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      一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑的制作方法

      文檔序號(hào):583333閱讀:2178來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑和檢測(cè)方法,尤其是一種適應(yīng)用于從植物 根系土壤的檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑。
      背景技術(shù)
      嗜鐵菌作為一類重要的植物根際促生菌,主要通過(guò)分泌嗜鐵素,螯合環(huán)境中的鐵 離子,增加土壤中鐵的生物有效性,滿足微生物和植物生長(zhǎng)需要,促進(jìn)植物生長(zhǎng);同時(shí)使環(huán) 境中的鐵的濃度進(jìn)一步降低,病原微生物由于缺乏鐵而不能生長(zhǎng)繁殖,進(jìn)而達(dá)到控制植物 病害的目的。目前嗜鐵素的檢測(cè)及嗜鐵菌的篩選主要采用通用CAS檢測(cè)平板法。CAS藍(lán)色 檢測(cè)液是由鉻天青(Chrome AzurolSulphonate, CAS)、溴化十六烷基三甲銨(Hexadecyltr imethy 1 -ammoniumbromide,HDTMA)和鐵離子組成的一種復(fù)合物,呈亮藍(lán)色。當(dāng)藍(lán)色檢測(cè)平 板中的鐵離子被微生物分泌的嗜鐵素奪走時(shí),即可在微生物生長(zhǎng)的菌落周圍形成橘黃色暈 圈。CAS檢測(cè)平板法可用于大多數(shù)細(xì)菌和真菌分泌的嗜鐵素檢測(cè),適合于初步篩選產(chǎn)嗜鐵 素的菌株,還可根據(jù)菌落周圍暈圈的大小初步判定產(chǎn)嗜鐵素的能力大小,該方法相對(duì)比較 簡(jiǎn)單、方便。但是,該方法檢測(cè)平板制作煩瑣,且檢測(cè)劑使用量大。雙層平板法,下層為通用 CAS檢測(cè)平板,上層為相應(yīng)的微生物固體培養(yǎng)基,下層為通用CAS檢測(cè)平板,可以解決微生 物生長(zhǎng)限制的問(wèn)題,但制作步驟煩瑣。Milagres等對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了改良,將檢測(cè)平板一分 為二,一部分用于培養(yǎng)待測(cè)菌,另一部分用于檢測(cè)嗜鐵素的產(chǎn)生。經(jīng)改良的檢測(cè)平板可用于 所有微生物嗜鐵素的檢測(cè),然而,該方法耗時(shí)太長(zhǎng)(需培養(yǎng)15天左右),待培養(yǎng)物長(zhǎng)滿培養(yǎng) 用培養(yǎng)基,方可查看結(jié)果,而且一個(gè)平板僅限于對(duì)一個(gè)分離物的檢測(cè)。

      發(fā)明內(nèi)容
      為了克服上述技術(shù)缺點(diǎn),本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑和檢測(cè) 方法,縮短檢測(cè)時(shí)間。為達(dá)到上述目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案是按重量比,含有0.0057% -0. 0059% 鉻天青 s、0. 0070% -0. 0074% HDTMA,2. 79% -3. 19%哌嗪-1,4-二乙磺酸(Piperazine-1, 4-bis(2-ethanesulfonic acid), PIPES) ,0. 07% _0· 11% FeCl3 · 6Η20,0. 49% _0· 89%瓊脂粉。由于在檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中使用了 0. 49% -0. 89%的瓊脂粉作為凝固劑,低 濃度的凝固劑使微生物產(chǎn)生的嗜鐵素迅速擴(kuò)散,縮短檢測(cè)時(shí)間。本發(fā)明設(shè)計(jì)了,1升重量為IOlOg的檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中含有58. 5-60. 5mg 鉻天青 S、70. 9-74. 9mg HDTMA,28. 24-32. 24mg 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1, 4-bis(2-ethanesulfonic acid),PIPES)、0· 8-1. 2mM FeCl3 · 6H20、5_9g 瓊脂粉。由于在1升重量為IOlOg的檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中使用了 5_9g瓊脂粉作為凝 固劑,低濃度的凝固劑使微生物產(chǎn)生的嗜鐵素迅速擴(kuò)散,縮短檢測(cè)時(shí)間。四

      附圖為本發(fā)明的實(shí)施例一的1小時(shí)后的顯色結(jié)果示意圖。
      具體實(shí)施例方式本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施例,按重量比,檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中含有 0. 0057 % 鉻天青 S、0. 0070 % HDTMA、2. 79 % 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1, 4-bis(2-ethanesulfonic acid),PIPES)、0· 07% FeCl3 · 6Η20、0· 49%瓊脂粉。本發(fā)明的第二個(gè)實(shí)施例,按重量比,檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中含有 0. 0059 % 鉻天青 S、0. 0074 % HDTMA、3. 19 % 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1, 4-bis(2-ethanesulfonic acid), PIPES) ,0. 11% FeCl3 · 6Η20、0· 89%瓊脂粉。本發(fā)明的第三個(gè)實(shí)施例,按重量比,檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中含有 0. 0058 % 鉻天青 S、0. 0072 % HDTMA、3. 10 % 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1, 4-bis(2-ethanesulfonic acid),PIPES)、0· 09% FeCl3 · 6Η20、0· 61%瓊脂粉。本發(fā)明的第四個(gè)實(shí)施例,以1升重量為IOlOg為例,含有60. 5mg鉻天青S、72.9mg HDTMA、30. 24mg 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1,4_bis (2-ethanesulfonic acid), PIPES)、ImM FeCl3 · 6H20(溶于 IOmL IOmMHCl)、7g 瓊脂粉。本發(fā)明的第五個(gè)實(shí)施例,以1升重量為IOlOg為例,含有58. 5mg鉻天青S、70.9mg HDTMA、28. 24mg 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1,4_bis (2-ethanesulfonic acid), PIPES)、0· 8mM FeCl3 · 6H20(溶于 IOmL IOmMHCl)、5g 瓊脂粉。本發(fā)明的第六個(gè)實(shí)施例,以1升重量為IOlOg為例,含有62. 5mg鉻天青S、74.9mg HDTMA、32. 24mg 哌嗪 _1,4_ 二 乙磺酸(Piperazine-1,4_bis (2-ethanesulfonic acid), PIPES)、1. 2mM FeCl3 · 6H20(溶于 IOmL IOmMHCl)、9g 瓊脂粉。先將微生物(已分離獲得的微生物或平板稀釋法分離的微生物平板)接種于最適 培養(yǎng)基中,等培養(yǎng)好后,使用1. 5-2mL將檢測(cè)劑覆蓋一薄層于培養(yǎng)物上,15分鐘內(nèi)即可看到 覆蓋層上顏色的變化。顯色后,用滅菌牙簽穿過(guò)覆蓋層將產(chǎn)生暈圈的菌落挑出,接種于相應(yīng) 液體培養(yǎng)基進(jìn)行振蕩培養(yǎng)后接種于相應(yīng)的固體平板上。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)1、檢測(cè)劑中低濃度的凝固劑便于微生物產(chǎn)生的嗜鐵素迅速擴(kuò)散,并縮短顯色時(shí)間,以快速檢測(cè)出平板中微生物產(chǎn)生的嗜鐵素。2、而且只需在培養(yǎng)好的微生物平板上覆蓋一薄層檢測(cè)劑,既滿足了微生物生長(zhǎng)的 需求,減少了檢測(cè)劑的用量,同時(shí)還便于目標(biāo)分離物的挑取以純化培養(yǎng)。3、不僅能簡(jiǎn)化CAS檢測(cè)平板制作的步驟,而且還能以少量的檢測(cè)液快速檢測(cè)出微 生物產(chǎn)生的嗜鐵素,并篩選出平板中的嗜鐵菌。
      權(quán)利要求
      一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑;其特征是按重量比,含有0.0057%-0.0059%鉻天青S、0.0070%-0.0074%HDTMA、2.79%-3.19%哌嗪-1,4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid),PIPES)、0.07%-0.11% FeCl3·6H2O、0.49%-0.89%瓊脂粉。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑;其特征是1升重量為IOlOg的檢 測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑中含有58. 5-60. 5mg鉻天青S、70. 9-74. 9mgHDTMA、28. 24-32. 24mg哌 嗪-1,4-二 乙磺酸(Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid), PIPES)、0. 8—1. 2mM FeCl3 · 6H20、5-9g 瓊脂粉。
      全文摘要
      一種檢測(cè)嗜鐵細(xì)菌的檢測(cè)劑,按重量比,含有0.0057%-0.0059%鉻天青S、0.0070%-0.0074%HDTMA、2.79%-3.19%哌嗪-1,4-二乙磺酸(Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid),PIPES)、0.07%-0.11%FeCl3·6H2O、0.49%-0.89%瓊脂粉;由于低濃度的凝固劑使微生物產(chǎn)生的嗜鐵素迅速擴(kuò)散,因此縮短檢測(cè)時(shí)間。
      文檔編號(hào)C12Q1/04GK101805778SQ201010163639
      公開(kāi)日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2010年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月28日
      發(fā)明者余賢美, 周廣芳, 沈廣寧, 艾呈祥 申請(qǐng)人:山東省果樹(shù)研究所
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