專利名稱：R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及精細(xì)化工品的生物耦合制備方法，特別是一種R(-)_4-氰基-3-羥基 丁酸乙酯的制備方法。
背景技術(shù)：
R(_)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酉旨(R(-)-ethyl 4-cyano-3-hydroxybutyrate)是 一個非常重要的手性化合物，它是合成HMG-CoA還原酶抑制劑Atorvastatin (Lipitor ) 的中間體，HMG-CoA還原酶抑制劑可以控制膽固醇的生物合成。它還是合成L-Carnitine 和(R)-4-amino-3-hydroxybutyric acid(GABOB)的中間體。L-Carnitine 是運送長鏈 脂肪酸通過細(xì)胞膜進(jìn)入粒線體代謝，以產(chǎn)生能量的運輸工具，它常作為營養(yǎng)補充品供運 動員用，也常見于嬰幼兒的營養(yǎng)品中。(R)-4-amino-3-hydroxybutyric acid(GABOB)是 y-aminobutyric acid的收縮劑，該類藥物可以用于控制一些臨床反應(yīng)，如精神分裂癥、癲 癇癥等。目前文獻(xiàn)報道的合成路徑有生物法和化學(xué)法。文獻(xiàn)報道的生物法合成4-氰 基-3-羥基丁酸乙酯是通過水解酶或腈水解酶選擇性水解前手性二氰化合物得到目標(biāo)產(chǎn) 物，這些方法所得產(chǎn)物ee值達(dá)不到要求，且條件苛刻(Trtrahedron =Asymmetry (1992), 3(12)，1547-1550 ；Synthesis (2001)，(12)，1866-1872)。W03106415 報道了一種以表氯醇 為原料酶法合成R(-)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的方法。該法得到的產(chǎn)物收率46%，ee 值99%以上，然而在該方法中，中間產(chǎn)物4-氰基-3-羥基丁酸需重結(jié)晶處理，工藝復(fù)雜，且 所用腈水解酶價格昂貴，沒有工業(yè)品出售，導(dǎo)致該方法不能實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)?；瘜W(xué)法以手 性3-羥基-γ -丁內(nèi)酯為原料，以醋酐或乙酰氯為?；瘎?，開環(huán)后再氰化得到目標(biāo)產(chǎn)物，這 些方法收率較高(52-59% )，但所用原料手性3-羥基_ Y _ 丁內(nèi)酯不易得，限制了其工業(yè) 化應(yīng)用(Tetrahedron =Asymmetry (2005)，16,2717-2721 ；W02002096915 ；W02004031131)。 Maja Majeric' Elenkov等報道了利用鹵醇脫鹵酶(HheA、HheB和HheC)催化端環(huán)化合物開 環(huán)合成羥基氰的方法，其催化活性和對映選擇性取決于酶的種類和底物的結(jié)構(gòu)(Adv. Synth. Catal. 2006，348，579-585)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡單、成本低， 適于工業(yè)化的R(-)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯生物耦合制備方法。本發(fā)明以表氯醇為原料，先用化學(xué)法合成4-氯-3-羥基丁酸乙酯，再用鹵醇脫鹵 酶生物催化制得R(_) -4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。本發(fā)明以表氯醇為原料，主要包括如下步驟(1)表氯醇與硫酸和氰化鈉在緩沖溶液中反應(yīng)得到4-氯-3-羥基丁腈；(2) 4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇發(fā)生Pinner反應(yīng)生成4_氯_3_羥基丁酸乙酯；(3)4-氯-3-羥基丁酸乙酯在鹵醇脫鹵酶催化下與氰化鈉和硫酸作用得到
3R(-) -4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。本發(fā)明的具體技術(shù)方案是R(_) -4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法， 其特點是，其步驟如下(1)4-氯-3-羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中， 控制反應(yīng)溶液的PH值6-10，控制反應(yīng)溫度10-50°C，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加 完后保溫反應(yīng)2-6小時，有機(jī)溶劑萃取后脫溶(脫除有機(jī)溶劑)得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為 表氯醇硫酸氰化鈉緩沖劑=1 1.0-1.6 1.0-1.6 0.1-0. 5;所用緩沖劑選自
磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉、硼酸_氯化鉀或三羥甲基氨基甲烷；(2)4-氯-3-羥基丁酸乙酯制備向4-氯-3-羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在 20-80°C反應(yīng)4-10小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量 為20-35% ;4_氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比=1 3-10 ；(3)成品制備往重量百分比濃度為10-30%氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加 入4-氯-3-羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶，在20-55°C下保溫反應(yīng)10-24小時，有機(jī)溶劑萃 取、脫溶，真空蒸餾并收集119-121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸乙酯；物 質(zhì)的摩爾比為4_氯-3-羥基丁酸乙酯氰化鈉=1 1.0-1.6;鹵醇脫鹵酶的用量為 4-氯-3-羥基丁酸乙酯的0. 8-1. 5倍。其反應(yīng)方程式如下(以鹵醇脫鹵酶HheC為例):
緩沖劑優(yōu)選為
OHNaCN / H2SO4在以上所述的制備方法技術(shù)方案中，進(jìn)一步優(yōu)選的技術(shù)方案是1、在步驟(1)中，所述的反應(yīng)溫度優(yōu)選為25_35°C。2、在步驟(1)中，控制反應(yīng)溶液的pH值優(yōu)選為7. 5-8. 5。3、步驟(1)中，物質(zhì)的摩爾比為表氯醇硫酸氰化鈉 1 1. 15 1. 16 0. 3。4、在步驟(1)中，所述的緩沖溶液、硫酸溶液和氰化鈉溶液的濃度可以按需要調(diào) 配，只要參與反應(yīng)的物質(zhì)的摩爾比符合本發(fā)明的規(guī)定即可；其中硫酸溶液優(yōu)選為濃度為 10-75%的稀硫酸溶液。5、在步驟⑴或(3)中，萃取用有機(jī)溶劑可以為可適用于本發(fā)明萃取用的任何一 種有機(jī)溶劑，優(yōu)選為二氯甲烷、甲苯或乙酸乙酯，進(jìn)一步優(yōu)選為二氯甲烷。6、步驟(2)中，4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比優(yōu)選為1 5_7 ；7、步驟(2)中，所述的反應(yīng)溫度優(yōu)選為60-65 °C。8、步驟(2)中，所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量優(yōu)選為25-30% ；
9、步驟(3)中，所用鹵醇脫鹵酶優(yōu)選為HheA、HheB或HheC，進(jìn)一步優(yōu)選為HheC。10、步驟(3)中，所述鹵醇脫鹵酶的用量優(yōu)選為4-氯-3-羥基丁酸乙酯的1_1. 2倍。11、步驟(3)中，所述的反應(yīng)溫度優(yōu)選為35-45 °C。本發(fā)明方法與現(xiàn)有的R(-)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的合成工藝相比具有以下優(yōu)占.
^ \\\ ·(1)它以廉價易得的表氯醇為原料，采用化學(xué)合成和生物催化相結(jié)合的方式，大大 降低了生產(chǎn)成本；(2)反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，產(chǎn)物的化學(xué)純度和光學(xué)純度均較高；(3)采用已工業(yè)化生產(chǎn)的鹵醇脫鹵酶生物催化，具有明顯的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境效益， 有利于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式以下進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步地理解 本發(fā)明，而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實施例1。R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其步驟如下(1) 4-氯-3-羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中， 控制反應(yīng)溶液的PH值6，控制反應(yīng)溫度10°C，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加完后保 溫反應(yīng)2小時，有機(jī)溶劑二氯甲烷萃取后脫溶得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為表氯醇硫酸氰 化鈉緩沖劑=1 1.0 1.0 0. 1 ；所用緩沖劑為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉(1:1);(2)4-氯-3-羥基丁酸乙酯制備向4-氯_3_羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在20°C 反應(yīng)4小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量為20% ； 4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比=1 3；(3)成品制備往重量百分比濃度為10%氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加入 4-氯-3-羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶，在20°C下保溫反應(yīng)10小時，有機(jī)溶劑二氯甲烷萃 取、脫溶，真空蒸餾并收集119°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸乙酯；物質(zhì)的 摩爾比為4_氯-3-羥基丁酸乙酯氰化鈉=1 1.0;鹵醇脫鹵酶的用量為4-氯-3-羥 基丁酸乙酯的0.8倍。實施例2。R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其步驟如下(1) 4-氯-3-羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中， 控制反應(yīng)溶液的PH值10，控制反應(yīng)溫度50°C，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加完后 保溫反應(yīng)6小時，有機(jī)溶劑甲苯萃取后脫溶得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為表氯醇硫酸氰化 鈉緩沖劑=1 1.6 1.6 0.5;所用緩沖劑為硼酸-氯化鉀(1:1);(2)4-氯-3-羥基丁酸乙酯制備向4-氯_3_羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在80°C 反應(yīng)10小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量為35% ； 4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比=1 10；(3)成品制備往重量百分比濃度為30%氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加入 4-氯-3-羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶HheB，在55 °C下保溫反應(yīng)24小時，有機(jī)溶劑甲苯 萃取、脫溶，真空蒸餾并收集121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸乙酯；物
5質(zhì)的摩爾比為4_氯-3-羥基丁酸乙酯氰化鈉=1 1.6;鹵醇脫鹵酶HheB的用量為 4-氯-3-羥基丁酸乙酯的1. 5倍。實施例3。R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其步驟如下(1) 4-氯-3-羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中， 控制反應(yīng)溶液的PH值8. 5，控制反應(yīng)溫度25°C，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加完后 保溫反應(yīng)5小時，有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取后脫溶得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為表氯醇硫酸 氰化鈉緩沖劑=1 1.3 1.3 0.4;所用緩沖劑為三羥甲基氨基甲烷；(2)4-氯-3-羥基丁酸乙酯制備向4-氯_3_羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在60°C 反應(yīng)6小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量為30% ； 4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比=1 5；(3)成品制備往重量百分比濃度為25%氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加入 4-氯-3-羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶HheC，在35°C下保溫反應(yīng)10-24小時，有機(jī)溶劑乙酸 乙酯萃取、脫溶，真空蒸餾并收集120°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸乙酯； 物質(zhì)的摩爾比為4_氯-3-羥基丁酸乙酯氰化鈉=1 1.15;鹵醇脫鹵酶HheC的用量為 4-氯-3-羥基丁酸乙酯的1. 0倍。實施例4。R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其步驟如下(1) 4-氯-3-羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中， 控制反應(yīng)溶液的PH值7. 5，控制反應(yīng)溫度35°C，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加完后 保溫反應(yīng)4小時，有機(jī)溶劑萃取后脫溶得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為表氯醇硫酸氰化鈉 緩沖劑=1 1. 15 1.16 0.3 ；所用緩沖劑為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉(1 2)；(2)4-氯-3-羥基丁酸乙酯制備向4-氯_3_羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在65°C 反應(yīng)8小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量為28% ； 4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比=1 7；(3)成品制備往重量百分比濃度為15%氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加入 4-氯-3-羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶HheA，在45°C下保溫反應(yīng)12小時，有機(jī)溶劑萃取、脫 溶，真空蒸餾并收集121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸乙酯；物質(zhì)的摩爾比 為4_氯-3-羥基丁酸乙酯氰化鈉=1 1.3;鹵醇脫鹵酶HheA的用量為4-氯-3-羥基 丁酸乙酯的1.2倍。實施例5。4-氯-3-羥基丁腈的制備實驗。在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入30g磷酸二氫鈉、30g磷 酸氫二鈉和500g水，再加入249g表氯醇和685g氰化鈉(30% )，攪拌下緩慢滴加420g稀 硫酸(50% )，控制Ph值7. 5-8. 5,8小時內(nèi)加完，再保溫反應(yīng)6小時。加入3 X 800ml 二氯 甲烷萃取，合并有機(jī)相，加熱蒸出二氯甲烷，得淺紅色液體322. 4g，收率93.2% (以表氯醇 計)。實施例6。4-氯-3-羥基丁酸乙酯實驗。在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入上述322. 4g淺紅色液體 和1650g鹽酸乙醇，攪拌升溫至65°C反應(yīng)6小時。減壓蒸出乙醇，冷卻抽濾，得淺紅色液體 420. 6g，收率91. 4% (以4-氯-3-羥基丁腈計)。實施例7。R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的制備實驗。
6
在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入555g氰化鈉溶液 (30%),攪拌下緩慢滴加315g稀硫酸(50% )，滴完后加入上述420. 6g淺紅色液體和450g 鹵醇脫鹵酶HheC，緩慢加熱到40°C反應(yīng)16小時。加入3X 1200ml 二氯甲烷萃取，合并有機(jī) 相，加熱蒸出二氯甲烷，再減壓收集119-121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸 乙酯 222. Ig,收率 59. 2% (含量 98. 23%, ee {t 99. 18%，比旋光度-34. 2)。實施例8。R(-)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的制備實驗。在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入555g氰化鈉溶液 (30%),攪拌下緩慢滴加315g稀硫酸(50% )，滴完后加入上述420. 6g淺紅色液體和450g 鹵醇脫鹵酶HheA，緩慢加熱到40°C反應(yīng)16小時。加入3X 1200ml 二氯甲烷萃取，合并有機(jī) 相，加熱蒸出二氯甲烷，再減壓收集119-121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸 乙酯 194. 3g，收率 54. 7% (含量 97. 69%, ee {t 95. 38%，比旋光度-30. 5)。實施例9。R(-)_4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的制備實驗。在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入555g氰化鈉溶液 (30%),攪拌下緩慢滴加315g稀硫酸(50% )，滴完后加入上述420. 6g淺紅色液體和450g 鹵醇脫鹵酶HheB，緩慢加熱到40°C反應(yīng)16小時。加入3X 1200ml 二氯甲烷萃取，合并有機(jī) 相，加熱蒸出二氯甲烷，再減壓收集119-121°C (5mmHg)餾分得R(_)_4_氰基-3-羥基丁酸 乙酯 208. 6g，收率 56. 8% (含量 97. 92%, ee 值 96. 44%，比旋光度-31. 5)。比較例6. R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的制備在裝有機(jī)械攪拌、溫度計及尾氣吸收的四口燒瓶中，加入55. 5g氰化鈉溶液 (30 % )和 R (-) -4-氯-3-羥基丁酸乙酯 37. Ig (Aldrich，ee 值 99. 32 %，含量 98. 76 % )，緩 慢加熱到65°C反應(yīng)8小時。加入3X 120ml 二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，加熱蒸出二氯甲烷， 再減壓收集119-121 °C (5mmHg)餾分得R(_) _4_氰基-3-羥基丁酸乙酯16. 8g，收率43. 9% (含量97. 51%，ee值97. 48%，比旋光度-32. 1)，其核磁共振氫譜圖可以用來測定其H原 子種類和個數(shù)比。
權(quán)利要求
R( ) 4 氰基 3 羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其特征在于，其步驟如下(1)4 氯 3 羥基丁腈制備將表氯醇加入到由緩沖劑溶于水制成的緩沖溶液中，控制反應(yīng)溶液的pH值6 10，控制反應(yīng)溫度10 50℃，同時滴加硫酸溶液和氰化鈉溶液，滴加完后保溫反應(yīng)2 6小時，有機(jī)溶劑萃取后脫溶得產(chǎn)物；物質(zhì)的摩爾比為表氯醇∶硫酸∶氰化鈉∶緩沖劑＝1∶1.0 1.6∶1.0 1.6∶0.1 0.5；所用緩沖劑選自磷酸氫二鈉 磷酸二氫鈉、硼酸一氯化鉀或三羥甲基氨基甲烷；(2)4 氯 3 羥基丁酸乙酯制備向4 氯 3 羥基丁腈中加入鹽酸乙醇，在20 80℃反應(yīng)4 10小時后脫溶、過濾，所得濾液即產(chǎn)物；所用的鹽酸乙醇中鹽酸的重量含量為20 35％；4 氯 3 羥基丁腈與鹽酸乙醇的重量比＝1∶3 10；(3)成品制備往重量百分比濃度為10 30％氰化鈉溶液中滴加硫酸溶液，再加入4 氯 3 羥基丁酸乙酯和鹵醇脫鹵酶，在20 55℃下保溫反應(yīng)10 24小時，有機(jī)溶劑萃取、脫溶，真空蒸餾并收集119 121℃/5mmHg餾分得R( ) 4 氰基 3 羥基丁酸乙酯；物質(zhì)的摩爾比為4 氯 3 羥基丁酸乙酯∶氰化鈉＝1∶1.0 1.6；鹵醇脫鹵酶的用量為4 氯 3 羥基丁酸乙酯的0.8 1.5倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述的反應(yīng)溫度為 25-35 °C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟⑴中控制反應(yīng)溶液的PH值 7. 5-8. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中物質(zhì)的摩爾比為表氯 醇硫酸氰化鈉緩沖劑=1 1. 15 1. 16 0. 3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)或(3)所述的有機(jī)溶劑為 二氯甲烷、甲苯或乙酸乙酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中4-氯-3-羥基丁腈與鹽 酸乙醇的重量比為1 5-7。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中，所述的反應(yīng)溫度為 60-65 "C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中所用鹵醇脫鹵酶為HheA、 HheB 或 HheC。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述鹵醇脫鹵酶的 用量為4-氯-3-羥基丁酸乙酯的1-1. 2倍。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中，所述的反應(yīng)溫度為 35-45 0C ο
全文摘要
R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯的生物耦合制備方法，其特征在于它以表氯醇為原料，先用表氯醇與硫酸和氰化鈉在緩沖溶液中反應(yīng)得到4-氯-3-羥基丁腈；再用4-氯-3-羥基丁腈與鹽酸乙醇發(fā)生Pinner反應(yīng)生成4-氯-3-羥基丁酸乙酯；最后用4-氯-3-羥基丁酸乙酯在鹵醇脫鹵酶催化下與氰化鈉和硫酸作用得到R(-)-4-氰基-3-羥基丁酸乙酯。本發(fā)明以廉價易得的表氯醇為原料，采用化學(xué)合成和生物催化相結(jié)合的方式，大大降低了生產(chǎn)成本；反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，產(chǎn)物的化學(xué)純度和光學(xué)純度均較高；采用已工業(yè)化生產(chǎn)的鹵醇脫鹵酶生物催化，具有明顯的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)境效益，有利于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P13/00GK101914582SQ201010226669
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月15日
發(fā)明者付瑞新, 王明 申請人:連云港宏業(yè)化工有限公司