專利名稱：一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠定性或定量檢測空氣中白僵 菌分生孢子的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
白僵菌是重要的昆蟲病原真菌，目前世界上發(fā)現(xiàn)死于真菌病的昆蟲中，白僵病占 20%以上。資料顯示白僵菌可寄生15個目700多種昆蟲及螨類，寄主范圍非常廣泛，所以 在環(huán)境中白僵菌的分生孢子自然繁殖量大；另外，白僵菌也是一種重要的微生物農(nóng)藥，通過 人工繁殖釋放后也會造成環(huán)境中白僵菌分生孢子的局部驟增和擴散。白僵菌的分生孢子形 成于昆蟲體表，容易脫落，且數(shù)量多，重量輕，容易隨風(fēng)傳播，由于空氣中大量散布的白僵菌 分生孢子可污染桑園或直接擴散到蠶室內(nèi)感染家蠶，導(dǎo)致近年來蠶桑主產(chǎn)區(qū)頻繁出現(xiàn)蠶白 僵病大范圍的爆發(fā)，給養(yǎng)蠶農(nóng)戶帶來巨大的經(jīng)濟損失，嚴(yán)重制約著蠶桑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此監(jiān) 測蠶區(qū)空氣中白僵菌分生孢子污染和擴散情況，及時采取相應(yīng)對策，對于預(yù)防蠶白僵病的 發(fā)生具有重要意義。在實驗室條件下白僵菌通過接種的方法可以在許多培養(yǎng)基上培養(yǎng)，但室外環(huán)境復(fù) 雜，微生物種類多，需要一種能采集和培養(yǎng)白僵菌的選擇性培養(yǎng)基，以檢測空氣中白僵菌分 生孢子的污染和擴散情況。目前用于監(jiān)測空氣中白僵菌分生孢子的方法尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可采集和檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，該培 養(yǎng)基能夠定性或定量檢測空氣中白僵菌分生孢子，能有效抑制雜菌生長，易于觀察菌落特 征，具有成本低，制作簡單等特點。能應(yīng)用于養(yǎng)蠶區(qū)域?qū)Π捉┚稚咦游廴竞蛿U散的檢 測。本發(fā)明提供的一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，制備配方如下黃豆芽 100-250g,蔗糖 10-25g,鏈霉素 0. 1-0. 5g，孟加拉紅 0. 1-0. 5g，瓊脂 15_20g，加水至 1000mL, 調(diào)節(jié)pH值為8. 0-11.0。本發(fā)明提供的一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，通過以下方法制備1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取配方所述質(zhì)量，加水至990mL，煮 沸40分鐘，雙層紗布過濾；2)濾液中加入配方所述質(zhì)量的蔗糖、孟加拉紅、瓊脂，煮沸后補足水量至990mL ；3)放入高壓滅菌鍋中，壓強1. 035X10sPa，溫度121°C 士 1°C，保持20_30分鐘后， 自然冷卻；4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55°C 士5°C時，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的相應(yīng)質(zhì)量百 分比濃度的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)pH值為8. 0-11. 0。本發(fā)明提供的一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基的使用方法為，使用時將 培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)皿中，暴露在空氣中10-60分鐘后，25°C -30°c培養(yǎng)3天即可根據(jù)菌落情況檢測出空氣中白僵菌分生孢子污染和擴散情況。本發(fā)明提供的一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基主要優(yōu)點如下1、本發(fā)明的培養(yǎng)基具有適合白僵菌生長的必需營養(yǎng)成份，在培養(yǎng)基中添加抗生素 和孟加拉紅不僅能夠抑制細(xì)菌和放線菌的生長，而且能夠抑制真菌菌落擴散，從而避免了 某些氣生性強的霉菌菌落的蔓延。同時提供的堿性條件可有效抑制非目的菌的生長。2、本發(fā)明的培養(yǎng)基加入孟加拉紅后，整個培養(yǎng)基顏色呈淡粉紅色，白僵菌菌落背 面呈鮮紅色，易于鑒別。3、本發(fā)明的培養(yǎng)基配方無特殊原料，容易取得，制備簡單，使用方便，無需專門的 技術(shù)培訓(xùn)，易于推廣應(yīng)用。
具體實施例方式
具體實施例方式實施例1:配方黃豆芽100g，蔗糖25g，鏈霉素0. 5g，孟加拉紅0. 5g，瓊脂20g，加水至 1000mL。制備方法1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取100g，加水至990mL，煮沸40分鐘， 雙層紗布過濾；2)濾液中加蔗糖25g，孟加拉紅0. 5g，瓊脂20g，煮沸后補足水量至990mL ；3)放入高壓滅菌鍋中，壓強1. 035X10sPa，溫度121 °C 士 1°C，保持20-30分鐘，自 然冷卻；4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55°C 士5°C時，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的質(zhì)量百分比 濃度為5%的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)最終pH值為8. 0。實施例2 配方黃豆芽150g，蔗糖15g，鏈霉素0. 3g，孟加拉紅0. 3g，瓊脂18g，加水至 1000mL。制備方法1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取150g，加水至990mL，煮沸40分鐘， 雙層紗布過濾；2)濾液中加蔗糖15g，孟加拉紅0. 3g，瓊脂18g，煮沸后補足水量至990mL ；3)放入高壓滅菌鍋中，壓強1. 035X10sPa，溫度121 °C 士 1°C，保持20-30分鐘，自 然冷卻；4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55°C 士5°C時，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的質(zhì)量百分比 濃度為3%的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)最終pH值為9. 0。實施例3:配方黃豆芽250g，蔗糖10g，鏈霉素0. lg，孟加拉紅0. lg，瓊脂15g，加水至 1000mL。制備方法1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取250g，加水至990mL，煮沸40分鐘，雙層紗布過濾；2)濾液中加蔗糖10g，孟加拉紅0. lg，瓊脂15g，煮沸后補足水量至990mL ；3)放入高壓滅菌鍋中，壓強1. 035X10sPa，溫度121 °C 士 1°C，保持20-30分鐘，自 然冷卻；4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55°C 士5°C時，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的質(zhì)量百分比 濃度為的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)最終pH值為11.0。
權(quán)利要求
一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，其特征在于，制備配方如下黃豆芽100-250g，蔗糖10-25g，鏈霉素0.1-0.5g，孟加拉紅0.1-0.5g，瓊脂15-20g，加水至1000mL，調(diào)節(jié)pH值為8.0-11.0，通過以下方法制備1)取新鮮的黃豆芽，洗凈后晾干表面水分，稱取配方所述質(zhì)量，加水至990mL，煮沸40分鐘，雙層紗布過濾；2)濾液中加入配方所述質(zhì)量的蔗糖、孟加拉紅、瓊脂，煮沸后補足水量至990mL；3)放入高壓滅菌鍋中，壓強1.035×105Pa，溫度121℃±1℃，保持20-30分鐘后，自然冷卻；4)滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至55℃±5℃時，990mL培養(yǎng)基加入剛配制的相應(yīng)質(zhì)量百分比濃度的鏈霉素溶液10mL，調(diào)節(jié)pH值為8.0-11.0。
2.一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基的應(yīng)用，將培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)皿中，暴露在 空氣中10-60分鐘后，25°C-30°C培養(yǎng)3天即可根據(jù)菌落情況檢測出空氣中白僵菌分生孢子 污染和擴散情況。
全文摘要
一種檢測空氣中白僵菌分生孢子的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由黃豆芽、蔗糖、鏈霉素、孟加拉紅、瓊脂和水制成，pH值為8.0-11.0。該培養(yǎng)基能夠定性或定量檢測空氣中白僵菌分生孢子，能有效抑制雜菌生長，易于觀察菌落特征，具有成本低，制作簡單等特點。能應(yīng)用于養(yǎng)蠶區(qū)域?qū)Π捉┚稚咦游廴竞蛿U散的檢測。
文檔編號C12Q1/06GK101851662SQ20101020638
公開日2010年10月6日 申請日期2010年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月23日
發(fā)明者萬永繼, 劉光英, 周圍, 張冉, 金志雄, 高紅 申請人:西南大學(xué)