專利名稱：基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種微生物復(fù)合制劑。具體地說是涉及一種基于多種益生菌的發(fā)酵培養(yǎng)物的復(fù)合微生物制劑及其應(yīng)用。屬于微生物制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
由于農(nóng)藥、化肥、抗生素和激素的大量使用給生態(tài)環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)帶來了日趨 嚴(yán)重的影響。為此，需采用微生物制劑來改良生態(tài)環(huán)境。目前，已經(jīng)上市的微生物制劑，大 多是單一菌或簡單的復(fù)合菌制劑，因而其功能都較為單一，用于種植業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)時(shí)僅能針 對肥料或飼料的一項(xiàng)或幾項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行改良；在很多復(fù)合菌制劑的制備過程中，部分企業(yè)盲 目的認(rèn)為加入的菌的種類越多越好，而將互相拮抗菌放在了一起；有的由于菌種選用不當(dāng)， 或使用的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分不均衡或，酸堿度、溫度等關(guān)鍵性參數(shù)設(shè)定存在偏差，造成活菌含 量低，雜菌多，水分含量偏高等問題，影響了產(chǎn)品的質(zhì)量及其使用效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種功能多、制品中活菌數(shù)量高，成品保存 期長的基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑的制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑 的制備方法，所述多種益生菌包括啤酒酵母菌(好氧菌)、枯草芽孢桿菌(厭氧菌)、嗜酸乳 桿菌(兼性厭氧菌)、沼澤紅假單胞菌(兼性厭氧菌)和菌糞腸球菌(兼性厭氧菌)，所述 制備方法包括培養(yǎng)基的制備和發(fā)酵工藝一、培養(yǎng)基的制備a)用于啤酒酵母菌(好氧菌)發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母發(fā)酵菌的培養(yǎng)基，包含以下重量配比的原料蜂蜜50-200份、紅糖 300-900份、磷酸二氫鉀1-5份、磷酸氫二鉀1-5份、硫酸亞鐵80-160份、硫酸錳5_20份、硫 酸銅3-10份、硫酸鋅8-20份、硼酸8-40份、鉬酸銨0. 5-1份和水5000-8000份；b)用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌(兼性厭氧菌)發(fā)酵的培養(yǎng)基用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的 原料蜂蜜50-200份、紅糖300-900份、磷酸二氫鉀1_5份、磷酸氫二鉀1_5份、硫酸亞鐵 80-160份、硫酸錳5-20份、硫酸銅3-10份、硫酸鋅8_20份、硼酸8_40份、鉬酸銨0. 5-1份 和水 5000-8000 份；c)用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯 草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草 芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料腐植酸鈉3-8份， 紅糖50-90份，蜂蜜10-30份和水3000-5000份。二、發(fā)酵工藝
a)啤酒酵母(好氧菌)發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C _95°C滅菌30-40分鐘后待溫度降至 30-35°C時(shí)，加入啤酒酵母菌種，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在30-40°C，發(fā)酵36-48 小時(shí)，得啤酒酵母菌培養(yǎng)物，所述啤酒酵母菌種的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比為 0. 1% -0. 5% ；b)嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌(兼性厭氧菌)的發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫 酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C -95°C滅菌30-40分鐘后待溫度降至30_35°C 時(shí)，加入嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在 25-35°C，發(fā)酵36-48小時(shí)，得嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)物和糞腸球菌培養(yǎng) 物，所述嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比 分別為 0. 05% -0. 4%,0. 01% -0. 2%和 0. 1% -0. 5% ；C)枯草芽孢桿菌(厭氧菌)的發(fā)酵按所述配方將腐植酸鈉、紅糖、蜂蜜和水置入發(fā)酵罐中，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH為 7-7. 5，加熱至溫度為85-95°C滅菌30-40分鐘，后待溫度降至30-35°C時(shí)，加入所述發(fā)酵工 藝a)和b)的培養(yǎng)物的混合物，再加入枯草芽孢桿菌菌種，攪拌后溫度控制在30-40°C，將 發(fā)酵罐中大氣壓抽負(fù)壓至0. 1-0. 3個(gè)大氣壓，發(fā)酵72-96小時(shí)得到成品。其中所述枯草 芽孢桿菌的加入量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后 混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基總量的重量百分比分別為 0. 01% -0. 05%。所述糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和啤酒酵母五種益生 菌發(fā)酵的菌種的重量配比為1 0.8-2.5 0.8-1.2 0.8-3.5 1.5-3.0。本發(fā)明基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑作用機(jī)理(1)嗜酸乳桿菌嗜酸乳桿菌能攝取光合細(xì)菌生產(chǎn)的物質(zhì)，分解在常溫下不易分解的木質(zhì)素和纖維 素，使未腐熟的有機(jī)物發(fā)酵，轉(zhuǎn)化成動植物有效的養(yǎng)分。嗜酸乳桿菌是能夠分解糖類產(chǎn)生乳 酸為主要代謝產(chǎn)物的無芽孢革蘭氏陽性菌，厭氧或兼性厭氧生長，在PH 3. 0 4. 5酸性條 件下仍能生存。通過生物拮抗(競爭排斥，降低PH，提高揮發(fā)性脂肪酸濃度，阻止和抑制致 病菌的侵入和定植，維持正常生態(tài)平衡，被稱為“后抗生素”。嗜酸乳桿菌能夠分解常溫下不 易分解的木質(zhì)素和纖維素，合成各種氨基酸和維生素，產(chǎn)生消化酶類，幫助食物消化和營養(yǎng) 吸收，促進(jìn)新陳代謝。(2)沼澤紅假單胞菌沼澤紅假單胞菌能利用太陽熱能或紫外線將土壤中的硫氫和碳?xì)浠衔镏械臍?分離出來，變有害為無害；并和C、氮等合成糖類、氨基酸類、維生素類、生物活性物質(zhì)(激 素)等，培肥土壤。在厭氣性條件下，沼澤紅假單胞菌能夠利用小分子有機(jī)物來合成自身生 長繁殖需要的各種養(yǎng)料，并以動植物體內(nèi)的分泌物、有機(jī)物和有害氣體(氨氣、沼氣、硫化 氫等)為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸、維生素和生物活性物質(zhì)等，有效降解了有毒有害物質(zhì)含 量，從而使養(yǎng)殖業(yè)從嚴(yán)重的化學(xué)污染中解放出來，生產(chǎn)出具有更高產(chǎn)量和無污染的優(yōu)質(zhì)畜產(chǎn)品。(3)啤酒酵母啤酒酵母可以產(chǎn)生出促進(jìn)細(xì)菌分裂的生物活性物質(zhì)，同時(shí)啤酒酵母還對促進(jìn)其它 有效微生物增殖的基質(zhì)(食物)的生產(chǎn)起著重要作用。它能夠特征性地發(fā)酵一系列碳水化 合物，所生產(chǎn)的單細(xì)胞蛋白是動物的有效養(yǎng)分。有機(jī)物經(jīng)啤酒酵母發(fā)酵后，蛋白質(zhì)、維生素、 氨基酸生物活性大幅度提高，所產(chǎn)生的單細(xì)胞蛋白是動物的有效養(yǎng)分。啤酒酵母菌體富含 蛋白質(zhì)、纖維素和多種酶類，可以加強(qiáng)消化吸收功能，提高動物對植酸磷的利用。(4)糞腸球菌糞腸球菌可以優(yōu)化土壤結(jié)構(gòu)，改善動物腸道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)其他益生菌的增 殖，其發(fā)酵產(chǎn)物能改善動物生長發(fā)育，調(diào)節(jié)動物消化吸收功能，提高動物生長速度。(5)枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌菌體生長過程中產(chǎn)生的多種等活性物質(zhì)，能明顯抑制致病菌的生 長，增強(qiáng)動植物抗病能力；枯草芽孢桿菌能迅速消耗環(huán)境中的游離氧，造成腸道低氧，促進(jìn) 有益厭氧菌生長，并產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸類，降低腸道PH值，間接抑制其它致病菌生長；枯草 芽孢桿菌刺激動物免疫器官的生長發(fā)育，激活Τ、B淋巴細(xì)胞，提高免疫球蛋白和抗體水平， 增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫功能，提高群體免疫力；枯草芽孢桿菌菌體自身合成多種酶類，在 消化道中與動物體內(nèi)的消化酶類一同發(fā)揮作用，從而加強(qiáng)消化吸收功能，促進(jìn)動物加速生 長發(fā)育。上述五種微生物混合發(fā)酵可以實(shí)現(xiàn)共生酶系的互補(bǔ)，這幾種微生物代謝途徑不 同，答謝產(chǎn)物各不相同，因而能起到單一菌株發(fā)酵難以起到的作用。在本發(fā)明中的混合培養(yǎng) 中，一種微生物可以產(chǎn)生有利于另一種(或多種)微生物生長、發(fā)酵所需的基本物質(zhì)(如碳 源、氮源)和營養(yǎng)素(多糖等)，能加快另一種(或多種)微生物的生長繁殖?；旌吓囵B(yǎng)這 幾種微生物能產(chǎn)生多種酶，可以作用于多種化合物，能很好的消除合改變底物中的抑制物， 提高培養(yǎng)基的利用率。在這些微生物的混合發(fā)酵培養(yǎng)過程中，可以完成多種轉(zhuǎn)化，而單一種 微生物的發(fā)酵是不可能完成的。在本發(fā)明中由于采用了合理適當(dāng)?shù)呐浔群团囵B(yǎng)條件，這些微生物可以迅速定植并 與環(huán)境相結(jié)合，產(chǎn)生大量易為動植物吸收的有益物質(zhì)，如氨基酸、有機(jī)酸、多糖類、各種維生 素、各種生化酶、促生長因子、抗氧化物質(zhì)和抗病毒物質(zhì)等，能夠清除腐敗和惡臭，提高動植 物免疫功能，預(yù)防和抑制致病菌，形成有利于動植物生長的良好環(huán)境，應(yīng)用于種植業(yè)和養(yǎng)殖 業(yè)，可以降低成本、提高產(chǎn)量、改善品質(zhì)。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑，它將多種具有不同性質(zhì)和 作用的微生物有機(jī)的結(jié)合為一體，具有了多種微生物和諧共生的微環(huán)境，使其具備了改良 生態(tài)的能力。具體功能表現(xiàn)在應(yīng)用于種植業(yè)，可有效地恢復(fù)和保持土壤的生態(tài)平衡，預(yù)防 和長期控制果樹植物的病蟲害，促進(jìn)植物生長，提高果蔬植物品質(zhì)；應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)，可增強(qiáng) 動物機(jī)體免疫力，提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動物生長發(fā)育等。本發(fā)明的優(yōu)勢在于制品中活菌數(shù)量高，成品保存期長。本產(chǎn)品應(yīng)用于種植業(yè)能促進(jìn)光合作用、改良土 壤、減少病蟲害、促進(jìn)植物健康快速生長；應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)能提高飼料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)動物生長發(fā)育，提高禽畜抗病能力。用于本發(fā)明的益生菌(糞腸球菌AS 1.0130、枯草芽孢桿菌AS 1.0884、嗜酸乳桿 菌AS 1. 1854、沼澤紅假單胞菌AS 1. 2180和啤酒酵母AS 2. 0121)均可由中國科學(xué)院微生 物研究所購得，并在常規(guī)培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)預(yù)培養(yǎng)。
本發(fā)明通過優(yōu)化培養(yǎng)基的配方和制備方法，將嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、沼澤紅假單 胞菌和啤酒酵母分別接種培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵，再混合后接種啤酒酵母進(jìn)行厭氧發(fā)酵，使各菌 種得到平衡增殖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一、培養(yǎng)基的制備a)用于啤酒酵母發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母發(fā)酵的培養(yǎng)基，包含以下重量配比的原料蜂蜜10kg、紅糖40kg、磷 酸二氫鉀200g、磷酸氫二鉀200g、硫酸亞鐵8kg、硫酸錳900g、硫酸銅300g、硫酸鋅800g、硼 酸1. 5kg、鉬酸銨50g和水500kg ；b)用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基用于嗜酸乳桿 菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料蜂蜜10kg、紅糖 40kg、磷酸二氫鉀200g、磷酸氫二鉀200g、硫酸亞鐵8kg、硫酸錳900g、硫酸銅300g、硫酸鋅 800g、硼酸1. 5kg、鉬酸銨50g和水500kg ；c)用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯 草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草 芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料腐植酸鈉3kg，紅 糖 50kg，蜂蜜 20kg 和 4000kg 水。二、發(fā)酵工藝a)啤酒酵母發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫 酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C -95°C滅菌30-40分鐘后待溫度降至30_35°C 時(shí)，加入啤酒酵母菌種，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在35°C，發(fā)酵42小時(shí)，得啤酒酵母 菌培養(yǎng)物，所述啤酒酵母菌種的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比為0. 1% ；b)嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫 酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C -95°C滅菌30-40分鐘后待溫度降至30_35°C 時(shí)，加入嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在 28°C，發(fā)酵36小時(shí)，得嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)物和糞腸球菌培養(yǎng)物，所述 嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比分別為 0. 08%,0. 01%和 0. 2% ；c)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵按所述配方將腐植酸鈉、紅糖、蜂蜜和水置入發(fā)酵罐中，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH為7-7. 5，加熱至溫度為85-95°C滅菌半小時(shí)，后待溫度降至30-35°C時(shí)，加入所述發(fā)酵工藝a) 和b)的培養(yǎng)物的混合物，再加入枯草芽孢桿菌菌種，攪拌后溫度控制在35°C，將發(fā)酵罐中 大氣壓抽負(fù)壓至0. 2個(gè)大氣壓，減壓發(fā)酵72小時(shí)得到成品。其中所述枯草芽孢桿菌的加入 量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草 芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基總量的重量百分比為0. 01%。 實(shí)施例2 一、培養(yǎng)基的制備a)用于好氧菌(啤酒酵母)發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母發(fā)酵的培養(yǎng)基，包含以下重量配比的原料蜂蜜10kg、紅糖40kg、磷 酸二氫鉀125g、磷酸氫二鉀125g、硫酸亞鐵8kg、硫酸錳800g、硫酸銅450g、硫酸鋅900g、硼 酸1kg、鉬酸銨50g和水500kg ；b)用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的 原料用于啤酒酵母發(fā)酵的培養(yǎng)基，包含以下重量配比的原料蜂蜜10kg、紅糖40kg、磷酸 二氫鉀125g、磷酸氫二鉀125g、硫酸亞鐵8kg、硫酸錳800g、硫酸銅450g、硫酸鋅900g、硼酸 lkg、鉬酸銨50g和水500kg ；c)用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā) 酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草 芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料腐植酸鈉3kg，紅 糖 45kg，蜂蜜 15kg 和 3000kg 水。二、發(fā)酵工藝a)啤酒酵母發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫 酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C _95°C滅菌后待溫度降至30-35°C時(shí)，加入啤酒 酵母菌種，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在35°C，發(fā)酵36小時(shí)，得啤酒酵母菌培養(yǎng)物，所 述啤酒酵母菌種的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比為0. 3% ；b)嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫 酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85°C _95°C滅菌后待溫度降至30-35°C時(shí)，加入嗜 酸乳桿菌菌種、沼澤紅假單胞菌菌種和糞腸球菌菌種，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制 在25°C，發(fā)酵42小時(shí)，得嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)物和糞腸球菌培養(yǎng)物，所 述嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比分別為 0. 2%,0. 01%禾P 0. 15%。c)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵按所述配方將腐植酸鈉、紅糖、蜂蜜和水置入發(fā)酵罐中，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH為 7-7. 5，加熱至溫度為85-95°C滅菌半小時(shí)，后待溫度降至30-35°C時(shí)，加入所述發(fā)酵工藝a) 和b)的培養(yǎng)物的混合物，再加入枯草芽孢桿菌菌種，攪拌后溫度控制在35°C，將發(fā)酵罐中 大氣壓抽負(fù)壓至0. 15個(gè)大氣壓減壓發(fā)酵84小時(shí)得到成品。其中所述枯草芽孢桿菌菌種的 加入量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基總量的重量百分比0. 03% .試驗(yàn)實(shí)施例實(shí)例1 益生菌微生物復(fù)合制劑在番茄上應(yīng)用效果試驗(yàn)1、材料與方法1. 1供試材料益生菌微生物復(fù)合制劑；番茄品種粉瑞達(dá).1. 2使用方法益生菌微生物復(fù)合制劑300倍清水稀釋備用。1. 3試驗(yàn)方法試驗(yàn)采取區(qū)組設(shè)計(jì)，即番茄設(shè)每67m2施三元素復(fù)合肥20kg分別加益生菌微生物復(fù)合制劑0. 1 (代號a)、0. 2 (代號b)、0. 3 (代號C)、0. 4 (代號d)、0. 5 (代號e) kg，與單施三元素復(fù)合肥作對照(ck)，共設(shè)6個(gè)處理，每處理3次重復(fù)。番茄4月1日播種， 小拱棚育苗，5月20日移栽，株距50cm，行距52cm，單株定植，地膜覆蓋栽培?；适┯?，在 蔬菜定植前20天大田開溝起壟，先溝施三元素復(fù)合肥，再沖施益生菌微生物復(fù)合制劑(稀 釋比為1 300)，然后復(fù)土起壟覆蓋地膜。2、結(jié)果與分析2. 1番茄施用益生菌微生物復(fù)合制劑對產(chǎn)量的影響結(jié)果表明，番茄小區(qū)產(chǎn)量以處理e最高，達(dá)564kg，不施用腐植液肥的田塊處理ck， 番茄產(chǎn)量最低，只有457kg，在三元素復(fù)合肥施用量相同的情況下，番茄施用益生菌微生物 復(fù)合制劑隨施用量增加產(chǎn)量有遞增趨勢；2. 2番茄施用益生菌微生物復(fù)合制劑對蔬菜抗病性的影響番茄施用益生菌微生物復(fù)合制劑后，從搭架綁蔓開始，表現(xiàn)葉色深綠，無病毒病和 早疫病，在番茄結(jié)果期沒發(fā)現(xiàn)裂果、畸型果，并抗衰老，采收時(shí)間加長，果色光亮，經(jīng)過營銷 商到試驗(yàn)田觀察，認(rèn)為市場將很受歡迎，而單施三元素復(fù)合肥的植株，在定植后25天出現(xiàn) 輕度病毒病，定植52天后出現(xiàn)較嚴(yán)重的早疫病，少量植株在結(jié)果期畸型果多，果表皮光澤 度不如其它處理。2. 3 討論試驗(yàn)結(jié)果表明，番茄施用益生菌微生物復(fù)合制劑能夠促進(jìn)作物生長，增強(qiáng)坑病性， 降低植保成本，提高產(chǎn)量和品質(zhì)，增加經(jīng)濟(jì)收入。從長遠(yuǎn)來看，能改善土壤，增加肥力，是一 種很有前途的農(nóng)用微生物復(fù)合制劑。實(shí)例2 益生菌微生物復(fù)合制劑在應(yīng)用于生豬飼養(yǎng)的效果試驗(yàn)1、試驗(yàn)材料與方法1. 1在基礎(chǔ)飼料中添加300倍稀釋的益生菌微生物復(fù)合制劑，進(jìn)行再次發(fā)酵；1.2選不同性別、平均體重在16士0.5公斤的仔豬60頭(分為A、B、C、D、E六組， 每組12頭)，試驗(yàn)周期為70天。各組基礎(chǔ)日糧相同，其中A、B、C、D組日糧分別添加5%、 10 %、15 %和20 %的益生菌微生物復(fù)合制劑發(fā)酵飼料并以300倍稀釋的益生菌微生物復(fù)合 制劑作為飲水飼喂，E組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)期防疫和飼料管理按豬場正常進(jìn)行。2、試驗(yàn)結(jié)果隨日糧中益生菌微生物復(fù)合制劑發(fā)酵飼料的增加，豬日增重呈增加趨勢，添加量 在15%以上各組日增重平均較對照組高。各組每公斤增重的飼料消耗均較對照組低，且隨 發(fā)酵飼料增加，每公斤增重的耗料量下降；各組每公斤增重的飼料成本均較對照組低，也隨 發(fā)酵飼料喂量的增加而降低。凡使用益生菌微生物復(fù)合制劑發(fā)酵飼料飼喂的，增重速度均明顯提高，平均每日每頭增重提高13. 1-29. 5 %，說明在其他條件相同情況下，使用益生菌 微生物復(fù)合制劑可以提高豬的生長速度，提前出欄，減少成本，單位時(shí)間的經(jīng)濟(jì)效益明顯提高。 從觀察到的情況看，使用益生菌微生物復(fù)合制劑飼養(yǎng)的7-10天以后，豬的毛色逐 漸光亮，并變得溫順，圈內(nèi)臭味明顯減輕，蒼蠅也減少。試驗(yàn)組豬沒有任何不正常反應(yīng)，沒有 患病，而對照組有時(shí)有輕微拉稀和上呼吸道感染。
權(quán)利要求
一種基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑的制備方法，其特征在于所述多種益生菌包括啤酒酵母菌、枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿、沼澤紅假單胞菌和菌糞腸球菌，所述制備方法包括培養(yǎng)基的制備和發(fā)酵工藝一、培養(yǎng)基的制備a)用于啤酒酵母菌發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母發(fā)酵菌的培養(yǎng)基，包含以下重量配比的原料蜂蜜50-200份、紅糖300-900份、磷酸二氫鉀1-5份、磷酸氫二鉀1-5份、硫酸亞鐵80-160份、硫酸錳5-20份、硫酸銅3-10份、硫酸鋅8-20份、硼酸8-40份、鉬酸銨0.5-1份和水5000-8000份；b)用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料蜂蜜50-200份、紅糖300-900份、磷酸二氫鉀1-5份、磷酸氫二鉀1-5份、硫酸亞鐵80-160份、硫酸錳5-20份、硫酸銅3-10份、硫酸鋅8-20份、硼酸8-40份、鉬酸銨0.5-1份和水5000-8000份；c)用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基包含以下重量配比的原料腐植酸鈉3-8份，紅糖50-90份，蜂蜜10-30份和水3000-5000份，二、發(fā)酵工藝a)啤酒酵母發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85℃-95℃滅菌30-40分鐘后待溫度降至30-35℃時(shí)，加入啤酒酵母菌種，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在30-40℃，發(fā)酵36-48小時(shí)，得啤酒酵母菌培養(yǎng)物，所述啤酒酵母菌種的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比為0.1％-0.5％；b)嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的發(fā)酵按所述配方將蜂蜜、紅糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸亞鐵、硫酸錳、硫酸銅、硫酸鋅、硼酸、鉬酸銨和水置入發(fā)酵罐中，85℃-95℃滅菌30-40分鐘后待溫度降至30-35℃時(shí)，加入嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌，充分?jǐn)嚢?0-60分鐘，將溫度控制在25-35℃，發(fā)酵36-48小時(shí)，得嗜酸乳桿菌培養(yǎng)物、沼澤紅假單胞菌培養(yǎng)物和糞腸球菌培養(yǎng)物，所述嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的加入量占其培養(yǎng)基總量的重量百分比分別為0.05％-0.4％、0.01％-0.2％和0.1％-0.5％；c)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵按所述配方將腐植酸鈉、紅糖、蜂蜜和水置入發(fā)酵罐中，加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH為7-7.5，加熱至溫度為85-95℃滅菌30-40分鐘，后待溫度降至30-35℃時(shí)，加入所述發(fā)酵工藝a)和b)的培養(yǎng)物的混合物，再加入枯草芽孢桿菌菌種，攪拌后溫度控制在30-40℃，將發(fā)酵罐中大氣壓抽負(fù)壓至0.1-0.3個(gè)大氣壓，發(fā)酵72-96小時(shí)得到成品，其中所述枯草芽孢桿菌的加入量占所述用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基總量的重量百分比分別為0.01％-0.05％，所述糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和啤酒酵母五種益生菌發(fā)酵的菌種的重量配比為1∶0.8-2.5∶0.8-1.2∶0.8-3.5∶1.5-3.0。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于多種益生菌發(fā)酵培養(yǎng)物的微生物復(fù)合制劑的制備方法，所述多種益生菌包括啤酒酵母菌、枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿、沼澤紅假單胞菌和菌糞腸球菌，所述制備方法包括培養(yǎng)基的制備和發(fā)酵工藝一、培養(yǎng)基的制備a)用于啤酒酵母菌發(fā)酵的培養(yǎng)基，b)用于嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵的培養(yǎng)基，c)用于啤酒酵母、嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌發(fā)酵后混合，再加入枯草芽孢桿菌菌種混合均勻后，再次發(fā)酵的培養(yǎng)基。二、發(fā)酵工藝a)啤酒酵母發(fā)酵，b)嗜酸乳桿菌、沼澤紅假單胞菌和糞腸球菌的發(fā)酵，c)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵。本發(fā)明的優(yōu)勢在于制品中活菌數(shù)量高，成品保存期長。
文檔編號C12N1/00GK101805698SQ20101014596
公開日2010年8月18日 申請日期2010年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日
發(fā)明者孫世璋, 袁歆 申請人:孫世璋;袁歆