專(zhuān)利名稱：一種制備氯吡格雷手性中間體(s)-鄰氯苯甘氨酸甲酯的化學(xué)-酶法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物催化水解制備手性藥物中間體技術(shù)，具體是一種制備氯吡格雷手 性中間體(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯的化學(xué)-酶法。
背景技術(shù)：
氯吡格雷(Clopidogrel)，化學(xué)名為(S)-a-(2_氯苯基)_4，5，6，7_ 四 氫噻吩并[3,2-c]吡啶-5 (4H)-乙酸甲酯((S) - a - (2-chlorophenyl) -4,5,6, 7-tetrohydrothieno [3，2-c]pyridine_5 (4H)-acetic acid methylester)。氯口比格雷由日 本第一制藥和法國(guó)賽洛非(Sanofi)公司共同開(kāi)發(fā)，1998年在美國(guó)上市。氯吡格雷在體外 無(wú)生物活性，口服后經(jīng)肝細(xì)胞色素P450酶系轉(zhuǎn)化為活性代謝物?；钚源x物與血小板膜上 的二磷酸腺苷(ADP)受體不可逆結(jié)合，抑制ADP誘導(dǎo)的血小板膜表面纖維蛋白原受體(GP Ilb/IIIa)活化，導(dǎo)致纖維蛋白原無(wú)法與該受體發(fā)生粘連而抑制血小板聚集。氯吡格雷臨床 上主要用于預(yù)防缺血性腦卒中、心肌梗死及外周血管病等。
CJ氯吡格雷的制備方法主要有兩條技術(shù)路線1)合成氯吡格雷消旋體，然后采用樟 腦磺酸等手性拆分劑拆分得到(S)-對(duì)映體；2)以3-噻吩乙醇為原料，與(S)-鄰氯苯甘氨 酸甲酯經(jīng)磺化、取代、合環(huán)、得到目標(biāo)產(chǎn)物。目前，主要采用第二條技術(shù)路線。(S)_鄰氯苯甘氨酸及其甲酯的制備方法包括1)生物催化拆分。以微生物酰胺酶 為催化劑水解消旋鄰氯苯甘氨酸酰胺(W0 0187819，EP1770166)制備(S)-鄰氯苯甘氨酸。 由于酰胺溶解度低，酰胺酶需要發(fā)酵產(chǎn)生限制了該法的規(guī)?；瘧?yīng)用；2)化學(xué)拆分。以D-樟 腦磺酸為拆分劑，拆分消旋鄰氯苯甘氨酸，收率僅為理論值的42% (US2004/0176637A1)。 以L-酒石酸為拆分劑拆分消旋鄰氯苯甘氨酸甲酯，得到(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯-L-酒石 酸鹽，進(jìn)一步用NaHCOj 鹽得到(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯(TO 2006/003671 A1，)。存在的 問(wèn)題是化學(xué)拆分后的(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯的光學(xué)純度不高(ee < 98% )，影響終端產(chǎn)物 氯吡格雷的光學(xué)純度。欲使氯吡格雷的光學(xué)純度符合標(biāo)準(zhǔn)，必須增加重結(jié)晶步驟。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的制備(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯的化學(xué)酶法。以(R， S)_鄰氯苯甘氨酸為原料，采用?；瘎┭苌玫?R，S)-N_苯乙酰鄰氯苯甘氨酸。以固定 化酶為生物催化劑，在水介質(zhì)中對(duì)映選擇性催化(R，S)-N_苯乙酰鄰氯苯甘氨酸為(S)_鄰 氯苯甘氨酸、苯乙酸和(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸。(S)-鄰氯苯甘氨酸在甲醇中轉(zhuǎn)化為 (S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽，然后解鹽形成(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯。(R)-N-苯乙酰鄰 氯苯甘氨酸與有機(jī)酸共熔消旋為(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸用于循環(huán)拆分。技術(shù)路線如下 本發(fā)明包括下列步驟1)、(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸制備在-10-10°C和PH8-10條件下，將(R， S)-鄰氯苯甘氨酸攪拌溶解在NaOH溶液中，在冰浴條件下滴加酰化劑，其中(R，S)-鄰氯苯 甘氨酸、NaOH及?；瘎┑哪柋葹? 2-3 1_3 ；滴加完畢后，室溫下反應(yīng)6_24h ；反應(yīng)完 成后用鹽酸調(diào)PH1-2，攪拌下析出(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸固體；2)、(R，S)-N_苯乙酰鄰氯苯甘氨酸酶催化水解在20-40°C和pH8-10條件下， 每升水中0. l-o. 5mol的(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸在固定化青霉素?；复呋?水解10-20h;其中，固定化青霉素?；概c(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸的質(zhì)量比為 1 3-10 ；反應(yīng)完成后，濃鹽酸調(diào)pHl-2，析出苯乙酸和(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸；濾液 濃縮，調(diào)等電點(diǎn)析出(S)_鄰氯苯甘氨酸；3)、(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽制備在0_5°C下，將(S)_鄰氯苯甘氨酸加入無(wú) 水甲醇中，滴加S0C12，滴加完畢，在室溫下反應(yīng)5-24h;(S)_鄰氯苯甘氨酸、S0C12*無(wú)水甲 醇的摩爾比為1 2-4 30-60;反應(yīng)完成后60°C溫度下減壓蒸餾，得到(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽；4)、(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯制備0-50°C溫度下，每升pH8. 0-10的堿性溶液中攪 拌加入0. 03-1.0mol(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽，用與堿性溶液等體積的012(12萃??；有 機(jī)層用水洗2-4次，無(wú)水Na2S04干燥，在60°C下減壓蒸餾除去CH2C12，得到(S)-鄰氯苯甘氨 酸甲酯；5) (R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸消旋化(R)-N_苯乙酰鄰氯苯甘氨酸與苯乙酸按 1 ；1摩爾比混合，在150-200°C下共熔消旋10-60分鐘，得到(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨 酸，用于步驟2)開(kāi)始的循環(huán)拆分。本發(fā)明的有益效果與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提出的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)1)固定化青霉素酰化酶高度 的對(duì)映選擇性，保證了(S)-鄰氯苯甘氨酸的高光學(xué)活性。以高光學(xué)活性(s)-鄰氯苯甘氨 酸甲酯為手性中間體，革除了氯吡格雷的重結(jié)晶步驟，簡(jiǎn)化了氯吡格雷的制備工藝；2)以 酶反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的苯乙酸作為(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸消旋化的有機(jī)酸，不僅有效 利用了反應(yīng)副產(chǎn)物，而且消旋時(shí)間短，消旋率和消旋收率高；3)無(wú)效對(duì)映體的循環(huán)拆分和 固定化青霉素?；傅难h(huán)使用，大大降低了過(guò)程成本。
具體實(shí)施例方式以下是以固定化青霉素?；笧樯锎呋瘎?，通過(guò)對(duì)映選擇性水解制備(S)_鄰 氯苯甘氨酸，(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯化和解鹽制備(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯，以及(R)-N-苯 乙酰鄰氯苯甘氨酸消旋化的實(shí)施例，但本發(fā)明并不限于所列出的幾個(gè)實(shí)例。實(shí)施例1 : (R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸制備將74. 2g(0. 4mol) (R，S)-鄰氯苯甘氨酸和 48g NaOH(l. 2mol)加入 700ml 水中，攪 拌溶解。在冰浴條件下滴加64ml(0.48mol)苯乙酰氯(或苯乙酸、或苯乙酸甲酯、或苯乙酰 溴)。滴加完畢后，室溫下反應(yīng)過(guò)夜。用鹽酸調(diào)PH1-2，攪拌下析出(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯 甘氨酸固體。抽濾，烘干得(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸115.6g，收率95%。實(shí)施例2 (R，S) -N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸酶催化水解將91.2g(0. 3mol) (R，S)_N_苯乙酰鄰氯苯甘氨酸加入600ml水中，用氨水調(diào) PH8.0。加入18.3g固定化青霉素?；?，30°C下攪拌反應(yīng)12h。抽濾除去固定化青霉素酰 化酶。濾液用濃鹽酸調(diào)PH1-2，抽濾，固體用熱水洗滌，烘干得(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸 44. 4g，收率97%。濾液60°C下減壓濃縮，調(diào)等電點(diǎn)析出固體。固體用無(wú)水乙醇洗滌，烘干， 得12. 6g(S)_鄰氯苯甘氨酸，收率90%，eel00%。實(shí)施例3 :(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽制備18. 6g(0. lmol) (S)_鄰氯苯甘氨酸加入200ml無(wú)水甲醇中，冰浴(0-5°C )下滴加 S0C12 14.5ml。滴加完畢，室溫下反應(yīng)5h。60°C下減壓蒸干，真空干燥得23. lg (S)-鄰氯苯 甘氨酸甲酯鹽酸鹽，收率98 %。實(shí)施例4 :(S)_鄰氯苯甘氨酸甲酯制備將11.8g(0. 05mol) (S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽攪拌加入到50mlpH8. 0-10的 NaHC03 溶液(或選自 pH8. 0-10 的 NaOH、KOH、Na2C03、NaHC03、或 NH3 溶液)中，加入 50ml CH2C12，萃取，有機(jī)層用水洗3次，無(wú)水Na2S04干燥，60°C下減壓蒸干得淡黃色液體(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯9. 8g，收率98%。實(shí)施例5 (R) -N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸消旋化30. 4g(0. lmol) (R) _N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸與13. 6g苯乙酸(0. lmol)混合，油浴 加熱至170°C，保溫20min，取樣溶于甲醇中，測(cè)旋光度為0，消旋率100%。共熔消旋混合物 用熱環(huán)己烷萃取3次(200ml X 3)除去苯乙酸，固體烘干得(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸 29g，消旋收率95%。
權(quán)利要求
一種制備抗血栓藥物氯吡格雷手性中間體(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯的化學(xué)-酶法，包括下列步驟1)、(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸制備在-10-10℃和pH8-10條件下，將(R，S)-鄰氯苯甘氨酸攪拌溶解在NaOH溶液中，在冰浴條件下滴加?；瘎?，其中(R，S)-鄰氯苯甘氨酸、NaOH及?；瘎┑哪柋葹?∶2-3∶1-3；滴加完畢后，室溫下反應(yīng)6-24h；反應(yīng)完成后用鹽酸調(diào)pH1-2，攪拌下析出(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸固體；2)、(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸酶催化水解在20-40℃和pH8-10條件下，每升水中0.1-0.5mol的(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸在固定化青霉素?；复呋滤?0-20h；其中，固定化青霉素?；概c(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸的質(zhì)量比為1∶3-10；反應(yīng)完成后，濃鹽酸調(diào)pH1-2，析出苯乙酸和(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸；濾液濃縮，調(diào)等電點(diǎn)析出(S)-鄰氯苯甘氨酸；3)、(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽制備在0-5℃下，將(S)-鄰氯苯甘氨酸加入無(wú)水甲醇中，滴加SOCl2，滴加完畢，在室溫下反應(yīng)5-24h；(S)-鄰氯苯甘氨酸、SOCl2和無(wú)水甲醇的摩爾比為1∶2-4∶30-60；反應(yīng)完成后60℃溫度下減壓蒸餾，得到(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽；4)、(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯制備0-50℃溫度下，每升pH8.0-10的堿性溶液中攪拌加入0.03-1.0mol(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽，用與堿性溶液等體積的CH2Cl2萃取；有機(jī)層用水洗2-4次，無(wú)水Na2SO4干燥，在60℃下減壓蒸餾除去CH2Cl2，得到(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯；5)(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸消旋化(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸與苯乙酸按1；1摩爾比混合，在150-200℃下共熔消旋10-60分鐘，得到(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸，用于步驟2)開(kāi)始的循環(huán)拆分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備抗血栓藥物氯吡格雷手性中間體(S)-鄰氯苯甘氨酸甲 酯的化學(xué)-酶法，其特征是步驟1)中的?；瘎┻x自苯乙酸、苯乙酸甲酯、苯乙酰氯或苯乙 酰溴。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備抗血栓藥物氯吡格雷手性中間體(S)-鄰氯苯甘氨酸 甲酯的化學(xué)_酶法，其特征是步驟4)中的堿性溶液選自pH8. 0-10的NaOH、KOH、Na2C03> NaHCO3 或 NH3 溶液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種制備抗血栓藥物氯吡格雷手性中間體(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯的化學(xué)-酶法。該方法以(R，S)-鄰氯苯甘氨酸為原料，利用?；瘎┭苌鸀?R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸。以固定化青霉素?；笧樯锎呋瘎?，在水介質(zhì)中對(duì)映選擇性催化(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸為(S)-鄰氯苯甘氨酸、苯乙酸和(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸。(S)-鄰氯苯甘氨酸在甲醇中轉(zhuǎn)化為(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽，然后解鹽形成(S)-鄰氯苯甘氨酸甲酯。(R)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸與有機(jī)酸共熔消旋為(R，S)-N-苯乙酰鄰氯苯甘氨酸，用于循環(huán)拆分。方法具有收率和光學(xué)純度高，環(huán)境友好的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12P13/00GK101864464SQ20101015980
公開(kāi)日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日
發(fā)明者夏仕文, 方國(guó)蘭 申請(qǐng)人:重慶凱樂(lè)爾生物催化技術(shù)有限公司