株生長的嗜熱鏈球菌菌株；ii)將所述乳發(fā)酵；iii)任選地，向發(fā)酵乳中加入另外的微生物和/或添加劑；和iv)任選地，包裝發(fā)酵乳制品。
2.權(quán)利要求1的方法，其中b)中的細菌屬于選自下列的菌株CHCC4462(DSM21407)、 CHCC3912 (DSM21406)、CHCC7018 (DSM21408)和這些菌株中任何菌株的突變體或變異體。
3.上述權(quán)利要求任一項的方法，其還包括以屬于選自下列的種的細菌接種所述乳保 加利亞乳桿菌、嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌和嗜酸乳桿菌。
4.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中步驟i)包括將乳接種包含下列的培養(yǎng)物a)雙歧桿菌菌株；b)保加利亞乳桿菌菌株；c)選自CHCC4462、CHCC4462 突變體、CHCC4462 變異體、CHCC3912、CHCC3912 突變體和 CHCC3912變異體的乳酸乳球菌菌株；和/或選自CHCC7018、CHCC7018突變體和CHCC7018 變異體的嗜熱鏈球菌菌株。
5.上述權(quán)利要求任一項的方法，其還包括以額外的嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選增稠菌株，諸 如選自 ST-B0DY-3 (Chr. Hansen A/S，Horsholm,丹麥)和 ST8833 (DSM17876)的菌株接種所 述乳。
6.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中雙歧桿菌菌株屬于選自青春雙岐桿菌、動物雙歧 桿菌、星狀雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、乳雙歧桿 菌、長雙歧桿菌和假鏈狀雙歧桿菌的種。
7.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中雙歧桿菌菌株是動物雙歧桿菌乳酸亞種菌株。
8.上述權(quán)利要求的方法，其中雙歧桿菌菌株選自CHCC5445(BB-12 ,DSM15954)、 CHCC7158(DSM17280)和BB_46 (DSM15955)，和這些菌株中任何菌株的突變體/變異體。
9.上述權(quán)利要求的方法，其中雙歧桿菌菌株選自CHCC5445(BB-12 ,DSM15954)、 CHCC7158(DSM17280)和BB_46 (DSM15955)，和這些菌株中任何菌株的突變體。
10.上述權(quán)利要求的方法，其中雙歧桿菌菌株是BB-12 ,或其具有例如與益生菌基本 相同特性的突變體。
11.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中發(fā)酵乳制品包含至少IO8Cfu雙歧桿菌/g發(fā)酵乳 制品。
12.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中發(fā)酵乳制品在儲存于+6°C28天后包含至少 108cfu/g雙歧桿菌。
13.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中步驟i)中的乳以IO5至3xl07cfU/g的雙歧桿菌 和/或以IO4至3. 5xl06cfu/g的嗜熱鏈球菌或乳酸乳球菌細菌接種。
14.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中乳還以至少一種細菌菌株，諸如乳酸乳球菌乳酸 亞種菌株(例如選自乳酸乳球菌乳酸亞種DN224 ；乳酸乳球菌乳酸亞種DN223 ；和這些菌株中任何菌株的突變體或變異體)接種。
15.上述權(quán)利要求任一項的方法，其中發(fā)酵乳制品包裝在密封包裝中，所述密封包裝包 含從 IOml 至 5000ml、或 25ml 至 3000ml、或 50ml 至 IOOOml 的制品。
16.通過上述權(quán)利要求任一項的方法可獲得的發(fā)酵乳制品。
17.權(quán)利要求16的發(fā)酵乳制品，其中制品在儲存于+6°C觀天后包含至少108cfu/g雙 歧桿菌。
18.發(fā)酵乳制品，包含屬于選自下列菌株的細菌CHCC7018、CHCC4462和CHCC3912，和 這些菌株中任何菌株的突變體。
19.發(fā)酵乳制品，包含屬于選自下列菌株的細菌CHCC7018和CHCC3912，和這些菌株中 任何菌株的突變體。
20.上述權(quán)利要求任一項的發(fā)酵乳制品，其包含103、優(yōu)選至少105cfu/g的嗜熱鏈球菌 菌株。
21.上述權(quán)利要求任一項的發(fā)酵乳制品，其還包括至少105、優(yōu)選至少107cfu/g的雙歧 桿菌和/或至少105、優(yōu)選至少107cfu/g的乳酸乳球菌乳酸亞種菌株。
22.上述權(quán)利要求任一項的發(fā)酵乳制品，其是酸乳。
23.組合物，諸如培養(yǎng)物，包含a)屬于雙歧桿菌菌株的細菌，諸如CHCCM45(BB-12 )，和b)屬于選自下列菌株的細菌乳酸乳球菌菌株，優(yōu)選增強雙歧桿菌菌株生長的菌株， 諸如CHCC4462，CHCC3912，或這些菌株中任何菌株的突變體，和嗜熱鏈球菌菌株，優(yōu)選增強 雙歧桿菌菌株生長的菌株(諸如CHCC7018，或其突變體)。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求的組合物，包含i)從IO5至1012cfU/g的選自BB-12 或其突變體的菌株，和ii)從IO5至1012cfu/g的選自CHCC7018或其突變體的菌株和/或IO5至1012cfu/g的 選自CHCC4462、CHCC3912和這些菌株中任何菌株的突變體的菌株。
25.上述權(quán)利要求的培養(yǎng)物，其還包含從IO5至1012cfu/g的DN2M或DN223或其突變體/變異體。
26.細菌菌株，選自ST7018、ST7018突變體和ST7018變異體，CHCC4462、CHCC4462突 變體、CHCC4462變異體，CHCC3912、CHCC3912突變體和CHCC3912變異體。
27.細菌菌株，選自ST7018、ST7018突變體和ST7018變異體，CHCC3912、CHCC3912突 變體和CHCC3912變異體。
28.細菌菌株，選自ST7018、ST7018突變體、CHCC3912和CHCC3912突變體。
29.細菌菌株，選自ST7018、CHCC3912，和這些菌株中任何菌株的突變體，所述突變體 具有雙歧桿菌生長促進特性。
30.分離形式的前述權(quán)利要求的菌株。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于制備發(fā)酵乳制品的方法，所述發(fā)酵乳制品包含雙歧桿菌與乳酸乳球菌、嗜熱鏈球菌和/或保加利亞乳桿菌種的乳酸細菌的組合。
文檔編號A23C9/123GK102105065SQ200980133986
公開日2011年6月22日 申請日期2009年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日
發(fā)明者賽西爾·賽曼迪, 迪特·瑪麗·?？硕鞑?申請人:科.漢森有限公司