專利名稱：用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法，具體為卷煙主流煙氣總粒相物(也稱煙氣冷凝物樣品)的制備方法，屬煙草及卷煙安全性評(píng)價(jià)技 術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
卷煙煙氣總粒相物樣品(也稱煙氣冷凝物樣品)的制備是卷煙主流煙氣生物學(xué)活 性檢測中重要的環(huán)節(jié)，在煙氣毒理學(xué)評(píng)價(jià)中，將煙氣冷凝物樣品用于細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)、細(xì) 胞毒性試驗(yàn)和微核試驗(yàn)等生物學(xué)活性檢測。目前文獻(xiàn)報(bào)道的用于生物活性檢測的煙氣樣品 制備方法有多種。國內(nèi)文獻(xiàn)[1]報(bào)道采用乙酸乙酯和細(xì)胞培養(yǎng)液來吸收捕集全部煙氣冷凝 物。國內(nèi)文獻(xiàn)[2]的方法是將收集在玻璃纖維濾片上的TPM用丙酮洗脫，洗脫液旋轉(zhuǎn)減壓 蒸發(fā)，提取物以干氮?dú)獯蹈?操作時(shí)溫度控制在40°C以下)，溶于二甲基亞砜，貯于-20°C 備用。國內(nèi)文獻(xiàn)[3]的方法是將收集20支卷煙TPM的濾片粉碎，置于燒杯中，加入200ml 二氯乙烷，25°C下浸泡過夜，置于調(diào)溫磁力攪拌儀上25°C下攪拌60min，過濾濾液于N2下吹 干，稱重后用二甲亞砜(DMSO)溶解，并定容至5ml，搖勻，得TPM原液，-80°C下保存。本實(shí)驗(yàn) 室收集煙氣總粒相物的方法文獻(xiàn)[4]為將劍橋?yàn)V片加入適量的丙酮浸泡過夜，將丙酮溶 液用濾紙過濾后，倒入蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將丙酮揮發(fā)成粘稠狀，再將其放入三角瓶中 置于50°C水浴鍋中將丙酮揮干，然后將三角瓶用錫箔紙封好口放置到-20°C冰箱中保存。 進(jìn)行致突變性檢測時(shí)取出根據(jù)所需濃度稱取干焦油用DMSO溶解。這些現(xiàn)有制備煙氣總粒 相物方法的過程均很繁雜。國外文獻(xiàn)[5-6]對煙氣冷凝物的制備采用二甲基亞砜，但沒有 報(bào)道具體操作過程。重要參考文獻(xiàn)1.謝劍平，劉惠民，朱茂祥等人，卷煙煙氣危害性指數(shù)研究，煙草科技，2009， 259(2) :5-23。2.劉寶法等人，不同類型煙草焦油致突變性的研究，中國煙草，1996，(3) :15_21。3.王琴美，蘭勤嫻，吳嘉彤等，部分國產(chǎn)烤煙型卷煙煙氣冷凝物的中型紅細(xì)胞毒性 試驗(yàn)，煙草科技，2007，238 (5)，41-43。4.夭建華、陳章玉、吳平艷等，卷煙煙氣的毒理學(xué)指標(biāo)與其重要有害成分之間的相 關(guān)性，煙草科技，2005，221 (12) 17-20。5. Doolittle D J, Bombick D W. Evaluation of the genotoxic and cytotoxicpotential of mainstream whole smoke and smoke condensate from a cigarettecontaining a novel carbon filter. Fundam Appl Toxicol,1997,39 (1) :11_7。6. Bombick B R,Murli H,Avalos J T,et al. Chemical and biological studies of anew cigarette that primarily heats tobacco. Part 2. In vitro toxicology of mainstreamsmoke condensate. Food Chem Toxicol,1998,36 (3) :183_190o

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，而提供一種簡單快速的用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法。本發(fā)明是在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，改進(jìn)點(diǎn)如下1、直接將捕集了卷煙主流煙氣總粒相物(TPM)的劍橋?yàn)V片加入有機(jī)溶劑二甲基 亞砜(DMS0)浸泡，超聲波提取20分鐘，用濾紙過濾后分裝到2ml凍存管中，保存于-70°C超 低溫冰箱中備用。2、有機(jī)溶劑二甲基亞砜(DMS0)的加入量按10mgTPM/ml進(jìn)行，一次加入，無需定容。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于操作步驟簡便，能真實(shí)反映出煙氣總粒相物的致突變性。


圖1為3種有機(jī)溶劑(二甲基亞砜、丙酮和二氯甲烷)提取TPM后，采用Ames試 驗(yàn)平板摻入法檢測同一樣品致突變性的結(jié)果比較圖。
具體實(shí)施例方式1、煙氣總粒相物的3個(gè)制備方法將卷煙在恒溫恒濕箱中平衡48小時(shí)，選取重量和吸阻一致的卷煙。按國標(biāo)方法， 分別在吸煙機(jī)上抽吸20支卷煙，同一個(gè)樣品抽吸三次，濾片標(biāo)為1、2、3。第1個(gè)劍橋?yàn)V片按 10mgTPM/ml加入DMS0浸泡(劍橋?yàn)V片吸煙前進(jìn)行稱重)，2、3個(gè)不同的提取方法檢測煙氣總粒相物的致突變性比較研究將3個(gè)不同的提取方法得到的TPM樣品采用Ames試驗(yàn)平板摻入法，菌株采用市場 購買的 M0LT0X AMES ASSAY STDisc TA98, TPM 濃度為 25、50、75、100、125、250、500ug/皿。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表見1。 表1三種有機(jī)溶劑提取TPM檢測突變性結(jié)果比較
3.結(jié)果分析由表1可看出本試驗(yàn)采用的三個(gè)有機(jī)溶劑提取的TPM，其中用DMS0直接提取的 最為完全。用DMS0直接提取的卷煙煙氣總粒相物的致突變性明顯高于用丙酮和二氯甲烷 提取的。所以本實(shí)驗(yàn)室采用DMS0直接提取卷煙煙氣總粒相物的方法，更好的用于檢測卷煙 煙氣總粒相物的致突變性。
權(quán)利要求
一種用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法，在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，其特征在于改進(jìn)點(diǎn)如下a.直接將捕集了卷煙主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片加入有機(jī)溶劑二甲基亞砜浸泡，超聲波提取20分鐘，用濾紙過濾后分裝到2ml凍存管中，保存于-70℃超低溫冰箱中備用；b.有機(jī)溶劑二甲基亞砜的加入量按10mgTPM/ml進(jìn)行，一次加入，無需定容。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法，屬煙草及卷煙安全性評(píng)價(jià)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的用于生物檢測的卷煙主流煙氣總粒相物樣品的制備方法，是在現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，其改進(jìn)點(diǎn)如為a.直接將捕集了卷煙主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片加入有機(jī)溶劑二甲基亞砜浸泡，超聲波提取20分鐘，用濾紙過濾后分裝到2ml凍存管中，保存于-70℃超低溫冰箱中備用；b.有機(jī)溶劑二甲基亞砜的加入量按10mgTPM/ml進(jìn)行，一次加入，無需定容。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于操作步驟簡便，能真實(shí)反映出煙氣總粒相物的致突變性。
文檔編號(hào)C12Q1/24GK101870997SQ20101015407
公開日2010年10月27日 申請日期2010年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月23日
發(fā)明者唐萍, 徐濟(jì)倉, 李雪梅, 繆恩銘, 耿永勤, 黃海濤 申請人:云南煙草科學(xué)研究院