專(zhuān)利名稱(chēng)：一種提取基因組脫氧核糖核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取基因組脫氧核糖核酸的方法，屬于生物中核酸應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在傳統(tǒng)的基因分型、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、品系檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，人們比較慣用的方法是，采用 手工抽提或者是購(gòu)買(mǎi)一般的基因組脫氧核糖核酸(以下簡(jiǎn)稱(chēng)DNA)提取試劑盒進(jìn)行。但是， 不管是采用手工抽提還是購(gòu)買(mǎi)試劑盒進(jìn)行提取，整個(gè)提取過(guò)程都要取一定量的材料，經(jīng)過(guò) 液氮研磨一裂解液裂解一孵育一離心一有機(jī)抽提(或者過(guò)柱)一漂洗數(shù)次一晾干一溶解 (或者洗脫)這樣的流程，最終得到DNA。而往往這些DNA僅僅是用作基因鑒定的聚合酶鏈 式反應(yīng)(polymerase chain reaction,以下簡(jiǎn)稱(chēng)PCR)模板，用過(guò)一次后DNA便扔了 ，當(dāng)然， 同時(shí)那些陰性的小老鼠們和那些陰性的擬南芥?zhèn)儯踩恿?。也許這種操作得到的DNA純度 和得率都是高的，但是即使不考慮使用液氮研磨時(shí)可能凍傷操作者的風(fēng)險(xiǎn)，整個(gè)提取過(guò)程 由于步驟繁瑣，使用的儀器眾多，等待時(shí)間很長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種提取基因組脫氧核糖核酸的方法，采用了特殊的技術(shù)， 旨在建立成熟穩(wěn)定的、一步法直接從各種材料中提取DNA，用于各種基因的PCR檢測(cè)體系。
本發(fā)明提出的提取基因組脫氧核糖核酸的方法，包括以下步驟
(1-1)將裂解緩沖液加入到植物組織、動(dòng)物組織或細(xì)菌中的任何一種材料中，將材 料研碎，并渦旋混勻，得到第一混濁液，加入的質(zhì)量體積比為植物材料、動(dòng)物材料或細(xì)菌中
的任何一種裂解緩沖液=io毫克200微升； (1-2)在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為10-20毫克/毫升的蛋白酶K， 加入的體積為5-20微升，混勻，55-65。C下孵育5_30分鐘，80-95。C加熱3_10分鐘，得到第 二混濁液； (1-3)對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為8000-13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí) 間為3-5分鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 上述方法中，裂解緩沖液的組成為pH值為8. 0、摩爾濃度為20-50毫摩爾/升的 三羥甲基氨基甲烷.鹽酸，摩爾濃度為2. 0-4. 0毫摩爾/升的乙二胺四乙酸以及摩爾濃度 為20-50毫摩爾/升的氯化鈉。 本發(fā)明提出的提取基因組脫氧核糖核酸的方法，其優(yōu)點(diǎn)是 1、基因檢測(cè)的首要條件是獲得足夠的DNA，所謂足夠的DNA對(duì)其數(shù)量和質(zhì)量的要 求并不需要太高，只要滿足PCR條件即可。本發(fā)明方法提出了一步法直接提取DNA用于PCR 擴(kuò)增，顧名思義采用一步法裂解材料，收獲DNA，用于PCR擴(kuò)增，操作簡(jiǎn)單快速，結(jié)果準(zhǔn)確重 復(fù)性好。本方法的好處在于一步法提取DNA，即不用液氮研磨，不需要酶解和長(zhǎng)時(shí)間孵育， 一次性裂解材料，材料范圍廣，植物組織、動(dòng)物組織、細(xì)菌都適用，操作時(shí)間短，直接應(yīng)用于基因檢測(cè)等，具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可最大限度的減少人為誤差。 2、直接PCR適用于對(duì)DNA的純度和得率要求不是極高的實(shí)驗(yàn)，如基因檢測(cè)等，操作 者只需一步將材料與裂解液混合，必要時(shí)將材料破碎，離心得到DNA，取1微升作為模板用 于20微升的PCR反應(yīng)體系，便可確定目的基因的有無(wú)。比如在轉(zhuǎn)基因篩選中，采用直接PCR 的方法，可瞬時(shí)得到DNA模板用于PCR鑒定，快速確定是否為轉(zhuǎn)基因個(gè)體，不用花精力照顧 陰性的幼苗或幼體，節(jié)省了大量資源。此外，本發(fā)明方法還適用于品系檢測(cè)、種子純度檢測(cè) 和分子標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)。 本發(fā)明提出了一步法、快速的DNA提取方法，用于PCR檢測(cè)，快速、便捷、安全，效率 高、穩(wěn)定性好，適合包括植物組織、種子、細(xì)菌和動(dòng)物組織的PCR檢測(cè)。


圖1是對(duì)本發(fā)明實(shí)施例1獲得的DNA進(jìn)行泛素基因PCR擴(kuò)增的檢測(cè)結(jié)果。
圖2是對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2獲得DNA進(jìn)行凝集素基因PCR擴(kuò)增的檢測(cè)結(jié)果。
圖3是對(duì)本發(fā)明實(shí)施例3獲得DNA進(jìn)行內(nèi)參基因PCR擴(kuò)增的檢測(cè)結(jié)果。
圖4是對(duì)本發(fā)明實(shí)施例4獲得DNA進(jìn)行通用引物PCR擴(kuò)增的檢測(cè)結(jié)果。
圖5是對(duì)本發(fā)明實(shí)施例5獲得DNA進(jìn)行內(nèi)參基因PCR擴(kuò)增的檢測(cè)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提出的提取基因組脫氧核糖核酸的方法，包括以下步驟 (1-1)將裂解緩沖液加入到植物組織、動(dòng)物組織或細(xì)菌中的任何一種材料中，將材 料研碎，并渦旋混勻，得到第一混濁液，加入的質(zhì)量體積比為植物材料、動(dòng)物材料或細(xì)菌中
的任何一種裂解緩沖液=io毫克200微升； (1-2)在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為10-20毫克/毫升的蛋白酶K， 加入的體積為5-20微升，混勻，55-65。C下孵育5_30分鐘，80-95。C加熱3_10分鐘，得到第 二混濁液； (1-3)對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為8000-13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí) 間為3-5分鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 上述方法中，裂解緩沖液的組成為pH值為8. 0、摩爾濃度為20-50毫摩爾/升的 三羥甲基氨基甲烷.鹽酸，摩爾濃度為2. 0-4. 0毫摩爾/升的乙二胺四乙酸以及摩爾濃度 為20-50毫摩爾/升的氯化鈉。
以下是本發(fā)明方法的實(shí)施例 在實(shí)施例中所采用的一些試劑來(lái)源天根生化科技(北京)有限公司生產(chǎn)的2x PCRReagent、蛋白酶K，和滅菌水。
實(shí)施例1 : 1 、將200 iU裂解緩沖液加入到10mg擬南芥葉片中，將材料研碎，并渦旋混勻，得 到第一混濁液； 2、在上述第一混濁液中加入濃度為20mg/ml的蛋白酶K，加入的體積為10 y 1，混 勻，55t:下孵育10分鐘，85t:加熱5分鐘，得到第二混濁液；
3、對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3分
鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 實(shí)施例2 : 1 、將200 ill裂解緩沖液加入到10mg大豆葉片中，將材料研碎，并渦旋混勻，得到 第一混濁液； 2、在上述第一混濁液中加入濃度為20mg/ml的蛋白酶K，加入的體積為10iU，混 勻，55t:下孵育10分鐘，85t:加熱5分鐘，得到第二混濁液； 3、對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3分
鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 實(shí)施例3 : 1 、將200 iil裂解緩沖液加入到lOmg水稻葉片中，將材料研碎，并渦旋混勻，得到 第一混濁液； 2、在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為20mg/ml的蛋白酶K，加入的體積
為10iil，混勻，55t:下孵育10分鐘，85t:加熱5分鐘，得到第二混濁液； 3、對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3分
鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 實(shí)施例4 : 1 、將200 iU裂解緩沖液加入到800 y 1菌液收集的菌體中中，并渦旋混勻，得到第 一混濁液； 2、在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為20mg/ml的蛋白酶K，加入的體積
為10iil，混勻，55t:下孵育10分鐘，85t:加熱5分鐘，得到第二混濁液； 3、對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3分
鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 實(shí)施例5: 1 、將200 iil裂解緩沖液加入到lOmg小鼠組織中，將材料研碎，并渦旋混勻，得到 第一混濁液； 2、在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為20mg/ml的蛋白酶K，加入的體積
為10iil，混勻，55t:下孵育30分鐘，85t:加熱5分鐘，得到第二混濁液； 3、對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3分
鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。 以下是對(duì)用本發(fā)明方法提取的DNA進(jìn)行檢測(cè)的實(shí)例 檢測(cè)實(shí)例1 :對(duì)實(shí)施例1得到的DNA進(jìn)行檢測(cè) 以實(shí)施例1中得到的DNA為模板，擬南芥UBQ基因特異引物
,l-F 5 'CAGGACAAAGAGGGAATACC 3'，R 5' GTTGAACAGGAGGGATACC 3'，
圃2-F 5' ATGTTTTTCGATGGATACCA 3'，R 5' GATTGCGTTAGCAGGCTTTG 3'，圃3-F
5， ATGTTTTTCGATGGATACCA 3，， R 5， TCAACCCCTCAATGAATAC 3，進(jìn)行258bp片段、1160bp片
段和1610bp片段的PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)系為 2x PCR Reagent 10 ii 1 正向引物(10微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
5
反向引物(IO微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
模板DNA liil
滅菌水 補(bǔ)至20 ii 1 試劑全部加好后，瞬時(shí)離心，將所有試劑收集到管底。
PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置
94°C 3min， 1循環(huán) 94°C 30秒(second,以下簡(jiǎn)稱(chēng)sec) ， 55°C 30sec， 72°C lmin 35循環(huán);
72。C5min，l循環(huán) 結(jié)果檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后取8 1反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。電泳條件為用 0. 5XTBE電泳緩沖液配制2% (W/V)的瓊脂糖凝膠，凝膠融化后加入含量為0. 5/ml的溴化 乙啶。按比例將8iU的PCR反應(yīng)產(chǎn)物與上樣緩沖液均勻混合，然后加入到凝膠孔中，以5V/ cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為40-60分鐘。電泳結(jié)束后將凝膠置于凝膠成像儀上觀察并 照相。 結(jié)果見(jiàn)圖1 :點(diǎn)樣順序?yàn)?. DNA marker ;2、3. 258bp片段；4、5. 1160bp片段；6、 7. 1610bp片段。由圖1可見(jiàn)，采用本發(fā)明方法提取的擬南芥葉片DNA，進(jìn)行特異引物的PCR 擴(kuò)增，得到的擴(kuò)增片段與預(yù)期的擴(kuò)增片段大小一致，所以用本方法提取的DNA完全能夠滿 足基因檢測(cè)的要求。
檢測(cè)實(shí)例2 :對(duì)實(shí)施例2得到的DNA進(jìn)行檢測(cè) 以實(shí)施例2中得到的DNA為模板，大豆lectin基因特異引物lectin-F : 5， GCCCTCTACTCCACCCCCATCC 3，，R :5' GCCCATCTGCAAGCCTTTTTGTG 3， ， lectin_F5， ATGGCCA CCTCCAACTTCTCTA 3'，R 5'AGTTCACGTCAATGCCGAT 3'，進(jìn)行118bp片段和6Q0bp片段的PCR
擴(kuò)增，PCR反應(yīng)系為 2x PCR Reagent 10 ii 1 正向引物(10iiM) 0.5 ill 反向引物(10iiM) 0.5 ill 模板DNA 1 ii 1 滅菌水 補(bǔ)至20 ii 1 試劑全部加好后，瞬時(shí)離心，將所有試劑收集到管底。
PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置
94°C 3min， 1循環(huán)94°C 30秒(second,以下簡(jiǎn)稱(chēng)sec) ， 55°C 30sec， 72°C lmin 35循環(huán);
72。C5min，l循環(huán) 結(jié)果檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后取8 1反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。電泳條件為用 0. 5XTBE電泳緩沖液配制2% (W/V)的瓊脂糖凝膠，凝膠融化后加入含量為0. 5/ml的溴化 乙啶。按比例將8iU的PCR反應(yīng)產(chǎn)物與上樣緩沖液均勻混合，然后加入到凝膠孔中，以5V/ cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為40-60分鐘。電泳結(jié)束后將凝膠置于凝膠成像儀上觀察并 照相。 結(jié)果見(jiàn)圖2，點(diǎn)樣順序?yàn)?. DNA Marker ;2、3. 118bp片段；4.陽(yáng)性對(duì)照；5、 6.600bp片段；7.陽(yáng)性對(duì)照。由圖2可見(jiàn)，采用本發(fā)明方法提取的大豆葉片DNA，進(jìn)行特異引物的PCR擴(kuò)增，得到的擴(kuò)增片段與陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增片段大小一致，所以用本方法提取的DNA 完全能夠滿足基因檢測(cè)的要求。 檢測(cè)實(shí)例3 :對(duì)實(shí)施例3得到的DNA進(jìn)行檢測(cè)以實(shí)施例3中得到的DNA為模板， 水稻內(nèi)源基因引物F 5 'CGATGTCAAGCGTTACTCTA 3'，R 5 'AGGTGGTGGTGGCTCAATAT 3'禾口F 5 'CGATGTCAAGCGTTACTCTA 3，，R 5 'CAGACATTATCAGCTGGTAC 3，，進(jìn)行272bp片段和694bp 片段的PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)系為2x PCR Reagent10 ii 1正向引物(10iiM)0. 5ii 1反向引物(lOiiM)0. 5ii 1模板DNA1 ii 1滅菌水補(bǔ)至20 ii 1試劑全部加好后，瞬時(shí)離心，將所有試劑收集到管底。
PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置94°C 3min， 1循環(huán)94°C 30秒(second,以下簡(jiǎn)稱(chēng)sec) ，55°C 30sec，72。C lmin 35循環(huán);
72 °C 5min， 1循環(huán)結(jié)果檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后取8il1反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。電泳條件為用
0. 5XTBE電泳緩沖液配制2% (W/V)的瓊脂糖凝膠，凝膠融化后加入含量為0. 5/ml的溴化 乙啶。按比例將8iU的PCR反應(yīng)產(chǎn)物與上樣緩沖液均勻混合，然后加入到凝膠孔中，以5V/ cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為40-60分鐘。電泳結(jié)束后將凝膠置于凝膠成像儀上觀察并 照相。 結(jié)果見(jiàn)圖3，點(diǎn)樣順序?yàn)閘.DNA Marker ;2、3.葉片DNA272bp片段；4、5.大米 DNA272bp片段；6.陽(yáng)性對(duì)照；7、8.葉片DNA694bp片段；9、 10.大米DNA694bp片段；11.陽(yáng) 性對(duì)照。由圖3可見(jiàn)，采用本發(fā)明方法提取的水稻葉片DNA，進(jìn)行特異引物的PCR擴(kuò)增，得到 的擴(kuò)增片段與陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增片段大小一致，所以用本方法提取的DNA完全能夠滿足基因 檢測(cè)的要求。
檢測(cè)實(shí)例4 :對(duì)實(shí)施例4得到的DNA進(jìn)行檢測(cè) 以實(shí)施例4中得到的DNA為模板，細(xì)菌通用引物16srDNA-F 5 'TAGCTGGTCTGAGAGGATGA 3'，R 5 'CTTGCCAGTATCAGATGCAGT，3進(jìn)行297bp片段的PCR擴(kuò)
增，PCR反應(yīng)系為 2x PCR Reagent 10 ii 1 正向引物(IO微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
反向引物(IO微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
模板DNA 1 ii 1 滅菌水 補(bǔ)至20 ii 1 試劑全部加好后，瞬時(shí)離心，將所有試劑收集到管底。 PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置 94°C 3min， 1循環(huán) 94°C 30秒(second,以下簡(jiǎn)稱(chēng)sec) ， 55°C 30sec， 72°C lmin 35循環(huán);
72。C5min，l循環(huán) 結(jié)果檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后取8 1反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。電泳條件為用 0. 5XTBE電泳緩沖液配制2% (W/V)的瓊脂糖凝膠，凝膠融化后加入含量為0. 5/ml的溴化 乙啶。按比例將8iU的PCR反應(yīng)產(chǎn)物與上樣緩沖液均勻混合，然后加入到凝膠孔中，以5V/ cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為40-60分鐘。電泳結(jié)束后將凝膠置于凝膠成像儀上觀察并 照相。 結(jié)果見(jiàn)圖4，點(diǎn)樣順序?yàn)?.DNA Marker ;2-5.陰性菌DNA擴(kuò)增；6-9.陽(yáng)性菌DNA 擴(kuò)增。由圖4可見(jiàn)，采用本發(fā)明方法提取的細(xì)菌DNA，進(jìn)行特異引物的PCR擴(kuò)增，得到的擴(kuò) 增片段與預(yù)期的擴(kuò)增片段大小一致，所以用本方法提取的DNA完全能夠滿足基因檢測(cè)的要 求。檢測(cè)實(shí)例5 :對(duì)實(shí)施例5得到的DNA進(jìn)行檢測(cè)以實(shí)施例5中得到的DNA為模 板，小鼠MILGFMAR2基因特異引物MILGFMAR2-F5， ATCCTCCTTCTATAGTCTGTCCAAGAGTAG3，， R5' CCTCCAGAAAAAGCTAGATACTAACCTT 3'進(jìn)行332bp片段的PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)系為
2x PCR Reagent 10 ii 1 正向引物(IO微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
反向引物(IO微摩爾每升，簡(jiǎn)稱(chēng)iiM) 0.5iU
模板DNA 滅菌水 補(bǔ)至20iU
試劑全部加好后，瞬時(shí)離心，將所有試劑收集到管底。
PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置
94。C3min，l循環(huán)94°C 30秒(second,以下簡(jiǎn)稱(chēng)sec) ，55°C 30sec，72。C lmin 35循環(huán);
72。C5min，l循環(huán) 結(jié)果檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后取8iU反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。電泳條件為用
0. 5XTBE電泳緩沖液配制2% (W/V)的瓊脂糖凝膠，凝膠融化后加入含量為0. 5/ml的溴化 乙啶。按比例將8iU的PCR反應(yīng)產(chǎn)物與上樣緩沖液均勻混合，然后加入到凝膠孔中，以5V/ cm的電壓進(jìn)行電泳，電泳時(shí)間為40-60分鐘。電泳結(jié)束后將凝膠置于凝膠成像儀上觀察并 照相。 結(jié)果見(jiàn)圖5，點(diǎn)樣順序?yàn)?.DNA Marker ;2.陰性對(duì)照；3.陽(yáng)性對(duì)照；4、5.小鼠肝 臟DNA擴(kuò)增；6、7.小鼠心臟DNA擴(kuò)增。由圖5可見(jiàn)，采用本發(fā)明方法提取的小鼠組織DNA， 進(jìn)行特異引物的PCR擴(kuò)增，得到的擴(kuò)增片段與陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增片段大小一致，而陰性對(duì)照 并無(wú)擴(kuò)增，所以用本方法提取的DNA完全能夠滿足基因檢測(cè)的要求。
8
權(quán)利要求
一種提取基因組脫氧核糖核酸的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1-1)將裂解緩沖液加入到植物組織、動(dòng)物組織或細(xì)菌中的任何一種材料中，將材料研碎，并渦旋混勻，得到第一混濁液，加入的質(zhì)量體積比為植物材料、動(dòng)物材料或細(xì)菌中的任何一種∶裂解緩沖液＝10毫克∶200微升；(1-2)在上述第一混濁液中加入質(zhì)量體積比濃度為10-20毫克/毫升的蛋白酶K，加入的體積為5-20微升，混勻，55-65℃下孵育5-30分鐘，80-95℃加熱3-10分鐘，得到第二混濁液；(1-3)對(duì)上述第二混濁液進(jìn)行離心分離，離心轉(zhuǎn)速為8000-13000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時(shí)間為3-5分鐘，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的裂解緩沖液的組成為pH值為 8. 0、摩爾濃度為20-50毫摩爾/升的三羥甲基氨基甲烷.鹽酸，摩爾濃度為2. 0-4. 0毫摩 爾/升的乙二胺四乙酸以及摩爾濃度為20-50毫摩爾/升的氯化鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取基因組脫氧核糖核酸的方法，屬于生物中核酸應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。將裂解緩沖液加入到植物組織、動(dòng)物組織或細(xì)菌中的任何一種材料中，將材料研碎，并渦旋混勻，得到第一混濁液，在其中加入蛋白酶K，混勻，孵育得到第二混濁液；對(duì)第二混濁液進(jìn)行離心分離，得到離心分離的上清液，上清液中含有脫氧核糖核酸。本方法即不用液氮研磨，不需要酶解和長(zhǎng)時(shí)間孵育，一次性裂解材料，材料范圍廣，植物組織、動(dòng)物組織、細(xì)菌都適用，操作時(shí)間短，直接應(yīng)用于基因檢測(cè)等，具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可最大限度的減少人為誤差。
文檔編號(hào)C12N15/10GK101792756SQ201010129818
公開(kāi)日2010年8月4日 申請(qǐng)日期2010年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月19日
發(fā)明者俞萍, 孫克非, 李曉晨, 柯海燕 申請(qǐng)人:天根生化科技(北京)有限公司